CN103665111A - 一种青环海蛇抗菌肽Hc-CATH的改造体HC-15及其制备方法和应用 - Google Patents
一种青环海蛇抗菌肽Hc-CATH的改造体HC-15及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103665111A CN103665111A CN201210327902.7A CN201210327902A CN103665111A CN 103665111 A CN103665111 A CN 103665111A CN 201210327902 A CN201210327902 A CN 201210327902A CN 103665111 A CN103665111 A CN 103665111A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibacterial peptide
- transformed body
- cath
- antimicrobial peptide
- cathelicidins
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 241000271899 Hydrophis cyanocinctus Species 0.000 title claims abstract description 8
- 108060001132 cathelicidin Proteins 0.000 title abstract description 12
- 102000014509 cathelicidin Human genes 0.000 title abstract description 12
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 title abstract 7
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 title abstract 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 24
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 abstract description 10
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 241001136306 Hydrophiidae Species 0.000 description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 8
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 4
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 4
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 2
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 2
- 241000272060 Elapidae Species 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- USSYUMHVHQSYNA-SLDJZXPVSA-N indolicidin Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 USSYUMHVHQSYNA-SLDJZXPVSA-N 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000001698 laser desorption ionisation Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000271915 Hydrophis Species 0.000 description 1
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 230000010748 Photoabsorption Effects 0.000 description 1
- 208000018569 Respiratory Tract disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000531795 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi A Species 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 108010078256 antimicrobial peptide IB-367 Proteins 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 229940121657 clinical drug Drugs 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 der Species 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- GUCYBPFJNGVFEB-XELKFLSISA-N iseganan Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H]2CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=3C=CC=CC=3)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(N1)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GUCYBPFJNGVFEB-XELKFLSISA-N 0.000 description 1
