BR112012017716B1

BR112012017716B1 - Composto, e, composição

Info

Publication number: BR112012017716B1
Application number: BR112012017716-8A
Authority: BR
Inventors: Fournial Arnaud; Mondon Philippe; Peschard Olivier
Original assignee: Sederma
Priority date: 2010-01-18
Filing date: 2011-01-17
Publication date: 2018-02-06
Also published as: FR2955326A1; CN103717200B; EP2525774B1; WO2011086532A1; CN103717200A; US20130004439A1; EP2525774A1; US8603498B2; FR2955326B1; BR112012017716A2

Abstract

composto, e, composição. o composto de acordo com a invenção tem a seguinte fórmula desenvolvida ix: em que: x = po(oh)~ 2~; so~ 2~(oh); po(oh)(xaa)~ m~ ou so~ 2~(xaa)~ m~; a = h; oh; nh~ 2~ ou alquila (1-6c); n = 1 a 4; y = -co- or~ 2~; - co-nr~ 3~r~ 4~; -o-co-r~ 2~;-c=cr~ 2~; r~ 2~ = uma cadeia de alquila, arila, aralquila, acila, sulfonila, açúcar ou alcóxi de 1 a 24 átomos de carbono, lineares, ramificados ou cíclicos, com ou sem substituições, saturados ou não, hidroxilados ou não, sulfurados ou não ; r~ 5~ = oh, o-alk (1-6c), (xaa)~ m~, nh~ 2~ ou nh-alqui(1-6c); xaa = peptídeo de m aminoácidos xaa com m de 1 a 10; o composto é preferivelmente fosfatado, obtido de ácido málico e tendo a seguinte fórmula desenvolvida: uma composição cosmética compreendendo o composto da presente invenção pode melhorar a condição geral da pele, por exemplo, hidratação, clareamento e propriedades mecânicas.

Description

(54) Título: COMPOSTO, E, COMPOSIÇÃO (51) Int.CI.: A61K 8/46; A61K 8/55; A61K 31/19; A61K 31/661; A61Q 19/08; C07C 305/06; C07F 9/09; A61P 17/00 (30) Prioridade Unionista: 18/01/2010 FR FR1050306 (73) Titular(es): SEDERMA (72) Inventor(es): ARNAUD FOURNIAL; PHILIPPE MONDON; OLIVIER PESCHARD “COMPOSTO LIPO-FOSFATADO OU LIPO-SULFATADO, COMPOSIÇÃO, E, USO DE UM COMPOSTO”

CAMPO TÉCNICO

O assunto de objetivo da presente invenção é um novo composto lipídico sulfatado ou fosfatado, a composição compreendendo-o e seus usos, por exemplo, no campo de cosméticos, produtos e cuidado pessoal e dermofarmácia.

A presente invenção se refere à indústria química, médica ou cosmética para cuidados da pele e adicionais (tais como cabelos, cílios, sobrancelhas, unhas, pelos) de mamíferos, animais ou seres humanos.

FUNDAMENTOS DA TÉCNICA

A indústria de cosméticos está buscando constantemente novos compostos ativos para o propósito de formular novos produtos cosméticos. Crescentemente, os compostos que são pesquisados devem ser ativos em diversos alvos para melhorar a condição total da pele, isto é, em primeiro lugar seu grau de hidratação, mas também suas propriedades mecânicas e/ou também seu brilho. Também, um novo ingrediente ativo que pode ser pesquisado é mais específico, capaz de embelezar a pele e adicionais, tais como pela adição de volume, clarificação da aparência, emagrecimento, etc.

O objetivo da presente invenção é satisfazer esta demanda. SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Para este objetivo, um composto da seguinte fórmula desenvolvida I é proposto:

H(X .O

R1 sendo uma cadeia lipídica/lipofílica

X = PO(OH)2 ou SO2(OH) n = 1 a 4.

Portanto, a presente invenção está visando os dois seguintes tipos de compostos:

Os compostos fosfatados tendo a seguinte fórmula II desenvolvida:

Os compostos sulfatados tendo a seguinte fórmula III desenvolvida:

De acordo com a invenção, uma cadeia lipídica/lipofílica Rj é citado como sendo R) = OR₂ ou NR₃R4.

R₂ é uma cadeia de alquila, arila, aralquila, acila, sulfonila, açúcar ou alcóxi de 1 a 24 átomos de carbono, preferivelmente de pelo menos 4 átomos de carbono, lineares, ramificados ou cíclicos, com ou sem substituições, saturados ou não, hidroxilados ou não, sulfurados ou não.

R₃ e R4 são, independentemente um do outro, um hidrogênio ou uma cadeia de R2, isto é uma cadeia de alquila, arila, aralquila, acila, sulfonila, açúcar ou alcóxi de 1 a 24 átomos de carbono, preferivelmente de pelo menos 4 átomos de carbono, lineares, ramificados ou cíclicos, com ou sem substituições, saturados ou não, hidroxilados ou não, sulfurados ou não, um de R₃ e R4 sendo uma cadeia tipo R₂.

Os compostos de acordo com a presente invenção podem ser usados na forma de sais ou ácidos ou uma mistura de ambos dependendo do pH de uso.

Os resultados de teste in vitro e in vivo foram obtidos como os compostos de acordo com a invenção levando a um potencial alto de aplicações em cosméticos ou dermofarmácia.

De acordo com as características preferidas:

- Ri = OR₂ com R₂ = cadeia de hidrocarboneto tendo pelo menos 4 átomos de carbono e/ou

- o composto da invenção é fosfatado X sendo PO(OH)2e/ou

-n=l

Mais preferivelmente, o composto da presente invenção é obtido de ácido málico ou de um de seus derivados ou análogos como material de partida.

Desta maneira, um composto preferido de acordo com a invenção é o 2-fosfato-ácido succínico-4-tetradecil éster têm a seguinte fórmula desenvolvida IV e denominado a seguir no texto o «LipoFosfomalato»:

com η = 1, X = PO(OH)₂ e Ri = OC14H29.

O uso do ácido málico como um dos materiais de partida leva vantajosamente a um processo de fabricação que é simples e que apresenta rendimento alto como descrito abaixo.

Outros diácidos comerciais são vantajosamente adequados para obter o composto da invenção, por exemplo, ácido tartárico (o ácido 2, 3di-hidroxibutanodióico) da seguinte fórmula V desenvolvida:

OH OH

OH OH

De acordo com outras características:

O composto pode compreender uma substituição na cadeia (CUjo-, por exemplo escolhido entre OH, NH₂ ou uma cadeia de alquila; preferivelmente cadeia de alquila inferior e/ou

A função carbonila pode ser substituída por uma função 25 análoga ligada dupla como divulgado na seguinte fórmula VI desenvolvida:

HCL A) η

e/ou a função de ácido carboxílico COOH do composto da invenção pode estar presente em uma forma derivada, por exemplo, uma forma de éster.

Vantajosamente, o composto da invenção pode ser ligado com qualquer peptídeo de m aminoácidos Xaa com m de 1 a 10 para obter um composto da seguinte fórmula VII desenvolvida, a ligação sendo atingida através de uma ligação do tipo peptídico com o COOH do composto de acordo com a invenção:

e/ou com um OH do substituinte X.

O composto da invenção se toma, desta maneira, uma alternativa fosfatada ou sulfatada às cadeias lipídicas clássicas ligadas aos peptídeos, como uma cadeia de palmitoila, elaidoila ou biotinoila, o Ri lipídico ou lipofílico tendo a função para melhorar a biodisponibilidade do peptídeo e sua capacidade de penetração cutânea.

A invenção abrange peptídeos (Xaa)_ra que consistem de derivados codificados, naturais ou não naturais e aminoácidos análogos (aminoácidos codificados: Alanina A Ala, Arginina R Arg, Asparagina N Asn, Aspartato ou ácido aspártico D Asp, císteína, C Cys, Glutamato ou ácido glutâmico E Glu, Glutamina Q Gin, Glicina G Gly, Histidina H His, Isoleucina I Ile, Leucina L Leu, Lisina K Lys, Metionina M Met, Fenilalanina F Phe, Prolina P Pro, Serina S Ser, Treonina T Thr, Triptofano W Trp, Tirosina Y Tyr, Valina, V Vai). São citados, por exemplo, sem ser restritivo, os aminoácidos K, T, C, M, MO (metionina cujo enxofre é oxidado), MO₂(metionina cujo enxofre é enxofre dioxidado), os dipeptídeos KT, KC, KP,

VW, KK, TT, YR, NF, DF, EL, CL, AH, YR, camitina, os tripeptídeos RKR, HGG, GHK, GKH, GGH, GHG, KFK, GKH, KPK, ΚΜΟΚ, KM02K, KAvaK, os tetrapeptídeos RSRK (SEQ ID N°: 1), GQPR (SEQ ID N°: 2) ou KTFK (SEQ ID N°: 3), os pentapeptídeos KTTKS (SEQ ID N°: 4), os hexapeptídeos GKTTKS (SEQ ID N°: 5), VGVAPG (SEQ ID N°: 6), etc.

Como outros exemplos, as sequências de aminoácido dos seguintes epítopos comercializados também podem ser mencionados: Vialox™, Syn-ake™ or Syn-Coll™ (Pentapharm), Hidroxiprolisilano CN™ (Exsymol), Argireline™, Leuphasyl™, Aldenine™, Trylgen™, Eyeseryl™,

Serilesine™ or Decorinyl™ (Lipotec), Collaxyl™ or Quintescine™ (Vincience), BONT-L-Peptide™ (lnfinitec Activos), Cytokinol™LS (Laboratoires Serobiologiques/Cognis), Kollaren™, IP2000™ ou Meliprene™ (Instituí Européen de Biologie Cellulaire), Neutrazen™ (Innovations), ECM-Protect™ (Atrium Innovations), Timp-Peptide™ ou

ECM Moduline™ (lnfinitec Activos), bem como os peptídeos mencionados a seguir no texto.

Além dos dez aminoácidos, derivados ou análogos de aminoácidos, os peptídeos são, em geral, muito volumosos para aplicações cosméticas e muito caros de se fabricar. Por estas razões, o peptídeo ligado é preferivelmente limitado a n = 6 (hexapeptídeo).

Também é possível que o composto de acordo com a invenção seja um bis-lipo sulfatado ou bis- ou tri fosfatado. A seguinte fórmula VIII desenvolvida ilustra esta característica da invenção como, por exemplo, para um composto de acordo com a invenção isto é, bis-lipo fosfatado:

O composto da presente invenção pode ser representado pela seguinte fórmula IX geral que incorpora todas as variantes possíveis divulgadas acima:

Em que:

X = PO(OH)_2; SO₂(OH); PO(OH)(Xaa)_m ou SO₂(Xaa)_m;

A = H; OH; NH₂ ou alquila (1-6C); η = 1 a 4;

Y= -CO-OR₂; -CO-NR₃R4;-O-CO-R_2;-C=CR₂;

R₂ = uma cadeia de alquila, arila, aralquila, acila, sulfonila, açúcar ou alcóxi de 1 a 24 átomos de carbono, lineares, ramificados ou cíclicos, com ou sem substituições, saturados ou não, hidroxilados ou não, sulfurados ou não; preferivelmente uma cadeia de pelo menos 4 carbonos;

R₃ e R4 são, independentemente um do outro, cada um, um átomo de hidrogênio ou uma cadeia de R2;

R₅ = OH, O-alk (1-6C), (Xaa)_m, NH₂ ou NH-alquil(l -6C); Xaa = peptídeo de m aminoácidos Xaa com m de 1 a 10. Na fórmula I desenvolvida,

X = PO(OH)₂ ou SO₂(OH)

R₅=OH

A-H η = 1 a 4,

Y = -CO-Ri com Ri = OR₂ ou NR₃R4.

O objetivo da presente invenção também é uma composição tópica, cosmética ou dermofarmacêutica, caracterizado pelo fato de que este

I compreende o composto como citado acima em um meio fisiologicamente aceitável, o uso desta composição em cosmética ou dermofarmácia para melhorar a condição geral da pele, por exemplo, para o tratamento de sinais cutâneos intrínsecos e extrínsecos de envelhecimento, para o tratamento de flacidez da pele, para melhorar a tonicidade, firmeza, elasticidade da pele, para o tratamento de atrofia cutânea, para melhorar a densidade da derme e epiderme, para tratar a desidratação cutânea, para o tratamento de perda de cabelo, para estimular a expansão de tecidos adiposos, para clarear a pele, para tratar a glicação de moléculas na pele, para tratar acne, para tratar a degradação da pele devido aos efeitos de oxidação e para tratar condições inílamatórias.

Portanto, as aplicações podem ser oferecidos nas faixas incluindo hidratantes, limpadores, anti-envelhecimento, antioxidante, protetor, restaurativo (mãos, pés, lábios), contornos (face, olhos, pescoço, lábios), cuidados de maquiagem para a pele e seus adicionais, incluindo cílios, produtos para lábios, produtos solares, remodelagem, aumento, preenchimento (por exemplo, das mãos, busto, seios), cuidado com o cabelo, etc.

Mais particularmente, os resultados de teste in vitro e in vivo dados na descrição detalhada mostram que a composição é útil para prevenir ou tratar os sinais cutâneos do envelhecimento, prevenir ou tratar desidratação cutânea, para melhorar a elasticidade da pele, para tratar a perda de firmeza, para tratar linhas finas e rugas, para estimular a expansão do tecido adiposo e para clarear a pele.

