CN103687488A - 化学和代谢稳定的具有强效钠通道阻滞剂活性的二肽 - Google Patents

化学和代谢稳定的具有强效钠通道阻滞剂活性的二肽 Download PDF

Info

Publication number
CN103687488A
CN103687488A CN201280031699.7A CN201280031699A CN103687488A CN 103687488 A CN103687488 A CN 103687488A CN 201280031699 A CN201280031699 A CN 201280031699A CN 103687488 A CN103687488 A CN 103687488A
Authority
CN
China
Prior art keywords
acid
compound
treatment
osmoticum
mucous membrane
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201280031699.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103687488B (zh
Inventor
迈克尔·罗斯·约翰逊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Parion Sciences Inc
Original Assignee
Parion Sciences Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Parion Sciences Inc filed Critical Parion Sciences Inc
Publication of CN103687488A publication Critical patent/CN103687488A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103687488B publication Critical patent/CN103687488B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/24—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D241/26—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with nitrogen atoms directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/28—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with nitrogen atoms directly attached to ring carbon atoms in which said hetero-bound carbon atoms have double bonds to oxygen, sulfur or nitrogen atoms
    • C07D241/30—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with nitrogen atoms directly attached to ring carbon atoms in which said hetero-bound carbon atoms have double bonds to oxygen, sulfur or nitrogen atoms in which said hetero-bound carbon atoms are part of a substructure —C(=X)—X—C(=X)—X— in which X is an oxygen or sulphur atom or an imino radical, e.g. imidoylguanidines
    • C07D241/32—(Amino-pyrazinoyl) guanidines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

下式所示的非常稳定的、选择性的并且对肾安全的钠通道阻滞剂：
Figure DDA0000447295590000011
本发明还包括使用本发明的钠通道阻滞剂的多种组合物、组合和治疗方法。