- 229950000488 iseganan Drugs 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- 201000002266 mite infestation Diseases 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 108010075334 omiganan pentahydrochloride Proteins 0.000 description 1
- WTNSIKUBZJCPLJ-IQOWARLESA-N omiganan pentahydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.Cl.C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H]3CCCN3C(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H]3CCCN3C(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)=CNC2=C1 WTNSIKUBZJCPLJ-IQOWARLESA-N 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000015961 tonic Nutrition 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000716 tonics Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明属于生物医学技术领域，具体的说是一种青环海蛇(Hydrophis cyanocinctus)抗菌肽Hc-CATH改造体抗菌肽HC-15及其制备方法和应用。改造体抗菌肽为青环海蛇(Hydrophis cyanocinctus)抗菌肽Hc-CATH的改造体HC-15，其是直链多肽，含有15个氨基酸残基，且C-末端酰胺化，分子量1974.46Da，等电点12.61。本发明改造抗菌肽HC-15具有广谱高效的抗菌活性，此外具有分子量小、结构简单、溶血活性低、制备方法简单等有益特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗菌肽及其制备方法和应用，具体涉及一种青环海蛇(Hydrophiscyanocinctus)抗菌肽Hc-CATH改造体抗菌肽HC-15及其制备方法和应用。
背景技术
Cathelicidins是一个具有多功能的抗菌肽家族，目前在哺乳类、鸟类、爬行类、两栖类和鱼类动物中均有发现。Cathelicidins具有广谱高效的抗微生物活性，不仅对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、某些真菌以及病毒具有非常强的杀菌活性，而且对许多临床耐药细菌同样具有作用。除此之外，cathelicidins还具有许多其他生物学活性，如对多种免疫细胞具有趋化作用、诱导肥大细胞脱粒和组织胺释放、调节巨噬细胞转录、促进伤口愈合、诱导血管发生、诱导变异细胞系细胞凋亡和淋巴细胞活化等。由于具有如此众多的活性，cathelicidins一直是国际上研究的热点。针对cathelicidins的药用开发则蕴含着巨大的临床治疗药物制备价值。
随着传统抗生素的大规模和不恰当使用，微生物耐药性问题变得日益严重，在临床上已经出现了大量能够广泛耐受传统抗生素的微生物，已有的抗生素对这些病原微生物无能为力。抗菌肽是一类天然的具有抗微生物活性的多肽，大多数抗菌肽分子量小于10KD，富含碱性氨基酸残基，能够形成两亲性的结构。大部分抗菌肽的杀菌机制是通过静电相互作用吸引并结合到带负电的细菌细胞膜表面，进一步在细菌细胞膜上形成跨膜的孔洞，导致细菌细胞内容物的外泄，从而导致细菌细胞的死亡。由于作用方式的不同，抗菌肽介导的杀菌作用远远快于传统抗生素，并且不易使细菌产生耐受性。
目前，国外有许多公司正在进行cathelicidins家族抗菌肽的研究开发，已有多种cathelicidins家族抗菌肽及其改造体进入临床试验阶段。如牛Indolicidin改造体MBI-226用于治疗中心导管导致的血液感染，已进入临床IIIb期。牛Indolicidin改造体MX-594AN用于治疗痤疮感染，已进入临床IIb期试验阶段。猪protegrin改造体Iseganan用于治疗肿瘤患者口腔感染，已进入临床I期试验阶段。
海蛇属于爬行纲蛇目眼镜蛇科，一般生活于大陆架和海岛周围的浅水区，是一类海岸带极具开发潜力的海洋经济爬行动物。世界上约有50多种海蛇，中国有扁尾海蛇亚科和海蛇亚科共9属15种。海蛇药用在中国历代医书均有记载，其作为祛风燥湿、通络活血、攻毒和滋补强壮等功效良药，常用于风湿痹症、四肢麻木、关节疼痛、疥癣恶疮等症。现代医学研究表明：海蛇干具有抗炎、抗菌、抗病毒、镇痛、改善微循环、提高免疫力等功能；海蛇胆具有显著止咳，祛痰作用，用于咳嗽、哮喘等呼吸道疾病的治疗；海蛇毒具有镇痛、抗血栓、抗肿瘤等活性。海蛇所具有的广泛的药学活性，表明其具有极大的药用开发潜力。但是与陆地蛇相比，目前国内外对海蛇的研究十分滞后，只有为数不多关于海蛇分类、生态、毒液成分和传统药学应用的文章报道。然而对海蛇cathelicidins家族抗菌肽的研究目前国内外仍是一片空白。
青环海蛇(Hydrophis cyanocinctus)属于眼镜蛇科海蛇亚科海蛇属，在辽宁、山东、江苏、浙江、福建、台湾、广东、广西、海南等省区沿海均有分布。但是目前关于青环海蛇cathelicidins家族抗菌肽的研究还没有报道。
发明人将本发明的青环海蛇抗菌肽Hc-CATH改造体HC-15氨基酸全序列经NCBI蛋白质数据库进行搜寻比对，未发现有任何相同多肽。
发明内容