De acordo com outras características vantajosas, a composição cosmética ou dermofarmacêutica da invenção pode incorporar um ou mais ingredientes ativos adicionais, para fornecer, vantajosamente, um produto cosmético ou dermofarmacêutico com uma faixa mais ampla de propriedades ou para intensificar as propriedades dos compostos da presente invenção. Os ingredientes ativos adicionais podem ser, por exemplo, selecionado de clareador, anti-vermelhidão, protetores solares, hidratantes, umectantes, esfoliantes, anti-envelhecimento, anti-rugas e linhas finas, estimulador do síntese de elastina e/ou colágeno, agentes conferidores de volume, melhoradores das propriedades elásticas, anti-acne, anti-inflamatório, antioxidantes, anti-radical livre ou agentes pró-pigmentadores, despigmentadores, depiladores, agentes anti-redesenvolvimento ou promotores do desenvolvimento, peptídeos, vitaminas etc. Estes ingredientes ativos podem ser obtidos de materiais vegetais, tais como extratos vegetais ou produtos de cultura ou fermentação de células vegetais.

Mais especificamente, o composto da invenção pode ser combinado com pelo menos um dos compostos selecionados de compostos de vitamina B3, compostos de niacinamida semelhantes ou tocoferol, retinol, hexamidina, ácido α-lipóico, resveratrol ou DHEA ou N-acetil-Tyr-Arg-O15 hexadecila, peptídeos Pal-VGVAPG (SEQ ID N°: 7), Pal-KTTKS (SEQ ID N°: 8), Pal-GHK, Pal-KMO2K e Pal-GQPR (SEQ ID N°: 9), que são ingredientes ativos usados nas composições tópicas cosméticas ou dermofarmacêuticas convencionais.

DESCRIÇÃO DETALHADA

O termo “meio fisiológico” significa, de acordo com a presente invenção, sem limitação, uma solução aquosa ou alcoólica, uma emulsão de água em óleo, uma emulsão de óleo em água, uma microemulsão, um gel aquoso, um gel anidro, um soro, uma dispersão de vesículas.

“Fisiologicamente aceitável” significa que as composições ou compostos divulgados são adequados para o uso no contato com membranas mucosas, unhas, escalpo, pelos, cabelos e pele de mamíferos e mais particularmente humana sem risco de toxicidade de incompatibilidade, instabilidade, resposta alérgica e outros.

Quando presente na composição, o composto da invenção está presente em quantidades de variam de 0,000001 % a 15 % em comparação com o peso total da composição, mais preferivelmente entre 0,0001 % e 5 %, dependendo do destino da composição e o efeito desejado mais ou menos pronunciado.

Todas as porcentagens e razões usadas aqui são em peso de composição total e todas as medições são feitas a 25°C a não ser que isto seja especificado de outra maneira.

Tipicamente, na composição da invenção que consiste simplesmente do composto da invenção e de um excipiente (o meio fisiológico) usado como solubilizador, por exemplo, formando um “ingrediente ativo” para a preparação futura de uma composição cosmética, a quantidade do composto estará compreendida entre 0,00005 % e 0,05 %.

A escolha do excipiente da composição é feita de acordo com as restrições relacionadas aos compostos da invenção (estabilidade, solubilidade, etc.) e se de acordo com a forma de dosagem quando considerado para a composição.

Os compostos da têm solubilidade em água que varia de acordo com sua natureza química exata. Desta maneira, os compostos da invenção podem ser incorporados nas composições usando-se uma solução aquosa e aqueles que não são solúveis em água podem ser solubilizados com solubilizadores convencionais cosmética, farmacêutica ou fisiologicamente aceitáveis, por exemplo e sem limitar esta lista: etanol, propanol, isopropanol, propileno glicol, glicerina, butileno glicol, ou polietileno glicol ou qualquer combinação. Este também pode ser interessante para dissolver os compostos da invenção usando-se emulsificadores e, por exemplo, emulsificadores contendo fósforo, tais como ésteres de fosfato.

Ingredientes adicionais

O CTFA International cosmetic ingredient dictionary & handbook (13° Ed. 2010) (publicado pela Cosmetic, Toiletry, and Fragrance

Association, Inc., Washington, D.C.) descreve uma variedade ampla não limitada de ingredientes cosméticos e farmacêuticos usualmente utilizados na indústria de cuidado com a pele que podem ser usados como ingredientes adicionais nas composições da presente invenção. Os exemplos destas classes de ingredientes incluem, mas não são limitados a: agentes de cura, agentes anti-envelhecimento da pele, agentes anti-rugas, agentes anti-atrofia, agentes hidratantes da pele, agentes suavizadores da pele, agentes anti-bacterianos, agentes anti-parasíticos pesticidas, agentes anti-fungicos, agentes fungicidas, agentes fungistáticos, agentes bactericidas, agentes bacteriostáticos, agentes antimicrobianos, agentes anti-inflamatórios, agentes anti-pruriginosos, agentes anestésicos externos, agentes anti-virais, agentes queratolíticos, descontaminantes de radical livre, agentes anti-seborréicos, agentes anticaspa, os agentes que modulam a diferenciação, proliferação ou pigmentação da pele e agentes que aceleram a penetração, agentes descamadores, agentes estimuladores ou inibidores da síntese de melanina, agentes branqueadores ou despigmentadores, agentes pró-pigmentação, agentes auto-bronzeadores, agentes inibidores de sintase de NO, antioxidantes, descontaminantes de radical livre e/ou agentes contra a poluição atmosférica, descontaminantes de espécies de carbonila reativos, agentes antiglicação, agentes de contração, agentes estimuladores da síntese de macromoléculas dérmicas ou epidérmicas e/ou capaz de inibir ou evitar sua degradação, tal como, por exemplo, agentes estimuladores da síntese de colágeno, agentes estimuladores da síntese de elastina, agentes estimuladores da síntese de decorina, agentes estimuladores da síntese de laminina, agentes estimuladores da síntese de defensina, agentes estimuladores da síntese de chaperona, agentes estimuladores da síntese de aquaporina, agentes estimuladores da síntese de ácido hialurônico, agentes estimuladores da síntese de fibronectina, agentes estimuladores da síntese de sirtuina, agentes estimuladores da síntese de e lipídeos e componentes do estrato córneo (ceramidas, ácidos graxos, etc.), agentes que inibem a degradação de colágeno, outros agentes que inibem a degradação de elas ti na, agentes que inibem as serina proteases tais como catepsina G, agentes estimuladores da proliferação de fibroblasto, os agentes estimuladores da proliferação de queratinócito, agentes estimuladores da proliferação de adipócito, agentes estimuladores da proliferação de melanócito, agentes estimuladores de diferenciação de queratinócito, agentes estimuladores de diferenciação de adipócito, agentes que inibem acetilcolinoesterase, agentes relaxante da pele, glicosaminoglicano agentes estimuladores de síntese, agentes anti-hiperceratose, agentes comedolíticos, agentes antipsoríase, agentes de reparo de DNA, agentes protetores de DNA, estabilizadores, agentes anti-coceira, agentes para o tratamento e/ou cuidado da pele sensível, agentes firmadores, agentes de marca anti-estiramento, agentes de ligação, agentes reguladores da produção de sebo, agentes lipolíticos ou agentes estimuladores de lipólise, agentes anti-celulite, agentes antiperspirante, agentes estimuladores de cura, agentes de cura coadjuvantes, agentes estimuladores de re-epitelialização, agentes de re-epitelialização coadjuvantes, fatores do desenvolvimento de citocina, agentes calmantes, agentes anti-inflamatórios, agentes anestésicos, agentes que atuam na circulação capilar e/ou microcirculação, agentes estimuladores de angiogênese, agentes que inibem a permeabilidade vascular, agentes venotônicos, agentes que atuam no metabolismo celular, agentes para melhorar a junção dérmica-epidérmica, agentes indutores de desenvolvimento capilar, agentes inibidores ou retardantes do crescimento capilar, relaxantes musculares; agentes anti-contaminação e/ou anti-radical livre; agentes lipolíticos, agentes venotônicos, agentes emagrecedores, agentes anti-celulite, agentes que atuam na microcirculação; agentes que atuam no metabolismo de energia das células; agentes limpadores, agentes de condicionamento capilar, agentes estilizadores capilares, promotores do desenvolvimento capilar, compostos protetores solares e/ou bloqueadores solares, agentes de maquiagem, detergentes, medicamentos farmacêuticos, emulsificadores, emolientes, agentes anti-sépticos, ativos desodorantes, carregadores dermatologicamente testados, tensoativos, abrasivos, absorvedores, componentes estéticos, tais como fragrâncias, colorações/corantes, óleos essenciais, sensações da pele, adstringentes cosméticos, agentes anti-acne, agentes anti-formação de massa, agentes anti-espumantes, antioxidantes, aglutinantes, aditivos biológicos, enzimas, inibidores enzimáticos, agentes indutores de enzima, coenzimas, agentes quelantes, extratos vegetais, derivados vegetais, extratos de tecidos vegetais, extratos de sementes vegetais, óleos vegetais, produtos botânicos, extratos botânicos, óleos essenciais, extratos marinhos, agentes obtidos a partir de um processo de biofermentação, sais minerais, extratos celulares e protetores solares (agentes fotoprotetores orgânicos ou minerais ativos contra raios ultravioleta A e/ou B), ceramidas, peptídeos, agentes de tamponação, agentes de carga, agentes quelantes, aditivos químicos, corantes, biocidas cosméticos, desnaturantes, adstringentes de medicamento, analgésicos externos, formadores de película ou materiais, por exemplo, polímeros, para auxiliar as propriedades de formação de película e substantividade da composição, derivados quaternários, agentes que aumentam a substantividade, agentes opacificadores, ajustadores de pH, propelentes, agentes redutores, sequestrantes, agentes alvej antes e clareadores da pele, agentes bronzeadores da pele, agentes condicionadores da pele (por exemplo, umectantes, incluindo mistos e oclusivos), suavizante da pele e/ou agentes de cura e derivados, agentes de tratamento da pele, espessantes e vitaminas e seus derivados, agentes descamadores, agentes umectantes, agentes curativos, lignanos, conservantes, absorvedores de UV, um citotóxico, um agente antineoplástico, um ativo solúvel em gordura, agentes de suspensão, modificadores de viscosidade, pigmentos, solventes não voláteis, diluentes, auxiliares perolescentes, intensificadores de espuma, uma vacina e sua mistura.

O ingrediente adicional pode ser selecionado do grupo que consiste de aminas de açúcar, glucosamina, D-glicosamina, N-acetil glicosamina, N-acetil-D-glicosamina, manosamina, N-acetil manosamina, galactosamina, N-acetil galactosamina, vitamina B3 e seus derivados, niacinamida, di-hidroacetato de sódio, ácido desidroacético e seus sais, fitoesteróis, compostos de ácido salicílico, hexamidinas, compostos de dialcanoil hidroxiprolina, extratos de soja e derivados, equol, isoflavonas, flavonóides, fitantriol, famesol, geraniol, peptídeos e seus derivados, di-, tri-, tetra-, penta- e hexapeptídeos e seus derivados, KTTKS (SEQ ID N°: 4),

PalKTTKS (SEQ ID N°: 8), camosina, compostos de N-acil aminoácido, retinóides, retinil propionato, retinol, retinil palmitato, retinil acetato, retinal, ácido retinóico, vitaminas solúveis em água, ascorbatos, vitamina C, ácido ascórbico, ascorbil glicosídeo, ascorbil palmitato, magnésio ascorbil fosfato, sódio ascorbil fosfato, vitaminas, seus sais e derivados, provitaminas e seus sais e derivados, etil pantenol, vitamina B, derivados de vitamina B, vitamina Bl, vitamina B2, vitamina B6, vitamina BI2, vitamina K, derivados de vitamina K, ácido pantotênico e seus derivados, pantotenil etil éter, pantenol e seus derivados, dexpantenol, biotina, aminoácidos e seus sais e derivados, aminoácidos solúveis em água, asparagina, alanina, indol, ácido glutâmico, vitaminas insolúveis em água, vitamina A, vitamina E, vitamina F, vitamina D, mono-, di- e tri-terpenóides, beta-ionol, cedrol, e seus derivados, aminoácidos insolúveis em água, tiro sina, triptamina, hidroxitolueno butilado, hidroxianisol butilado, alantoína, tocoferol nicotinato, tocoferol, tocoferol ésteres, pal-GHK, fitoesterol, hidróxiácidos, ácido glicólico, ácido láctico, ácido lactobiônico, ceto ácidos, ácido pirúvico, ácido fítico, ácido lisofosfatídico, estilbenos, cinamatos, resveratrol, cinetina, zeatina, dimetilaminoetanol, peptídeos naturais, peptídeos de soja, sais de ácidos de açúcar, gliconato de Mn, gliconato de Zn, materiais particulados, materiais de pigmento, cores naturais, piroctona olamina, 3,4,4'- triclorocarbanilida, triclocarban, zinco piritiona, hidroquinona, ácido kojic, ácido ascórbico, magnésio ascorbil fosfato, ascorbil glicosídeo, piridoxina, aloe vera, terpeno álcoois, alantoina, bisabolol, dipotássio glicirrizinato, glicerol ácido, sorbitol ácido, pentaeritritol ácido, pirrolidono ácido e seus sais, di-hidroxiacetona, eritrulose, gliceraldeído, tartaraldeído, óleo de cravo da índia, mentol, cânfora, óleo de eucalipto, eugenol, mentil lactato, destilado de hamamélia, eicoseno e copolímeros de vinil pirrolidona, iodopropil butilcarbamato, um polissacarídeo, um ácido graxo essencial, salicilato, ácido glicirretínico, carotenóides, ceramidas e pseudo-ceramidas, um complexo de lipídeo, óleos, em geral, de origem natural tal como manteiga de karité, óleo de abricó, óleo de onagro, óleo de prunus^ óleo de palma, óleo de monoi, HEPES, procisteína, O-octanoil-6-D-maltose, o sal de sódio do ácido metilglicinodiacético, esteróides, tais como diosgenina e derivados de DHEA, DHEA ou desidroepiandrosterona e/ou um precursor ou derivado químico ou biológico, N-etiloxicarbonil-4-para-aminofenol, extratos de mirtilo; fito-hormônios; extratos da levedura Saccharomyces cerevisiae, extratos de algas, extratos de soja, lupina, milho e/ou ervilha, alverina e seus sais, em particular, citrato de f

alverina, extrato de gilbardeira e de castanha da índia e misturas dos mesmos, um inibidor de metaloproteinase.

