CN103695536A - 一种广西莪术dna条形码标准基因序列 - Google Patents
一种广西莪术dna条形码标准基因序列 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种广西莪术DNA条形码标准序列，其特征在于所述条形码标准检测基因为ITS基因，具有基因序列SEQ ID NO.1。测序结果通过手工校对、序列拼接，并在NCBI中进行Blast相似性搜索，确保所得序列为目标序列。广西莪术的种类鉴定依靠形态学和分子鉴定所实现，从而保证了结果的可靠性。本发明提供的广西莪术的DNA条形码标准基因序列有利于实现广西莪术的快速的鉴定，缩短鉴定时间，提高鉴定准确性。
Description
技术领域
本发明涉及物种鉴定领域，具体涉及一种广西莪术DNA条形码标准基因序列。
背景技术
广西莪术Curcuma kwangsiensisS.G..Lee et C.F.Liang是姜科中的一种多年生草本植物，广泛分布于广西、广东、云南和四川等地，与蓬莪术Curcuma phaeocaμlisval.和温郁金CurcumawenyujinY.H.Chen et C.Ling) 是中国药典收载的3种基原莪术。《中华人民共和国药典》（2010版）规定上述三种植物的根状茎为常用中药“莪术”，有行气破血、消积止痛的功效；其块根为中药的“郁金”, 具活血止痛、行气解郁、清心凉血、利胆退黄之效。加之莪术类药材往往在采集后就地加工，加工后药材外形相似，形态辨别困难，致使该类药材在流通市场上品种混乱现象普遍存在，药材质量极不稳定，因此对广西莪术类药材基原植物的鉴定和限制是非常重要。因此,对其物种和资源进行鉴定研究,对促进该科植物的开发和利用具有重要意义。
DNA条形码技术（ DNA barcoding）是2003年由加拿大动物学家hebert首次提出，即利用一段DNA片段对物种进行鉴定，该技术自问世以来，因其快速、客观和操作程序化等特点，引起了科学界的广泛关注，是近年来发展最迅速的学科之一。线粒体细胞色素 C 氧化亚基（Cytochrome C Oxidase CO I）基因是被公认为动物界中标准的DNA条形码，对于植物的DNA barcoding 鉴定研究来说，由于植物进化历程中容易发生杂交及网状进化事件，且同一基因在不同种群中进化速率也不一样，致使植物条形码的研究比动物要复杂得多，至今没有找到一条通用的 DNA barcoding 序列，推荐较多的序列有ITS、psbA-trnH、ITS2、matK 等序列，但这些序列是否适合每一个具体的植物科或属, 尚需进行针对性的探索研究。从 Baldwin第一次把 ITS 应用于植物系统发研究以来，ITS 己经成为系统发育重建中最受欢迎的序列之一。ITS 之所以能有这么广的应用，在于它自身的一些特点：第一，ITS 在核基因组中是高度重复的，千万个拷贝以串联重复方式出现在一个或多个染色体基因位点上，这样多的拷贝有利于扩增、克隆和测序。同时，ITS、ITS2 分别位于 18S－5.8SrDNA、5.8S－26SDNA 之间，而从细菌、真菌到高等植物的 18S、5.8S、26S rDNA 的序列又高度保守，这样就可以用与它们序列互补的通用引物对 ITS 区进行 PCR 扩增、测序。第二，这一基因家族通过不等交换和基因转换，重复单位间已发生了位点内或位点间的同步进化（concerted evolution），即不同 ITS 拷贝间的序列趋于相近或完全一致。这个特性可促使根据 ITS 序列对种间关系进行精确重建。由于变异较快，ITS 不适用于较高分类阶元的系统学研究，而适用于科以下分类阶元的系统发育分析。ITS 序列在一些起源古老世代较长的植物类群中的变异较低，也为研究那些间隔区进化速度很慢的古老类群间的系和长世代类群内较高阶元的系统重建提供了可能性。同时，ITS 序列为杂交和多倍化研究提供了契机。此外，在某些类群，ITS 序列已经用于种内的系统发育研究。迄今为止，已有诸多证明ITS基因在植物的分类鉴定中行之有效。因此可采用ITS基因的DNA条形码技术对广西莪术进行分子鉴定，目前Genbank 中只有其它莪术类的ITS基因序列，至今尚无广西莪术的ITS的相关基因序列。本发明提供的广西莪术DNA条形码标准序列有利于实现广西莪术的快速鉴定，缩短鉴定时间，提高鉴定结果的准确性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种广西莪术DNA条形码标准基因序列。该基因序列的获得，将大大有助于对其物种和资源进行鉴定研究。
为了实现上述目的，本发明通过如下技术方案实现：一种广西莪术DNA条形码标准检测基因，所述条形码标准检测基因为ITS，具有如下所述的基因序列SEQ ID NO.1：
TAGGTGAACT GCGGAAGGAT CATTGTTGAG AGAGCATAGC ATAGAATGAT GGATGATTGC 60
GAACGTGTGA ACGTGACCCT TTCGTCGGCC CATGTTGGTG GGCGATTGAC CGTAGCTCGG 120