本发明的目的在于一种青环海蛇(Hydrophis cyanocinctus)抗菌肽Hc-CATH改造体抗菌肽HC-15及其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种改造体抗菌肽，改造体抗菌肽为青环海蛇(Hydrophis cyanocinctus)抗菌肽Hc-CATH的改造体HC-15，其是直链多肽，含有15个氨基酸残基，且C-末端酰胺化，分子量1974.46Da，等电点12.61。
所述改造体抗菌肽为：缬氨酸-精氨酸-赖氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸-精氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-精氨酸-精氨酸-缬氨酸-精氨酸-赖氨酸-丝氨酸-缬氨酸，且C-末端酰胺化。
改造体抗菌肽的应用，所述改造体抗菌肽HC-15用于制备抗微生物药物的用途
本发明的有益效果在于：本发明根据青环海蛇抗菌肽Hc-CATH的氨基酸序列，利用分子改造方法设计Hc-CATH的改造体HC-15，该改造体具有广谱高效的抗微生物活性，此外具有分子量小、结构简单、溶血活性低、制备方法简单等有益特点。
具体实施方式
下面用实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1制备抗菌肽Hc-CATH的改造体HC-15
I、HC-15的制备方法：根据青环海蛇抗菌肽Hc-CATH的氨基酸序列，利用分子改造方法设计Hc-CATH的改造体HC-15。用自动多肽合成仪(433A，Applied Biosystems)合成其全序列，利用HPLC反相柱层析脱盐。
II、分子量测定采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)。
III、纯化的HC-15用高效液相色谱HPLC方法鉴定其纯度，分子量测定采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)，等电聚焦电泳测定等电点，用自动氨基酸测序仪测定氨基酸序列结构。
测定结果为：
HC-15是青环海蛇抗菌肽Hc-CATH的一种变异体。HC-15是一种直链多肽，含有15个氨基酸残基，且C-末端酰胺化，分子量1974.46Da，等电点12.61。HC-15全序列为：缬氨酸-精氨酸-赖氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸-精氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-精氨酸-精氨酸-缬氨酸-精氨酸-赖氨酸-丝氨酸-缬氨酸，且C-末端酰胺化。
试验例1抗菌肽Hc-CATH的改造体HC-15的抗菌活性
1.HC-15抗菌活性检测
分别挑取保存于斜面上的试验菌株(标准菌株及临床分离菌株共25株)均匀涂布于MH固体培养基(青岛海博生物技术有限公司)平板上，将经过灭菌的0.5cm直径的滤纸片置于培养基表面，滴加溶解于灭菌去离子水的2mg/ml的HC-15样品溶液10μl，于37℃倒置培养18-20小时，观察抑菌圈形成与否。若样品具有抗菌活性，则会在滤纸片周围形成清晰透明的抑菌圈，抑菌圈越大表明样品抗菌活性越强。
2.HC-15最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration)测定：
试验菌株分别接种到MH液体培养基中(青岛海博生物技术有限公司)，37℃振荡培养到对数生长期，而后将培养至对数生长期的培养液用新鲜MH液体培养基稀释到2×105cfu/m1。
取1.9ml上述稀释的细菌培养液，加入经0.22μm孔径膜过滤的2mg/ml的HC-15样品溶液0.1ml作为第一管，第一管混匀后取出1ml加入第2管中，依次倍比稀释(参见表1)，自第9管吸出1ml弃去，第10管为对照管。
表1稀释方法
上述各管混匀后放置37℃缓慢振荡培养18小时，于600nm波长处测定光吸收。最小抑菌浓度为看不见细菌生长的最低样品浓度。结果如表2所示。
由表2可见，HC-15对试验菌株表现出广谱高效的抗微生物活性，对革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌均具有很强的活性，其中包括大量临床分离耐药菌株。
表2.HC-15抗菌活性
| 菌株 | MIC(μg/ml) |
| 绿脓杆菌ATCC27853 | 9.4 |
| 绿脓杆菌1019(IS，DR) | 18.7 |
| 绿脓杆菌1205(IS，DR) | 37.5 |
| 绿脓杆菌1014(IS，DR) | 9.4 |
| 大肠杆菌ATCC25922 | 2.3 |
| 大肠杆菌1852(IS，DR) | 2.3 |
| 大肠杆菌1866(IS，DR) | 9.4 |
| 大肠杆菌1017(IS，DR) | 4.7 |
| 大肠杆菌2813(IS，DR) | 9.4 |
| 大肠杆菌0726(IS，DR) | 4.7 |
| 大肠杆菌0722(IS，DR) | 4.7 |
| 金黄色葡萄球菌ATCC25923 | 1.2 |
| 金黄色葡萄球菌1865(IS，DR) | 18.7 |
| 金黄色葡萄球菌1875(IS，DR) | 75 |
| 金黄色葡萄球菌1002(IS，DR) | 9.4 |
| 金黄色葡萄球菌1013(IS，DR) | 37.5 |
| 金黄色葡萄球菌2706(IS，DR) | 18.7 |
| 金黄色葡萄球菌2712(IS，DR) | 9.4 |
| 金黄色葡萄球菌2810(IS，DR) | 9.4 |
| 甲型副伤寒沙门氏菌1764(IS，DR) | 4.7 |
| 肺炎克雷伯菌1123(IS，DR) | 9.4 |
| 肺炎克雷伯菌1012(IS，DR) | 18.7 |
| 肺炎克雷伯菌0202(IS，DR) | 37.5 |
| 肺炎克雷伯菌0724(IS，DR) | 18.7 |
| 屎肠球菌0712(IS，DR) | 4.7 |
MIC：最小抑菌浓度，IS：临床分离株，DR：耐药菌株。以上结果为三次独立重复实验平均值。
3.HC-15溶血活性测定：
