CN103698293A - 酶制剂中镉的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物制剂检测技术领域，具体涉及酶制剂中镉的检测方法。所述方法包括步骤（1）样品前处理，将样品进行湿法消化；（2）标准曲线制备；（3）测定；（4）结果计算，

Description

酶制剂中镉的检测方法

技术领域

本发明涉及生物制剂检测技术领域，具体涉及酶制剂中镉的检测方法。

背景技术

酶制剂是一种专一性极高的生物催化剂,广泛应用于食品、纺织、饲料、医药、造纸等行业，近年来酶制剂产业得以快速发展，酶制剂产品品种不断增加,但各项国家标准尚不健全，各项卫生、质量指标的检测方法相对落后。

如饲用酶制剂中镉的检测在NY/T722-2003《饲料用酶制剂通则》中指定使用GB/T13082-1991《饲料中镉的测定方法》,但该标准适用于饲料中镉的测定，酶制剂中镉含量较低，使用该法所得结果不准确，并且该方法较繁琐，操作步骤较多。QB/T1803-1993《工业酶制剂通用试验方法》中规定酶制剂中重金属的测定按GB8451进行，该标准已被GB/T5009.74-2003《食品添加剂中重金属限量试验》代替，该方法只是让试样中的重金属离子与硫化氢作用，生成棕黑色，与同法处理的铅标准溶液比较，做限量试验，并未对镉含量进行单独测定。除上述所提标准中有涉及酶制剂中镉的测定外，再无相关的检测标准，大多数情况只能借鉴相近的标准进行测定，因此，为更好地推动酶制剂的发展，急需建立各种卫生质量标准的检测方法。

发明内容

本发明的目的就是建立一种准确简单的酶制剂中镉的检测方法。

根据本发明的酶制剂中镉的检测方法包括以下步骤：

（1）样品前处理，将样品进行湿法消化；

（2）标准曲线制备

取定代表样品进行标准加入法测定，取镉标准工作液于进样盘中，设定4ng/ml，8ng/ml，12ng/ml，16ng/ml四个点，稀释，以原子吸收分光光度计石墨炉在检测波长228.8nm、狭缝0.7nm、灯电流3-6mA的条件下测定吸收值，制作标准曲线；

（3）测定

将前处理后的试样溶液和试剂空白注入原子吸收分光光度计石墨炉中，检测波长228.8nm，狭缝0.7nm，灯电流3-6mA，按绘制标准曲线步骤进行测定，测出相应吸光值与标准曲线比较定量；

（4）结果计算

计算公式

试样中镉含量按式（1）进行计算。

$X=\frac{(C1-C0)\×V\×1000}{m\×1000\×1000}...\left(1\right)$

式中：

X——试样中镉含量，单位为毫克每千克或毫克每升；

C1——测定样液中镉含量，单位为纳克每毫升；

C0——空白液中镉含量，单位为纳克每毫升；

V——试样消化液定量总体积，单位为毫升；

m——试样质量或体积，单位为克或毫升。

根据本发明的具体实施方式，所述酶制剂中镉的检测方法包括以下步骤：

（1）样品前处理，

湿法消化：称取样品1.0-2.0g，精确到0.0001g，于聚四氟乙烯坩埚中，加5ml混合酸浸泡过夜；加4ml混合酸，盖上盖子，在电热板上190℃消化；样品开始冒棕红色的烟时揭开盖子，继续消化赶酸，样品变黑取下，冷却后再加3ml混合酸，继续消化，至突然冒大量白烟时取下，溶液呈澄清透明状，冷却后分多次加入去离子水转移到25ml容量瓶，并定容摇匀，用一次性过滤器过滤，备用。同时制备试剂空白溶液。

检测波长228.8nm，狭缝0.7nm，灯电流3-6mA，石墨炉升温程序如表1（基体及进样量改变后需进行改进），背景校正为氘灯扣背景。

（2）标准曲线制备

标准加入法：取定代表样品进行标准加入法测定，取镉标准工作液于进样盘中，设定4ng/ml，8ng/ml，12ng/ml，16ng/ml四个点，仪器进行自动稀释，制作标准曲线。酶制剂载体成分较复杂，消化完后的样品溶液与镉标准溶液在成分上存在较大差异，如果直接采用标准曲线法，使用镉标准溶液制作标曲，会导致检测结果发生偏差；而采用标准加入法，就能在一定程度上减弱基体成分不同造成的误差。