TGCGATCGGC ACTAAGGAAC AACGAACTTG GAAGCAGAGG GCCCCCTTAG CGTGAGCGGG 180
GAGCCCAATG CGTCAGAGAT TCTTCGGAAT CAAATGACTC TCGGCAATGG ATATCTCGGC 240
TCTTGCATCG ATGAAGAACG TAGTGAAATG CGATACTTGG TGTGAATTGC AGAATCTCGT 300
GAACCATTGA GTCTTTGAAC GCAAGTTGTG CCCGAGGCCT TGTGGTCGAG GGCACGCCTG 360
CTTGGGTGTC ATGACATCGT CGCTTTTGCT CCATGCTTCG TCGGCATTGA GCGCGAAAGT 420
TGGCCCCGTG TGCCCTCGGG CACAGTCGGT CGAAGAGTGG GTAGTCGGTA ATCGTCGAGC 480
ACGATGGACG TTGGTCGTCG CGAGCGAGAA CTGAACGTCG TCCTCGTCGT TTTGGGATGA 540
GTCCTCAAGA GACCCTGTGT GATGATTGCG GAGTCGCGTG AAAGCGCCGC GTCAATCATT 600
TGCGGCCCCA ATCAGGCGAG ACCAC 625。
所述的广西莪术DNA条形码标准检测基因的PCR引物，其PCR引物序列为：
正向引物：5’ TAG GTG AAC TGC GGA AGG AT 3’，
反向引物：5’ GTG GTC TCG CCT GAT TGG 3’。
本发明的广西莪术的分子鉴定方法，包括：
1）从待测的广西莪术植物组织中分离提取DNA；
2）以该DNA为模板用一对引物, 正向引物5’TAG GTG AAC TGC GGA AGG AT 3’，反向引物5’GTG GTC TCG CCT GAT TGG 3’，通过聚合酶链式反应扩增出广西莪术ITS基因；
3）然后取适量步骤2）的PCR扩增出的广西莪术的ITS基因的反应产物用琼脂糖进行电泳分离，经过溴乙锭染色后于紫外灯下观察，根据扩增产物的大小判定结果，如果扩增出的条带在600bp附近，且条带单一无杂带及引物带，便将条带在紫外灯下切下，回收纯化，将纯化的DNA转化到大肠杆菌中表达，提质粒，连接到T载体，再提质粒，3500测序仪测序；
4）根据测序结果，如果与所述基因序列SEQ ID NO.1的同源性在98%以上，即可判断所述的待测样品为广西莪术。
根据DNA条形码技术原理，采用PCR扩增，大肠杆菌中表达等方法，确保条带的纯度及可靠性。测序结果通过手工校对、序列拼接，并在NCBI中进行Blast相似性搜索，确保所得序列为标准序列。
所述引物自行设计合成，正向引物5’TAG GTG AAC TGC GGA AGG AT 3’；反向引物5’ GTG GTC TCG CCT GAT TGG 3’。
本发明可用琼脂糖凝胶电泳检测方法检测扩增结果。
本发明填补了Genbank 中广西莪术ITS基因序列的空白。
与传统的形态学鉴定方法相比，本发明获得的基因序列有利于实现广西莪术的分子鉴定，能有效缩短广西莪术的鉴定时间。
附图说明
图1 为本发明的技术流程图；
图2 为本发明的广西莪术ITS基因PCR扩增结果电泳鉴定图；
图3 为本发明的ITS基因转入到载体内的测序峰图（部分）。
具体实施方式
下面结合附图对本发明内容作进一 步的说明，但不是对本发明的限定。
实施例
参照图1，本发明的技术流程图。
1、 广西莪术标本的采集与保存
采集广西10个不同地域的广西莪术，用硅胶干燥，保存于硅胶中，定期更换硅胶。
2、广西莪术DNA的提取
采用CTAB法及碱裂解法提取广西莪术的DNA，比较两种提取方法的利弊，从提取结果来看，CTAB法步骤稍显繁琐但是质量优于碱裂解法，因此我们采用的是CTAB法提取(天根试剂盒），提取的DNA样品保存于-20℃保存备用。
3、引物合成
本实施例所用引物如下：
正向引物：5’ TAG GTG AAC TGC GGA AGG AT 3’；
反向引物：5’ GTG GTC TCG CCT GAT TGG 3’；
引物由invitrogen公司合成。
4、PCR扩增
本实施例的PCR反应体系如表1所示
表1 为广西莪术ITS基因PCR反应体系（50μl体系）
| 成分 | 体积(μl) |
| 模板(DNA） | 2 |
| 正向引物 | 2 |
| 反向引物 | 2 |
| 2XMastermix | 25 |
| ddH2o | 19 |
本实施例的反应程序如表2所示
表2 为广西莪术ITS基因PCR反应程序
| 步骤 | 反应温度（℃） | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94 | 3min | 1 |
| 变性 | 94 | 30s | 30 |
| 退火 | 60 | 30s | 30 |
| 延伸 | 72 | 1min | 30 |