Ingredientes ativos de cuidado com a pele e de cuidado com os cabelos adicionais que são particularmente úteis podem ser encontrados em na literatura comercial SEDERMA e no website www.sederma.ff.

Em qualquer forma de realização da presente invenção, entretanto, os ingredientes adicionais úteis aqui podem ser categorizados pelo benefício de fornecer ou pelo seu modo postulado de ação. Entretanto, deve ser entendido que os ingredientes adicionais úteis aqui podem, em alguns exemplos fornecer mais do que um benefício ou operar por intermédio de mais do que um modo de ação. Portanto, as classificações aqui são feitas por causa de conveniência e não são pretendidos limitar os ingredientes adicionais para aquela aplicação ou aplicações listadas.

Os seguintes ativos conhecidos podem ser mencionados, como exemplos: betaina, glicerol, Actimoist Bio 2™ (Active organics), AquaCacteen™ (Mibelle AG Cosmetics), Aquaphyline™ (Silab),

AquaregulK™ (Solabia), Carciline™ (Greentech), Codiavelane™ (Biotech Marine), Dermaflux™ (Arch Chemicals, Inc), Hydra'Flow™ (Sochibo), HydromoistL™ (Symrise), RenovHyal™ (Soliance), Seamoss™ (Biotech Marine), Essenskin™ (Sederma), Moist 24™ (Sederma), Argireline™ (marca do acetil hexapeptídeo-3 da Lipotec), espilantol ou um extrato de Acmella oleracea conhecido sob o nome Gatuline Expression™ (EP 1722864), um extrato de Boswellia serrata conhecido sob o nome Boswellin™, Deepaline PVB™ (Seppic), Syn-AKE™ (Pentapharm), Ameliox™, Bioxilift™ (Silab) ou misturas destes.

Entre outros extratos vegetais que podem ser combinados com o composto da invenção, podem ser mais particularmente mencionados os extratos de Hera, em particular Hera Inglesa (Hedera Helix), de thorowax Chinês (Bupleurum chinensis), de Bupleurum Fale atum, de arnica (Arnica Montana L), dealecrim (Rosmarinus officinalis N), de tagetes (Calêndula officinalis}, de sálvia (Salvia officinalis L), de ginseng (Panax ginseng), de ginko biloba, de Mosto de St. John (Hyperycum Perforatum), de gilbardeira (Ruscus aculeatus L), de arbusto europeu (Filipendula ulmaria L\ de chá de Jarva de flor grande (Orthosiphon Stamincus Benth}, de algas (Fucus Vesiculosus}, de bétula (Bétula alba), de chá verde, de noz de cola (Cola Nipida}, de castanha da índia, de bambu, de centela (Centella as ia ti ca}, de heather, de fuco, de salgueiro, de orelha de rato, de escina, de cangzhu, de chrysanthellum indicum, das plantas do gênero Armeniacea, Atractylodis Platicodon, Sinnomenum, Pharbitidis, Flemingia, de Coleus tais como C. Forskohlii, C. blumei, C. esquirolii, C. scutellaroides, C. xanthantus and C, Barbatus, tal como o extrato da raiz de Coleus barbatus, extratos de de

Ballote, de Guio a, de Davallia, de Terminalia, de Barringtonia, de Trema, de antirobia, cecropia, argania, dioscoreae tal como Dioscorea opposita ou Mexican, extratos de Ammi visnaga, de Centella asiatica e Siegesbeckia, em particular Siegesbeckia orientalis, extratos vegetais da família de Ericaceae, em particular extratos de mirtilo (Vaccinium angustifollium) ou Arctostaphylos uva ursi, aloe vera, esteróis vegetais (por exemplo, fitoesterol), Manjistha (extratos das plantas do gênero Rubia, particularmente Rubia Cordifolia), e Guggal (extraído das plantas do gênero Commiphora, particularmente Commiphora Mukuí), extrato de cola, camomila, extrato de trevo vermelho, extrato de Piper methysticum (Kava Kava de SEDERMA (FR 2 771 002 e WO 99/25369), extrato de Bacopa monieri (Bacocalmine™ de SEDERMA, WO 99/40897) e extrato de chicote do mar, extratos de Glycyrrhiza glabra, de amora, de melaleuca (tea tree), de Larrea divaricata, de Rabdosia rubescens, de euglena gracilis, de Fibraurea recisa Hirudinea, de Chaparral Sorghum, de extrato de girassol, de Enantia clorantha, de Mitracarpe do gênero Spermacocea, de Buchu barosma, de Lawsonia inermis L., de Adiantium Capillus-Veneris L·, de Chelidonium majus, de Luffa cylindrical, de mandarina japonesa (Citrus reticulata Blanco var. unshiu), de Camélia sinensis, de Imperata cylindrical, de Glaucium Flavum, de Cupressus Sempervirens, de Polygonatum multiflorum, de loveyly hemsleya, de Sambucus Nigra, de Phaseolus lunatus, de Centaurium, de Macrocystis Pyrifera, de Turnera Diffusa, de Anemarrhena asphodeloides, de Portulaca pilosa, de Humulus lupulus, de Coffea Arabica and de Ilex Par aguar iensis.

A extração da planta pode ser realizada usando-se engenharias convencionais, tais como extração fenólica, de qualquer parte da planta, tal como a flor, semente, fruto, raiz, tubérculo, folha, pericarpo e preferivelmente rizoma. Os solventes de extração podem ser selecionados dentre água, propileno glicol, butileno glicol, glicerina, glicerídeos carílicos; cápricos PEG-6, polietileno glicol, metil e/ou etil ésteres, diglicóis, polióis cíclicos, diglicóis etoxilados ou propoxilados, álcoois (metanol, etanol, propanol e butanol) ou qualquer mistura destes solventes. Os extratos vegetais de acordo com a presente invenção também podem ser obtidos por outros processos, tais como maceração, decocção simples, lixiviação, extração por refluxo, extração super-crítica com CO₂, ultrassom ou extração por micro-ondas ou técnicas contra-corrente ou pelas engenharias de culturacelular vegetal e/ou fermentação. Esta lista não é restritiva.

Os peptídeos adequados podem incluir, mas não se limitam a, di-, tri-, tetra-, penta- e hexa- peptídeos e seus derivados. Em uma forma de realização, a composição compreende de cerca de 1x10-7 % a cerca de 20 %, mais preferivelmente de cerca de 1x10-6 % a cerca de 10 %, ainda mais preferivelmente de cerca de 1x10-5 % a cerca de 5 %, em peso de peptídeo adicional.

Como usado aqui, “peptídeo” refere-se a peptídeos contendo dez ou menos aminoácidos e seus derivados, isômeros e complexos com outras espécies, tais como íons metálicos (por exemplo, cobre, zinco, manganês, magnésio e outros). Como usado aqui, peptídeo refere-se tanto a peptídeos de ocorrência natural quanto sintetizados. Também são úteis aqui as composições de ocorrência natural e comercialmente disponíveis que contenham peptídeos.

Os peptídeos adequados para o uso aqui incluem mas não se limitam a Camosina (beta-AH), YR, VW, NF, DF, KT, KC, CK, KP, KK ou TT. Os tripeptídeos adequados para o uso aqui incluem, mas não se limitam a RKR, HGG, GHK, GKH, GGH, GHG, KFK, GKH, KPK, ΚΜΟΚ, KM02K ou KAvaK. Os tetrapeptídeos adequados para o uso aqui incluem mas não se limitam a RSRK (SEQ ID N°: 1), GQPR (SEQ ID N°: 2) or KTFK (SEQ ID N°: 3). Os pentapeptídeos adequados incluem, mas não se limitam a KTTKS (SEQ ID N°: 4). Os hexapeptídeos adequados incluem mas não se limitam a GKTTKS (SEQ ID N°: 5), VGVAPG (SEQ ID N°: 6) e do tipo divulgado em

FR 2854897 e US 2004/0120918.

Outros peptídeos adequados para o uso aqui incluem, mas não se limitam a derivados lipofílicos de peptídeos, preferivelmente derivados de palmitoíla e complexos metálicos dos já mencionados (por exemplo, complexo de cobre do tripeptídeo His-Gly-Gly). Os derivados de dipeptídeo preferidos incluem N-Palmitoil-beta-Ala-His, N-Acetil-Tyr-Arghexadeciléster (CALMOSENSINE™ da SEDERMA, França, WO 9807744, US 6,372,717). Os derivados de tripeptídeo preferidos incluem N-PalmitoilGly-Lys-His, (Pal-GKH da SEDERMA, França, WO 0040611), Pal-KMO2K, um derivado de cobre de His-Gly-Gly vendido comercialmente como lamina, da Sigma, lipospondina (N-Elaidoil-Lys-Phe-Lys) e seus análogos de substituição conservativa, N-Acetil-Arg-Lys-Arg-NH2 (Peptide CK+), NBiot-Gly-His-Lys (N-Biot-GHK de SEDERMA, W00058347) e seus derivados. Os derivados de tetrapeptídeo adequados para o uso aqui incluem, mas não se limitam a N-palmitoil-Gly-Gln-Pro-Arg (SEQ ID N°: 9) (da SEDERMA, França), derivados de pentapeptídeo adequados para o uso aqui incluem, mas não se limitam a N-Palmitoil-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser (SEQ ID N°: 8) (disponíveis como MATRIXYL™ da SEDERMA, França, WO 0015188 e US 6,620, 419) N-Palmitoil-Tyr-Gly-Gly-Phe-X com X Met (SEQ ID N°: 10) or Leu (SEQ ID N°: 11) ou misturas destes. Os derivados de hexapeptídeo adequados para o uso aqui incluem, mas não se limitam a NPalmitoil-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly (SEQ ID N°: 7) e seus derivados.

As composições preferidas comercialmente disponíveis contendo um tripeptídeo ou um derivado incluem Biopeptide-CL™ da SEDERMA (W00143701), Maxilip™ da SEDERMA (W00143701), Biobustyl™ da SEDERMA. As composições comercialmente disponíveis fontes preferidas de tetrapeptídeos incluem RIGIN™ (W00043417), EYELISS™ (W003068141), MATRIXYL™ RELOADED, and MATRIXIL 3000™ contendo entre 50 e 500 ppm de palmitoil-Gly-Gln-Pro-Arg (SEQ ID

Ν°: 9) e carregador, proposto por SEDERMA, França (US2004/0132667).

Os seguintes peptídeos comercializados podem ser mencionados, bem como ingredientes ativos adicionais: Vialox™, Syn-ake™ or Syn-Coll™ (Pentapharm), Hidroxiprolisilane CN™ (Exsymol),

Argireline™, Leuphasyl™, Aldenine™, Trylgen™, Eyeseryl™, Serilesine™ or Decorinyl™ (Lipotec), Collaxyl™ or Quintescine™ (Vincience), BONTL-Peptide™ (lnfmitec Activos), Cytokinol™LS (Laboratoires Serobiologiques/Cognis), Kollaren™, IP2000™ or Meliprene™ (lnstitut Européen de Biologie Cellulaire), Neutrazen™ (Innovations), ECM-Protect™ (Atrium Innovations), Timp-Peptide™ ou ECM Moduline™ (lnfinitec Activos),

Preparação da composição

As composições da presente invenção são, em geral, preparadas por métodos convencionais tais como são conhecidos na técnica de fabricar composições tópicas e orais e composições para injeção. Tais métodos podem ser tipicamente conduzidos em uma ou mais etapas, com ou sem aquecimento, esfriamento e outros.

A forma física das composições de acordo com a invenção não é importante: estas podem estar em uma forma galênica tais como cremes, loções, leite ou unguentos de creme, géis, emulsões, dispersões, soluções, suspensões, limpadores, fundações, preparações anidras (bastões, em particular, pomada para os lábios, óleos para o corpo e de banho), géis de banho, xampus e loções de tratamento do couro cabeludo, creme ou loção para o cuidado da pele ou cabelo, loções ou cremes removedores de maquiagem, loções, leites ou cremes de protetor solar, loções, cremes ou leites de bronzeamento, cremes, espumas, géis ou loções de pré-barbear, de barbear ou pós-barba, maquiagens, batons, máscaras ou esmaltes de unha, “essências” para pele, soros, materiais adesivos ou absorventes, emplastros transdérmicos ou pós, loção emoliente, leite ou creme, pulverizações, óleos para o corpo e para o banho, bases de tinta, pomada, emulsão, suspensão colóide, compacta ou sólida, lápis, formulação pulverizável ou espalhável, blush, vermelho, delineador de olho, delineador labial, brilho labial, pó facial ou corporal, espumas ou géis estilizadores, condicionador de unhas, bálsamos labiais, condicionadores de pele, hidratantes, pulverizações capilares, sabões, esfoliantes corporais, adstringentes, depilatórios e soluções de ondulação permanente, formulações anticaspa, composições anti-suor e antiperpirantes, pulverizações nasais e assim por diante. Estas composições também podem ser apresentadas na forma de batons pretendidos para a aplicação de cor ou proteger os lábios de racbaduras ou de produtos de maquiagem para os olhos ou pinturas ou bases de pinturas para a fase. As composições de acordo com a invenção incluem cosméticos, produtos de cuidado pessoal e preparações farmacêuticas. A presente invenção também pode ser aplicada na pele animal e/ou adicionais. Também se pode considerar a composição na forma de espuma ou na forma de composições para aerossol também incluindo um agente propelente sob pressão.