Description

化学和代谢稳定的具有强效钠通道阻滞剂活性的二肽
发明背景
本申请要求于2011年6月27日提交的美国序列号61/501,524的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及上皮钠通道阻滞剂3，5-二氨基-6-氯-N-(N-(4-(4-((S)-3-(二甲氨基)-4-((S)-1-(二甲氨基)-6-胍基-1-氧代己-2-基氨基)-4-氧代丁基)苯基)丁基)甲脒基)吡嗪-2-甲酰胺(I)。本发明还包括使用本发明钠通道阻滞剂的多种治疗方法。本发明还涉及用于治疗干眼的新化合物(特别地包括可用作钠通道阻滞剂的3，5-二氨基-6-氯-N-(N-(4-(4-((S)-3-(二甲氨基)-4-((S)-1-(二甲氨基)-6-胍基-1-氧代己-2-基氨基)-4-氧代丁基)苯基)丁基)甲脒基)吡嗪-2-甲酰胺(I)及其可药用盐形式)、包含所述化合物的组合物、所述化合物的治疗方法和用途以及用于制备所述化合物的方法。
背景技术
在环境和身体之间交界面的黏膜表面进化出了多种“先天防御”，即保护机制。这些先天防御的主要形式是用液体清洁这些表面。通常，黏膜表面上液体层的量反映上皮液体分泌和上皮液体吸收之间的平衡，上皮液体分泌通常反映与水(和阳离子反离子(cation counter-ion))偶联的阴离子(Cl-和/或HCO3 -)分泌，上皮液体吸收通常反映与水和反阴离子(Cl-和/或HCO3 -)偶联的Na+吸收。黏膜表面的许多疾病是由这些黏膜表面上保护性液体太少造成的，而后者由分泌(太少)与吸收(相对太多)之间失衡造成。表征这些黏膜功能障碍的缺陷的盐运输过程存在于黏膜表面的上皮层中。
补充黏膜表面上的保护性液体层的一种方法是通过阻滞Na+通道和液体吸收来使系统“再平衡”。介导Na+和液体吸收的限速步骤的上皮蛋白质是上皮Na+通道(ENaC)。ENaC位于上皮组织的顶面上，即黏膜表面环境交界面。因此，为了抑制ENaC介导的Na+和液体吸收，必须将阿米洛利(amiloride)类(其从ENaC的胞外结构域阻滞)ENaC阻滞剂递送至黏膜表面，并且重要的是保持在该部位以实现治疗效用。本发明描述了以黏膜表面上液体太少为特征的疾病以及治疗这些疾病所需的设计成显示出提高的效力、降低的黏膜吸收、以及从ENaC缓慢解离(“解脱”或分离)的“局部用”钠通道阻滞剂。
慢性阻塞性肺病以气道表面脱水和使黏液分泌物在肺中滞留为特征。这样的疾病的实例包括囊性纤维化、慢性支气管炎、以及原发性或继发性纤毛运动障碍(ciliary dyskinesia)。这样的疾病影响约1500万美国患者，并且是第六大死亡原因。其他以滞留的黏液分泌物的积累为特征的气道或肺疾病包括鼻窦炎(与上呼吸道感染相关的鼻旁窦的炎症)和肺炎。
慢性支气管炎(chronic bronchitis，CB)(包括最常见的致死的遗传形式慢性支气管炎)、囊性纤维化(cystic fibrosis，CF)是反映身体无法正常从肺清除黏液的疾病，其最终产生慢性气道感染。在正常肺中，针对慢性肺内气道感染(慢性支气管炎)的主要防御通过不断从支气管气道表面清除黏液来介导。在健康上该功能有效地从肺除去潜在的有害毒素和病原体。最近的数据表明，对于CB和CF二者初始的问题(即，基本缺陷)是无法从气道表面清除黏液。无法清除黏液反映了气道表面上液体与黏蛋白的量之间的失衡。该“气道表面液体”(airway surface liquid，ASL)主要由与血浆类似比例(即，等张)的盐和水组成。黏蛋白大分子组成成界限清楚的“黏液层”，其通常捕获吸入的细菌并通过打入被称为“纤毛周围液体”(periciliary liquid，PCL)的水性低黏度溶液的纤毛运动从肺中运出。在疾病状态下，气道表面作为ASL的黏蛋白的量失衡。这导致ASL相对减少，导致黏液浓缩、PCL的润滑活性降低、以及无法通过纤毛作用将黏液清除到口腔。这降低了黏液从肺的机械清除，导致黏附于气道表面的黏液的长期细菌定植。细菌的长期滞留、在长期的基础上局部抗微生物物质无法杀死陷入黏液的细菌、以及随后身体对于这种表面感染的慢性炎性应答导致了CB和CF的综合征。
当前，美国受影响的人群为，12,000,000具有获得性(主要来自于香烟烟雾暴露)形式慢性支气管炎的患者和约30,000具有遗传形式的囊性纤维化的患者。约等于欧洲存在的这两种人群的数目。在亚洲，CF较少，但是CB的发病率高，并且像世界其他地区一样在提高。
对于在导致这些疾病的基础缺陷水平上特异性治疗CB和CF的产品，目前有巨大的未满足的医学需要。目前对于慢性支气管炎和囊性纤维化的治疗集中于治疗这些疾病的症状和/或晚期作用。因此，对于慢性支气管炎，β-激动剂、吸入式类固醇、抗胆碱能剂、以及口服茶碱和磷酸二酯酶抑制剂均在开发中。但是，这些药物中没有有效地治疗无法从肺清除黏液之根本问题的药物。类似地，在囊性纤维化中，使用相同范围的药理学剂。这些策略已经由旨在通过无法尝试杀伤生长在黏附的黏液块中的细菌的中性粒细胞来从CF肺中清除沉积在肺中的DNA(“Pulmozyme”；Genentech)以及通过使用旨在提高肺自身的杀伤机制的吸入性抗生素(“TOBI”)来摆脱黏附黏液细菌斑块的较新策略进行了补充。身体的一般原则是如果初始的损伤未治疗，在这种情况下，黏液保留/阻碍，细菌感染就成为长期的并提高了针对抗菌剂治疗的治疗难度。因此，CB和CF肺病二者主要的未满足的治疗需要是使气道黏液再水化(即，恢复/扩大ASL的体积)和促进其(含细菌)从肺的有效方法。
R.C.Boucher在U.S.6,264,975中描述了使用吡嗪酰胍钠通道阻滞剂使黏膜表面水化。以公知的利尿剂阿米洛利、苯扎米尔(benzamil)和非那米尔(phenamil)为代表的这些化合物是有效的。但是，这些化合物具有很大的缺点，(1)相对无效，这一点很重要，这是因为可以通过肺吸入的药物的质量有限；(2)迅速吸收，其限制了药物在黏膜表面上的半衰期；以及(3)从ENaC自由解离。体现在这些公知的利尿剂中的这些缺点的总和产生对具有使黏膜表面水化的治疗益处而言在黏膜表面具有不足的效力和/或有效半衰期的化合物。
R.C.Boucher在美国专利No.6,926,911中建议使用相对弱效的钠通道阻滞剂(例如阿米洛利)与渗压剂(osmolyte)用于治疗气道疾病。这种组合不具有超过任一种单独治疗的实际优势，并且在临床上没有用处，见Donaldson等，N Eng J Med.，2006；353：241-250。阿米洛利被发现阻滞气道的透水性并消除同时使用高张盐水(hypertonic saline)和阿米洛利的潜在益处。
Anderson的美国专利No.5,817,028描述了通过吸入甘露醇来在对象中刺激气道变窄(用于评价对哮喘的易感性)和/或诱导痰的方法。建议可以使用同一技术来诱导痰和促进黏液纤毛清除。建议的物质包括氯化钠、氯化钾、甘露醇和右旋糖。
明显地，需要在恢复从CB/CF患者的肺部清除黏液上更有效的药物。这些新治疗的价值将反映在CF和CB二者的人群的生活质量和生命持续时间的改善上。
身体内和身体上的其他黏膜表面在其表面的保护性表面液体的正常生理学上显示出细微的差异，但是疾病的病理生理学反映了共同主题，即保护性表面液体太少。例如，在口干燥症(口干)中，口腔缺少液体是因为腮腺、舌下腺和颌下腺无法分泌液体，而持续的Na+(ENaC)运输介导从口腔吸收液体。
类似地，干性角膜结膜炎(keratoconjunctivitis sira)(干眼)由在结膜表面上连续Na+依赖的液体吸收的情况下泪腺无法分泌液体导致。干燥性角膜结膜炎(keratoconjunctivitis sicca，KCS)或慢性干眼病(dry eyedisease，DED)是最频繁诊断的眼病之一，导致疼痛刺激、眼表面上的炎症和视力下降。KCS/DED由眼上缺少水性泪液造成。干眼是最频繁诊断的眼病之一，仅在美国就影响超过5百万人。干眼是多因素疾病，由泪膜不足的常见病因造成，导致眼表面损伤和眼不适症状。目前较少的可用治疗方法(其包括免疫抑制剂和非处方的眼泪替代品)对于许多使用者没有足够的有效性或仅暂时减轻干眼症状。因此，开发治疗干眼的新药剂对于治疗环境(therapeutic milieu)将具有极大益处。眼表面上泪膜的体积代表了泪液产出与通过排出、蒸发或上皮吸收的液体损失之间的平衡。与其他上皮组织类似，结膜和角膜的上皮组织能够通过主动的盐和水运输调节黏膜表面的水化状态。上皮钠通道(ENaC)是包括眼在内的多种组织中钠(和水)吸收的关键调节物。预测抑制眼中的ENaC将保持泪腺分泌并维持眼表面的水化。
在鼻窦炎中，与CB一样，具有黏蛋白分泌和相对ASL消耗之间的失衡。最后，在胃肠道中，在近端的小肠中无法分泌C1-(和液体)，在末端回肠中Na+(和液体)的吸收提高，导致远端肠梗阻综合征(distalintestinal obstruction syndrome，DIOS)。在老年患者中，在降结肠中过量的Na+(和体积)吸收产生便秘和憩室炎(diverticulitis)。
公开的文献包括帕瑞科技公司(Parion Sciences Inc.)针对吡嗪酰胍类似物作为钠通道阻滞剂的若干专利申请和授权专利。这些出版物的实例包括PCT公开No.WO2003/070182、WO2003/070184、WO2004/073629、WO2005/025496、WO2005/016879、WO2005/018644、WO2006/022935、WO2006/023573、WO2006/023617、WO2007/018640、WO2007/146869、WO2008/031028、WO2008/031048，以及美国专利No.6858614、6858615、6903105、7064129、7186833、7189719、7192958、7192959、7192960、7241766、7247636、7247637、7317013、7332496、7368447、7368450、7368451、7375102、7388013、7399766、7410968、7807834、7842697、以及7868010。
依然需要在黏膜组织上具有增强的效力和有效性的新的钠通道阻滞化合物。依然还需要提供治疗作用但是使接受者中高钾血症之发生或发展尽可能小或使其消除的新的钠通道阻滞化合物。
发明概述
本发明的一个目的是提供在适于局部施用的液体制剂中稳定的化合物。
本发明的一个目的是提供与已知化合物如阿米洛利、苯扎米尔和非那米尔相比在体内更有效和/或从黏膜表面吸收得更慢和/或更不可逆的化合物。
本发明的另一个目的是提供这样的化合物，其：(I)与已知化合物相比从黏膜表面尤其是气道表面吸收得较慢，以及(2)在施用到黏膜表面之后，当从黏膜表面吸收时，主要是非肾吸收，从而防止了肾的副作用，例如高钾血症。
本发明的另一个目的是提供利用上述化合物的药理学性质的治疗方法。
特别地，本发明的一个目的是提供依靠黏膜表面的再水化的治疗方法。
特别地，本发明的一个目的是提供治疗干眼和相关眼病的方法。
本发明的目的可以通过式(I)化合物所示吡嗪酰胍来实现：
本发明还提供了包含本文所述化合物的药物组合物。
本发明还提供了促进黏膜表面水化的方法，其包括：
向对象的黏膜表面施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了恢复黏膜防御的方法，其包括：
向有此需要的对象的黏膜表面局部施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了阻滞ENaC的方法，其包括：
使钠通道与有效量的通过本文描述所示化合物I相接触。
本发明还提供了促进黏膜表面中的黏液清除的方法，其包括：
向对象的黏膜表面施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗慢性支气管炎的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗囊性纤维化的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗鼻窦炎(rhinosinusitis)的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗鼻脱水的方法，其包括：
向有此需要的对象的鼻道施用有效量的本文所述化合物I。
在一个具体实施方案中，鼻脱水因向对象施用干燥氧气导致。
本发明还提供了治疗窦炎(sinusitis)的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗肺炎的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗呼吸机诱导的肺炎(ventilator-inducedpneumonia)的方法，其包括：
向依靠呼吸机的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗哮喘的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗原发性纤毛运动障碍的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗中耳炎的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了诱导痰用于诊断目的的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗慢性阻塞性肺病的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗肺气肿的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗干眼的方法，其包括：
向有此需要的对象的眼施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了促进眼水化的方法，其包括：
向对象的眼施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了促进角膜水化的方法，其包括：
向对象的眼施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗舍格伦病(
Figure BDA0000447295570000071
disease)的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗阴道干燥的方法，其包括：
向有此需要的对象的阴道施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗皮肤干燥(dry skin)的方法，其包括：
向有此需要的对象的皮肤施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗口干(口干燥症(xerostomia))的方法，其包括：
向有此需要的对象的口施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗远端肠梗阻综合征的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗食管炎的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗支气管扩张的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明还提供了治疗便秘的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。在该方法的一个实施方案中，经口或通过栓剂或灌肠剂施用所述化合物。
本发明还提供了治疗慢性憩室炎的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的本文所述化合物I。
本发明的另一个方面是提供在施用渗透增强剂时使用钠通道阻滞剂的治疗。因此，当与渗压剂组合使用时，与单独使用的任何一种化合物相比，这样的式I的钠通道阻滞剂将延长在黏膜表面的药效学半衰期。
本发明的另一个目的是提供同时使用式(I)的钠通道阻滞剂和渗压剂的治疗，其从黏膜表面(尤其是气道表面)吸收得较慢。
本发明的另一个目的是提供包含式(I)的钠通道阻滞剂和渗压剂的组合物。
本发明的目的可通过治疗通过提高黏膜纤毛清除和黏膜水化而改善之疾病的方法来实现，其包括向需要提高黏膜纤毛清除和黏膜水化的对象施用有效量的本文所定义的式(I)化合物和渗压剂。
本发明的目的还可通过诱导痰用于诊断目的的方法来实现，其包括向有此需要的对象施用有效量的本文所定义的式(I)化合物和渗压剂。
本发明的目的还可以通过治疗炭疽(anthrax)的方法来实现，其包括向有此需要的对象施用有效量的本文所定义的式(I)化合物和渗压剂。