| 延伸 | 72 | 7min | 1 |
| 保存 | 4 | 1 |
PCR产物短期保存于4℃，长期应保存于-20℃。
5、PCR扩增产物检测
取5μl PCR扩增产物，用1.5%的琼脂糖凝胶电泳（180v电压，电泳35min)，溴乙锭染色。凝胶成像系统检测，电泳图参见图2。
6、将目的条带在紫外灯下切下，用胶回收试剂盒（天根公司胶回收试剂盒DP214)回收纯化DNA，-20℃保存。
具体操作步骤为：
1) 柱平衡，向吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中）加入500μl平衡液BL，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；
2）将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量；
3）向胶块中加入等倍体积溶液PC（如凝胶重0.1g,其体积可视为100μl,则加入100μlPC溶液），50℃水浴放置10min 左右，期间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解；
4）将上一步所得溶液加入一个吸附柱CB2中，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中；
5）向吸附柱CB2加入600μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集中；
6）重复步骤5；
7）将吸附柱CB2放入收集管中，12000rpm离心2min，尽量除去漂洗液。将吸附柱置于室温放置数分钟，彻底晾干；
8）将吸附柱CB2放入一个干净离心管中，向洗附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液EB，室温放置2min ，12000rpm离心2min，收集DNA溶液。可以洗两遍以提高产量。-20℃保存。
7、 将目的基因连接到T载体上，16℃连接过夜，试剂盒使用的是艾德来公司的（目录号CV04)。
本实施例的PCR反应体系如表3所示(10μl体系)
| 成分 | 体积(μl) |
| 10xLigation Buffer | 1 |
| 10XPEG Enhancer | 1 |
| PBLUE-T 载体 | 1 |
| 纯化后的PCR产物 | 1 |
| ddH2o | 5 |
| T4 DNA Ligase | 1μl |
8、将连接好的载体质粒转化到大肠杆菌中，挑选出9个克隆进行细菌培养。
具体操作步骤如下：
（1）感受态细胞的制备
1）从-80℃冰箱内取出一只冻存好的细菌DH5α，划板；
2）从37℃挑选出一个单克隆放到装有100ml LB培养液中，剧烈振摇培养3h，测OD值在0.4-0.6之间时培养结束；
3）将细菌转移到一个无菌，一次性使用预冷的50ml的聚丙烯管中，在冰上放置10min，使培养皿冷却至0℃；
4）于4℃以4100rpm离心10min，以回收细胞；
5）倒出培养液，将管倒置1min，以使最后的培养液流尽；
6）每50ml初始培养液，用30ml预冷的0.1mol CaCl2 -MgCl2 溶液重悬每份细胞沉淀；
7）于4℃以4100rpm离心10min，以回收细胞；
8）重复步骤5；
9）每50ml初始培养液用2ml 预冷的 0.1molCaCl2 重悬每份细胞沉淀；
10）4℃保存细胞或-80℃冻存以备用。
（2）转化
1）从-80℃冰箱取出一支感受态细胞(200μl)放冰上待溶；
2）将连接好的载体全部加入到感受态细胞中，在冰上轻轻混匀，冰上放置30min；
3）将管放入到42℃的循环水浴中，热击90s，不要摇动试管；
4）快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却1-2min；
5）每管加入800μl LB培养基，加培养基之前先将LB加温至37℃，然后将试管转移到摇床上，温育60min；
6）取适当体积已转化的感受态细胞转移到含有氨苄的抗生素平板上37摄氏度孵育过夜。
（3）挑选出9个长出来的克隆进行细菌培养。
9、培养好的细菌，先进行PCR扩增，方法步骤同上，检查目的基因是否连接到T 载体里面，根据PCR扩增的结果挑选出4个克隆培养的细菌进行质粒小提取（天根公司质粒小提试剂盒，货号DP103 ），提取的质粒保存在-20℃。
具体操作步骤为：
1）柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μl BL，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；
2) 取1-5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，5000rpm离心3min，尽量吸除上清；