As composições cosméticas de acordo com a invenção também podem ser para o uso orodental, por exemplo, pasta de dente. Naquele caso, as composições podem conter os adjuvantes e aditivos usuais para composições para o uso oral e, em particular, tensoativos, agentes espessantes, agentes umectantes, agentes polidores, tais como sílica, várias substâncias ativas, tais como fluoretos, particularmente fluoreto de sódio e, possivelmente, agentes adoçantes, tais como sacarina sódica.

O composto de acordo com a presente invenção pode estar na forma de solução, dispersão, emulsão, pasta ou pó, individualmente ou como uma pré-mistura ou em veículos individualmente ou como uma pré-mistura em vetores, tais como macro-, micro- ou nanocápsulas, macro-, micro- ou nanoesferas, lipossomas, oleossomas ou quilomícrons, macro-, micro- ou nanopartículas ou macro-, micro ou nanoesponjas, esporos ou exinas, micro ou nano emulsões ou absorvidos em pós poliméricos orgânicos, talcos, bentonitas ou outros suportes inorgânicos ou orgânicos.

O composto de acordo com a presente invenção pode ser usado em qualquer forma que seja, em uma forma ligada a ou incorporada em ou absorvida em macro-, micro- e nanopartículas ou macro-, micro e nanocápsulas, para o tratamento de têxteis, fibras naturais ou sintéticas, lãs e quaisquer materiais que podem ser usados para roupas ou roupa íntima para o dia ou noite pretendido entrar em contato co ma pele, lenços ou panos, para exercer seu efeito cosmético por intermédio do contato com a pele/têxtil e para permitir a liberação tópica contínua.

Método de tratamento cosmético ou dermofarmacêutico tópico

A presente invenção também se refere ao processo de tratamento tópico para melhorar a condição geral da pele que envolve a aplicação tópica à pele de uma quantidade eficaz da composição da invenção com o citado acima. Mais especificamente:

para evitar e/ou tratar os sinais de envelhecimento intrínseco e extrínseco da pele;

para evitar e/ou tratar a desidratação da pele;

para evitar e/ou tratar flacidez da pele e/ou melhorar o tônus e/ou firmeza e/ou elasticidade e elasticidade da pele;

para evitar e/ou tratar atrofia da pele e/ou melhorar a densidade da derme e da epiderme;

dar ou retomar volume à derme e epiderme; para estimular a expansão do tecido adiposo.

Para clarear a pele;

para evitar e/ou tratar aspereza da pele;

para evitar e/ou tratar degradação da pele devido aos efeitos de oxidação;

para evitar e/ou tratar perda capilar;

para evitar e/ou tratar glicação de moléculas na pela;

para evitar e/ou tratar acne;

para evitar e/ou tratar estados inflamatórios.

A composição de acordo com a invenção pode ser aplicada localmente em áreas da face, lábios, pescoço, linha do pescoço, mãos, pés, cabeça ou corpo. Uma das vantagens principais da presente invenção reside na capacidade quando necessário ou desejável ser capaz de aplicar tratamentos “leves” seletivos locais através deste método não invasivo tópico de aplicação. No caso de uso anti-rugas, por exemplo, este pode ser aplicado muito localmente usando-se uma seringa ou microcânula.

Também é possível, entretanto, considerar uma composição contendo o composto de acordo com a invenção pretendido ser injetado subcutaneamente.

De acordo com outras características específicas, o método de tratamento de acordo com a invenção pode ser combinado com um ou mais outros métodos de tratamento que alvejam a pele, tal como luminoterapia, aromaterapia ou tratamentos por calor.

De acordo com a invenção, dispositivos com diversos compartimentos ou kits podem ser propostos para aplicar o método descrito acima que pode inclui, por exemplo, e não restritivamente, um primeiro compartimento contendo a composição incluindo o composto lipossulfatado ou lipofosfatado da invenção e em um segundo compartimento uma composição contendo um outro ingrediente e/ou excipiente ativo, as composições contidas no dito primeiro e segundo compartimentos, neste caso sendo considerados serem uma composição de combinação para o uso simultâneo, separado ou em etapas durante o tempo, particularmente em um dos métodos de tratamento citados acima.

Exemplos

Os seguintes exemplos descrevem e demonstram vários aspectos dentro do escopo da presente invenção. Os exemplos são apenas dados para os propósitos ilustrativos e não devem ser considerados ser restritivos a sua invenção. Adicionalmente para os propósitos ilustrativos diversas formulações cosméticas serão descritas. Estas formulações são representativas, mas não restritas a invenção.

1/Exemplo do método de fabricação para obter o Lipo-Fosfomalato (4tetradecil éster do ácido 2-fosfato-succínico) de acordo com a invenção:

A síntese do 4-tetradecil éster do ácido 2-fosfato-succínico (produto final com a 2 referência) é realizada nas 4 etapas lineares de acordo com o seguinte esquema de síntese:

2_;2-dsrneíoxipíopano_fTolueno, refluxo

DCC, DMAFcat 0¾¾

T

Acetona, HCI 1M,Ta

O OH

H3PQ4 cat. dilaurato de dibntfltma. 80°C

Síntese do ácido (2,2-dimetil-5-oxo-íl,31dioxolan-4-il)-acétíco (com a referência 5 no esquema acima):

Ácido DL-málico marcado (com a referência 4 no esquema acima) é protegido na forma de dioxolano no refluxo de tolueno, na presença de 2,2-dimetoxipropano. A reação é quantitativa. O produto obtido (com a referência 5 no esquema acima) é diretamente comprometido na seguinte etapa.

Síntese de tetradecil éster do ácido (2₅2-dimetil-5Oxo-ll,31dioxolan-4-il)acético (com a referência 7 no esquema acima):

A função carboxílica livre é esterificada com 1 tetradecanol, na presença de DCC (Dicicloexilcarbodiimida) e de uma quantidade catalítica de DMAP3 (4-dimetilaminopiridina). O composto obtido (com a referência 7 no esquema acima) é diretamente comprometido na seguinte etapa.

Síntese de 4-tetradecil éster do ácido succínico (com a 8 referência no esquema acima):

O cetal (ref 7) é hidrolisado em um meio ácido para conduzir o ácido. O rendimento do produto isolado é de 71 % após purificação e cristalização em ciclo-hexano.

Síntese do 4-tetradecil éster do ácido 2-fosfato-succínico (ref 2)

A função de álcool livre é fosfatado com ácido fosfórico na presença de uma quantidade catalítica de dilaurato de dibutiltina, a 80°C. O lipo-fosfo-malato desejado (ref 2) é obtido com um rendimento de 46 % na forma de um sólido branco.

2/Exemplo de formulação de um ingrediente ativo que compreende um composto da invenção

Este ingrediente ativo é para a indústria cosmética para a preparação dos produtos cosméticos, tal como cremes, géis, etc.

O Lipo-Fosfomalato sólido é primeiro solubilizado em uma mistura de ésteres de açúcares (laurato e/ou sorbitano de oleato) e de ésteres fosfatados (fosfatos de oleila e/ou dioleila), então dispersado em um emoliente.

Tipicamente, a quantidade de Lipo-Fosfomalato neste 5 ingrediente ativo será de cerca de 200 ppm.

3/Resultados da avaliação in vitro

Para estes testes de avaliação, quando o Lipo-Fosfomalato é solubilizado, este é de acordo com o ponto acima 2/.

Filagrina é uma proteína observada na parte superior da epiderme. Este é um fator chave na homeostase de água em virtude de seu papel crucial na formação e então estabilização da barreira cutânea (estrato córneo) e na classificação do Fator de Umidificação Natural (Natural Moisterising Factor (NMF)).

A Filagrina é produzida pela camada granular - a última viável da epiderme - na forma de um precursor polimérico: a profilagrina. A última é uma cadeia de 1 a 12 monômeros de filagrina. Seus controles de taxa de fosforilação em sua insolubilidade, lise e acondicionamento nos grânulos de querato-hialina com loricrina e queratinas 1 e 10.

Sucessivamente e, como elevará em direção as camadas superiores da epiderme, profilagrina sofrerá:

uma proteólise levando à produção de monômeros de filagrina. Matriptase é envolvida nesta proteólise;

uma ligação nos filamentos intermediários de queratina (KIF) devido a TGase;

- a desiminação de filagrina por um peptidil desiminase para reduzir a ligação e levando ao reaparecimento de monômeros de filagrina e a degradação de filagrina nos fragmentos de filagrina por uma protease não identificada.

Na parte inferior do estrato córneo, desidratação dispara a proteólise completa de fragmentos de filagrina sob a ação de caspase-14. Esta proteólise leva à produção de aminoácidos higroscópicos. Estes aminoácidos formam cerca de 40 % do fator de umidificação natural (NMF), parcialmente responsável pela manutenção da boa hidratação da epiderme.

A boa hidratação da epiderme é um fenômeno de complexo que envolve a manutenção de um nível alto da expressão das proteínas diferentes: filagrina, TGase, loricrina, matriptase e caspase 14. Este é atingido através da aplicação dos queratinócitos humanos na cultura ou nos explantes da pele.

A própria hidratação da pele também é garantida pela presença na camada córnea de uma membrana de lipídeo particularmente impermeável, que evita a perda de água.

3.1- Estudo da síntese de filagrina nos queratinócitos humanos (Método imunofluorescente)

Protocolo: Queratinócitos humanos foram cultivados até a confluência. As células foram então colocadas em contato/não contato com um Lipo-Fosfomalato solubilizado por 21 dias. No final deste período de contato, rotulação comum tanto a filagrina quanto profilagrina foi realizado nas camadas celulares usando os anticorpos específicos. A intensidade de rotulação foi analisado em fotos (n-15 fotos) e comparado aquele obtido para o controle negativo e para a vitamina D3 em 10 M usado como um controle de diferenciação positivo.

Tabela 1: Produção de filagrina e profilagrina nos queratinócitos humanos na presença de Lipo-Fosfomalato solubilizado

	Concentração	Filagrina/profílagrina (UFA/10⁰ célula.)	Mudança (%); importância
Controle	-	1,39 ±0,62	Referência
Lipo-Fosfomalato	1,5 ppm	3,04 ±1,21	+119%;p<0,07
solubilizado	5 ppm	5,00 ±1,58	+259 %; p<0,01

Vitamina D3 (10'⁷M): +221 % (p<0,01)

O controle positivo fortemente usado induz a profilagrina e síntese de profilagrina e filagrina nas células. No mesmo período, aumento das concentrações de Lipo-Fosfomalato solubilizado estimula esta produção em uma maneira dependente da dosagem. Um aumento de +259 % (p<0,01) foi registrado na presença de 5 ppm de Lipo-Fosfomalato solubilizado comparado ao controle.

3.2- Destaque do aumento da síntese de filagrina/profilagrina na pele humana explantada na presença de Lipo-Fosfomalato solubilizado

A síntese de filagrina/profilagrina foi confirmada nas peles humanas explantadas. Este modelo, altamente realístico, confirma os resultados nas culturas de camada simples.

Protocolo experimental: O dia após sua preparação (remoção de tecido adiposo), um creme contendo 5 ppm de LipoFosfomalato solubilizado foi topicamente aplicado aos segmentos da pele medindo 8 mm em diâmetro, a cada dia por 5 dias (creme preparado com um ingrediente ativo do ponto acima 2/) (n=3 segmentos da pele). No mesmo período o creme de placebo foi aplicado às peles de controle (n=3). Seguindo as aplicações, os segmentos da pele foram fixados, congelados e então cortados usando um criomicrotomo. As lâminas obtidas foram rotuladas com o mesmo anticorpo como antes. Os marcadores de filagrina/profilagrina fluorescentes obtidos a partir do creme com a Lipo-Fosfomalato foram quantificados pela análise de imagem (n=30 fotos para cada caso) e comparado àqueles obtidos com um creme de placebo.

Em uma segunda série de experimentos, os segmentos da pele foram levemente retirados em avanço (4 faixas sucessivas), a fim de melhorar a penetração ativa e então são submetidos ao mesmo procedimento como antes.

Resultados: as fotos mostram a variação na quantidade de filagrina/profilagrina na seção superior da epiderme da pele humana seguindo a aplicação do creme contendo o Lipo-Fosfomalato solubilizado ou o creme de placebo.

Tabela 2: Produção de filagrina e profilagrina induzida pela Lipo-Fosfomalato para a pele humana

	Filagrina/profilagrina (UFA)	Mudança (%); importância
Peles intactas	Creme de placebo	8,59 ± 2,00	Referência
Creme com 5 ppm de Lipo-Fosfomalato solubilizado	11,40 ±2,90	±33 %; p<0,01
Pele retiradas	Creme de placebo	8,55 ± 1,70	Referência
Creme com 5 ppm de Lipo-Fosfomalato solubilizado	14,43 ±3,10	±69 %; p<0,01

Um aumento marcado no sinal fluorescente de filagrina foi observado nas peles que receberam o creme a 5 ppm de Lipo-Fosfomalato solubilizado comparado as peles que receberam o creme de placebo.

Similarmente, os resultados da análise registrados pela pele retirada mostra que o creme contendo 5 ppm de Lipo-Fosfomalato solubilizado estimula a produção de filagrina/profilagrina em uma extensão altamente significante comparada aos controles. De maneira interessante notase que a mesma quantidade de filagrina foi obtida com um placebo, com relação se as faixas ou não foram usadas. A retirada antes da aplicação do composto portanto melhora a eficácia de Lipo-Fosfomalato solubilizado facilitando sua penetração.

Estes dois estudos, juntos com um realizado nos queratinócitos cultivados, mostram que a Lipo-Fosfomalato solubilizado pode aumentar as quantidades de filagrina/profilagrina na epiderme.

3.3- Estudo da síntese de caspase-14 e matriptase

Estas duas enzimas são responsáveis do metabolismo de profilagrina e filagrina.

O método divulgado no exemplo 1.2- foi usado.