本发明的目的还可以通过预防、暴露后预防、预防性或治疗性治疗(preventive or therapeutic treatment)由病原体(特别是可用于生物恐怖主义的病原体)引起的疾病或病症的方法来实现，其包括向有此需要的对象施用有效量的式(I)化合物。
本发明的目的还可以通过包含本文所定义的式(I)化合物和渗透活性化合物(osmotically active compound)的组合物来实现。
附图说明
图1：用P-1046(I)和阿米洛利抑制ENaC的剂量响应曲线。使用犬支气管上皮细胞的原代培养物在尤斯灌流室(Ussing chamber)研究中产生与阿米洛利相比的P-1046的效力。如通过剂量响应曲线的左移指示的，P-1046的效力比阿米洛利的效力＞100倍。
图2：P-1046(式I，15)浓度对ExLac大鼠眼泪产出的影响。原始PRT眼泪产出值示于左侧面板中，基线校正值示于右侧面板中。在所有浓度下，P-1046使ExLac大鼠中的眼泪产出在给药后15分钟时提高至或稍低于在正常大鼠中观察到的眼泪产出值。在给药后2小时除了0.1mM剂量组外仍观察到了该效果。所有组n=4。
图3：P-1046(式I，15)从眼表面的清除。通过确定从每一根线(thread)中提取的P-1046的质量和基于芯吸(wick)到所述线上的流体的体积来确定浓度，以上述方法确定P-1046的浓度。对于所有测试浓度，P-1046表现出明显的两相清除，从而到给药后30分钟时从眼表面清除大部分药物，随后是给药后30至120分钟的缓慢清除相。应注意，在缓慢清除相，浓度≥1mM的P-1046浓度远大于P-1046(5.3nM)的IC50，从而长时间提高眼泪体积。
图4：图4。10mM P-1046(式I，15)对ExLac大鼠眼泪产出的影响。原始PRT眼泪产出值示于左侧面板中，基线校正值示于右侧面板中。相对于载剂对照，单次10mM剂量的P-1046产生提高的眼泪体积。尽管原始眼泪产出数据在超过60分钟之后没有显著性(反应了与P-1046处理的动物相比对照动物较高的基线值)，基线矫正数据在给药后的所有时间点都是统计学显著的(p＜0.03，n=3)。
图5：在第1天和第10天，P-1046(式I，15)溶解度/稳定性样品的HPLC分析。在50℃、PH4.2的具有2.8％NaCl的柠檬酸盐缓冲液中10天后，未观察到P-1046的降解。P-1046可以以8.8mg/mL的最高测试浓度完全溶于该缓冲液中。
图6：P-1046眼耐受性的总结。(A)每一剂量组和每一给药间隔的累积德莱兹评分(Draize score)(数据是右眼的全部德莱兹评分的总和)。P-1046的两种给药方案在德莱兹评分上仅有稍微升高，其不大于在载剂处理动物中观察到的那些。为了比较，在相同研究中认为有刺激性的化合物以黄色表示。(B)每一给药间隔下每一剂量组的平均眨眼率。P-1046的两种给药方案仅表现为在一些时间点稍微提高，与载剂处理的动物类似。这些数据表明10和30mM的P-1046对装置不产生刺激。
图7：眼给药后P-1046的血浆水平。(A)10mM P-1046(50ul/剂量)8次给药期间及之后个体动物的血浆水平。(B)30mM P-1046(50ul/剂量)4次给药期间及之后个体动物的血浆水平。
发明详述
本发明基于以下发现：与已知的钠通道阻滞剂(例如阿米洛利、苯扎米尔和非那米尔)相比，式(I)的化合物更有效并且从黏膜表面(尤其是气道表面)吸收得更慢。因此，与这些化合物相比，式(I)化合物在黏膜表面上具有较长的半衰期。
本发明还基于以下发现：式(I)所涵盖的某些化合物：(1)与已知化合物相比，从黏膜表面(尤其是眼表面)吸收得更慢，并且(2)在施用到黏膜表面上之后，当从黏膜表面吸收时，主要是非肾排泄，以便尽可能降低高钾血症的机会。
本发明还基于以下发现：式(I)所涵盖的某些化合物提供了利用上述化合物的药理学性质的治疗方法。
特别地，本发明还基于以下发现：式(I)所涵盖的某些化合物使黏膜表面再水化。
特别地，本发明还基于以下发现：式(I)包含的某些化合物可用于治疗干眼和相关眼病。
可以作为游离碱制备和使用本文所述化合物I。或者，可以作为可药用盐制备和使用所述化合物。可药用盐是保持或提高母体化合物的期望生物活性并且不赋予不期望的毒理作用的盐。这样的盐的实例是：(a)与无机酸形成的酸加成盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等；(b)与有机酸形成的盐，所述有机酸例如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、葡萄糖酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸、鞣酸、棕榈酸、藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸、丙二酸、磺基水杨酸、乙醇酸、2-羟基-3-萘甲酸、双羟萘酸(pamoate)、水杨酸、硬脂酸、邻苯二甲酸(phthalic acid)、扁桃酸、乳酸等；以及(c)由元素的阴离子形成的盐，所述元素的阴离子例如氯离子、溴离子和碘离子。
应注意的是，式(I)范围内的化合物的所有对映体、非对映体和外消旋混合物、互变异构体、多晶型物(polymorph)、假多晶型物(pseudopolymorph)和可药用盐都涵盖在本发明内。这些对映体和非对映体的所有混合物都在本发明的范围内。
式I化合物及其可药用盐可以作为不同的多晶型物或假多晶型物存在。如本文使用的，结晶性多晶型物是指结晶化合物以不同晶体结构存在的能力。结晶性多晶型物可由结晶包装(crystal packing)内的差异(包装多态性)或同一分子不同构象异构体(conformer)之间的包装差异(构象多态性)造成。如本文使用的，结晶性假多晶型物是指化合物的水合物或溶剂合物以不同晶体结构存在的能力。本发明的假多晶型物可因为结晶包装内的差异(包装多态性)或同一分子不同构象异构体之间的包装差异(构象多态性)而存在。本发明包括式I化合物的所有多晶型物和假多晶型物，及其可药用盐。
式(I)化合物及其可药用盐还可以作为无定形固体存在。如本文使用的，无定形固体是在固体中没有长程有序(long-range order)的原子位置的固体。当晶体大小为2纳米或更小时，该定义同样适用。可使用包含溶剂的添加剂以产生本发明的无定形形式。本发明包括式I～III化合物的所有无定形形式及其可药用盐。
式I化合物可以作为不同的互变异构形式存在。本领域技术人员将承认，胍可以以互变异构形式存在。通过举例的方式而不是通过限制的方式，式I化合物可以以如下所示多种互变异构形式存在：
Figure BDA0000447295570000121
式I的所有实施方案的胍和酰基胍的所有可能的互变异构形式都在本发明的范围内。
“对映体”是指与彼此的镜像不可叠加的化合物的两种立体异构体。
本文使用的立体化学的定义和约定一般根据S.P.Parker，Ed.，McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill BookCompany，New York；以及Eliel，E.和Wilen，S.，Stereochemistry of OrganicCompounds(1994)John Wiley & Sons，Inc.，New York。许多有机化合物以光学活性形式存在，即其具有使平面偏振光的平面旋转的能力。在描述光学活性化合物时，使用前缀D和L或者R和S表示分子关于其手性中心的绝对构型。前缀d和l、D和L、或(+)和(-)被用于表示化合物使平面偏振光旋转的符号，其中S、(-)或l是指化合物是左旋的，而具有前缀R、(+)或d的化合物是右旋的。对于给定的化学结构，这些立体异构体除了彼此为镜像外是完全相同的。特定立体异构体还可以称作对映体，这样的异构体的混合物通常称作对映体混合物。对映体的50∶50混合物被称为外消旋混合物或外消旋物，在化学反应或过程中没有立体选择性或立体特异性时，其可能发生。术语“外消旋混合物”或“外消旋物”是指两种对映体物质的等摩尔混合物，其没有光学活性。
可通过使用例如用光学活性拆分剂(optically active resolving agent)形成非对映体的方法拆分外消旋混合物来获得单一立体异构体(例如基本不含其立体异构体的对映体)。(″Stereochemistry of CarbonCompounds，″(1962)by E.L.Eliel，McGraw Hill；Lochmuller，C.H.，(1975)J.Chromatogr.，113：(3)283-302)。可以通过任何合适的方法使本发明手性化合物的外消旋混合物分开和分离，包括：(1)与手性化合物形成离子的非对映体盐，并通过分级结晶或其他方法分离，(2)与手性衍生试剂形成非对映体化合物，分离非对映体并转化成纯的立体异构体，以及(3)在手性条件下直接分离基本纯的或富集的立体异构体。
术语“非对映体”是指具有两个或更多个手性中心的立体异构体，并且其分子不是彼此的镜像。非对映体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱性质和反应性。可以在高分辨率分析操作(例如电泳和色谱)下分离非对映体的混合物。
不希望受到任何特定理论的约束，认为式(I)的化合物在体内作为钠通道阻滞剂。通过阻滞黏膜表面存在的表皮钠通道，式(I)的化合物降低了黏膜表面水的吸收。该作用提高了黏膜表面保护液的体积，使系统再平衡，从而治疗疾病。
本发明还提供了利用上文讨论的本文所述化合物的性质的治疗方法。因此，可以利用本发明的方法治疗的对象包括但不限于：患有囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、慢性支气管炎、支气管扩张、慢性阻塞性气道疾病的患者、人工通气患者、具有急性肺炎的患者等。通过向患者的至少一个肺施用活性化合物，然后从患者诱导或收集痰样品，本发明可用于从患者获得痰样品。通常，通过气雾剂(液体或干粉)或灌洗向呼吸道黏膜表面施用本发明。
可以通过本发明方法治疗的对象还包括：经鼻施用补充氧(倾向于使气道表面干燥的方案)的患者；患有影响鼻气道表面之变应性疾病或应答(例如，对花粉、灰尘、动物毛发或粒子、昆虫或昆虫粒子等的变应性应答)的患者；患有鼻气道表面细菌感染(例如葡萄球菌感染，如金黄色葡萄球菌感染、流感嗜血杆菌感染、肺炎链球菌感染、铜绿假单胞菌感染等)的患者；患有影响鼻气道表面之炎性疾病的患者；或患有窦炎(其中，通过施用有效促进窦中的堵塞液体排放的量，施用活性剂以促进窦中堵塞的黏液分泌物的排放)或组合的鼻窦炎的患者。还可以通过局部递送(包括气雾剂和滴剂)向鼻窦表面施用本发明。
本发明可用于使除了气道表面以外的黏膜表面水化。这些其他的黏膜表面包括胃肠道表面、口腔表面、生殖-泌尿道表面、眼表面或眼睛表面、内耳和中耳。例如，可以通过任何合适的方式(包括局域/局部、经口或直肠)施用有效量的本发明的活性化合物。
本发明主要涉及治疗人对象，但是还可用于治疗其他哺乳动物对象(例如狗和猫)，用于兽医目的。
如本文讨论的，用于制备本发明组合物的化合物可以是可药用的游离碱形式。由于与盐相比化合物的游离碱在水溶液中通常较不可溶，所以使用游离碱组合物以向肺提供更持续的活性剂释放。以未溶解在溶液中的颗粒形式存在于肺中的活性剂无法用于诱导生理学应答，但是作为生物可利用药物的储库逐渐溶解在溶液中。
本发明的另一个方面是药物组合物，其包含在可药用载体(例如，水性载体溶液)中的式(I)化合物。一般来说，式(I)化合物以有效抑制黏膜表面对水的再吸收的量包含在组合物中。
不期望受到任何特定理论的约束，相信本发明的钠通道阻滞剂阻滞黏膜表面中存在的上皮钠通道，本文描述的钠通道阻滞剂降低了黏膜表面对盐和水的吸收。该作用提高了黏膜表面上保护液的体积，使系统重新平衡，从而治疗疾病。当与渗压剂组合使用时，该作用增强。
还可以与渗压剂组合使用式(I)化合物，从而降低使黏膜表面水化所需的化合物的剂量。该重要性质意味着，当与渗压剂组合使用时，化合物将具有较低的通过阻滞位于接受者身体中非目标位置之钠通道(例如，肾中)而造成不期望副作用的倾向。
本发明活性渗压剂是渗透活性的分子或化合物(即，是“渗压剂”)。本发明的“渗透活性”化合物在气道或肺上皮表面上是不可透膜的(membrane-impermeable)(即，基本上不可被吸收)。本文中使用的术语“气道表面”和“肺表面”包括肺气道表面，例如支气管和细支气管、肺泡表面，以及鼻和窦表面。本发明的活性化合物可以是离子渗压剂(即盐)，或者可以是非离子渗压剂(即，糖、糖醇和有机渗压剂)。特别的意图是，在性质上是外消旋的活性化合物的两种消旋体形式包含在可用于本发明的活性化合物组中。应注意的是渗透活性化合物的所有外消旋体、对映体、非对映体、互变异构体、多晶型物和假多晶型物以及外消旋混合物均涵盖在本发明中。
可用于本发明的为离子渗压剂的活性渗压剂包括可药用阴离子和可药用阳离子的任何盐。优选地，阴离子和阳离子中的任一种(或两种)在施用它们的相关气道表面是不可吸收的(即，具有渗透活性并且不会迅速地主动运输)。这样的化合物包括但不限于FDA批准的市售的盐中包含的阴离子和阳离子，见例如Remington：The Science and Practice ofPharmacy，Vol.II，第1457页(第19版，1995)，其通过引用并入本文，并且可以以任何组合(包括其常规组合)使用。
可用于实施本发明的可药用渗透活性阴离子包括但不限于：乙酸根、苯磺酸根、苯甲酸根、碳酸氢根、酒石酸氢根、溴离子、乙二胺四乙酸钙、右旋樟脑磺酸根(樟脑磺酸根)、碳酸根、氯离子、柠檬酸根、二氢氯化物、乙二胺四乙酸根、乙二磺酸根(1，2-乙二磺酸根)、丙酸酯月桂硫酸根(月桂硫酸根)、乙磺酸根(1，2-乙烷二磺酸根)、富马酸根、葡庚糖酸根(gluceptate)、葡萄糖酸根、谷氨酸根、甘苯胂酸根(glycollylarsanilate)(对羟乙酰氨基苯胂酸根(p-glycollamidophenylarsonate))、己基间苯二酚酸根(hexylresorcinate)、海巴明(hydrabamine)(N，N’-二(去氢松香基)乙二胺)、氢溴酸根、盐酸根、羟萘甲酸根、碘离子、羟乙基磺酸根、乳酸根、乳糖醛酸根、苹果酸根、马来酸根、扁桃酸根(mandelate)、甲磺酸根、甲基溴化物、甲基硝酸根、甲基硫酸根、黏酸根、萘磺酸根、硝酸根、亚硝酸根(nitrte)、双羟萘酸根(pamoate，embonate)、泛酸根、磷酸根或磷酸氢根、聚半乳糖醛酸根、水杨酸根、硬脂酸根、次乙酸根、琥珀酸根、硫酸根、鞣酸根、酒石酸根、茶氯酸根(teoclate)(8-氯茶碱盐)、三乙基碘化物、碳酸氢根等。特别优选的阴离子包括氯离子、硫酸根、硝酸根、葡萄糖酸根、碘离子、碳酸氢根、溴离子和磷酸根。
可用于实施本发明的可药用阳离子包括但不限于：有机阳离子，例如苄星(N，N'-二苄基乙二胺)、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基D-葡糖胺)、普鲁卡因、D-赖氨酸、L-赖氨酸、D-精氨酸、L-精氨酸、三乙铵、N-甲基D-甘油等。特别优选的有机阳离子是3碳、4碳、5碳和6碳有机阳离子。可用于实施本发明的金属阳离子包括但不限于：铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌、铁、铵等。特别优选的阳离子包括钠、钾、胆碱、锂、葡甲胺、D-赖氨酸、铵、镁和钙。
可以与本文所述钠通道阻滞剂一起使用来实施本发明的渗透活性盐的具体实例包括但不限于：氯化钠、氯化钾、氯化胆碱、碘化胆碱、氯化锂、氯化葡甲胺、L-赖氨酸氯化物、D-赖氨酸氯化物、氯化铵、硫酸钾、硝酸钾、葡萄糖酸钾、碘化钾、氯化铁、氯化亚铁、溴化钾等。可以使用单一盐或不同渗透活性盐的组合来实施本发明。优选不同盐的组合。当使用不同盐时，阴离子或阳离子之一在不同盐中可以是相同的。
本发明的渗透活性化合物还包括非离子渗压剂，例如糖、糖醇和有机渗压剂。可用于本发明的实践中的糖和糖醇包括但不限于3碳糖(例如，甘油、二羟丙酮)、4碳糖(例如，赤藓糖、苏阿糖和赤藓酮糖的D和L形式二者)、5碳糖(例如，核糖、阿拉伯糖、木糖、来苏塘、阿洛酮糖(psicose)、果糖、山梨糖和塔格糖(tagatose)的D和L形式二者)、以及6碳糖(例如，麦芽糖、阿洛糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖和塔罗糖(talose)的D和L形式二者，以及阿洛-庚酮糖、阿洛-hepulose、葡萄-庚酮糖、甘露-庚酮糖、古洛-庚酮糖、艾杜-庚酮糖、半乳-庚酮糖、塔洛-庚酮糖)。可用于本发明的实践中的其他糖包括棉子糖(raffinose)、棉子糖系列寡糖和水苏糖(stachyose)。可用于本发明的每一种糖/糖醇的还原形式的D和L形式二者也是本发明范围内的活性化合物。例如，当还原时，葡萄糖变成山梨醇，因此在本发明的范围内，山梨醇和糖/糖醇的其他还原形式(例如，甘露醇、半乳糖醇(dulcitol)、阿拉伯糖醇)是本发明的活性化合物。