将采集的兔血与阿氏液混合抗凝，生理盐水洗涤2次并重悬成107-108cell/ml的悬浮液。上述稀释好的红细胞悬液与溶解于生理盐水的HC-15样品混合，37℃保温30min，再于1000rpm离心5min，上清液于540nm测吸收值。阴性对照使用生理盐水，阳性对照使用Triton X-100，溶血百分比按以下公式计算：溶血百分比H％＝(A样品-A阴性对照)/A阳性对照×100％。结果表明样品浓度为100μg/ml，HC-15的溶血百分比为9.4％，说明HC-15具有较低的溶血活性，不易引起人体红细胞破裂溶解而对人体产生伤害，因此十分利于其在医药领域进一步的开发应用。
Claims (3)
1.一种改造体抗菌肽，其特征在于：改造体抗菌肽为青环海蛇(Hydrophis cyanocinctus)抗菌肽Hc-CATH的改造体HC-15，其是直链多肽，含有15个氨基酸残基，且C-末端酰胺化，分子量1974.46Da，等电点12.61。
2.根据权利要求1所述的改造体抗菌肽，其特征在于：所述改造体抗菌肽为缬氨酸-精氨酸-赖氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸-精氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-精氨酸-精氨酸-缬氨酸-精氨酸-赖氨酸-丝氨酸-缬氨酸，且C-末端酰胺化。
3.权利要求1所述的改造体抗菌肽用于制备抚微生物药物的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210327902.7A CN103665111B (zh) | 2012-09-07 | 2012-09-07 | 一种青环海蛇抗菌肽Hc-CATH的改造体HC-15及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210327902.7A CN103665111B (zh) | 2012-09-07 | 2012-09-07 | 一种青环海蛇抗菌肽Hc-CATH的改造体HC-15及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103665111A true CN103665111A (zh) | 2014-03-26 |
| CN103665111B CN103665111B (zh) | 2016-02-24 |
Family
ID=50303971
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210327902.7A Active CN103665111B (zh) | 2012-09-07 | 2012-09-07 | 一种青环海蛇抗菌肽Hc-CATH的改造体HC-15及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103665111B (zh) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103923189A (zh) * | 2014-04-11 | 2014-07-16 | 东北农业大学 | 一种猪源抗菌肽的衍生肽ir2及其制备方法和应用 |
| CN105198979A (zh) * | 2014-05-30 | 2015-12-30 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇改造体抗菌肽qha1及其制备方法和应用 |
| CN105273073A (zh) * | 2014-05-30 | 2016-01-27 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇改造体抗菌肽qha2及其制备方法和应用 |
| CN105273074A (zh) * | 2014-05-30 | 2016-01-27 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇改造体抗菌肽qha3及其制备方法和应用 |
| CN105796603A (zh) * | 2014-12-29 | 2016-07-27 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种抗菌肽凝胶剂及其制备方法 |
| CN105816853A (zh) * | 2015-01-04 | 2016-08-03 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种改造体抗菌肽及其凝胶剂的制备 |
| CN106478795A (zh) * | 2015-09-01 | 2017-03-08 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇改造体抗菌肽hc3-5及其制备方法和应用 |
| CN112625107A (zh) * | 2020-11-30 | 2021-04-09 | 宜肌坊(厦门)生物科技有限公司 | 一种绿海龟抗菌肽的改造体抗菌肽c-cm8及其制备方法和应用 |
| CN112625108A (zh) * | 2020-11-30 | 2021-04-09 | 宜肌坊(厦门)生物科技有限公司 | 一种绿海龟抗菌肽的改造体抗菌肽c-cm5及其制备方法和应用 |
| CN106800591B (zh) * | 2015-11-25 | 2021-07-09 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇抗菌肽改造体及其原核表达制备方法和用途 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101386640A (zh) * | 2008-09-27 | 2009-03-18 | 中国科学院昆明动物研究所 | 金环蛇抗菌肽cathelicidin-BF变异体cathelicidin-BF15及其应用 |
| CN101412753A (zh) * | 2008-09-27 | 2009-04-22 | 中国科学院昆明动物研究所 | 金环蛇抗菌肽cathelicidin-BF及其基因和应用 |
-
2012