Resultados

Tabela 3: Produção de matriptase e caspase-14 na presença de LipoFosfomalato solubilizado nos queratinócitos humanos cultivados pela imunorrotulação (n=15 fotos)

	Concentrações	Matriptase (UFA/10⁶ célula)	Mudança (%); importância	Caspase (UFA/10⁶ célula)	Mudança (%); importância
Controle	-	1,01 ±0,34	Referência	0,51+0,16	Referência
Lipo-Fosfomalato solubilizado	1,5 ppm 5 ppm	2,27 ± 0,47 4,08 ±1,56	+125%; p<0,01 +304 %; p<0,01	1,13 ±0,44 1,68 ±0,64	±121 %; p<0,01 +229 %; p<0,01
Vitamina D3 (10’⁷M): +239 % e +57]	% (p<0,01)

Os resultados mostram que a matriptase aumenta em um modelo similar a filagrina nas camadas de queratinócitos. A indução foi significante e dependente da dosagem na quantidade de Lipo-Fosfomalato solubilizado para atingir +304 % a 5 ppm.

Indução da síntese de caspase-14 (+229 %; p<0,01) também 10 foi observado com 5 ppm de Lipo-Fosfomalato solubilizado. Como para a matriptase, paralelismo com um aumento da síntese de filagrina é observado.

Parece portanto que a formação de filagrina não é apenas o fenômeno a ser promovido pelo Lipo-Fosfomalato solubilizado, mas que as enzimas, que produzem o componente umectante na divagem de filagrina, também são estimulados e nas proporções similares.

3.4- Estudo da síntese de loricrina

A loricrina é um dos elementos chave na formação do envelope córneo. Esta é ligada à involucrina (ver 1.1) pela transglutaminase, que formam as estruturas insolúveis, rígidas. O método descrito em 1.2. foi usado.

Tabela 4: Produção de loricrina na presença de Lipo-Fosfomalato solubilizado nos queratinócitos humanos cultivados pela imunorrotulação (n=15 fotos)

	Concentrações	Loricrina (UFA/10⁶ célula)	Mudança (%); importância
Controle	-	0,73 + 0,48	Referência
Lipo-Fosfomalato	1,5 ppm	1,69 ±0,67	±131 %; p<0,01
solubilizado	5 ppm	3,84 ± 1,19	±426 %;/><0,0/

Vitamina D3 (10'⁷M): +206 % (p<0,01)

Como para as três proteínas precedentes, um estímulo alto da síntese de loricrina pela Lipo-Fosfomalato solubilizado também é observado.

3.5- Estudo da transcrição e atividade de transglutaminase

A transglutaminase foi estudada usando a transcrição por mRNA, qRT-PCR e com relação a atividade pelo ensaio enzimológico. ByqRT-PCR: Queratinócitos humanos foram colocados em contato/não colocado em contato com solubilizado por 14 horas. No final do período de contato, as culturas foram interrompidas e m-RNA permitem a produção de proteína de transglutaminase-1 foi quantificada usando o Método RT-PCR.

Após a extração e purificação de m-RNA, cópias são feitas em DNA usando uma Transcriptase reversa (RT). O número de cópias de um dado m-RNA (aquele de TGase) é portanto amplificado usando dois olignonucleotídeos (denominado iniciadores) específicos aos genes de TGase e em uma enzima (PCR = reação de cadeia de polimerase) durante uma série de ciclos de amplificação, cada um de que a duplicação do número de cópias presentes. O resultado desta ampliação é medido pela fluorescência. Ct é o número de ciclos requeridos para atingir um dado nível de fluorescência (série arbitrária). É claro, que mais m-RNA de um dado gene presente na cultura de partida existe, em poucos ciclos (Ct) são necessários para atingir o nível de série de fluorescência.

Pela enzimologia: No final do período de contato de 14 dias, as células foram colocadas em contato com um substrato de transglutaminase sintética fluorescente. A metabolização do substrato por intermédio da transglutaminase permitirá a fixação na matriz de proteína intracelular. Após o enxague, o substrato fluorescente não fixo é eliminado e a fluorescência fixa nas células pela enzima é quantificada.

Tabela 5: Produção de transglutaminase-1 m-RNA e da variação da atividade de transglutaminase na presença de Lipo-Fosfomalato solubilizado nos queratinócitos (n=5)

	m-RNA	Enzimologia
	Concentrações	Número de ciclos: Ct*	% de mudança**; Importância	rransglutaminase (UFA/10⁶ célula)	% de mudança; Importância
Controle		24,60 ± 0,42	Referência	230 ± 43	Referência
Lipo-Fosfomalato solubilizado	5 ppm	23,25 ± 0,46	+101 %; p<0,01	516 + 63	+124%;p<0,01

Vitamina D3 (10’⁷M): m-RNA <=> +73 % e Enzimologia O x7,5 (p<0,01) * uma unidade Ct corresponde a aproximadamente 100 % de variação.

** após normalização pelo gene « manutenção», invariável na concentração, com ou sem LipoFosfomalato solubilizado.

Estes resultados mostram que transglutaminase é induzida pela Lipo-Fosfoinalato solubilizado, ambos no nível transcricional (m-RNA) e no nível de atividade de proteína. Em ambos casos, o aumento é próximo a +100 % (p<0,01).

Além disso, um estudo de ensaio de DNA mostrou que a transglutaminase-1 e genes de involucrina são superexpressados na rede com outros genes essenciais para a formação da camada comificada na presença de Lipo-Fosfomalato solubilizado.

A Indução de síntese TGase pelo Lipo-Fosfomalato solubilizado completa esta figura do estímulo da proteína essencial para formar a barreira da pele. Que é notável na invenção é o estímulo simultâneo na presença de Lipo-Fosfomalato solubilizado destas cinco proteínas, cada uma essencial para a hidratação.

3.6- Avaliação do efeito de Lipo-Fosfomalato na síntese de complexo de lipídeos

A pele é feita até de diversas camadas de células que protegem a partir das agressões externas por vários meios. O meio principal entre estes é uma barreira de lipídeo no estrato córneo, a camada externa da pele, consistindo principalmente de ceramidas, colesterol e ácidos graxos permitem a pele reter sua hidratação. Estudamos o efeito de Lipo-Fosfomalato na síntese de colesterol e ceramidas nos queratinócitos humanos cultivados.

- Colesterol (imunorrotulação)

Os queratinócitos humanos cultivados em confluência foram colocados em contato com um Lipo-Fosfomalato em um meio levemente enriquecido com cálcio para promover o estabelecimento das junções intercelulares e deste modo melhoram a ancoragem das células diferenciadas às células subjacentes. Um controle negativo foi realizado no mesmo meio. Após um período de contato de 7 dias, a camada foi rotulada com um fluorescente específico por colesterol. A intensidade da rotulação foi analisadas nas fotos e comparada aquele obtido com um controle negativo (Tabela 6).

As fotos de casos de Lipo-Fosfomalato mostram um início de diferenciação marcada visível abaixo no microscópio. As células são ligadas nos feixes coesivos amplos, algumas vezes interligados como através da rede. Este não foi observado com um controle negativo no mesmo período.

Além disso, a quantificação pela rotulação imunológica, quantificação de colesterol foi realizado usando a cromatografia de camada fina de desempenho alto (ou HPTLC).

- Colesterol (cromatografia de camada fina)

O mesmo protocolo foi seguido como antes mas uma ampla quantidade de queracinócitos foi usado nesta ocasião por causa dos limites da detecção do mecanismo. Após 7 dias, as camadas foram enxaguadas, os lipídeos extraídos usando os solventes antes de ser depositado em uma placa de cromatografia de camada fina usando um dispositivo automático. Após migração e detecção, os grupos foram analisados e quantificados com base na faixa dos lipídeos padrão depositados na mesma placa.

Tabela 6: variação da quantidade de colesterol pela imunorrotulação e HPTLC nos queratinócitos após o contato com Lipo-Fosfomalato solubilizado

	IMF	HPTLC
	Concentrações	Colesterol (UFA/10⁶ célula)	% de mudança*; Importância	Colesterol (pg/10⁶ célula)	% de mudança; Importância
Controle	-	2,40 + 2,37	Referência	20,24 + 2,40	Referência
Lipo-Fosfomalato solubilizado	5 ppm	4,98 ± 2,59	+107%; p<0,04	30,89 ± 7,20	+53 %; p<0,05

Estes dois resultados, obtidos com dois métodos diferentes, mostram que o Lipo-Fosfomalato estimula a produção de colesterol durante a diferenciação de queratinócito.

- Ceramidas

No mesmo período como o ensaio de HPTLC, um ensaio de ceramidas hidroxiladas e não hidroxiladas foi realizado nos extratos.

Tabela 7: Variação de quantidade de ceramidas por HPTLC nos queratinócitos após o contato com um Lipo-Fosfomalato solubilizado

	Concentrações	Ceramidas não hidroxiladas (pg/10⁶ célula)	% de mudança*; Importância	Ceramidas hidroxiladas (pg/10⁵ célula)	Mudança*; Importância
Controle	-	2,36 + 0,10	Referência	1,40 + 0,01	Referência
Lipo-Fosfomalato solubilizado	5 ppm	8,41 + 1,30	+256%; p<0,01	10,50 + 1,12	x 7,5

*: número de vezes.

Este dado claramente mostra que Lipo-Fosfomalato induz a produção de colesterol e várias classes de ceramidas nos queratinócitos durantes sua diferenciação. Esta produção de lipídeo pelo Lipo-Fosfomalato não foi observado em fibroblastos ou melanócitos. É portanto um efeito específico relacionado ao metabolismo de queratinócito durante sua diferenciação.

Toda esta informação claramente mostra que os disparos de Lipo-Fosfomalato nos queratinócitos humanos cultivados pela produção de elementos essenciais para a introdução e homeostase da hidratação e barreira da pele. Deste modo um número da síntese converge para criar o envelope celular comificado em termos de ambas produções de comeócito estreitado com uma matriz de proteína reticulada e a produção de seus lipídeos essenciais. Filagrina, caspase-14 e matriptase formam a base da produção de homeostase de água; involucrina, loricrina e transglutaminase são os elementos chaves da formação de comeócito; ceramidas e colesterol completo

I esta figura para a formação de hidro-barreira de lipídeo.

3.7- Síntese de ácido hialurônico e seu receptor CD44

O principal interesse citado do ácido hialurônico é seu papel como um agente de hidratação para a epiderme de pele e também como agente anti-ruga, porque participa da elasticidade da pele. O ácido hialurônico está presente nos espaços intercelulares das camadas basais e espinosa, principalmente da camada espinosa média, mas ausente de camadas superiores (granular e córnea).

Seu papel de hidratação é portanto posicionado nas camadas 10 inferiores da epiderme, desigual aos efeitos previamente mencionados que foram localizados nas camadas superiores da epiderme.

- Efeito na síntese do ácido hialurônico pelas humanas de queratinócitos humanos

Protocolo: Queratinócitos humanos são humanas foram cultivados em placas 15 MW24 por 24 horas. As células foram contatadas ou não com a LipoFosfomalato por 3 dias. Os sobrenadantes de cultura foram tirados e um ensaio da quantidade de ácido hialurônico foi atingido. Ácido retinóico foi usado como o controle positivo.

Tabela 8: aumento de ácido hialurônico pelo Lipo-Fosfomalato nos 20 queratinócitos humanos (ELISA) (n=5)

	Concentração	ng/10^e6 células	% de mudança/ControIe
Controle	-	878 +/-21	Referência
Lipo-Fosfomalato solubilizado	1,67 ppm	1015+/- 46	+16%; p<0,01
	5 ppm	1374 +/- 50	+57 %; p<0,01
	8,33 ppm	1480 +/-51	+69 %; p<0,01
Ácido retinóico (controle positivo)	ΙμΜ = +190%; p<0,01.

Um estímulo significante e dependente da dosagem da síntese de ácido hialurônico no queratinócito humano na presença de LipoFosfomalato da invenção é observada.

- Efeito da síntese CD44 pelo queratinócito

Protocolo: Queratinócitos humanos foram cultivados na caixa de 35 mm a confluência. As células são contatadas ou não com um Lipo-Fosfomalato por dias. No final deste período de contato, as células são fixadas e uma rotulação imunológica de CD44 é feita usando os anticorpos específicos. Tabela 9: Aumento da síntese CD44 na presença de Lipo-Fosfomalato pelos queratinócitos humanos

	Concentração	ÜFA/10⁶ células	% de variação/ControIe
Controle	-	3,96 +/- 3,65	Referência
Lipo-Fosfomalato solubilizado	5 ppm	27,20 +/- 16,5	+587%; p<0,01 =>x7

Um estímulo significante e dependente da dosagem de queratinócito CD44 na presença de Lipo-Fosfomalato da invenção é observada.

3.8- Efeito na síntese de laminina pelos queratinócitos humanos

A molécula de laminina é importante no nível da junção dermo-epidérmica (DEJ). Este garante a ancoragem própria dos queratinócitos basais à membrana de base e é responsável pela elasticidade da epiderme. Nas células envelhecidas não é mais substituído como eficientemente como nas células mais jovens, visto que a necessidade de estimular a biossíntese para uma renovação melhorada.

Protocolo: Queratinócitos humanos são humanas foram cultivados em placas

MW24 por 24 horas. As células foram contatadas ou não com um LipoFosfomalato por 3 dias. Os sobrenadantes de cultura foram tirados e um ensaio da quantidade de laminina foi atingido. TGF-βΙ foi usado como o controle positivo.

Tabela 10A: Aumento de laminina pela Lipo-Fosfomalato em queratinócitos humanos (ELISA) (n=5)

	Concentração	ng/10^e6 células	% de variação/ControIe
Controle	-	116+/-13	Referência
Lipo-Fosfomalato solubilizado	1,67 ppm	190 +/-11	+64 %; p<0,01
	⁵ PP^m	333 +/- 10	+187%; p<0,01
	8,33 ppm	343 +/- 10	+196%; p<0,01

TGF- βΐ (controle positivo) lÓ'⁶ % = +361 %; p<0,01

Um estímulo significante ou dependente da dosagem da síntese de laminina no queratinócito na presença de Lipo-Fosfomalato da invenção é observada.