（3）测定

试样溶液和试剂空白，按绘制标准曲线步骤进行测定，测出相应吸光值与标准曲线比较定量。

（4）基体改进剂的使用：酶制剂的基体成分较为复杂，采用石墨炉原子吸收光谱法测定时，对于有干扰的试样，要加入基体改进剂以消除干扰。绘制标准曲线时也要加入与试样测定时等量的集体改进剂。

（5）结果计算

计算公式

试样中镉含量按式（1）进行计算。

$X=\frac{(C1-C0)\×V\×1000}{m\×1000\×1000}...\left(1\right)$

式中：

X——试样中镉含量，单位为毫克每千克或毫克每升（mg/kg或mg/L）

C1——测定样液中镉含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

C0——空白液中镉含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

V——试样消化液定量总体积，单位为毫升（mL）；

m——试样质量或体积，单位为克或毫升（g或mL）。

每个试样应取两份平行试样进行分析测定，相对误差不超过15.0％，二者的平均值为最终的测定值。

通过样品测定的准确度、精密度（重复性、重现性），不同行业酶制剂的适用性，以及标准大米物质的真值回归实验等验证了该方法，说明该方法是一种简便、可靠、准确的方法。

具体实施方式

实施例1用石墨炉原子吸收光谱法对酶制剂中镉进行测定

试样中镉在酸的作用下变成镉离子，沉淀及过滤去除沉淀物，稀释定容，注入原子吸收分光光度计石墨炉中，电热原子化后吸收228.8nm共振线，在一定浓度范围，其吸收值与镉含量成正比，与标准系列比较定量。

（1）试剂和溶液

硝酸，优级纯。高氯酸，优级纯。混合酸：取4体积硝酸与1体积高氯酸混合。镉标准储备液：GSB04-1721-2004，1000μg/ml，国家标准样品，购于国家有色金属及电子材料分析测试中心。镉标准中间液：取1ml镉标准储备液于100ml容量瓶中，用水定容摇匀，即为10μg/ml中间液；再取1ml10μg/ml溶液于50ml容量瓶中，用水定容，即为0.2μg/ml中间液。镉标准工作液：取4ml0.2μg/ml镉标准中间液于50ml容量瓶中，用水定容即为16ng/ml镉标准工作液。基体改进剂：0.1%硝酸钯。

（2）试样的制备

选取有代表性的样品，包括市售的饲料酶制剂，食品酶制剂等几个行业酶制剂的粉剂和颗粒制剂，至少500g，四分法缩分至约100g，粉碎，过1mm筛，混匀装入密封容器中，低温保存备用。

（3）测定步骤

（3-1）样品前处理

湿法消化：称取样品1.0-2.0g，精确到0.0001g，于聚四氟乙烯坩埚中，加5ml混合酸浸泡过夜；加4ml混合酸，盖上盖子，在电热板上190℃消化；样品开始冒棕红色的烟时揭开盖子，继续消化赶酸，样品变黑取下，冷却后再加3ml混合酸，继续消化，至突然冒大量白烟时取下，溶液呈澄清透明状，冷却后分多次加入去离子水转移到25ml容量瓶，并定容摇匀，用一次性过滤器过滤，备用。同时制备试剂空白溶液。

检测波长228.8nm，狭缝0.7nm，灯电流3-6mA，石墨炉升温程序如表1（基体及进样量改变后需进行改进），背景校正为氘灯扣背景。

表1：石墨炉升温程序

（3-2）标准曲线制备

标准加入法：取定代表样品进行标准加入法测定，取镉标准工作液于进样盘中，设定4ng/ml，8ng/ml，12ng/ml，16ng/ml四个点，仪器进行自动稀释，制作标准曲线。