本发明的渗透活性化合物还包括被称为“有机渗压剂”的非离子渗压剂家族。术语“有机渗压剂”一般是用于指用于控制肾中的细胞内渗量浓度(osmolality)的分子。见例如J.S.Handler等，Comp.Biochem.Physiol，117，301-306(1997)；M.Burg，Am.J.Physiol.268，F983-F996(1995)，其各自通过引用并入本文。尽管本发明人不希望本发明受到任何特定理论的约束，但是似乎这些有机渗压剂可用于控制在气道/肺表面上的胞外体积。可用作本发明活性化合物的有机渗压剂包括但不限于三大类化合物：多元醇类(多羟基醇类)、甲胺类和氨基酸类。考虑可用于本发明实践中的多元醇有机渗压剂包括但不限于：肌醇(inositol、myo-inositol)和山梨醇。可用于本发明实践中的甲胺有机渗压剂包括但不限于：胆碱、甜菜碱、肉碱(L-、D-和DL形式)、磷酸胆碱、溶血磷酸胆碱(lyso-phosphorylcholine)、甘油磷酰胆碱、肌酸和磷酸肌酸。本发明的氨基酸有机渗压剂包括但不限于：D-形式和L-形式的甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸和牛磺酸。可用于本发明实践中的其他渗压剂包括tihulose和肌氨酸。哺乳动物有机渗压剂是优选的，人有机渗压剂是最优选的。但是，某些有机渗压剂是细菌、酵母和海洋动物来源的，并且这些化合物也可用作本发明范围内的活性化合物。
在某些情况下，可以向对象施用渗压剂前体，因此，这些化合物也可用于本发明的实践中。本文中使用的术语“渗压剂前体”是指通过代谢步骤(分解代谢或合成代谢)转化成渗压剂的化合物。本发明的渗压剂前体包括但不限于：葡萄糖、葡萄糖聚合物、甘油、胆碱、磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱和无机磷酸盐，它们是多元醇类和甲胺类的前体。本发明范围内的氨基酸渗压剂的前体包括水解产生渗压剂氨基酸的蛋白质、肽和聚氨基酸，以及可以通过代谢步骤如转氨基作用转化成渗压剂氨基酸的代谢前体。例如，氨基酸谷氨酰胺的前体是聚-L-谷氨酰胺，谷氨酸的前体是聚-L-谷氨酸。
同样旨在本发明范围内的是化学修饰的渗压剂或渗压剂前体。这样的化学修饰包括将渗压剂(或前体)与改变或增强渗压剂或渗压剂前体的作用(例如，抑制渗压剂分子的降解)的其他化学基团相连接。这样的化学修饰已已应用于药物或前药中，并且是本领域中已知的(见例如美国专利No.4,479,932和4,540,564；Shek，E.等，J.Med.Chem.19：113-117(1976)；Bodor，N.等，J.Pharm.Sci.67：1045-1050(1978)；Bodor，N.等，J.Med.Chem.26：313-318(1983)；Bodor，N.等，J.Pharm.Sci.75：29-35(1986)，其各自通过引用并入本文。
一般来说，不促进或事实上阻止或延迟细菌生长的本发明的渗透活性化合物(离子型和非离子型二者)是优选的。
通过本领域已知的任何合适方法，例如通过滴鼻剂、喷雾(mist)、气雾剂、持续过夜的鼻插管等，可以以任何顺序和/或同时将本文描述的式(I)化合物和本文中公开的渗透活性化合物施用于对象的黏膜表面如眼、鼻和气道表面，包括鼻道、窦和肺。在本发明的一个实施方案中，通过经支气管镜灌洗(transbronchoscopic lavage)，可以同时施用本发明的式(I)化合物和渗透活性化合物。在本发明的一个优选实施方案中，通过吸入包含式(I)化合物和渗透活性化合物的可吸入气溶胶可吸入颗粒，通过施用使本发明的式(I)化合物和渗透活性化合物沉积在肺气道表面，其中式(I)化合物可以在独立地递送渗透活性化合物之前或之后足够短的时间内以使它们的作用相加。可吸入颗粒可以是液体或固体。用于向对象的肺施用气溶胶颗粒的多种吸入器是已知的。在本发明的另一个优选实施方案中，如本文所限定的，可以同时给予式(I)化合物和渗透活性化合物。
向有此需要的对象连续(以任何顺序)或同时施用本发明的式(I)化合物和渗透活性化合物。本文中所使用的术语“同时”是指在时间上足够接近以产生组合的作用(即，同时可以是同时地，或者其可以是在彼此之前或之后的短时期内发生的两个或更多个事件)。同时还包括作为两种组分的混合物或溶液递送式(I)化合物和渗压剂，以及当从两个不同雾化器递送时。其一个实例是递送一个雾化器中的化合物1和通过T形管(T-piece)连接的第二雾化器中的高张盐水。当与其他活性剂一起施用时，本发明的活性化合物可以作为其他活性剂的载剂或载体，或可以简单地与其他活性剂同时施用。可以将本发明的活性化合物用作干的或液体载剂以向气道表面施用其他活性成分。可以以常规方式和剂量将这些其他活性剂与本发明活性化合物组合施用来治疗这些其他活性剂旨在治疗的疾病或病症，本发明的活性化合物被认为是作为所述其他活性剂的载剂或载体。可以使用任何这样的其他活性成分，特别是当气道表面的水化(即，本发明渗透活性化合物的活性)有助于其他活性成分的活性(例如，通过促进或增强活性成分的摄取，通过有助于其他活性成分的作用机制，或通过任何其他机制)时。在本发明的一个优选实施方案中，当将本发明的活性化合物与其他活性剂同时施用时，本发明的活性化合物对于其他活性剂具有相加作用，即，通过同时施用本发明的活性化合物增强了其他活性剂的期望的效果。
本发明的式(I)化合物还可用于治疗空气传染(airborne infection)。空气传染的实例包括例如RSV。本发明的式(I)化合物还可用于治疗炭疽感染。本发明涉及本发明的式(I)化合物用于预防、暴露后预防、预防性或治疗性治疗由病原体引起的疾病或病症的用途。在一个优选实施方案中，本发明涉及式(I)化合物用于预防、暴露后预防、预防性或治疗性治疗由可用于生物恐怖主义的病原体引起的疾病或病症。
近年来，实施了多种研究项目和生物防卫措施以应对关于在恐怖行为中使用生物制剂的担忧。这些措施旨在应对关于生物恐怖主义或使用微生物或生物毒素杀人、传播恐怖和破坏社会的担忧。例如，国家过敏和传染病研究所(National Institute of Allergy and Infectious Diseases，NIAID)开发了用于生物防卫研究的战略规划，其概述了用于解决在较宽领域中对生物恐怖主义以及新出现和再出现的传染病之研究需要的计划。根据该计划，美国平民对炭疽杆菌(Bacillus anthracis)孢子的有意暴露揭示了对于生物恐怖主义的国家整体准备中的缺口。另外，报道详述了这些攻击揭露了以下未满足的需求：用于迅速诊断由生物恐怖主义制剂引起之疾病的测试，疫苗和用于预防的免疫治疗，以及治疗这些疾病的药物和生物制剂。
各种研究努力的主要焦点在于研究被认为具有作为生物恐怖主义制剂的潜在危险的病原体的生物学，研究针对这些制剂的宿主反应，开发针对传染病的疫苗，评价针对这些制剂目前可用的和研究中的治疗剂，以及开发用于鉴别有威胁之制剂的体征和症状的诊断。这些努力是值得赞赏的，但是，考虑到大量病原体被认为潜在可用于生物恐怖主义，这些努力尚未能够对所有可能的生物恐怖主义治疗提供令人满意的响应。另外，许多被认为具有作为生物恐怖主义制剂的潜在危险的病原体不能够提供充分的经济鼓励以通过工业开发治疗性或预防性措施。另外，即使预防措施(例如，疫苗)能够用于可用于生物恐怖主义的每一种病原体，但是向一般人群施用此类疫苗的成本很昂贵。
在方便有效的治疗可用于每一种生物恐怖主义威胁之前，对于可防止或降低感染病原体的危险的预防性或治疗性治疗存在强烈需求。
本发明提供了这样的预防性治疗的方法。在一个方面，提供了预防性治疗方法，其包括：向需要预防性治疗的个体施用预防有效量的式(I)化合物，所述预防性治疗针对来来自一种或更多种空气传播之病原体的感染。空气传播之病原体的一个具体实例是炭疽。
在另一个方面，提供了用于降低来自可在人中造成疾病的空气传染之病原体的感染危险的预防性治疗方法，所述方法包括向可能处于感染空气传染之病原体的危险中但是无疾病症状的人的肺施用有效量的式(I)化合物，其中有效量的钠通道阻滞剂和渗压剂足以降低人中感染的危险。空气传染之病原体的一个具体实例是炭疽。
在另一个方面，提供了用于治疗来自空气传染之病原体的感染的暴露后预防性治疗或治疗性治疗方法，其包括向个体的肺施用有效量的式(I)化合物，所述个体具有对来自空气传染之病原体的感染的治疗需要。可以通过本发明的暴露后预防、营救和治疗性治疗方法预防的病原体包括可以通过口、鼻或鼻气道进入身体从而进一步进入肺的任何病原体。通常，病原体是自然存在的或通过气溶胶化的空气传染之病原体。病原体可以是自然存在的或可以是在气溶胶化或将病原体引入到环境中的其他方法之后有意引入到环境中的。许多不能在空气中自然传播的已经被或可以被气溶胶化以用于生物恐怖主义。可用于本发明的治疗的病原体包括但不限于NIAID所列出的A、B和C类优先级的病原体。这些类别通常对应于疾病控制和预防中心(Centers for Disease Control and Prevention，CDC)所编纂的列表。如由CDC建立的，A类病原体是能够容易地在人与人之间散布或传播，造成高的死亡率，具有大的公共卫生影响潜力的那些。在优先级上接下来是B类病原体，并且其包括中等容易散布并造成中等发病率和低死亡率的那些。C类由新出现的病原体组成，由于其可用性、容易生产和散布以及高发病率和死亡率的潜力，可以被改造成在未来大量散布。这些病原体的具体实例是炭疽和鼠疫。可以预防或降低从其而来的感染风险的其他病原体包括流感病毒、鼻病毒、腺病毒和呼吸道合胞病毒等。可以预防的其他病原体有冠状病毒，其被认为造成严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome，SARS)。
还可以将本发明化合物连同P2Y2受体激动剂或其可药用盐(本文中有时也称为“活性剂”)一起使用。所述组合物还可包含P2Y2受体激动剂或其可药用盐(本文中有时也称为“活性剂”)。通常包含有效量的P2Y2受体激动剂以刺激气道表面(特别是鼻气道表面)分泌氯化物和水。合适的P2Y2受体激动剂描述在U.S.6,264,975、U.S.5,656,256和U.S.5,292,498的第9～10栏中，其各自通过引用并入本文。
也可以将支气管扩张剂与本发明的化合物组合使用。这些支气管扩张剂包括但不限于β-肾上腺素能激动剂，其包括但不限于肾上腺素、异丙肾上腺素、非诺特罗、沙丁胺醇(albuterol)、特布他林、吡布特罗、比托特罗、奥西那林(metaproterenol)、异他林(iosetharine)、昔萘酸沙美特罗(salmeterol xinafoate)，以及抗胆碱能剂，包括但不限于异丙托溴铵，以及化合物如茶碱和氨茶碱。根据已知技术，可以在本文所述活性化合物之前或同时施用这些化合物。
本发明的另一个方面是药物制剂，其包含在可药用载体(例如，水性载体溶液)中的上述活性化合物。一般来说，在组合物中包含有效治疗黏膜表面(例如，抑制黏膜表面(包括气道和其他表面)对水的重吸收)量的活性化合物。
可以通过任何合适的方法向黏膜表面施用本文中公开的活性化合物，包括局部、经口、经直肠、经阴道、经眼和经皮肤等。例如，对于便秘的治疗，可以经口或经直肠向胃肠黏膜表面施用活性化合物。活性化合物可以与任何合适形式的可药用载体组合，例如无菌生理盐水或稀盐水或局部用溶液，作为用于经口施用的微滴、片剂等，作为用于直肠或生殖-泌尿道施用的栓剂等。根据需要，制剂中可以包含赋形剂以提高活性化合物的溶解度。
可以通过任何合适的方法向患者的气道表面施用本文中公开的活性化合物，包括作为可药用载体(例如生理盐水溶液或稀盐水溶液或蒸馏水)中的活性化合物的喷雾、雾状物或微滴。例如，可以如Jacobus的美国专利No.5,789,391中所述将活性化合物制备成制剂并施用，所述专利的公开内容通过引用整体并入本文。
如上文提到的，为实践本发明而制备的固体或液体颗粒活性剂可如上所述包括可吸入或不可吸入尺寸的颗粒，即，对于可吸入颗粒，颗粒的尺寸足够小以便在吸入后通过口腔和喉并进入细支气管和肺泡，对于不可吸入颗粒，颗粒足够大以便保留在鼻气道中而不是通过喉进入细支气管和肺泡。一般来说，尺寸为约1至15微米(更特别地，尺寸小于约4.7微米)的颗粒是可吸入的。不可吸入尺寸的颗粒的尺寸大于约5微米，最大为可见微滴尺寸。因此，对于经鼻施用，10～500μm的粒径可用于确保保留在鼻腔内。
在根据本发明的制剂的制造中，活性剂或者其可药用盐或游离碱通常尤其与可接受的载体混合。当然，载体必须与制剂中的任何其他成分相容并且必须对患者无害。载体必须是固体或液体，或者固体和液体二者，并且优选地与化合物配制成单剂量制剂，例如，可含按重量计0.5％至99％的活性化合物的胶囊。可以向本发明的制剂中引入一种或更多种活性化合物，可以通过任何公知的制药技术制备所述制剂，所述技术基本由将组分混合组成。
通过用研钵和研杵来研磨干活性剂，然后使微粉化组合物通过400目筛以打碎或分离出大的团聚体，可以制备包含微粉化活性剂的可吸入或不可吸入干颗粒的组合物。
颗粒活性剂组合物可任选地包含分散剂，其用于促进气溶胶的配制。合适的分散剂是乳糖，其可以以任意合适的比例(例如，按重量计1比1的比例)与活性剂共混。
可通过本领域已知的合适方式，例如通过滴鼻、喷雾等向对象的包括鼻道、窦和肺在内的气道表面施用本文中公开的活性化合物。在本发明的一个实施方案中，通过经支气管镜灌洗施用本发明的活性化合物。在本发明的一个优选实施方案中，通过施用包含活性化合物的可吸入颗粒的气溶胶悬液，使本发明的活性化合物沉积在肺气道表面上，所述悬液由对象吸入。可吸入颗粒可以是液体或固体。用于向对象的肺施用气溶胶颗粒的多种吸入器是已知的。
可以使用例如由Inhale Therapeutic Systems，Palo Alto，California，USA开发的那些吸入器，并且包括但不限于美国专利No.5,740,794、5,654,007、5,458,135、5,775,320和5,785,049中描述的那些，这些专利各自通过引入并入本文。本申请人特别地旨在使本文中引用的所有专利文献通过引用整体并入。也可以使用例如由Dura Pharmaceuticals，Inc.，SanDiego，California，USA开发的那些吸入器，包括但不限于美国专利No.5,622,166、5,577,497、5,645,051和5,492,112中公开的那些，这些专利各自通过引入并入本文。另外，可以使用例如由Aradigm Corp.，Hayward，California，USA开发的那些吸入器，包括但不限于在美国专利U.S.Patents No.5,826,570、5,813,397、5,819,726和5,655,516中公开的那些，这些专利各自通过引入并入本文。这些装置特别适合于干颗粒吸入器。
可以通过任何合适的方法来产生包含活性化合物的液体颗粒的气溶胶，例如用压力驱动的气溶胶雾化器(L C Star)或超声雾化器(ParieFlow)来产生。见，例如，美国专利4,501,729，其通过引用并入本文。雾化器是借助于通过狭窄文托利孔口(venturi orifice)的压缩气体(通常为空气或氧气)的加速度或借助于超声搅拌将活性成分的溶液或悬液转化成治疗性气溶胶喷雾的市售装置。用于在雾化器中使用的合适的制剂由液体载体中的活性成分组成，活性成分占制剂的高至40％w/w，但是优选不到20％w/w。载体通常是水(最优选无菌无热原的水)或稀的水性醇溶液。也可以使用全氟化碳。任选的添加剂包括防腐剂(如果制剂未制成无菌的，例如羟基苯甲酸酯)、抗氧化剂、芳香剂(flavoring agent)、挥发油、缓冲剂和表面活性剂。
同样地，可以通过任何固体颗粒药物气溶胶发生器产生包含活性化合物的固体颗粒的气溶胶。用于向对象施用固体颗粒药物的气溶胶发生器以适合人类施用的速率产生上文阐明的可吸入颗粒和产生包含预定计量剂量的药物的大量气溶胶。一种举例说明性类型的固体颗粒气溶胶发生器是吹入器。用于通过吹入施用的合适的制剂包含细粒状的粉末，所述粉末可借助于吹入器递送或以鼻烟的方式摄入到鼻腔中。在吹入器中，粉末(例如，其足以实施本文中描述的治疗的计量剂量)包含在通常由明胶或塑料制成的胶囊或药盒中，其在原位被刺破或打开，并且通过吸入时通过装置吸入的空气或借助于手动操作的泵来递送粉末。吹入器中使用的粉末由单独活性成分或包含活性成分、合适的粉末稀释剂(如乳糖)和任选地表面活性剂的粉末共混物组成。活性成分通常占制剂的0.1至100％w/w。第二种类型的举例说明性气溶胶发生器包括定量吸入器(metered doseinhaler)。定量吸入器是增压的气溶胶分配器，其通常包含在液化抛射剂中的活性成分的悬液或溶液。在使用时，通过适于递送计量体积(通常为10至150μl)的阀排放制剂，以产生包含活性成分的细颗粒喷雾。合适的抛射剂包括某些氯氟烃化合物，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷及其混合物。制剂还可包含一种或更多种共溶剂(例如乙醇)、表面活性剂(例如油酸或脱水山梨糖醇三油酸酯)、抗氧化剂和合适的芳香剂。