3）向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl溶液P1（请先检查是RNaseA)，使用移液器或者漩涡震荡器彻底悬浮细菌沉淀；
4）向离心管中加入250μl溶液P2，温和的上下翻转6-8次；
5）向离心管中加入350μl溶液P3，立即温和地上下倒转6-8次，12000rpm离心10min；
6）将上清液转移到吸附柱CP3中，注意尽量不要吸出沉淀，5000rpm离心5min；
7）向吸附柱中加入600μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），5000rpm离心2min；
8) 重复步骤7；
9）将吸附柱CB2放入收集管中，12000rpm离心2min，尽量除去漂洗液；
10）将吸附柱CB2放入一个干净离心管中，向洗附膜中间位置悬空滴加50μl的洗脱缓冲液EB，室温放置2min，12000rpm离心2min，收集溶液。可以洗两遍以提高产量。-20℃保存。
10、测序
测序试剂为ABI公司的bigdye3.1，测序引物为M13F。测序峰图参见图3。
本实施例的操作步骤为：
1）测序反应体系为20μl
| 成分 | 体积(μl) |
| BigDye 2.5X | 1 |
| BigDye sequencing Buffer 5X | 3.5 |
| 引物 | 1 |
| 模板 | 1 |
| ddH2o | 13.5 |
2）测序反应PCR的程序是：
| 步骤 | 反应温度（℃） | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95 | 5min | 1 |
| 变性 | 96 | 30s | 50 |
| 退火 | 55 | 10s | 50 |
| 延伸 | 60 | 4min | 50 |
| 保存 | 4 | 1 |
3）每管加入2μl 125mm EDTA，2μl 3M NaAC，加至管底；
4）加入50μl 100%预冷的无水乙醇，封严，震荡4次，室温放置15min；
5)12000rpm 4℃ 离心30min，吸出上清，动作轻柔；
6）加入50μl 70%预冷的无水乙醇，12000rpm 4℃ 离心15min，吸出上清，动作轻柔；
7）重复6 ；
8）让残余的酒精在室温挥发干，加入10μl Hi-Di 甲酰胺，95℃变性4min，迅速置冰上4min，上样电泳。
11、所得基因序列经校对拼接后即为目的基因序列。
广西莪术基因序列SEQ ID NO.1：
TAGGTGAACT GCGGAAGGAT CATTGTTGAG AGAGCATAGC ATAGAATGAT GGATGATTGC 60
GAACGTGTGA ACGTGACCCT TTCGTCGGCC CATGTTGGTG GGCGATTGAC CGTAGCTCGG 120
TGCGATCGGC ACTAAGGAAC AACGAACTTG GAAGCAGAGG GCCCCCTTAG CGTGAGCGGG 180
GAGCCCAATG CGTCAGAGAT TCTTCGGAAT CAAATGACTC TCGGCAATGG ATATCTCGGC 240
TCTTGCATCG ATGAAGAACG TAGTGAAATG CGATACTTGG TGTGAATTGC AGAATCTCGT 300
GAACCATTGA GTCTTTGAAC GCAAGTTGTG CCCGAGGCCT TGTGGTCGAG GGCACGCCTG 360
CTTGGGTGTC ATGACATCGT CGCTTTTGCT CCATGCTTCG TCGGCATTGA GCGCGAAAGT 420
TGGCCCCGTG TGCCCTCGGG CACAGTCGGT CGAAGAGTGG GTAGTCGGTA ATCGTCGAGC 480
ACGATGGACG TTGGTCGTCG CGAGCGAGAA CTGAACGTCG TCCTCGTCGT TTTGGGATGA 540
GTCCTCAAGA GACCCTGTGT GATGATTGCG GAGTCGCGTG AAAGCGCCGC GTCAATCATT 600
TGCGGCCCCA ATCAGGCGAG ACCAC 625
正向引物： 5’ TAG GTG AAC TGC GGA AGG AT 3’
反向引物：5’ GTG GTC TCG CCT GAT TGG 3’
Claims (3)
1.一种广西莪术DNA条形码标准检测基因，其特征在于所述条形码标准检测基因为ITS基因，具有如下所述的基因序列ITS SEQ ID NO.1：
TAGGTGAACT GCGGAAGGAT CATTGTTGAG AGAGCATAGC ATAGAATGAT GGATGATTGC 60
GAACGTGTGA ACGTGACCCT TTCGTCGGCC CATGTTGGTG GGCGATTGAC CGTAGCTCGG 120
TGCGATCGGC ACTAAGGAAC AACGAACTTG GAAGCAGAGG GCCCCCTTAG CGTGAGCGGG 180