Este faz a Lipo-Fosfomalato da invenção particularmente bem adequado para anti-envelhecimento, em particular para as aplicações antirugas e firmeza.

3.9- Síntese de colágeno I em fibroblastos dérmicos humanos

Os fibroblastos humanos normais (NHF) são cultivados em placas MW24 por 24 horas. As células são contatadas ou não com um LipoFosfomalato da invenção em várias concentrações por 7 dias. A síntese de colágeno I produzido pelas células é então quantificado pela imunorrotulação fixadas nas camadas usando um anticorpo específico. A quantificação pela análise de imagem é então realizada nas fotos.

O TGF- βΐ é usado como controle positivo.

Uma análise de diferença foi realizada nos dados (casos tratados comparados com casos não tratados). No caso de identidade das diferenças, um teste de Student foi então realizado nos meios.

Resultados:

Tabela 10B: Síntese aumentada de colágeno I no fibroblasto (n = 15 perfis/casos)

	Concentração	Meio AFU	% de variação/Controle
Controle	-	3,7 +/- 2,1	Referência
Lipo-Fosfomalato solubilizado	Eq 1 % Eq 3 % Eq 5 %	8,1 +/- 5,6 21,1 +/-13,8 30,4+/- 14,6	+60 %; p=0,09 +315%; p<0,01 +496 %; p<0,01
TGF- βΐ	10‘⁶%	55 +/-17,6	+1374%; p<0,01

AFU = unidade de fluorescência arbitrária

Um estímulo significante ou dependente da dosagem da síntese de colágeno I nos fibroblastos dérmicos na presença de LipoFosfomalato de acordo com a invenção é observada.

Este faz o Lipo-Fosfomalato da invenção particularmente bem adequado para evitar e reparar os danos à pele, compreender a perda das propriedades mecânicas da pele (perda da firmeza), linhas finas e rugas.

3.10- Estudo da Lipo-Fosfomalato em adipogênese

Alguns dos compostos cosméticos são projetados para ancorar a instalação da gordura subcutânea para anestésicos melhores e volume maior. Nesta perspectiva, aumento da diferenciação de adipócito foi considerado nos testes in vitro, (com um marcador chave G3PDH) nas culturas pré-adipócitos e, similarmente, estímulo de lipogênese nestas culturas foi considerado.

- Efeito da Lipo-Fosfomalato na atividade G3PPH

Protocolo: As células 3T3-L1 foram cultivadas até sub confluência, então induzidas para diferenciar com uma mistura apropriada com ou sem o LipoFosfomalato em concentrações diferentes. Após 3 dias de incubação, a mistura de diferenciação é substituída por um meio de cultura de manutenção, na presença ou não de Lipo-Fosfomalato. Após 3 dias de incubação, as camadas das células são coletadas e a atividade de G3PDH é submetida ao ensaio.

Tabela 11:

	Concentração	% de mudança/Controle
Controle	-	Referência
Lipo-Fosfomalato	10 ppm	+158%; p<0,01
	15 ppm	+225 %; p<0,01

Pioglitazona (controle positivo) 10 μΜ: +593 %; p<0,01

Os resultados mostram que a diferenciação de pré-adipócitos é significante ou dependente da dosagem estimulado por Lipo-Fosfomalato.

- Efeito da Lipo-Fosfomalato na síntese de triglicerídeos

Protocolo: As células 3T3-L1 foram cultivadas até sub-confluência, então induzido para diferenciar com uma mistura apropriada com ou sem o Lipo20 Fosfomalato nas concentrações diferentes. Após 3 dias de incubação, a mistura de diferenciação é substituída por um novo meio de manutenção de cultura, na presença ou não de Lipo-Fosfomalato. Após 3 dias de incubação, a quantidade de triglicerídeos intracelulares é medido pelo método enzimático. Tabela 12:

	Concentração	% de mudança/Controle
Controle	-	Referência
Lipo-Fosfomalato	10 ppm 15 ppm	+112%; p<0₅01 +210%; p<0,01

Pioglitazona (controle positivo) 10 μΜ: +174 %; p<0,01

- Estímulo da incorporação de lipídeo pelas células 3T3-L1

Protocolo: As células 3T3-L1 são semeadas e cultivadas por 4 dias (multiplicação). Seguem uma fase de diferenciação (incubação com uma mistura de diferenciação clássica) e então uma fase de maturação (com uma mistura de maturação) na presença ou não de Lipo-Fosfomalato nas concentrações diferentes. No final deste período, as células foram lavadas, fixas e coloridas com óleo vermelho. As camadas das células foram fotografadas digitalmente e a cor vermelha é quantificada pela análise da imagem. As porcentagens de superfície do óleo vermelho, relacionado na tabela abaixo, foram estabelecidas comparadas as células de controle e o teste validade pela comparação ao pioglitazona (10 μΜ), controle positivo para estímulo de diferenciação.

Tabela 13:

	Concentração	% de mudança/Controle
Controle	-	Referência
Lipo-Fosfomalato	10 ppm	+171 %; p<0,01
	15 ppm	+294 %; p<0,01
	20 ppm	+481 %; p<0,01

Pioglitazona (controle positivo) 10 μΜ: +323 %; p<0,01

Os resultados mostram que o Lipo-Fosfomalato é dependente da dosagem estimulando a diferenciação e síntese de triglicerídeos nos préadipócitos. O Lipo-Fosfomalato pode promover o volume corporal por um efeito semelhante ao lipoenchimento cosmético.

3.11- Estudo de Melanogênese

Protocolo: Melanócito humano são semeados e contatados com um Lipo-Fosfomalonato por 5 dias. No final do período de incubação, a atividade de tirosinase residual foi medida nos homogenados celulares.

Tabela 14: Mudança na atividade de tirosinase de melanócitos humanos após 5 dias de contato com um Lipo-Fosfomalonato

	Concentração	Variação (%)
Controle	-	Referência
Lipo-Fosfomalato	10 ppm	-21 %; p<0,01
12 ppm	-28 %; p<0,01
15 ppm	-31 %; p<0,01

Arbutina (controle positivo) 0,03 % = -45 %; p<0,01

Uma diminuição significante e dependente da dosagem da atividade de tirosinase é observada na presença de Lipo-Fosfomalato.

O Lipo-Fosfomalato da invenção é portanto útil para a iluminação da pele.

Todos estes resultados mostram que o Lipo-Fosfomalato da presente invenção é um agente capaz de atuar nos níveis diferentes: hidratação, propriedades mecânicas (firmeza, elasticidade), linhas finas e rugas, dando e retomando o volume da derme, despigmentação das manchas de envelhecimento... O composto da invenção pode ser preconizado por uma destas propriedades como um agente anti-envelhecimento global.

4/Galênico

O ingrediente ativo descrito no ponto 1/ acima (contendo cerca de 200 ppm de Lipo-Fosfomalato) é usado abaixo para formular os produtos cosméticos.

4.1/ Gel de hidratação

Produto	%	Nome CTFA
Fase A
H₂O	QsplOO	Água
Ultrez 10 Carbopol	0,20	Carbômero
Fase B
Butileno glicol	2,00	Butileno glicol
Conservante	qs
Fase C
Citrol GMS A/S NA	1,00	Estearato de glíceríla & estearato de PEG 100
Crodacol CS 90	0,50	Cetearíl álcool
Crodamol AB	2,00	Benzoato de alquila C12-15
Crodamol OSU	3,00	Succinato de Dioctila
Fase D
Pemulen TR2	0,20	Acrilatos/C 10-30 acrilatos de alquila cruzado ao polímero
Crodamol STS	1,00	Miristato de benzil éster PPG-3
DC 245	1,00	Ciclopentasiloxano
Fase E
Sorbato de potássio	0,10	Sorbato de potássio
Fase F
Ingrediente ativo que compreende 200 ppm de Lipo-Fosfomalato da invenção	3,00
Fase G
h₂o	4,00
NaOH 30 %	0,40	Hidróxido de sódio

Procedimento de operação:

Estágio 1: Pesar a fase A e deixar dilatar sem agitação por 30 minutos.

Estágio 2: Pesar a fase B e misturar cuidadosamente.

Estágio 3: então adicionar a fase B na fase A, misturar cuidadosamente.

Estágio 4: Aquecer a Fase A+ B a 75 °C em um banho de água. 5 Estágio 5: Pesar a fase C e aquecer a 75°C em um banho de água. Misturar cuidadosamente.

Estágio 6: Pesar a fase D e misturar cuidadosamente.

Estágio 7: Adicionar fase C, então a fase D na fase A + B com agitação staro v = 1000 rpm, homogeneizar bem.

Estágio 8: extemporaneamente, adicionar a fase E, pré-aquecer a 60°C.

Estágio 9: então adicionar a fase F, homogeneizar cuidadosamente.

Estágio 10: Em tomo de 55°C adicionar a Fase G, 15 homogeneizar cuidadosamente.

4.2/ Creme de hidratação

Produto	%	nome CTFA
Fase A
H₂O	qsplOO	Água
Ultrez 10	0,25	Carbômero
Fase B
Butileno glicol	2,00	Butileno glicol
Fenoxi etanol	qs	Fenoxi etanol
Fase C
Volpo S2	0,40	Esteareth-2
Volpo S 10	1,20 '	Esteareth-10
Citrol GMS AS/NA	1,00	Estearato de glicerila & Estearato de PEG-100
Crodacol CS90	0,50	Cetearil álcool
Laurocapram	2,50	Azone
DC 345	2,00	Cicloexasiloxano & Ciclopentasiloxano
Crodamol OSU	7,00	Succinato de dioctila
Fase D
Ingrediente ativo que compreende 200 ppm de Lipo-Fosfomalato da invenção	3,00
Fase E
Sorbato de potássio	0,10	Sorbato de potássio
Fase F
h₂o	3,00	Água
NaOH 30 %	0,25	Hidróxido de sódio

Procedimento de operação:

Estágio 1: Pesar a fase A e deixar dilatar sem agitação por 30 minutos.

Estágio 2: Aquecer a fase A a 75°C em um banho de água. Estágio 3: Pesar a fase B e misturar cuidadosamente.

Estágio 4: Então adicionar a fase B na fase A a 75 °C em um banho de água.

Estágio 5: Pesar a fase C e aquecer a 75°C em um banho de água. Misturar cuidadosamente.

Estágio 6: Adicionar a fase C na fase A + B com agitação staro v = 1000 rpm, homogeneizar cuidadosamente.

Estágio 7: extemporaneamente, adicionar a fase D, préaquecida a 60°C.

Estágio 8: Então adicionar a fase E, homogeneizar cuidadosamente.

Estágio 9: Ajustar ao pH a 6 com a fase E abaixo 350C.

Estágio 10: Então adicionar a fase F, homogeneizar cuidadosamente.

4.3/Creme de hidratação/anti-envelhecimento: uma combinação do composto de Lipo-Fosfomalato de acordo com a invenção, em particular para sua propriedade de hidratação e de Essenskin® marcado ativo pelo candidato para suas propriedades anti-envelhecimento. Essenskin® consolidará as propriedades anti-envelhecimento do composto da presente invenção.

O Essenskin® é uma associação de α-hidroximetionina de cálcio e homotaurina.

Produto	%	Nome CTFA
Fase A
H₂0	qsplOO	Água
Optasens G 83	0,30	Carbômero
Fase B
Arlatone LC	4,00	Estearato de Sorbitano & laurato de sorbitila
Fase C
Glicerina	5,00	Glicerina
Fenoxi etanol	qs	Fenoxietanol

Fase D
Crodacol CS 50	0,50	Cetearil álcool
Estol 3609	3,00	Trietilexanoina
Prisorine 2021	3,00	Isoestearato de Isopropíla
Dow Corning 345	2,00	Cicloexasiloxano & ciclopentasíloxano
Fase E
Ingrediente ativo que compreende 200 ppm de Lipo-Fosfomalato da invenção	3,00
FaseF
Sorbato de potássio	0,10	Sorbato de potássio
Fase G
h₂o	3,00	Água
NaOH 30 %	0,25	Hidróxido de sódio
FaseH
Essenskin®	2,50
Fasel
Fragrância de Verveina	0,10	Fragrância

Procedimento de operação:

Estágio 1: Sprinkle Ultrez 10 em água e deixar dilatar por 30 minutos.

Estágio 2: Aquecer a fase A a 75 °C em um banho de água. Estágio 3: Pesar a fase B e misturar cuidadosamente. Sprinkle fase B na fase A, em um banho de água a 75 °C, com agitação v=300 rpm. Deixar homogeneizar 30 minutos.

Estágio 4: Pesar e misturar fase C. Adicionar a fase C na fase

A+B em um banho de água a 75°C.

Estágio 5: Pesar a fase D e aquecer a 75°C em um banho de água.

Estágio 6: Adicionar a fase E na fase D.

Estágio 7: Enfraquecer a Fase D+E na fase A+B+C, com agitação v=1000 rpm, fora do banho de água.

Estágio 8: Extemporaneamente adicionar a fase F.

Estágio 9: Neutralizar lentamente com fase G pelo ajuste do pH, Deixar dilatar por 1 hora.

Estágio 10: abaixo de 35°C, checar o pH = +/- 6,00.

Estágio 11: Adicionar a fase H na fase precedente, misturar cuidadosamente.

Estágio 12: Adicionar a fase I na fase precedente, misturar cuidadosamente.

4.4/Creme de fírmeza/hidratação anti-envelhecimento: uma combinação do composto da invenção, em particular por suas propriedades de hidratação e de Idealift® marcado ativo pelo candidato por suas propriedades de firmeza/antienvelhecimento.