- 2012-09-07 CN CN201210327902.7A patent/CN103665111B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101386640A (zh) * | 2008-09-27 | 2009-03-18 | 中国科学院昆明动物研究所 | 金环蛇抗菌肽cathelicidin-BF变异体cathelicidin-BF15及其应用 |
| CN101412753A (zh) * | 2008-09-27 | 2009-04-22 | 中国科学院昆明动物研究所 | 金环蛇抗菌肽cathelicidin-BF及其基因和应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| DI NARDO A ET AL.: "Cathelicidin antimicrobial peptides block dendritic cell TLR4 activation and allergic contact sensitization", 《THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY》 * |
| YIPENG WANG ET AL.: "Snake cathelicidin from Bungarus fasciatus is a potent peptide antibiotics", 《PLOS ONE》 * |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103923189B (zh) * | 2014-04-11 | 2016-05-18 | 东北农业大学 | 一种猪源抗菌肽的衍生肽ir2及其制备方法和应用 |
| CN103923189A (zh) * | 2014-04-11 | 2014-07-16 | 东北农业大学 | 一种猪源抗菌肽的衍生肽ir2及其制备方法和应用 |
| CN105273074B (zh) * | 2014-05-30 | 2018-12-18 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇改造体抗菌肽qha3及其制备方法和应用 |
| CN105273074A (zh) * | 2014-05-30 | 2016-01-27 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇改造体抗菌肽qha3及其制备方法和应用 |
| CN105273073A (zh) * | 2014-05-30 | 2016-01-27 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇改造体抗菌肽qha2及其制备方法和应用 |
| CN105273073B (zh) * | 2014-05-30 | 2018-12-18 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇改造体抗菌肽qha2及其制备方法和应用 |
| CN105198979A (zh) * | 2014-05-30 | 2015-12-30 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇改造体抗菌肽qha1及其制备方法和应用 |
| CN105796603A (zh) * | 2014-12-29 | 2016-07-27 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种抗菌肽凝胶剂及其制备方法 |
| CN105816853A (zh) * | 2015-01-04 | 2016-08-03 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种改造体抗菌肽及其凝胶剂的制备 |
| CN106478795A (zh) * | 2015-09-01 | 2017-03-08 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇改造体抗菌肽hc3-5及其制备方法和应用 |
| CN106800591B (zh) * | 2015-11-25 | 2021-07-09 | 山东国际生物科技园发展有限公司 | 一种海蛇抗菌肽改造体及其原核表达制备方法和用途 |
| CN112625107A (zh) * | 2020-11-30 | 2021-04-09 | 宜肌坊(厦门)生物科技有限公司 | 一种绿海龟抗菌肽的改造体抗菌肽c-cm8及其制备方法和应用 |
| CN112625108A (zh) * | 2020-11-30 | 2021-04-09 | 宜肌坊(厦门)生物科技有限公司 | 一种绿海龟抗菌肽的改造体抗菌肽c-cm5及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103665111B (zh) | 2016-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103665111B (zh) | 一种青环海蛇抗菌肽Hc-CATH的改造体HC-15及其制备方法和应用 | |
| Okigbo et al. | Antimicrobial effect of leaf extracts of pigeon pea (Cajanus cajan (L.) Millsp.) on some human pathogens | |
| CN104151415B (zh) | 一种天然抗菌肽Alligatorin4及其应用 | |
| CN106188265B (zh) | 一种抗微生物肽Cm-CATH2及其基因、制备方法和应用 | |
| CN101386640A (zh) | 金环蛇抗菌肽cathelicidin-BF变异体cathelicidin-BF15及其应用 | |
| CN101412753A (zh) | 金环蛇抗菌肽cathelicidin-BF及其基因和应用 | |
| CN102924574B (zh) | 抗菌肽lz1和该抗菌肽在制备抗菌药物中的用途 | |