（3-3）测定

试样溶液和试剂空白，按绘制标准曲线步骤进行测定，测出相应吸光值与标准曲线比较定量。

（3-4）基体改进剂的使用：对于有干扰的试样，则需加入基体改进剂硝酸钯消除干扰。绘制标准曲线时也要加入与试样测定时等量的集体改进剂。

（3-5）结果计算

计算公式

试样中镉含量按式（1）进行计算。

$X=\frac{(C1-C0)\×V\×1000}{m\×1000\×1000}...\left(1\right)$

式中：

X——试样中镉含量，单位为毫克每千克或毫克每升（mg/kg或mg/L）

C1——测定样液中镉含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

C0——空白液中镉含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

V——试样消化液定量总体积，单位为毫升（mL）；

m——试样质量或体积，单位为克或毫升（g或mL）。

每个试样应取两份平行试样进行分析测定，相对误差不超过15.0％，二者的平均值为最终的测定值。

（4）样品测定结果

对同一样品进行6次平行测定，所得平均浓度为26.67μg/L，相对标准偏差为2.45%；同时进行加标回收率的计算，三组加标回收率均在85.0%-115.0%之间，符合要求，说明该方法是可行的，结果见表2。

表2：酶制剂样品中镉的测定结果

（5）几种酶制剂样品测定结果

从市场随机选取了三种不同酶制剂，分别为饲用酶制剂、食品用酶制剂、纺织用酶制剂进行镉含量的检测，结果见表3：三组数据的标准差均在5.0%以内，变异系数均在15.0%以内，说明该方法精密度较好，并能适用于这三种不同行业酶制剂。

表3：不同酶制剂样品中镉的检测结果

(6)真值回归

为了验证该处理方法是否能准确的测定样品中镉的真实含量，采用真值回归的方法来检验。由于没有酶制剂重金属标准物质，就选择与酶制剂性质最接近的大米标准物质(GBW10010)作为参考。大米标准物质采用与酶制剂样品相同的处理、检测条件，并且大米标准物质所得结果均是在以酶制剂样品为基质绘制的标准曲线条件下检测的，结果见表4，回收率在90.0%-105.0%之间，相对标准偏差为5.52%。

表4:大米标准物质检测值

Claims (3)

1.酶制剂中镉的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）样品前处理，将样品进行湿法消化；

（2）标准曲线制备

取定代表样品进行标准加入法测定，取镉标准工作液于进样盘中，设定4ng/ml，8ng/ml，12ng/ml，16ng/ml四个点，稀释，以原子吸收分光光度计石墨炉在检测波长228.8nm、狭缝0.7nm、灯电流3-6mA的条件下测定吸收值，制作标准曲线；

（3）测定

将前处理后的试样溶液和试剂空白注入原子吸收分光光度计石墨炉中，检测波长228.8nm，狭缝0.7nm，灯电流3-6mA，按绘制标准曲线步骤进行测定，测出相应吸光值与标准曲线比较定量；

（4）结果计算

计算公式

试样中镉含量按式（1）进行计算。

$X=\frac{(C1-C0)\×V\×1000}{m\×1000\×1000}...\left(1\right)$

式中：

X——试样中镉含量，单位为毫克每千克或毫克每升；

C1——测定样液中镉含量，单位为纳克每毫升；

C0——空白液中镉含量，单位为纳克每毫升；

V——试样消化液定量总体积，单位为毫升；

m——试样质量或体积，单位为克或毫升。

2.根据权利要求1所述的酶制剂中镉的检测方法，其特征在于，在步骤（1）中，称取样品1.0-2.0g，精确到0.0001g，于聚四氟乙烯坩埚中，加5ml混合酸浸泡过夜；加4ml混合酸，盖上盖子，在电热板上190℃消化；样品开始冒棕红色的烟时揭开盖子，继续消化赶酸，样品变黑取下，冷却后再加3ml混合酸，继续消化，至突然冒大量白烟时取下，溶液呈澄清透明状，冷却后分多次加入去离子水转移到25ml容量瓶，并定容摇匀，用一次性过滤器过滤，备用。同时制备试剂空白溶液。

3.根据权利要求1所述的酶制剂中镉的检测方法，其特征在于，在绘制标准曲线时和试样测定时，加入基体改进剂以消除干扰，所述基体改进剂为0.1v/v%硝酸钯。