Idealift® contém o lipodipeptídeo do éster N-acetil-TirosilArginil-O-hexadecílico. Este é um ativo capaz de estimular uma síntese das fibras elásticas e tem um efeito anti-gravidade na pele da face. O lipopeptídeo também é conhecido por duas propriedades calmantes e miorelaxantes.

Produto	%	nome CTFA
Fase A
Optasens G83	0,30	Carbômero
h₂o	qsp100	Água
FaseB
Fenoxietanol	qs	Fenoxietanol
Glicerina	3,50	Glicerina
Fase C
Optasens G82	0,20	Ácido acrílico/copolímero de Alquilmetacrilato
Polawax GP 200	1,00	Cetearil álcool & polisorbato 20
Crodacol CS 90	1,00	Cetearil álcool
Crodamol STS	1,00	Miristato do éter benzílico PPG-3
DC 200 5 cps	2,50	Dimeticonas
Crodamol TN	1,50	Isononanoato de Isotridecila
Fase D
Ingrediente ativo que compreende 200 ppm de Lipo-Fosfomalato da invenção	3,00	/
Fase E
Idealift®	4,00	ί
Fase F
Sorbato de potássio	0,10	Sorbato de potássio
Fase G
NaOH 30 %	0,40	Hidróxido de sódio
h₂o	4,00	Água
FaseH
Perfume de orquídea	0,10	Fragrância

Procedimento de operação:

Estágio 1: Dispersar o carbômero em água com agitação staro v = 300 rpm. Deixar dilatar 1 hora.

Estágio 2: Misturar a fase B.

Estágio 3: Então adicionar a fase B na fase A. Homogenizar.

Aquecer em um banho de água a 75 °C.

Estágio 4: Pesar a fase C, misturar e aquecer a 75 °C no banho de água.

Estágio 5: Adicionar a fase D na fase precedente.

Estágio 6: Adicionar a fase E na fase A + B.

Estágio 7: Adicionar a fase C+D na fase A+B+E, com agitação staro v = 300 rpm.

Estágio 8: Então adicionar a fase F na fase precedente, com agitação staro v 300 rpm. Deixar homogeneizar 1 hora.

Estágio 9: Neutralizar com a fase G com agitação staro v = 500 rpm em tomo de 50°C.

Estágio 10: Então adicionar a fase H em tomo de 55°C, homogeneizar cuidadosamente.

5/Resultados da avaliação in vivo na hidratação

Princípio: Estudos para demonstrar a eficácia in vivo do composto de LipoFosfomalato da invenção foram realizados em dois painéis de objetivo: um painel fêmea e um painel macho.

Diversos métodos complementares foram associados deste estudo:

- Estudo do melhoramento na hidratação da pele pelo estímulo da síntese dos agentes umectantes naturais: Comeometer® e MoisturemeterD™; Estudo do efeito remanescente após uma semana.

- Avaliação do melhoramento de homeostase da barreira protetora pela medição da perda de água transepidérmica (TEWL) no Vapometer® e pelo monitoramento do pó umectante.

- Avaliação do melhoramento no processo de homeostase de água por intermédio do ensaio de caspase-14 e glicerol. O método ex-vivo nos adesivos.

Protocolo:

Inclusão e critério de inclusão específico ao estudo: Homem e mulher com a pele seca ou pele propensa a secura foram incluídas. A mulher tem os níveis de hormônio constantes presentes por 3 meses precedentes ao teste e durante o teste. Apenas os produtos cosméticos fornecidos durante o estudo foram usados. A aplicação dos tratamentos foi, portanto, proibido em duas semanas antes do estudo e pela duração do estudo.

Tipos de estudos e duração: dois estudos foram conduzidos sob teste cego simples usando-se os métodos não invasivos vs. Um local de placebo; cada voluntário deste modo atuado como seu controle.

- um primeiro curto estudo da 21 conduzido em 17 voluntários (44 anos de idade média [19 a 61 anos]).

- um segundo, mais longo, de 2 meses, conduzido em 38 voluntários (47 anos de idade média [19 a 68 anos]).

A cada painel foi dado um creme de acordo com exemplo acima 4.2 e seu creme de placebo respectivo, que foram massageados em um local da face duas vezes ao dia por um período de série.

Para os testes de umectação e Vapometer®, o creme foi aplicado em um antebraço e o creme de placebo ao braço oposto.

A sinopse de estudo pode ser resumida de acordo com o seguinte diagrama:

TO: Comeometer®, Moisturemeter™, Vapometer®, umectação de pele;

T21 dias: Comeometer®, Moisturemeter™;

T2 meses: Comeometer®, Moisturemeter™, Vapometer®, Umectação de pele;

T2 meses + 1 semana: Comeometer®, Moisturemeter™.

- Avaliação de hidratação

As medições de hidratação foram registradas usando dois dispositivos complementares: o Comeometer® CM825 (Courage & Khazaka) e o MoistureMeter-D™ (Delfin). Ambos dispositivos usam as propriedades elétricas da pele e registram uma medição da impedância diretamente relacionado ao teor de água da pele. Estes fornecem a informação em várias profundidades na pele.

Em cada uma destas técnicas, o sinal registrado a diminuição 5 mais rápida com profundidade. Deste modo, o estrato córneo e epiderme superficial são mais explorados com um Comeometer®, que na teoria, pode registrar uma profundidade máxima de 100 pm. Similarmente, a epiderme superficial e epiderme profunda tende-se ser explorado com um MoistureMeter-D™ (sonda XS5), que contudo tem uma profunda máxima teórica de 500 pm.

Uma primeira medição foi inicialmente realizada para avaliar a reestruturação e reequilíbrio do efeito da Lipo-Fosfomalato na face.

As medições após 21 dias foram tiradas uma noite após a última aplicação. Tabela 15 mostra um efeito marcado do creme contendo o

Lipo-Fosfomalato comparado ao creme de placebo este apenas após 21 dias de aplicação.

Tabela 15: Melhoramento na homeostase da pele, as medições com um Comeometer®, seguindo a aplicação do creme contendo o Lipo-Fosfomalato na face, (valores médios registrados em N=17 voluntários, n-3 medições/voluntário)

	TO	T21 dias
	Creme contendo 5,1 ppm de LipoFosfomalato	PLACEBO	Creme contendo 5,1 ppm de LipoFosfomalato	PLACEBO
Média	46,24 ± 7,96	45.10 ±8.97	49.04 ± 15.22	42.43 ± 17.04
Média das diferenças	1,14; nsd	6.61;p<0,02
Mudanças (%) {-> max*)	+2,5 %	+15.6% H 48.4 %)
Diferenças entre o creme da invenção/Placebo	+13,l%;p<0,04 (-> 44,6 %)

*: Max: Média de 9 melhores aplicadores nsd\ diferença não signifícante; Teste de Student t

A hidratação das primeiras camadas de estrato córneo da face, medida com um Comeometer®, significantemente variado por 13,1 % na média entre as zonas com um Lipo-Fosfomalato contendo creme e as zonas com um creme de placebo (p<0,04); esta variação atingida +44,6 % para os 9 melhores aplicadores.

Um aumento significante na hidratação também foi registrada com um MoistureMeter-D™ no lado da face tratada com Lipo-Fosfomalato contendo creme da invenção; este aumento foi quase 17 % (p<0,05 comparado ao placebo) com a variação atingindo +44,0 % para os 9 melhores aplicadores.

Tabela 16: Melhoramento na homeostase na pele medida com um MoistureMeter-D™, seguindo a aplicação do creme contendo o LipoFosfomalato da invenção na face (valores médios em N=17 voluntários, n~3 10 medições/voluntário) _ _

	T0	T 21 dias
	Creme contendo 5,1 ppm de LipoFosfomalato	PLACEBO	Creme contendo 5,1 ppm de LipoFosfomalato	PLACEBO
Média	35,30 + 9,32	36.08 + 8.88	38.88 + 9.67	33.98+ 11.69
Diferença Creme da invenção/ Placebo*	-0,78; nsd	4.90 ;/?<0,02
Mudança (%) Creme da invenção/Placebo (-> max*)	-1,2 %	+14.40 % (->41.5%)
Diferenças	+16,6 %,p<0,02 (-> 44,0 %)

*: Max: média de 9 melhores aplicadores nsd‘. diferenças não signifícantes; Teste de Student t

Para o estudo de termo longo em dois meses, como previamente, medições foram retiradas uma noite após a última aplicação. Os resultados com um Comeometer® confirmam a direção positiva já obtida com um estudo curto; além disso, estes resultados mostram que a hidratação

I média da face é altamente aumentado no lado do creme de acordo com a invenção comparado ao placebo.

I Deste modo, para o painel como um total (N=38), o aumento entre TO e T2 meses é de ordem de +30,4 %, este aumenta altamente

I

-j significante (p<0,01) comparado ao placebo que não varia durante este intervalo. Esta variação atingiu +58,0 % para os 19 melhores aplicadores.

Notavelmente, os resultados mostram que, no macho, o aumento entre T0 e T2 meses foi de +38,4 % na média (p<0,01 comparado ao

I placebo; tabela 17). Esta variação quantificada +59,0 % para os 9 melhores aplicadores.

Tabela 17: Melhoramento da homeostase da pele medida com um Comeometer®, seguindo a aplicação na face do creme da invenção contendo o Lipo-Fosfomalato (valores médios em N=38 voluntários* incluindo 16 homens 0), n=3 medições/voluntário)

	TO	T2 meses
	Creme contendo 5,1 ppm de Lipo- Fosfomalato	PLACEBO	Creme contendo 5,1 ppm de Lipo- Fosfomalato	PLACEBO
Média*	40,93* ±8,93	43,02* ± 8,28	54,03* ± 12,78	43,04* ±10,51
Diferença * Creme contendo o Lipo- Fosfomalato/ Placebo	-2,09* e -2,46 ($)	10,98* e 14,33 (<?)
Mudança (%) Creme contendo o Lipo- Fosfomalato/ Placebo (—> max)	-4,9 %; nsd* e -5,7 % (<?); nsd	+25,5 %;p<0,01* (-> 52,8) e +32,8% (<?),/?<£,07 (-» 57,0)
Diferenças	+30,4 %;p<0,0 7* (-> 58,0) e +38,4 % (<?); p<0,01 (-» 59,0)

* N=38; nsd\ diferença não signifícante; Teste de Student t -> Max: média dos melhores aplicadores

A este complemento, as medições liberadas mais em 10 profundidade com um MoistureMeter-D™ mostra a tendência similar. Como uma substância de fato, com um creme contendo o Lipo-Fosfomalato, hidratação da face é altamente aumentada no painel total (+28,6 %; p<0,01).

Esta variação atinge +48,5 % para os 19 melhores aplicadores.

Como previamente, o aumento também é maior para os 15 machos (+34,3 %; p<0,01) comparado ao placebo que insignificantemente muda. Esta variação atinge +53,6 % para os 9 melhores aplicadores (tabela

18).

Tabela 18: Melhoramento na homeostase da pele medida com um MoistureMeter-D™ após a aplicação do creme contendo o Lipo-Fosfomalato na face (valores médios em N=38 voluntários incluindo 16 homens 0), n=3 medições/voluntário)

	TO	T 2 meses
	Creme contendo 5,1 ppm de Lipo- Fosfomalato	PLACEBO	Creme contendo 5,1 ppm de Lipo- Fosfomalato	PLACEBO
Média	40,11 ±7,40	40,89 ± 7,89	49,48 ± 9,02	39,04 ± 8,74
Diferença* Creme contendo o lipo-fosfo- malato/ Placebo	-0,78* e -1,63 (<?)	10,44* e 12,4 (d)
Mudança (%) Creme contendo o lipo-fosfo- malato/ Placebo	-1; 9 %*; nsd e -3,9 % (<?); nsd	26,7 %*; p<0,01 (-> 46,8 %) e 30,3 %(<$);p<0,01 (-> 48 ;2 %)
Diferenças	28,6%*; p<0,01 (-> 48,5 %) e 34,3 % (d); p<0,01 (> 53,6 %)

* Ν-38·„ diferença não signifícante; Teste de Student t -> Max: média dos melhores aplicadores

Estes resultados claramente mostram que a direção observada em 21 dias com um creme contendo o Lipo-Fosfomalato da invenção foi intensificado após 2 meses. A homeostase da pele do voluntários, como mostrado no protocolo de hidratação, uma noite após a aplicação final, é aumentada.

A epiderme portanto visto ter adquirido um reservatório de umidade ou agentes de umectação, que não é ligado à composição do creme visto que nenhuma mudança não foi observado no local de placebo.

- Estudo remanescente

Uma semana após a última aplicação, uma nova medição foi registrado em uma parte do painel voluntário (n=27 voluntários, 16 homens e 11 homens). Os resultados obtidos com um Comeometer® e o

MoistureMeter-D™ mostram uma resistência notável à secura para o local tratado com um creme contendo o Lipo-Fosfomalato da invenção comparado ao placebo (tabelas 19 e 20).

Tabela 19: Restante do melhoramento de homeostase cutânea da face após uma semana sem aplicação, medido com um Corneometer®. (valores médios em N=27 voluntários, n=3 medições/voluntário)

	TO	T 2 meses	T 2 meses + 1 semana
	Creme contendo 5,1 ppm de Lipo- Fosfomalato	PLACEBO	Creme contendo 5,1 ppm de Lipo- Fosfomalato	PLACEBO	Creme contendo 5,1 ppm de Lipo- Fosfomalato	PLACEBO
Média	42,23 ±9,08	43,00 ±8,17	57,89 ± 12,16	44,12+11,07	47,30 ± 12,97	42,65 ± 11,44
Diferença Creme contendo o lipo-fosfo- malato vs. Placebo	-0,77; nsd	+13,77; p<0,01	+4,64; p<0,01
% de mudança Creme contendo o Iipo-fosfo- malato ví. Placebo	-1,8 %	+31,2%	+10,9% (-> +24,5 %)*
% de mudança T 2 meses + 1 semana ví. TO	+12,7%p<0,07 (-> +27,1 %)*

()*: 1/2 painel = 14 melhores aplicadores.