可以通过气溶胶发生器以10至150升/分钟，更优选30至150升/分钟，最优选约60升/分钟的速率由固体或液体颗粒形成气溶胶。包含较大量药物的气溶胶可以更迅速地施用。
本文中公开的活性化合物的剂量将根据被治疗的病症或对象的状态而不同，但是一般可以是约0.01、0.03、0.05、0.1至1、5、10或20mg药剂，其沉积在气道表面。可以将日剂量分成一个或多个单位剂量来施用。目标是在肺气道表面达到10-9～104M的药剂浓度。
在另一个实施方案中，通过施用包含活性化合物的可吸入或不可吸入颗粒(优选不可吸入颗粒)的气溶胶悬液来施用本发明的活性化合物，所述气溶胶悬液通过鼻由对象吸入。所述可吸入或不可吸入颗粒可以是液体或固体。所包含的活性剂的量可以是足以在对象的气道表面达到约10-9、10-s或10-7至约10-3、10-2、10-1摩尔/升，更优选约10-9至约10-4摩尔/升的活性剂溶解浓度的量。
活性化合物的剂量将根据被治疗的病症和对象的状态而不同，但是一般可以为足以在对象的鼻气道表面达到约10-9、10-8或10-7至约10-3、10-2、10-1摩尔/升，更优选约10-7至约10-4摩尔/升的活性剂溶解浓度的量。根据所施用活性化合物的特定制剂的溶解度，可以将日剂量分成一个或多个单位剂量来施用。对于人对象，根据对象的年龄和病症，日剂量按重量计可以是约0.01、0.03、0.1、0.5或1.0至10或20毫克活性剂颗粒。目前优选的单位剂量是每天以2～10次施用的方案给予约0.5毫克活性剂。可以通过任何合适的方法(例如，封装明胶胶囊)作为预包装单位来提供剂量。
在本发明的一个实施方案中，颗粒活性剂组合物可包含活性剂的游离碱和可药用盐二者以提供容易释放和持续释放的活性剂二者，以溶解在鼻的黏膜分泌物中。这样的制剂用于向患者提供早期缓解和随着时间持续缓解二者。通过降低所需的日施用次数，预期持续释放提高患者对活性剂治疗过程的顺从性。
适于气道施用的药物制剂包括溶液剂、乳剂、混悬剂和浸膏剂(extract)。一般地见J.Nairn，Solutions，Emulsions，Suspensions andExtracts，in Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第86章(第19版，1995)，其通过引用并入本文。可以按照美国专利Schor的美国专利No.4,389,393、Hlum的美国专利No.5,707,644、Suzuki的美国专利No.4,294,829、和Suzuki的美国专利No.4,835,142中的描述制备适合于经鼻施用的药物制剂，这些专利的公开内容通过引用整体并入本文。
可以通过任何合适的方式产生包含活性化合物的液体颗粒的喷雾或气溶胶，例如利用具有在合适的可药用载体(例如无菌生理盐水溶液或无菌水)中的活性剂的简单的鼻用喷雾剂。可以利用压力驱动的气溶胶雾化器或超声波雾化器来施用。见例如美国专利No.4,501,729和No.5,656,256，这二者通过引用并入本文。在鼻用微滴或喷雾瓶或雾化器中使用的合适的制剂由液体载体中的活性成分组成，活性成分最多占制剂的40％w/w，但是优选不到20％w/w。通常，载体是水(最优选无菌无热原的水)或稀的水性醇溶液，优选在0.12％至0.8％的氯化钠溶液中制备。任选的添加剂包括防腐剂(如果制剂未制成无菌的，例如羟基苯甲酸甲酯)、抗氧化剂、芳香剂、挥发油、缓冲剂、渗透活性剂(例如，甘露醇、木糖醇、赤藓醇)和表面活性剂。
通过用研钵和研杵来研磨干活性剂，然后使微粉化组合物通过400目筛以打碎或分离出大的团聚体，可以制备包含微粉化活性剂的可吸入或不可吸入干颗粒的组合物。
颗粒组合物可任选地包含分散剂，其用于促进气溶胶的形成。合适的分散剂是乳糖，其可以以任意合适的比例(例如，按重量计1比1的比例)与活性剂共混。
可以根据本领域中已知的方法合成式I化合物。以下方案示出了代表性的合成方法：
这些方法描述于例如E.J.Cragoe，“The Synthesis of Amiloride andIts Analogs”(Chapter3)in Amiloride and Its Analogs，第25-36页中，其通过引用并入本文。制备化合物的另一些方法描述于例如U.S.3,313,813中，其通过引用并入本文。特别是见U.S.3,313,813中描述的方法A、B、C和D。用于制备本发明化合物的中间体的另一些方法公开于US7,064,129、US6,858,615、US6,903,105、WO2004/073629、WO2007/146869和WO2007/018640中，其各自明确地通过引用并入本文。
可使用数种测定来表征本发明的化合物。以下讨论了代表性的测定。钠通道阻滞活性和可逆性的体外测量
用于评估本发明化合物的作用机制和/或效力的一种测定包括使用安装在尤斯灌流室上的气道上皮单层在短路电流(ISC)下测量的气道上皮钠电流的腔内药物抑制的确定。将获自新鲜切除的人、狗、绵羊或啮齿动物气道的细胞接种到多孔的0.4微米SnapwellTMInserts(CoStar)上，在空气-液体界面(air-liquid interface，ALI)条件下培养在激素限定的培养基中，在浸入尤斯灌流室中的Krebs Bicarbonate Ringer(KBR)的同时测定钠运输活性(ISC)。以half-log剂量添加方案向腔浴中添加所有受试化合物(1×10-11M至3×10-5M)，并且记录ISC(抑制)的累积变化。在二甲基亚砜中制备所有药物的1×10-2M浓度的储液并储存在-20℃下。通常平行进行8份制备物的制备；每次的两份制备物引入阿米洛利和/或苯扎米尔作为阳性对照。在施用最大浓度(5×10-5M)之后，使腔内浴与新鲜的无药物KBR溶液交换三次，并在每次洗涤约5分钟的持续时间之后测量所得ISC。可逆性定义为在第三次清洗后钠电流返回基线值的百分比。通过计算机接口收集来自电压钳的所有数据并离线分析。
通过Prism3.0程序考虑和测定所有化合物的剂量效应关系。计算IC50值、最大有效浓度和可逆性并与作为阳性对照的阿米洛利和苯扎米尔进行比较。来自犬气道的新鲜切除的细胞中的代表性化合物的钠通道阻滞活性的效力示于表2中。
表2.钠通道阻滞活性的体外测量
化合物 IC50(nM)
I 5.3
阿米洛利 781
吸收的药理学测定
(1)顶端消失测定
将支气管细胞(狗、人、绵羊或啮齿类动物细胞)以0.25×106/cm2的密度接种在具有1.13cm2生长面积的Transwell-Col胶原包被膜上，所述膜生长在促进极化上皮组织的激素限定培养基中空气-液体界面处。在空气-液体界面(ALI)发育12至20天后，预期培养物＞90％具有纤毛，并且黏蛋白积累在细胞上。为了确保原代气道上皮细胞制备物的完整性，测量作为培养物极化性质完整性之指标的跨上皮阻力(transepithelialresistance，Rt)和跨上皮电位差(potential difference，PD)。优选研究人细胞系统从顶端表面吸收的速率。在模拟体内“薄”膜(～25μl)的条件下进行消失测定(disappearance assay)，并通过向顶端表面以10μM初始浓度添加实验的钠通道阻滞剂或阳性对照(阿米洛利、苯扎米尔、非那米尔)来开始实验。在不同时间点(包括0、5、20、40、90和240分钟)收集一系列样品(每份样品5μl体积)。通过使用FluorocountMicroplate Flourometer或HPLC测量每一种钠通道阻滞剂的固有荧光来确定浓度。使用由已知浓度和纯度的可信参考标准材料产生的标准曲线进行定量分析。使用非线性回归单相指数衰减(Prism V3.0)进行消失速率的数据分析。
2.阿米洛利同种物摄取的共聚焦显微镜分析
几乎所有的阿米洛利样分子在紫外线范围内都发荧光。使用x-z共聚焦显微镜，可以将这些分子的该性质用于直接测量细胞更新。将等摩尔浓度的实验化合物以及包含阿米洛利和被证明迅速摄取到细胞区室中的化合物(苯扎米尔和非那米尔)的阳性对照放置在共聚焦显微镜平台上的气道培养物的顶端表面。随着时间获取一系列x-z图像，量化细胞区室中累积的荧光的强度，并且以荧光变化相对于时间作图。
3.化合物代谢的体外测定
在经上皮吸收的过程中，气道上皮细胞具有代谢药物的能力。另外，尽管可能性较小，但是可能的是药物可以通过特定胞外酶活性而在气道上皮表面上被代谢。尽管更可能作为外表面事件，但是化合物可以通过占据患有肺病(例如，囊性纤维化)患者气道腔的受感染分泌物而代谢。因此，进行一系列测定以表征因受试化合物与人气道上皮细胞和/或人气道上皮管腔产物与受试化合物相互作用导致的化合物代谢。
在第一系列测定中，将KBR中作为“ASL”刺激物的受试化合物的相互作用施加于生长在T-Col插入系统中的人气道上皮细胞的顶端表面。对于大部分化合物，使用高效液相色谱(HPLC)测试代谢(产生新物质)以解析化学物质和这些化合物的内源荧光性质，以评估受试化合物和新代谢物的相对量。对于典型的测定，将受试溶液(25μl KBR，含10μM受试化合物)放置在上皮腔表面。从腔和浆膜隔室获得连续的5至10μl样品，用于HPLC分析(1)从腔渗透到浆膜浴的受试化合物的质量和(2)由母体化合物潜在形成的代谢物。在受试分子的荧光性质不足以进行这样的表征的实例中，使用放射性标记的化合物进行这些测定。由HPLC数据，量化腔表面上新代谢化合物的消失和/或形成速率以及基底侧溶液中受试化合物和/或新代谢物的出现。还针对母体化合物量化了与潜在的新代谢物的色谱移动性相关的数据。
为了分析CF痰对受试化合物潜在的代谢，收集获自10名CF患者(在IRB批准下)吐出的CF痰的“代表性”混合物。在剧烈涡旋下使痰溶解在KBR溶液的1∶5混合物中，然后将混合物分成“无水(neat)”的痰等量份和进行了超速离心从而获得“上清液”等量份的等量份(无水=细胞的，上清液=液相)。CF痰的化合物代谢的典型研究包括向孵育在37℃下的“无水”CF痰和CF痰“上清液”的等量份中添加已知质量的受试化合物，之后对来自每一种痰类型的等量份顺序取样，以通过上述HPLC分析对化合物的稳定性/代谢进行表征。如上，然后进行化合物消失、形成新代谢物的速率和新代谢物的HPLC移动性的分析。
4.药物在动物中的药理作用和作用机制
可以使用Sabater等，Journal of Applied Physiology，1999，第2191-2196页描述的体内模型测量化合物增强黏膜纤毛清除(mucociliaryclearanc，MCC)的作用，该文献通过引用并入本文。
方法
动物准备：将成年母羊(体重25至35kg)以竖直姿势束缚在适合于经改造的购物车的专用的身体束缚带中。将动物的头固定并用2％利多卡因将鼻道局部麻醉。然后将动物经鼻插入7.5mm内径的气管内导管(endotracheal tube，ETT)。将ETT的端口放置在声带下方并用柔性气管镜确证其位置。在插管之后，使动物平衡约20分钟，之后开始测量黏膜纤毛清除。
放射性气溶胶的施用：使用Raindrop雾化器产生99mTc-人血清白蛋白(3.1mg/ml；含约20mCi)的气溶胶，其产生3.6μm中值空气动力学直径的微滴。将雾化器与由电磁阀(solenoid valve)和压缩空气源(20psi)组成的剂量测定系统相连接。将雾化器的输出端引导到塑料T形连接器中，所述连接器的一端与气管内导管相连接，另一端与活塞式呼吸器(piston respirator)相连接。在呼吸器的吸气周期开始时开动该系统1秒。呼吸器的潮气量(tidal volume)设定为500mL，吸气和呼气比例为1∶1，速率为每分钟20次呼吸，以使中央气道沉积最大化。使绵羊呼吸放射性标记的气溶胶5分钟。使用伽马射线照相机测量99mTc人血清白蛋白从气道的清除。将照相机定位于动物背上，绵羊以自然竖直姿势支持在车中，从而使得图像区域垂直于动物的脊椎。在绵羊上放置外部放射性标记的标记物以确保在伽马射线照相机下的同轴度。所有图像保存在与伽马射线照相机一体的计算机中。追踪对应于绵羊右肺的图像上的感兴趣区域并记录计数。将计数相对于衰减进行校正并表示为初始基线图像中存在的放射性的百分比。从分析中排除左肺，这是因为左肺的轮廓与胃重叠，计数可能是吞下和进入胃的放射性标记的黏液。
治疗方案(在t-0的活性评估)：在施用放射性气溶胶之后立即获得基线沉积图像。在零时间，获得基线图像之后，使用Pari LC JetPlus雾化器使载剂对照(蒸馏水)、阳性对照(阿米洛利)或实验化合物从4ml体积雾化给自由呼吸的动物。雾化器通过流量为每分钟8升的压缩空气驱动。递送溶液的时间为10至12分钟。在递送全部剂量之后立即去掉动物的管子，以防止因从ETT呼吸过量放射性示踪物引起的计数的错误升高。在总共8小时的观察时期中，在给药后开始的两小时中以15分钟的间隔、给药后接下来的6小时中以1小时的间隔获得肺的连续图像。用不同试验制剂进行的给药期被至少7天的清除期分开。
治疗方案(在t-4小时的活性评估)：使用标准方案的以下变化形式来评价在单次暴露于载剂对照(蒸馏水)、阳性对照(阿米洛利或苯扎米尔)或试验药剂之后响应的耐久性。在零时间，使用Pari LC JetPlus雾化器使载剂对照(蒸馏水)、阳性对照(阿米洛利)或试验化合物从4ml体积雾化给自由呼吸的动物。雾化器通过流量为每分钟8升的压缩空气驱动。递送溶液的时间为10至12分钟。将动物以竖直姿势在特定的身体束缚带中束缚4小时。在4小时结束时，动物从Raindrop雾化器接受单剂量的雾化99mTc人血清白蛋白(3.1mg/ml；含约20mCi)。在递送全部剂量的放射性示踪物之后立即去掉动物的管子。在施用放射性气溶胶之后立即获得基线沉积图像。在总共4小时的观察时期中，在施用放射性示踪物后开始的两小时(代表施用药物后第4至6小时)中以15分钟的间隔、给药后接下来的2小时中以1小时的间隔获得肺的连续图像。用不同试验制剂进行的给药期被至少7天的清除期分开。
统计学：使用Windows，version5的SYSTAT分析数据。使用双因素重复ANOVA分析数据(以评估整体作用)，之后通过配对t检验鉴定特定对之间的差异。当P小于或等于0.05时，显著性是可以接受的。使用线性最小二乘回归计算平均MCC曲线的斜率值(由在t-0评估中给药后初始45分钟期间收集的数据进行计算)以评估迅速清除相期间初始速率的差异。
实施例
已经一般性地描述了本发明，通过参照本文中提供的某些特定实施例，可以取得进一步地理解，除非另有指明，否则所述实施例仅用于举例说明的目的，而不是旨在限制。
钠通道阻滞剂的制备
材料和方法。所有试剂和溶剂均购自Aldrich Chemical公司，并且使用时不进行进一步纯化。质子和碳NMR谱分别在300MHz和75MHz下在Bruker AC300波谱仪上获得。质子谱参照四甲基硅烷作为内标物，碳谱参照CDCl3、CD3OD、丙酮-d6或DMSO-d6(除非另有指明，否则购自Aldrich或Cambridge Isotope Laboratories)。在Mel-Temp II设备上获得熔点，并且其未经校正。在Shimadzu LCMS-2010EV质谱仪上获得ESI质谱。在Shimadzu Prominence HPLC系统上使用Waters XTerra RPC18分析柱在220nm(除非另有指明)检测，获得HLPC分析。流量为1.0mL/分钟，使用以下时间程序：
Figure BDA0000447295570000301
除非另外指明，否则应用缩写的以下定义。
缩写 定义
THF 四氢呋喃
Cbz 苄氧羰基，即-(CO)O-苄基
AUC 曲线下面积或峰面积
EtOAc 乙酸乙酯
Rf 保留因子
HPLC 高效液相色谱
MTBE 甲基叔丁基醚
tR 保留时间
GC-MS 气相色谱-质谱
wt％ 重量百分比
h 小时
min 分钟
MHz 兆赫兹
MeOH 甲醇
TFA 三氟乙酸
UV 紫外线
式I(15)的制备
Figure BDA0000447295570000311
Figure BDA0000447295570000321
化合物2的制备：
在室温下将乙酰氯(27.1mL，380.1mmol)逐滴添加到MeOH(225mL)中，并添加化合物1(15.0g，54.3mmol)。将所得溶液回流过夜并浓缩，然后从己烷(700mL)中碰撞(crash)，得到作为灰白色固体的期望化合物2(14.0g，89％)：
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.07(d，J＝8.7Hz，2H)，6.71(d，J=8.7Hz，2H)，4.02(t，J=6.6Hz，1H)，3.68(s，3H)，2.75-2.57(m，2H)，2.22-2.05(m，2H).
化合物3的制备：