GAGCCCAATG CGTCAGAGAT TCTTCGGAAT CAAATGACTC TCGGCAATGG ATATCTCGGC 240
TCTTGCATCG ATGAAGAACG TAGTGAAATG CGATACTTGG TGTGAATTGC AGAATCTCGT 300
GAACCATTGA GTCTTTGAAC GCAAGTTGTG CCCGAGGCCT TGTGGTCGAG GGCACGCCTG 360
CTTGGGTGTC ATGACATCGT CGCTTTTGCT CCATGCTTCG TCGGCATTGA GCGCGAAAGT 420
TGGCCCCGTG TGCCCTCGGG CACAGTCGGT CGAAGAGTGG GTAGTCGGTA ATCGTCGAGC 480
ACGATGGACG TTGGTCGTCG CGAGCGAGAA CTGAACGTCG TCCTCGTCGT TTTGGGATGA 540
GTCCTCAAGA GACCCTGTGT GATGATTGCG GAGTCGCGTG AAAGCGCCGC GTCAATCATT 600
TGCGGCCCCA ATCAGGCGAG ACCAC 625。
2.权利要求1所述的广西莪术DNA条形码标准检测基因的PCR引物，其特征在于PCR引物序列为：
正向引物：5’ TAG GTG AAC TGC GGA AGG AT 3’；
反向引物：5’ GTG GTC TCG CCT GAT TGG 3’。
3.一种广西莪术的分子鉴定方法，包括：
1）从待测的广西莪术植物组织中分离提取DNA；
2）以该DNA为模板用一对引物, 正向引物：5’ TAG GTG AAC TGC GGA AGG AT 3’，反向引物5’ GTG GTC TCG CCT GAT TGG 3’，通过聚合酶链式反应扩增出广西莪术ITS基因；
3）然后取适量步骤2的聚合酶链式反应扩增出的ITS基因用琼脂糖电泳分离，经溴乙锭染色后于紫外灯下观察，根据扩增产物的大小判定结果；
4）如果能特异性扩增出600bp的条带,进行切胶回收，连接到T载体上，转化，提取质粒，在3500基因测序仪器上进行测序；
5）根据测序结果，如果与所述基因序列SEQ ID NO.1的同源性在98%以上，即可判断所述的待测组织为广西莪术。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105821054A (zh) * | 2015-01-05 | 2016-08-03 | 深圳华大基因研究院 | 一种四川华鳊dna条形码标准检测序列及其应用 |
| CN106834471A (zh) * | 2017-02-17 | 2017-06-13 | 丽水市农业科学研究院 | Dna条形码鉴别畲药食凉茶基原物种及其近缘易混种的方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101406154A (zh) * | 2008-11-18 | 2009-04-15 | 广西中医学院 | 中药莪术优良品种的选育方法 |
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101406154A (zh) * | 2008-11-18 | 2009-04-15 | 广西中医学院 | 中药莪术优良品种的选育方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| CAO HUI等: "Authentication of Curcuma species (Zingiberaceae) based on nuclear 18S rDNA and plastid trnK sequences", 《ACTA PHARMACEUTICA SINICA》 * |
| 石林春: "姜科药用植物DNA条形码鉴定研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105821054A (zh) * | 2015-01-05 | 2016-08-03 | 深圳华大基因研究院 | 一种四川华鳊dna条形码标准检测序列及其应用 |
| CN105821054B (zh) * | 2015-01-05 | 2019-12-13 | 深圳华大基因研究院 | 一种四川华鳊dna条形码标准检测序列及其应用 |
| CN106834471A (zh) * | 2017-02-17 | 2017-06-13 | 丽水市农业科学研究院 | Dna条形码鉴别畲药食凉茶基原物种及其近缘易混种的方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
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Granted publication date: 20150729 Termination date: 20171125 |