| Olugbuyiro et al. | Wound healing effect of Flabellaria paniculata leaf extracts | |
| CN103435686B (zh) | 抗耐药性细菌感染多肽Cbf-14及其用途 | |
| CN107652359A (zh) | 抗菌肽kr‑32及其用途 | |
| CN114853865B (zh) | 一种改造体抗菌肽dsNCM1及其应用 | |
| CN104292301A (zh) | 一种小分子合成抗菌肽及其制备方法与应用 | |
| CN114181293B (zh) | 一种人源抗菌肽ll-37改造体及其应用 | |
| CN104163861B (zh) | 一种爬行动物抗菌肽Alligatorin5及其应用 | |
| CN107188944A (zh) | 海蚯蚓抗菌肽nz17074衍生肽n6及其应用 | |
| CN104177485A (zh) | 一种扬子鳄抗菌肽Alligatorin6及其应用 | |
| CN106188264A (zh) | 一种抗微生物肽Cm‑CATH3及其基因、制备方法和应用 | |
| CN103936827B (zh) | 一种韭菜籽抗菌三肽及其制备方法与应用 | |
| CN102363040A (zh) | 用于粘膜组织的抗微生物肽制剂 | |
| CN104592359A (zh) | 一种林蛙抗菌肽衍生物及其应用 | |
| CN104388344B (zh) | 一株北里乳杆菌菌株及其用途 | |
| US20100196414A1 (en) | Silver Ionized Plant Extraction Liquid and Use Thereof | |
| CN102516382A (zh) | 一种海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-5及其基因、分离纯化、化学合成和应用 | |
| CN102816223A (zh) | 细鳞鱼Cathelicidin抗微生物肽CATH_BRALE及其基因、制备、应用 | |
| WO2012162471A2 (en) | Pachycereus plant extract and methods of use thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: YANTAI AOLAN MARINE BIOTECHNOLOGY CO., LTD. Effective date: 20140409 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20140409 Address after: 264670 high tech Zone, Shandong, Yantai science and technology Avenue, No. 39 Applicant after: Shandong International Biotechnology Park Development Co., Ltd. Applicant after: YANTAI AOLAN MARINE ORGANISM TECHNOLOGY CO., LTD. Address before: 264670 high tech Zone, Shandong, Yantai science and technology Avenue, No. 39 Applicant before: Shandong International Biotechnology Park Development Co., Ltd. |
|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: YANTAI AOLAN MARINE BIOTECHNOLOGY CO., LTD. LVYE I Free format text: FORMER OWNER: YANTAI AOLAN MARINE BIOTECHNOLOGY CO., LTD. Effective date: 20140909 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20140909 Address after: 264670 high tech Zone, Shandong, Yantai science and technology Avenue, No. 39 Applicant after: Shandong International Biotechnology Park Development Co., Ltd. Applicant after: YANTAI AOLAN MARINE ORGANISM TECHNOLOGY CO., LTD. Applicant after: Lvye Investment Group Co., Ltd. Address before: 264670 high tech Zone, Shandong, Yantai science and technology Avenue, No. 39 Applicant before: Shandong International Biotechnology Park Development Co., Ltd. Applicant before: YANTAI AOLAN MARINE ORGANISM TECHNOLOGY CO., LTD. |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Wang Yipeng Inventor after: Zhang Jianbai Inventor after: Zhang Shumin Inventor after: Xie Zeping Inventor before: Wang Yipeng Inventor before: Zhang Shumin Inventor before: Xie Zeping |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information |