在0℃下向化合物2(14.0g，48.2mmol)的MeOH/H2O(140mL/70mL)溶液中添加NaHCO3(28.5g，337.4mmol)和Boc2O(11.5g，53.0mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌过夜。使反应混合物在EtOAc(300mL)和水(300mL)之间分配。分离出水层并用EtOAc(2×300mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，得到作为灰白色固体的期望化合物3(13.5g，90％)：
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ6.98(d，J=8.4Hz，2H)，6，67(d，J＝8.4Hz，2H)，4.03(t，J=4.5Hz，1H)，3.68(s，3H)，2.65-2.40(m，2H)，1.92-1.82(m，1H)，1.44(s，9H).
化合物4的制备：
在0℃下向化合物3(13.5g，43.6mmol)的吡啶(150mL)溶液中添加三氟甲烷磺酸(7.3mL，43.6mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌3h。浓缩之后，使反应混合物在EtOAc(300mL)与水(300mL)之间分配。分离出水层并用EtOAc(2×300mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，将残余物通过柱色谱(硅胶，95∶5CHCl3/MeOH)纯化，得到作为灰棕色固体的期望化合物4(16.0g，83％)：
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.26-7.23(m，2H)，7.20-7.17(m，2H)，5.08(br s，1H)，4.36(br s，1H)，3.71(s，3H)，2.73-2.67(m，2H)，2.21-2.13(m，1H)，1.99-1.87(m，1H)，1.45(s，9H).
化合物6的制备：
在室温下向化合物4(16.0g，36.2mmol)的无水CH3CN(160mL)溶液中添加TEA(20.9mL，144.8mmol)、己烷中的10％(t-Bu)3P(1.4g，7.2mmol)、丁-3-炔基氨基甲酸苄酯(5，8.8g，43.4mmol)和CuI(340mg，1.8mmol)。将所得混合物用氩脱气3min，并一次性迅速添加Pd(PPh3)4(4.1g，3.6mmol)，在用氩脱气5min之后，将所得混合物在60℃下加热12h。将反应混合物在真空下浓缩，将残余物通过柱(硅胶，40∶60己烷/EA)纯化，得到作为褐色油的化合物6(16.0g，70％)：
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.28(m，8H)，7.07(d，J=8.4Hz，2H)，5.12(br s，4H)，4.33(br s，1H)，3.71(s，3H)，3.46-3.39(m，2H)，2.68-2.59(m，4H)，2.14-2.20(m，1H)，1.96-1.84(m，1H)，1.44(s，9H).
化合物7的制备：
在室温下将化合物6(8.0g，16.1mmol)溶解在二氧六环(60mL)中的4N HCl中，并将所得溶液搅拌1h。在浓缩之后，将残余物从MTBE中碰撞，得到作为白色固体的盐酸盐7(6.75g，90％)：
1HNMR(300MHz，CD3OD)δ7.32-7.28(m，7H)，7.18(d，J=8，1Hz，2H)，5.08(s，2H)，4.04(t，J＝6.3Hz，1H)，3.82(s，3H)，3.31-3.29(m，2H)，2.82-2.67(m，2H)，2.58(t，J=6.9Hz，2H)，2.26-2.08(m，2H).
化合物8的制备
向化合物7(6.75g，15.6mmol)的MeOH/AcOH(70mL/15mL)溶液中添加H2O中的37％CH2O(25.2mL，312mmol)和氰基硼氢化钠(7.84g，124.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。浓缩之后，将残余物通过柱色谱(硅胶，10∶1CH2Cl2/MeOH，10∶1∶0.1CHCl3/MeOH/NH4OH)纯化，得到作为灰白色固体的期望化合物8(3.8g，63％)：
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.26(m，7H)，7.11(d，J=8.1Hz，2H)，5.11(s，2H)，3.69(s，3H)，3.45-3.39(m，2H)，3.10(t，J=7.5Hz，1H)，2.65-2.60(m，4H)，2.32(s，6H)，2.01-1.88(m，2H).
化合物9的制备：
向甲酯8(3.80g，8.9mmol)的THF/MeOH/H2O(30mL/30mL/10mL)溶液中添加NaOH(3.50g，89.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。浓缩之后，将残余物溶解在H2O(50mL)，并添加1N HCl水溶液以调节pH值至5。过滤出所得沉淀并干燥，得到作为灰白色固体的期望化合物9(3.25g，90％)：
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.32-7.28(m，7H)，7.17(d，J=8.4Hz，2H)，5.08(s，2H)，3.46-3.42(m，1H)，3.45-3.39(m，2H)，2.83-2.70(m，8H)，2.58(t，J＝6.9Hz，2H)，2.15-2.05(m，2H).
化合物11的制备：
向化合物9(1.80g，4.4mmol)的无水DMF(20mL)溶液中添加HATU(3.3g，8.8mmol)和DIPEA(4.0mL，22.0mmol)。将所得溶液在室温下搅拌0.5h并添加胺10(2.1g，5.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜并在EtOAc(200mL)和水(200mL)之间分配。分离出水层并用EtOAc(2×200mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶，95∶5CHCl3/MeOH)纯化，得到作为白色固体的期望化合物11(1.70g，49％)：
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.28(m，7H)，7.10(d，J=8.1Hz，2H)，5.10(s，3H)，4.97-4.90(m，1H)，3.86(t，J=6.6Hz，2H)，3.45-3.35(m，2H)，3.12(s，3H)，3.09-3.00(m，2H)，2.96(s，3H)，2.91-2.71(m，2H)，2.62(t，J=6.3Hz，2H)，2.30(s，6H)，1.97-1.31(m，26H).
化合物12的制备：
在室温下使化合物11(1.7g，2.1mmol)和10％Pd/C(800mg)在MeOH/AcOH(25mL/1.0mL)中的悬液经受氢化条件(1atm)过夜。将反应混合物通过硅藻土(celite)过滤并用MeOH洗涤。在真空下将滤液浓缩并从MTBE中碰撞，得到作为无色油的乙酸盐12(1.45g，90％)：
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.12(s，4H)，4.97-4.90(m，2H)，3.90-3.85(m，2H)，3.29(s，3H)，2.95(s，3H)，2.91(t，J=7.6Hz，2H)，2.63(t，J＝6.8Hz，2H)，2.57-2.50(m，8H)，1.95(s，6H)，2.02-1.96(m，2H)，1.80-1.62(m，10H)，1.50(s，9H)，1.45(s，9H).
化合物14的制备：
在室温下向乙酸盐12(1.45g，2.1mmol)和甲基3，5-二氨基-6-氯吡嗪-2-羰基异硫脲氢碘酸盐(13，1.28g，3.3mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中添加DIPEA(2.17g，16.8mmol)。将反应混合物在70℃下加热2h，然后冷却至室温并在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶，9∶1CH2Cl2/MeOH，80∶18∶2CHCl3/MeOH/NH4OH)纯化，得到作为黄色固体的化合物14(1.15g，68％)：
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.09(s，4H)，4.87-4.82(m，2H)，3.86(t，J=7.2Hz，2H)，3.24-3.18(m，3H)，3.22(s，3H)，2.96-2.91(m，4H)，2.64-2.47(m，4H)，2.30(t，6H)，1.99-1.72(m，10H)，1.55-1.32(m，20H).
化合物15[式I]-3，5-二氨基-6-氯-N-(N-(4-(4-((S)-3-(二甲氨基)-4-((S)-1-(二甲氨基)-6-胍基-1-氧代己-2-基氨基)-4-氧代丁基)苯基)丁基)甲脒基)吡嗪-2-甲酰胺的制备：
向化合物14(670mg，0.7mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中添加TFA(5.0mL)，并将所得溶液在室温下搅拌2h。将反应混合物在真空下浓缩并与1N HCl水溶液共沸3次，得到作为黄色吸湿性固体的盐酸盐15(式I，600mg，99％)：
1HNMR(400MHz，D2O)δ7.16-7.15(m，4H)，3.84-3.81(m，1H)，3.26(br s，2H)，3.13-3.11(m，5H)，2.91-2.86(m，9H)，2.61-2.53(m，4H)，2.25-2.11(m，2H)，1.74-1.23(m，10H).
化合物15的体外数据总结：
●在犬支气管上皮细胞上的效力(IC50)：5.3±3.3nM(n=5)(图1)
●在犬支气管上皮细胞上的最大作用的逆转：洗涤三次，损失了6.8±5.1％(n=3)的作用
●穿过人支气管上皮细胞的吸收速率：0.12±0.05nM/cm2/min(n=3)
●人支气管上皮的代谢：顶端或基底端未检测到代谢物
●人血浆稳定性：经过4小时未检测到代谢
●犬支气管上皮细胞保留气道表面液体的持久性：药物递送后94±5％(n=3)的流体保留8小时，药物递送后56±6％(n=2)的流体保留24小时
●大鼠肝细胞代谢：在全部24小时的孵育期间没有显著代谢的证据
●人血浆蛋白结合：80±5％(n=6)与血浆蛋白结合用P-1046(I)和阿米洛利抑制ENaC的剂量响应曲线示于图1中。
化合物15(式I、aka I、aka P-1046、aka1046)的眼的数据和方法：
ExLac大鼠中P-1046(式I，15)浓度对眼泪产出的作用示于图2中。
P-1046(式I，15)从眼表面的清除示于图3中。
ExLac大鼠中10mM P-1046(式I，15)对眼泪产出的作用示于图4中。
用于眼泪产出之酚红线(Phenol Red Thread，PRT)测量的方法：
动物物种/品系：大鼠，Sprague Dawley(SD)，手术摘除泪腺(ExLac)。
动物数目/性别：3～4只雌性/组
受试物制剂：在开始研究之前不超过48小时，为每个给药组制备所有储液。通过分光光度法确定所有受试物溶液中的ENaC阻滞剂的浓度。
受试物的施用：给予同侧和对侧眼二者5□1受试物的溶液。
酚红线(PRT)测试：用浸有酚红染料的ZoneQuick棉线测量眼泪产生。将折叠的线末端保持在外侧-腹侧结膜穹窿(conjunctival cul-de-sac)中10秒。通过测量由黄色变色为红色的线长度确定芯吸到线上的眼泪的长度。立体显微镜的使用有助于准确地测量(以毫米记录)芯吸/颜色变化。
用于P-1046(化合物15式I、aka I、aka P-1046、aka1046)的方法：
从PRT线提取：
将所有PRT线收集在微量离心管(eppendorf tube)中并在-20C下储存至测定药物浓度之时。从线上提取P-1046并如下分析：
1.将200μL70％ACN(70％ACN，30％H2O)添加到其中具有线的样品管中。
2.将步骤1的管涡旋30秒并超声处理1分钟至完全浸没所述线。
3.将样品溶液在室温下孵育4小时。
4.使样品再次涡旋30秒。
5.将75μL的每种样品溶液(来自步骤4)转移到96孔UPLC板中，向每一样品孔中添加额外的75μL流动相A(5mM甲酸铵，H2O中的0.1％甲酸)。
6.相同地制备线溶液的分析标准物(10mM，1mM，100□M，10□M，1□M，100nM，缓冲液)。
7.通过UPLC分析所有样品的药物浓度。
化合物15(式I、aka I、aka P-1046、aka1046)的溶解度和稳定性测试：
用于溶解度和稳定性评价的方法：
1.制备2.8％NaCl和25mM柠檬酸盐缓冲液，溶液的pH为4.2。溶液的渗量浓度为约940mOsM。
2.向受试化合物中添加适量缓冲溶液以得到约10mg/mL的浓度。
3.使溶液涡旋15秒，超声处理30秒，再次涡旋60秒并从视觉上观察溶液。
4.通过分光光度计计算溶液的终浓度。
●取出一部分溶液并将其稀释至1∶10的比例。将该溶液置于50℃下以进行加速稳定性研究10天。
●通过HPLC分析获得的稳定性数据。
5.制备2.8％NaCl和25mM柠檬酸盐缓冲液，溶液的pH为4.2。溶液的渗量浓度为约940mOsM。
6.向受试化合物中添加适量缓冲溶液以得到约10mg/mL的浓度。
7.使溶液涡旋15秒，超声处理30秒，再次涡旋60秒并从视觉上观察溶液。
8.通过分光光度计计算溶液的终浓度。
●取出一部分溶液并将其稀释至1∶10的比例。将该溶液置于50℃下进行加速稳定性研究10天。
●通过HPLC分析获得的稳定性数据。
图5示出在第1天和第10天时P-1046(式I，15)溶解度/稳定性样品的HPLC分析。
化合物15(式I、aka I、aka P-1046、aka1046)的概括的安全性和耐受性：
用P-1046在新西兰白兔中进行急性非GLP眼毒性研究
●目的：
本研究的目的是评价当向新西兰白兔局部滴注施用时上皮钠通道(ENaC)的抑制剂P-1046的眼耐受性和全身暴露。
●方法：
提供作为淡黄白色粉末的受试物(P-1046)。然后将受试物制备成用于局部眼应用的给药溶液。将28只在研究开始时约4个月大、随机体重为2.6-3.1千克的实验用年幼雄性新西兰白兔分配到下表中所示治疗组：
组 P-1046浓度(右眼)* 给药次数** 动物数目
1.载剂 0 8 4
6.P-1046-低剂量 10 8 4
7.P-1046-高剂量 30 4 4
*每次给药时，将50μ1载剂或受试物溶液滴在右眼上，将50μ1盐水滴在左眼上
**在一天中施用8次(给药之间间隔1小时，10mM剂量组)或4次(每次给药之间间隔2小时，30mM剂量组)。
在第1组和第6组中，向右眼球上施用50μl受试物或对照载剂8次(每次给药之间间隔约1小时)，在第7组中施用4次(每次给药之间间隔约2小时)。每日记录死亡数和临床观察结果。随机/选择地记录体重以及在第2天处死之前记录体重。对于眨眼速率评估，在治疗开始之前和全部给药之后对右眼的眨眼仅计数3分钟。记录3分钟眨眼观察期间眼畏缩(wincing)和用爪子扒(pawing)的实例作为临床观察结果。记录每日的摄食量。在处理之前、每次给药之后和第2天给药后约24小时根据德莱兹(Draize)对眼进行评分。在第1天给药之前、中间给药(第3、5和6组中第4次给药，第2、4和7组中第二次给药)之后30分钟以及最后一次给药之后30、60、120和240分钟时，从第2至7组的动物中采集血液用于毒物动力学评估。在开始治疗之前以及最后一次给药之后120分钟和240分钟时采集血样用于评价血清化学参数。在最后一次给药后的4小时期间采集尿样。在第2天完成研究操作之后处死所有动物。
●结果和结论
如通过临床观察、体重和摄食量判断的，研究中的动物表现出良好整体健康
通过眨眼速率测量、眼的德莱兹评价和临床观察评估眼刺激性。以下讨论与每种治疗相关刺激性。
载剂
载剂被极好地耐受，在给药之后仅有小的、短暂的眼刺激。载剂对照动物在两个眼都具有结膜发红(最大德莱兹评分=1)以及眼上的畏缩和用爪子扒。与用盐水处理的眼(左眼)相比，用载剂处理的眼(右眼)的结膜发红的发生率更高，这表明观察到的刺激性可能是载剂作用和给药操作二者导致的(图6)。所有眼在第2天表现正常。
10和30mM P-1046
P-1046制剂可以被较好耐受。观察到给药后结膜发红，但是该体征的严重程度和发生率与载剂对照相当。10mM组的所有眼在第2天表现正常。
图6中示出了P-1046眼耐受性的总结。
图7示出了在眼给药之后的P-1046血浆水平。