Tabela 20: restante de melhoramento da homeostase cutânea de face após uma semana sem aplicação, medido com um MoistureMeter-D™ (valores médios em N=27 voluntários, n=3 medições/voluntário)

	T0	T 2 meses	T 2 meses + 1 semana
	Creme contendo 5,1 ppm de Lipo- Fosfomalato	PLACEBO	Creme contendo 5,1 ppm de Lipo- Fosfomalato	PLACEBO	Creme contendo 5,1 ppm de Lipo- Fosfomalato	PLACEBO
Média	40,82 ±7,55	41,56 ±6,85	50,81 ±8,66	39,59 ± 8,50	44,80 ±8,60	36,48 ±8,07
Diferença Creme contendo o lipo-fosfo- malato ví. Placebo	-0,75; nsd	11.23;p<0,07	8.32;/?<0,07
% de mudança Creme contendo o lipo-fosfo- malato ví. Placebo	-1,8 %	+28.4 %	22.8 % (-> 34.7 %)*
T2 meses + 1 semana ví. T0	+24,6%;p<0,07 (-> +35,2%)*

()*: 1/2 painel = 14 melhores aplicadores.

Os resultados mostram que o creme contendo o LipoFosfomalato da invenção dispara um efeito residual muito interessante após uma semana sem aplicação. A hidratação da pele é deste modo mantido em um nível alto (+23 %, p<0,01 em todos os voluntários do painel e +35 % (p<0,01) para metade do painel).

- Avaliação de homeostase de hidrobarreira de lipídeo

O reforço da barreira foi avaliada a partir de 2 perspectivas diferentes:

- Uma avaliação dinâmica da barreira por uma medição de perda de água transepidérmica seguindo uma ruptura induzida por retiradas na barreira.

- Uma avaliação visual da barreira pela medição de sua umidade.

Medição de TEWL

O estabelecimento e manutenção da barreira de pele de hidrolipídeo são essenciais para o organismo. No ensaio relacionado abaixo, o re-estabelecimento desta barreira foi avaliado após a ruptura disparada pelos retiradas repetidas.

Em TO, a perda de água transepidérmica (ou TEWL) do antebraço foi medido usando o Vapometer® (Delfin), um dispositivo usando uma câmara fechada. Uma série de retiradas foi então realizada em uma maneira controlada em uma tentativa para romper levemente a homeostase de barreira. O aumento mediado por destruição em TEWL foi medido no estado pronto. Este método permite a resistência da barreira a ser avaliado.

Após a aplicação do creme contendo o Lipo-Fosfomalato da invenção ou o creme de placebo, um protocolo idêntico a um usado em TO foi seguido. Este facilita a avaliação de um melhoramento potencial na resistência.

Tabela 21: Aumento médio em TEWL seguindo homeostase rompida (Valores médios registrados em N=38 voluntários, n=3 medições/voluntário).

	TO	T2mois
	Creme contendo 5,1 ppm de LipoFosfomalato	PLACEBO	Creme contendo 5,1 ppm de LipoFosfomalato	PLACEBO
Perda da homeostase (in g/m²/h)*	6,63 ± 5,00	6,36 ±4,60	1,70 ±1,50	3,40 ± 2,5
Diferença* Creme contendo o LipoFosfomalato/Creme de placebo	+0,27	-1,70
Mudança (%) Creme contendo o LipoFosfomalato/Creme de placebo	-4,2 %**; nsd	+50 %**;p<0,01
% de mudança T 2 meses vs. TO	+54,2 %; p<0,01
* Diferenças médias em Ί	7EWL entre antes e depois da ruptura por retiradas.

** 100 x (creme de Placebo da invenção)/Placebo; nsd\ diferença não significante; teste de Student

A destruição em TO aumentou o TEWL por aproximadamente

6,5 unidades em ambos lados do creme de acordo com a invenção e no local de placebo site é observado (isto é ruptura de homeostase). Reciprocamente, após 2 meses de tratamento, as respostas foram mais diferentes dependendo do produto testado.

Como ao placebo, a ruptura em homeostase foi menos pronunciado do que a TO, principalmente devido ao efeito de massagem, mas o aumento em TEWL foi contudo alto (3,40 unidades), isto é a diferença de 2,96 unidades comparadas ao TO.

Com um creme contendo o Lipo-Fosfomalato da invenção, a destruição em 2 meses causados apenas uma ruptura leve em homeostase (1,70 unidade), com um ganho de 5,03 comparado ao TO. A diferença entre os dois casos é muito significante e em favor do creme de acordo com a invenção. O creme de acordo com a invenção melhora a barreira de +54,2 % (p<0,01).

Medição de umidade

Uma medição original da condição da barreira da pele pode ser obtida pela medição da umidade da pele. Uma gota de água depositada em uma pele pode interagir com a pele em uma maneira totalmente diferente dependendo da condição e, portanto, a composição, da barreira.

A partir do ponto de vista físico-químico, uma gota depositada em uma pele apenas distribuirá levemente se a pele é hidrofóbica (pele atópica seca, desprovida de lipídeo devido aos sabões). Sua umidade é dita a ser fraca. Reciprocamente, um melhoramento na qualidade de estrato córneo melhora a umidade da pele.

Usando esta propriedade, depositamos uma microgota de água (10 pL) em uma maneira reprodutível na pele e medido em sua capacidade de disseminação usando-se um vídeo microscópio (Scalar) e software de análise de imagem. Embora imperfeito por causa deste ser menos detalhado do que as medições do ângulo de contato e similarmente menos exato, medição da área de superfície ocupada pela gota de água na pele foi entretanto um bom indicador de umectação de pele.

Tabela 22: Variação média na umidade de uma gota no antebraço seguindo a 5 aplicação do creme contendo o Lipo-Fosfomalato da invenção (Valores médios registrados em N=37 voluntários, n=3 medições/voluntário).

	Creme contendo 5,1 ppm de LipoFosfomalato	PLACEBO
	TO	T 2 meses	T0	T 2 meses
Superfície ocupada (mm²)	9,73 ± 2,80	13,03 ± 7,70	10,74 + 4,3	12,73+6,6
Ganho ví. TO (in %)		+33,9 %		+18,5%
Importância ví. TO		£><0,05		nsd
nsd: diferença não significante; teste de Stuc	ent

Como os resultados mostram, a superfície ocupada pela gota significantemente aumentada por +33,9 % (p<0,05) no local tratado com um creme contendo o Lipo-Fosfomalato, deste modo indicando melhor umidade. Este mostra que a película de hidrolipídeo é espessa. O local de placebo exibe a umidade aumentada mas que permanece não significante. O creme de placebo provavelmente fornecido a camadas exteriores do estrato córneo com certas propriedades emolientes, que afetam o resultado umidade.

- Avaliação do homeostase de agentes umectantes

A avaliação de restauração de uma balança melhor dentro do estrato córneo foi avaliada pela medição de dois dos fatores chaves obtidos pelas retiradas:

- Avaliação de atividade caspase-14,

- Avaliação de produção de glicerol endógeno.

Dando o amplo número de amostras (retiradas) a serem colocados, estas avaliações foram realizadas unicamente usando um painel macho de 15 voluntários.

Ensaio de caspase-14

Visto na seção in vitro, que o Lipo-Fosfomalato da invenção induz a expressão do gene e síntese de caspase-14 nos queratinócitos cultivados e epiderme reconstruído. Temos desenvolvido um método original pelo ensaio da atividade desta enzima a partir das faixas coletadas do antebraço dos voluntários. Três faixas (6 DSquame® no total) sofre a extração em um tampão de pH neutro. Esta solução foi então colocada em contato com um substrato sintético clivado pela caspase-14; a fluorescência resultante a partir deste processo foi registrado usando um líder de fluorescência.

Tabela 23: Ensaio da atividade de caspase-14 extraído a partir das faixas tiradas do antebraço (Valores médios por N=15 voluntários, 6 faixas/voluntário)

	TO	T 2 meses
	Creme contendo 5,1 ppm de LipoFosfomalato	PLACEBO	Creme contendo 5,1 ppm de LipoFosfomalato	PLACEBO
Atividade média (UFA/mín/pg de proteínas)	89,6 ±37,3	86,0 ± 43,2	167,5 + 71,5	120,5 ± 39,8
Média das diferenças	+3,6; nsd	+47,0; p<0,02
Mudanças (em %)	+4,2 %	+39,0 %
Diferenças de creme da invenção/Placebo	+34,8 %

nsd'. diferença não significante; teste de Student

Estes resultados mostram que a atividade de caspase-14 é aumentada na média por +34,8 % no local tratado com um creme contendo o Lipo-Fosfomalato comparado ao local de placebo (p<0,02).

O aumento nesta atividade nas camadas superiores do estrato córneo destaca o aumento na produção desta enzima observada na biologia molecular e imunofluorescência.

Ensaio de glicerol endógeno

Em paralelo ao ensaio de caspase-14, usamos o mesmo extrato para avaliar a quantidade de glicerol presente nas camadas superiores da epiderme antes e depois da aplicação do creme contendo o Lipo-Fosfomalato da invenção ou o creme de placebo. Este método permite o glicerol livre a ser submetido ao ensaio devido a cascata das reações enzimáticas, finalmente dando uma reação colorida, que foi submetida ao ensaio a 540 nm.

Tabela 24: Ensaio de glicerol extraído a partir de faixas tiradas a partir do antebraço (valores médios registrados em N=T 5 voluntários, 6 faixas/voluntário)

	TO	T2 meses
	Creme contendo 5,1 ppm de LipoFosfomalato	PLACEBO	Creme contendo 5,1 ppm de LipoFosfomalato	PLACEBO
Média de Glicerol (nmol/pg de proteínas)	0,164 + 0,115	0,169 + 0,135	1,128 ± 0,641	0,266 + 0,177
Médias das diferenças	-0,005; nsd	+0,862; p<0,01
Mudanças (%)	-3%	+325 %
Diferenças creme da invenção/ Placebo	+328 %

nsd: diferença não significante; teste de Student

Estes resultados mostram que a quantidade de glicerol observada no estrato córneo aumentado por +328 % na média no local em que o creme contendo o Lipo-Fosfomalato foi aplicado comparado ao local de placebo (p<0,01).

As quantidades detectadas são consistentes com aqueles dados na literatura.

O aumento neste componente, que é essencial pela hidratação da pele, é ligado à indução observada na biologia molecular de LIPE lipase conhecido por hidrolisar os triacilgliceróis, mono e diglicerídeos bem como ésteres de colesterol em queratinócitos; esta lipase deve, portanto permite a retirada do sal do glicerol na célula e seu acúmulo subsequente nos comeócitos.

Todos estes resultados registrados nos voluntários que aplica o creme contendo o Lipo-Fosfomalato ou o creme de placebo mostra que o creme contendo o Lipo-Fosfomalato pode intensificar a homeostase de água na pele para promover uma síntese de compostos essenciais para esta homeostase. Deste modo filagrina e suas enzimas chaves tal como caspase-14 fornecem a célula com seus agentes de umectação de origem de proteína. Além disso, complexo de lipídeos tais como ceramidas ou colesterol, que estabelece a função de barreira, cuidado aumentado. Finalmente, um aumento no glicerol intra-comocítico um componente com propriedades mais umectantes - completa esta figura.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que é da seguinte fórmula I desenvolvida:

O

HO. HO

R

O

X em que:

X = PO(OH)2

R1 = OR2

R₂ é uma cadeia de hidrocarboneto de 4 a 24 átomos de carbono; e n =1.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que tem a seguinte fórmula VI desenvolvida:

HR /O

O O

P—OH ^{O X}OH com n = 1, X = PO(OH)2 e R1 = OC14H29 (o Lipo-Fosfomalato).

15

3. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende o composto como definido na reivindicação 1 ou 2 em um meio fisiologicamente aceitável.

4. Composição de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um ativo cosmético adicional

20 selecionado de clareador, anti-vermelhidão, protetores solares, hidratantes, umectantes, esfoliantes, anti-envelhecimento, anti-rugas e linhas finas, estimulador da síntese de elastina e/ou colágeno, agentes conferidores de volume, melhoradores das propriedades elásticas, anti-acne, anti-inflamatório, anti-oxidantes, anti-radical livre ou agentes propigmentadores,

25 despigmentadores, depiladores, agentes anti-redesenvolvimento ou promotores do desenvolvimento, peptídeos, vitaminas.

Petição 870170079556, de 19/10/2017, pág. 8/9

5. Composição de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o ativo cosmético adicional é selecionado de compostos de vitamina B3, compostos retinóides, hexamidina, ácido α-lipóico, resveratrol, DHEA ou peptídeos N-acetil-Tyr-Arg-O-hexadecila, Pal-VGVAPG (SEQ ID N°:7), Pal-KTTKS (SEQ ID N°:8), Pal-GHK, Pal-KMO2K e Pal-GQPR (SEQ ID N°:9).

6. Composição de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que os compostos de vitamina B3 compreendem niacinamida e tocoferol.

7. Composição de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que os compostos retinóides compreendem retinol.

8. Uso de um composto como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de uma composição para melhorar a condição geral da pele.

9. Uso de um composto como definido na reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a dita composição é para prevenir ou tratar os sinais cutâneos do envelhecimento, para prevenir ou tratar a desidratação cutânea, para prevenir ou tratar linhas finas e rugas, para prevenir ou tratar perda de firmeza, para melhorar a elasticidade da pele, para estimular a expansão do tecido adiposo ou para clarear a pele.

Petição 870170079556, de 19/10/2017, pág. 9/9