Claims (23)

1.式(I)所示化合物及其外消旋体、对映体、非对映体、互变异构体、多晶型物、假多晶型物和可药用盐：
Figure FDA0000447295560000011
2.权利要求1所述的化合物，其是无机酸或有机酸的酸加成盐，所述无机酸或有机酸选自：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、葡萄糖酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸、鞣酸、棕榈酸、藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸、丙二酸、磺基水杨酸、乙醇酸、2-羟基-3-萘甲酸、双羟萘酸、水杨酸、硬脂酸、邻苯二甲酸、扁桃酸和乳酸。
3.药物组合物，其包含权利要求1所述的化合物和可药用载体。
4.组合物，其包含：
权利要求1所述的化合物；和
P2Y2受体激动剂。
5.组合物，其包含：
权利要求1所述的化合物；和
支气管扩张剂。
6.促进黏膜表面水化的方法，其包括：
向对象的黏膜表面施用有效量的权利要求1所述的化合物。
7.阻滞钠通道的方法，其包括：
使钠通道与有效量的权利要求1所述的化合物相接触。
8.治疗慢性支气管炎、治疗支气管扩张、治疗囊性纤维化、治疗窦炎、治疗阴道干燥、治疗干眼、促进眼水化、促进角膜水化、促进黏膜表面中的黏液清除、治疗舍格伦病、治疗远端肠梗阻综合征、治疗皮肤干燥、治疗食管炎、治疗口干、治疗鼻脱水、治疗呼吸机诱导的肺炎、治疗哮喘、治疗原发性纤毛运动障碍、治疗中耳炎、诱导用于诊断目的痰、治疗慢性阻塞性肺病、治疗肺气肿、治疗肺炎、治疗便秘、治疗慢性憩室炎、治疗鼻窦炎的方法，其包括：
向有此需要的对象施用有效量的权利要求1所述的化合物。
9.治疗通过提高黏膜纤毛清除和黏膜水化而好转之疾病的方法，其包括向需要提高黏膜纤毛清除和黏膜水化的对象施用有效量的渗压剂和权利要求1所述的化合物。
10.权利要求9所述的方法，其中所述疾病是选自以下的一种或更多种病症：慢性支气管炎、支气管扩张、囊性纤维化、窦炎、阴道干燥、干眼、舍格伦病、远端肠梗阻综合征、皮肤干燥、食管炎、口干(口干燥症)、鼻脱水、哮喘、原发性纤毛运动障碍、中耳炎、慢性阻塞性肺病、肺气肿、肺炎、憩室炎、鼻窦炎、以及空气传染。
11.权利要求9所述的方法，其中在施用所述渗压剂之前施用所述化合物。
12.权利要求9所述的方法，其中在施用所述渗压剂的同时施用所述化合物。
13.权利要求9所述的方法，其中在施用所述渗压剂之后施用所述化合物。
14.权利要求9所述的方法，其中所述渗压剂是高张盐水或甘露醇。
15.权利要求9所述的方法，其中所述渗压剂是作为可吸入尺寸之微粉化颗粒递送的氯化钠。
16.权利要求9所述的方法，其中使用能够向鼻道或肺气道递送制剂的装置通过气溶胶化来施用所述有效量的渗压剂和钠通道阻滞剂，其中所述气溶胶为可吸入尺寸。
17.组合物，其包含：
(a)权利要求1所述的化合物和(b)渗透活性化合物。
18.诱导痰的方法，其包括向需要提高黏膜纤毛清除和黏膜水化的对象施用有效量的渗压剂和权利要求1所述的化合物。
19.预防、暴露后预防、预防性或治疗性治疗由病原体引起之疾病或病症的方法，其包括向需要提高黏膜纤毛清除和黏膜水化的对象施用有效量的权利要求1所述的化合物。
20.权利要求19所述的方法，其中所述病原体是炭疽或鼠疫。
21.预防、暴露后预防、预防性或治疗性治疗由病原体引起之疾病或病症的方法，其包括向需要提高黏膜纤毛清除和黏膜水化的对象施用有效量的渗压剂和权利要求1所述的化合物。
22.权利要求22所述的方法，其中所述病原体是炭疽或鼠疫。
23.用于制备上文中所限定之化合物I的方法，其包括本文中所描述的步骤：
Figure FDA0000447295560000031
CN201280031699.7A 2011-06-27 2012-06-27 化学和代谢稳定的具有钠通道阻滞剂活性的二肽 Expired - Fee Related CN103687488B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161501524P 2011-06-27 2011-06-27
US61/501,524 2011-06-27
PCT/US2012/044372 WO2013003444A1 (en) 2011-06-27 2012-06-27 A chemically and metabolically stable dipeptide possessing potent sodium channel blocker activity

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103687488A true CN103687488A (zh) 2014-03-26
CN103687488B CN103687488B (zh) 2015-06-10

Family

ID=47424521

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280031699.7A Expired - Fee Related CN103687488B (zh) 2011-06-27 2012-06-27 化学和代谢稳定的具有钠通道阻滞剂活性的二肽

Country Status (13)

Country Link
US (4) US9072738B2 (zh)
EP (1) EP2723176B1 (zh)
CN (1) CN103687488B (zh)
BR (1) BR112013032771B1 (zh)
CA (1) CA2839709C (zh)
DK (1) DK2723176T3 (zh)
ES (1) ES2633177T3 (zh)
HR (1) HRP20171044T1 (zh)
HU (1) HUE032851T2 (zh)
PL (1) PL2723176T3 (zh)
PT (1) PT2723176T (zh)
SI (1) SI2723176T1 (zh)
WO (1) WO2013003444A1 (zh)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6858615B2 (en) 2002-02-19 2005-02-22 Parion Sciences, Inc. Phenyl guanidine sodium channel blockers
AR086745A1 (es) 2011-06-27 2014-01-22 Parion Sciences Inc 3,5-diamino-6-cloro-n-(n-(4-(4-(2-(hexil(2,3,4,5,6-pentahidroxihexil)amino)etoxi)fenil)butil)carbamimidoil)pirazina-2-carboxamida
PT2723176T (pt) 2011-06-27 2017-07-18 Parion Sciences Inc Dipéptido química e metabolicamente estável que possui potente atividade bloqueadora do canal de sódio
WO2013064451A1 (en) 2011-11-02 2013-05-10 Boehringer Ingelheim International Gmbh Novel process for the preparation of acylguanidines and acylthioureas
CA2854217C (en) 2011-11-02 2019-12-31 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted pyrazinoylguanidine compounds and their use as epithelial sodium channel blockers, medicaments containing said compounds and processes for the preparation thereof
US8859559B2 (en) 2011-12-20 2014-10-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted pyrazines and their use in the treatment of disease
WO2013174757A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Boehringer Ingelheim International Gmbh Tertiary amines, medicaments containing said amines, use thereof and processes for the preparation thereof
LT2855435T (lt) 2012-05-29 2018-09-10 Parion Sciences, Inc. Amino amidai, panašūs į dendrimerus, su natrio kanalų blokavimo aktyvumu, skirti gydyti sausų akių sindromą ir kitas gleivinių ligas
WO2014044849A1 (en) 2012-09-24 2014-03-27 Boehringer Ingelheim International Gmbh Heterocyclic compounds, medicaments containing said compounds, use thereof and processes for the preparation thereof
HUE032891T2 (hu) 2012-12-17 2017-11-28 Parion Sciences Inc Klórpirazin-karboxamid-származékok nem kielégítõ nyálkahártya-hidratáció által elõsegített megbetegedések kezelésére
US9029382B2 (en) 2012-12-17 2015-05-12 Parion Sciences, Inc. 3,5-diamino-6-chloro-N-(N-(4-phenylbutyl)carbamimidoyl) pyrazine-2-carboxamide compounds
SG11201601291QA (en) 2013-08-23 2016-03-30 Parion Sciences Inc Dithiol mucolytic agents
US9102633B2 (en) 2013-12-13 2015-08-11 Parion Sciences, Inc. Arylalkyl- and aryloxyalkyl-substituted epithelial sodium channel blocking compounds
US20150376145A1 (en) 2014-06-30 2015-12-31 Parion Sciences, Inc. Stable sodium channel blockers
MX2017009764A (es) 2015-01-30 2018-03-28 Parion Sciences Inc Agentes mucolíticos de monotiol novedosos.
JP2018520986A (ja) 2015-04-30 2018-08-02 パリオン・サイエンシィズ・インコーポレーテッド ジチオール粘液溶解剤の新規なプロドラッグ

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110008268A1 (en) * 2006-06-09 2011-01-13 Parion Sciences, Inc. Phenyl substituted pyrazinoylguanidine sodium channel blockers possessing beta agonist activity

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL299931A (zh) 1962-10-30
JPS6034925B2 (ja) 1979-07-31 1985-08-12 帝人株式会社 持続性鼻腔用製剤およびその製造法
US4389393A (en) 1982-03-26 1983-06-21 Forest Laboratories, Inc. Sustained release therapeutic compositions based on high molecular weight hydroxypropylmethylcellulose
US4540564A (en) 1982-05-18 1985-09-10 University Of Florida Brain-specific drug delivery
US4479932A (en) 1982-05-18 1984-10-30 University Of Florida Brain-specific drug delivery
US4501729A (en) 1982-12-13 1985-02-26 Research Corporation Aerosolized amiloride treatment of retained pulmonary secretions
JPS6032714A (ja) 1983-08-01 1985-02-19 Teijin Ltd 鼻腔粘膜に適用するための安定化された粉末状薬学的組成物
US5707644A (en) 1989-11-04 1998-01-13 Danbiosyst Uk Limited Small particle compositions for intranasal drug delivery
US5404871A (en) 1991-03-05 1995-04-11 Aradigm Delivery of aerosol medications for inspiration
US5492112A (en) 1991-05-20 1996-02-20 Dura Pharmaceuticals, Inc. Dry powder inhaler
US5292498A (en) 1991-06-19 1994-03-08 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method of treating lung disease with uridine triphosphates
ES2141108T3 (es) 1991-07-02 2000-03-16 Inhale Inc Metodo y dispositivo para proporcionar medicamentos en aerosol.
US5785049A (en) 1994-09-21 1998-07-28 Inhale Therapeutic Systems Method and apparatus for dispersion of dry powder medicaments
BR9307270A (pt) 1992-10-19 1999-06-01 Dura Pharma Inc Inalador de pó seco
US5819726A (en) 1993-01-29 1998-10-13 Aradigm Corporation Method for the delivery of aerosolized drugs to the lung for the treatment of respiratory disease
AUPM411494A0 (en) 1994-02-25 1994-03-24 Central Sydney Area Health Service Method and device for the provocation of upper or lower airway narrowing and/or the induction of sputum
US5656256A (en) 1994-12-14 1997-08-12 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods of treating lung disease by an aerosol containing benzamil or phenamil
US5645051A (en) 1995-04-21 1997-07-08 Dura Pharmaceuticals, Inc. Unit dose dry powder inhaler
US5622166A (en) 1995-04-24 1997-04-22 Dura Pharmaceuticals, Inc. Dry powder inhaler delivery system
US5654007A (en) 1995-06-07 1997-08-05 Inhale Therapeutic Systems Methods and system for processing dispersible fine powders
US5789391A (en) 1996-07-03 1998-08-04 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method of treating sinusitis with uridine triphosphates and related compounds
ATE347880T1 (de) 1998-10-20 2007-01-15 Univ North Carolina Methoden zum befeuchten der nasenschleimhaut
US6926911B1 (en) 1998-12-22 2005-08-09 The University Of North Carolina At Chapel Hill Compounds and methods for the treatment of airway diseases and for the delivery of airway drugs
US6858615B2 (en) 2002-02-19 2005-02-22 Parion Sciences, Inc. Phenyl guanidine sodium channel blockers
US6858614B2 (en) 2002-02-19 2005-02-22 Parion Sciences, Inc. Phenolic guanidine sodium channel blockers
US6903105B2 (en) 2003-02-19 2005-06-07 Parion Sciences, Inc. Sodium channel blockers
WO2005016879A2 (en) 2003-08-18 2005-02-24 Parion Sciences, Inc. Cyclic pyrazinoylguanidine sodium channel blockers
US20050090505A1 (en) 2003-08-18 2005-04-28 Johnson Michael R. Methods of reducing risk of infection from pathogens
JP2007502827A (ja) 2003-08-18 2007-02-15 パリオン・サイエンシィズ・インコーポレーテッド 脂肪族ピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカー
CA2534682C (en) 2003-08-18 2013-02-26 Parion Sciences, Inc. Capped pyrazinoylguanidine sodium channel blockers
US7745442B2 (en) 2003-08-20 2010-06-29 Parion Sciences, Inc. Methods of reducing risk of infection from pathogens
US20090253714A1 (en) 2003-08-20 2009-10-08 Johnson Michael R Methods of reducing risk of infection from pathogens
US7375102B2 (en) 2004-06-28 2008-05-20 Amgen Sf, Llc Tetrahydroquinazolin-4(3H)-one-related and tetrahydropyrido[2,3-D]pyrimidin-4(3H)-one-related compounds, compositions and methods for their use
US7399766B2 (en) 2004-08-18 2008-07-15 Parion Sciences, Inc. Soluble amide & ester pyrazinoylguanidine sodium channel blockers
KR20070059063A (ko) 2004-08-18 2007-06-11 마이클 알 존슨. 지방족 아미드 및 에스테르 피라지노일구아니딘 나트륨채널 차단제
CA2575680A1 (en) 2004-08-18 2006-03-02 Michael R. Johnson Cyclic amide & ester pyrazinoylguanidine sodium channel blockers
US20090324724A1 (en) 2004-08-18 2009-12-31 Parion Sciences, Inc. Soluble amide & ester pyrazinoylguanidine sodium channel blockers
US7807834B2 (en) 2005-08-03 2010-10-05 Parion Sciences, Inc. Capped pyrazinoylguanidine sodium channel blockers
US8324218B2 (en) 2006-06-09 2012-12-04 Parion Sciences, Inc. Aliphatic pyrazinoylguanidine sodium channel blockers with beta agonist activity
US20110195973A1 (en) 2006-06-09 2011-08-11 Parion Sciences, Inc. Cyclic substituted pyrazinoylguanidine sodium channel blockers possessing beta agonist activity
AR062741A1 (es) 2006-09-07 2008-12-03 Hirsh Andrew J Metodo para aumentar la hidratacion de la mucosa y la evacuacion de l a mucosa mediante tratamiento con bloquadores de los canales del sodio y osmolitos
JP2010502739A (ja) 2006-09-07 2010-01-28 パリオン・サイエンシィズ・インコーポレーテッド ナトリウムチャネル阻害剤及び浸透圧調節物質を用いた処置による粘膜水和及び粘液クリアランスの改善
WO2008124496A1 (en) 2007-04-03 2008-10-16 Parion Sciences, Inc. Method of treating acid-sensing ion channel mediated pain, cough, and central nervous system disorders
US8288391B2 (en) 2007-04-03 2012-10-16 Parion Sciences, Inc. Pyrazinoylguanidine compounds for use as taste modulators
WO2009049159A1 (en) 2007-10-10 2009-04-16 Parion Sciences, Inc. Delivering osmolytes by nasal cannula
CN101951913A (zh) 2008-02-26 2011-01-19 帕里昂科学公司 聚芳族钠通道阻断剂
US20100074881A1 (en) 2008-07-11 2010-03-25 Parion Sciences, Inc. Multiple nebulizer systems
PT2723176T (pt) 2011-06-27 2017-07-18 Parion Sciences Inc Dipéptido química e metabolicamente estável que possui potente atividade bloqueadora do canal de sódio
AR086745A1 (es) 2011-06-27 2014-01-22 Parion Sciences Inc 3,5-diamino-6-cloro-n-(n-(4-(4-(2-(hexil(2,3,4,5,6-pentahidroxihexil)amino)etoxi)fenil)butil)carbamimidoil)pirazina-2-carboxamida
LT2855435T (lt) 2012-05-29 2018-09-10 Parion Sciences, Inc. Amino amidai, panašūs į dendrimerus, su natrio kanalų blokavimo aktyvumu, skirti gydyti sausų akių sindromą ir kitas gleivinių ligas
HUE032891T2 (hu) 2012-12-17 2017-11-28 Parion Sciences Inc Klórpirazin-karboxamid-származékok nem kielégítõ nyálkahártya-hidratáció által elõsegített megbetegedések kezelésére
US9029382B2 (en) 2012-12-17 2015-05-12 Parion Sciences, Inc. 3,5-diamino-6-chloro-N-(N-(4-phenylbutyl)carbamimidoyl) pyrazine-2-carboxamide compounds

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110008268A1 (en) * 2006-06-09 2011-01-13 Parion Sciences, Inc. Phenyl substituted pyrazinoylguanidine sodium channel blockers possessing beta agonist activity

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YAWAR J. QADRI ET AL.: "Amiloride Docking to Acid-sensing Ion Channel-1", 《THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY》, vol. 285, no. 13, 26 March 2010 (2010-03-26), pages 9627 - 9635, XP055136774, DOI: doi:10.1074/jbc.M109.082735 *

Also Published As

Publication number Publication date
BR112013032771A2 (pt) 2016-08-16
EP2723176B1 (en) 2017-04-12
US20140142118A1 (en) 2014-05-22
EP2723176A1 (en) 2014-04-30
CA2839709C (en) 2020-01-14
EP2723176A4 (en) 2014-11-12
US9655896B2 (en) 2017-05-23
PT2723176T (pt) 2017-07-18
WO2013003444A1 (en) 2013-01-03
CN103687488B (zh) 2015-06-10
HRP20171044T1 (hr) 2017-10-06
US20170281620A1 (en) 2017-10-05
US20150290189A1 (en) 2015-10-15
PL2723176T3 (pl) 2018-01-31
ES2633177T3 (es) 2017-09-19
US9072738B2 (en) 2015-07-07
US20180104241A1 (en) 2018-04-19
DK2723176T3 (en) 2017-07-31
HUE032851T2 (en) 2017-11-28
CA2839709A1 (en) 2013-01-03
SI2723176T1 (sl) 2017-09-29
BR112013032771B1 (pt) 2021-01-12
US10159672B2 (en) 2018-12-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103687488B (zh) 化学和代谢稳定的具有钠通道阻滞剂活性的二肽
CN104334535B (zh) 用于治疗干眼和其他粘膜疾病的具有钠通道阻断活性的树状聚体样氨基酰胺
CN105073717B (zh) 可用于治疗由黏膜水化不足造成的疾病的氯-吡嗪甲酰胺衍生物
CN108033921B (zh) 3,5-二氨基-6-氯-n-(n-(4-(4-(2-(己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)苯基)丁基)甲脒基)吡嗪-2-甲酰胺
JP6392241B2 (ja) ３，５−ジアミノ−６−クロロ−ｎ−（ｎ−（４−フェニルブチル）カルバムイミドイル）ピラジン−２−カルボキサミド化合物
TWI432198B (zh) 多芳香族鈉通道阻斷劑
US9856224B2 (en) Stable sodium channel blockers
JP2010502738A (ja) ナトリウムチャネル遮断剤および浸透圧調節物質での処置により粘膜水和および粘膜クリアランスを増強する方法
CN105579035B (zh) 二巯基化物类粘液溶解剂
JP2007502829A (ja) 環状ピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカー
CN104955812B (zh) 经芳烷基和芳氧基烷基取代的上皮钠通道阻断化合物
CN101534813A (zh) 通过使用钠通道阻断剂和渗透调节剂的治疗来增加粘膜水化和粘液清除的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20150610

Termination date: 20200627

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee