CN103664777A - 一种美啉醇化合物、制备方法及其药物组合物和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了新型美啉醇化合物及其制备方法和含有它们的药物组合物及用途，属于医药技术领域。具体地说，本发明提供了式Ⅰ化合物，以及所述化合物的药物组合物在制备用于预防和/或治疗幽门螺旋杆菌引起胃炎病和肿瘤的药物中的用途。本发明Ⅰ化合物不仅对幽门螺旋杆菌具有更高度选择性抑制作用，而且对还对肿瘤血管新生有显著抑制作用，从而为开发一种新的治疗幽门螺旋杆菌引起胃炎病药物和抗肿瘤药物提供了可能。

Description

一种美啉醇化合物、制备方法及其药物组合物和用途

技术领域

本发明提供一种美啉醇化合物、其制备方法及含有它们的药物组合物和用途，属于医药技术领域。 

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori）为一种定植于胃黏膜的革兰氏阴性的螺杆菌，是造成慢性胃炎和消化性胃溃疡的重要致病因素，特别是世界卫生组织已将其列为胃恶性肿瘤如胃黏膜相关性淋巴组织淋巴瘤和胃腺癌的I类致癌因子。在全世界人群中H.pylori慢性感染率高达50%以上，发展中国家感染人群的比率甚至达到了70～90%。中华医学会消化病分会2001～2004年流行病学调查显示我国幽门螺杆菌感染率为40%～90%，平均为59%；儿童感染率为25%～59%，平均40%，并平均每年以0.5%～1%的速度递增。幽门螺杆菌感染性疾病已经成为当今世界最严重而紧迫的公共卫生问题之一。 

目前临床上治疗幽门螺杆菌引起的消化系统疾病推荐应用质子泵抑制剂(PPI)+阿莫西林+克拉霉素的三联疗法，因疗程长、抗菌药用量大，病人出现消化道反应恶心、呕吐、腹痛、腹泻、甚至出现伪膜性肠炎等，导致病人的依从性减少，常不能完成整个疗程，且随时间的推延产生耐药性，导致应用此方案的根除率逐渐降低，成为临床上亟待解决问题。疫苗研制成功为预防幽门螺杆菌引起的消化性溃疡带来希望，但由于幽门螺杆菌抗原免疫原性很低，引起的免疫应答有限，需要同时应用佐剂（大肠杆菌热敏毒素LT），佐剂的毒性又限制了临床应用，特别是某些Hp蛋白与人蛋白具有高度同源性，口服可引起免疫反应的疫苗量又可引起胃炎的加重，即免疫后胃炎，导致其依从性降低。中药治疗有一定效果，副作用比较小，但服药时间较长，仅适用于症状比较轻的患者，且治愈率低。因此，开发抗幽门螺杆菌药物已受到关注，并成为目前药物研究的重点和热点之一。 

自1962年发现第一个含有4-喹啉酮母核的喹诺酮类抗菌药萘啶酸以来， 许多学者致力于研究开发这类药物，特别是近十余年来取得了飞跃进展，已经开发出第四代喹诺酮类药物，用于治疗革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌，但这类药物对治疗幽门螺杆菌引起的消化系统疾病效果不理想。现有技术中，多份文献公开了喹啉酮及其用途。例如，CN1391896公开了一种抗过敏的新型喹啉酮化合物，CN1150420公开了4－喹啉酮衍生物及其盐用于循环系统和呼吸系统疾病，CN1056305公开了一种新的4（1Ｈ）喹啉酮类衍生物用于治疗心血管系统和呼吸系统疾病，而与本发明相关则只有CN1255853公开的抗幽门螺杆菌用医药组合物中涉及的一种1-羟基-2-（2-反-壬烯基）-3-甲基-4（1H）-喹啉酮，但CN1255853中所述喹啉酮结构、制备方法和功能作用与本发明不一样。CN1255853所述喹啉酮结构1位N被羟基化，2位被2-反-壬烯基取代，4位是酮基，采用发酵法制备，同时该化合物抗幽门螺旋杆菌差，且不具有本发明的抑制肿瘤血管新生作用。 

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明所要解决的技术问题，提供一种可治疗幽门螺旋杆菌引起的消化系统疾病的新型美啉醇化合物及其制备方法。 

本发明的另一目的是提供以此美啉醇化合物获取的药物组合，并将其应用于治疗幽门螺旋杆菌引起的消化系统疾病和抗肿瘤。 

解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案： 

一种美啉醇化合物；其特征在于，是式Ⅰ，其名称为2-十一烷基-3-甲基-4（1H）-喹啉醇，其化学式为C₂₁H₃₁NO，命名为美啉醇。 

所述式Ⅰ美啉醇化合物的制备方法，包括如下步骤： 

1）取邻氨基苯丙酮13mmol，月桂酰氯20mmol，置250ml双颈圆底烧瓶中，加入三乙胺18mmol，二氯甲烷60-80ml，在室温下搅拌反应4-20小时，加饱和氯化铵溶液60-100ml，取有机相，减压浓缩，残物硅胶柱层析，收集目的物，减压浓缩，干燥，获月桂酰氨基苯丙酮； 

2）取步骤1）获得的月桂酰氨基苯丙酮11mmol，置250ml双颈圆底烧瓶中，加入乙醇钠30-40mmol，无水乙醇180-240ml,回流反应4-36小时，减压浓缩回收乙醇，加水100-200ml洗脱一次，残物硅胶柱层析，收集目的物，减压浓缩，干燥，获2-十一烷基-3-甲基-4（1H）-喹啉醇，即式Ⅰ化合物。 

进一步，式I化合物为无定形物或结晶型。 

一种药物组合物，其特征在于，包含式Ⅰ化合物，用于制备治疗十二指肠溃疡、胃溃疡、反流性食管炎药物或胃酸过多的药物；其为单位剂量形式中的量，以式Ⅰ化合物，C₂₁H₃₁NO计，分别为40-120mg。 

一种药物组合物，其特征在于，包含式Ⅰ，在制备用于预防和/或治疗幽门螺旋杆菌引起的消化系统疾病的药物中的用途。 

上述药物组合物，包含式Ⅰ化合物，其为单位剂量形式，其中所述的单位剂量形式选自：片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射液、注射用粉剂、透皮贴剂、软膏剂、凝胶剂、栓剂、口服溶液、口服混悬液、注射用乳剂、口服乳剂、缓释片剂或控释片剂。 

如本发明中，术语“治疗”具有其一般含义，并且在本文特别地是指对幽门螺旋杆菌引起的消化系统疾病患者采用本发明的式I化合物或药物组合物进行处理，以期对所述幽门螺旋杆菌引起的消化系统疾病患者产生治疗、治愈、缓解、减轻等作用。类似地，如本文使用的，术语“预防”具有其一般含义，并且在本文特别地是指对可能罹患本发明所述幽门螺旋杆菌引起的消化系统疾病或者对本发明所述幽门螺旋杆菌引起的消化系统疾病具有罹患风险者采用本发明的式I化合物或药物组合物进行处理，以期对所述幽门螺旋杆菌引起的消化系统疾病产生防止、预防、阻止、隔断等作用。 

如本文使用的，术语“药学可接受的”通常是指制药领域可使用，对 产品或者对哺乳动物无害，或具有合理的或可接受的利益/风险比。 

如本文使用的，术语“载体”和“赋形剂”可以是制药领域中任何常规的载体和赋形剂。具体的载体和赋形剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为药学上可接受的载体或赋形剂包括药学领域常规的载体、赋形剂、稀释剂、填充剂、溶剂、支持剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等。必要时，还可以包括香味剂、防腐剂和甜味剂等。 

如本文使用的，术语“幽门螺旋杆菌引起的消化系统疾病”具有其医学领域的一般含义。 

如本文使用的，术语“有效量”是指本发明所述活性成份的量，该量可以对本发明所述幽门螺旋杆菌引起的消化系统疾病进行有效的预防和/或治疗。 

如本文使用的，术语“药物组合物”或“药盒产品”具有其一般含义，并且在本文中可以狭义地指药物制剂或药物剂型，其可以包含或不包含药用辅料。可采用制药领域特别是制剂领域中的常规技术，来制备本发明的药物组合物或复方药物组合。根据本发明的药物组合物，其为可以适用于口服给药、胃肠外给药或局部给药、外用给药的药物剂型。根据本发明的药物组合物，所述的药物剂型包括但不限于：片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、注射液、注射用粉剂、透皮贴剂、软膏剂、凝胶剂、栓剂、口服溶液、口服混悬液、注射用乳剂、口服乳剂、缓释片剂、控释片剂等。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。 

当本发明的药物组合物或药盒产品作为药物施用于受试动物患者时，它们可以以其本身给予，即不加任何的上述药学可接受的载体，将本发明的药物组合物以原形直接施用于患者；或者可以是以含有例如1-99%（更优选例如10-90%）的式Ⅰ化合物的与药学可接受的载体组合成药物组合物后给予人或动物。 

在本发明的式Ⅰ或药物组合物或药盒产品中的活性成分，其实际的剂量水平和施用的时程可以改变，以便获得一种活性成分的量，该量对于特定的受试个体、 组合物和施用方法而言，可以有效地获得期望的治疗应答，而对受试个体无毒性。当然，可改变本发明或药盒产品中的式Ⅰ化合物的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。应当认识到，本发明Ⅰ化合物或药物组合物或药盒产品中的式Ⅰ化合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。 

本发明的式Ⅰ化合物或药物组合物或药盒产品中的式Ⅰ化合物，如上文所述，它们的具体剂量可由本领域熟练技术人员根据已有知识来确定。如果需要，有效的日剂量可出于给药目的分成多剂量。因此，单剂量组合物或药物制剂单元可含有这种数量或其分剂量，以构成日剂量。对于本发明药盒产品而言，其中的式Ⅰ化合物依照一定的时间顺序施用于受试个体，例如将二者同时施用、以任选顺序的间隔施用等。 

本发明药物组合物中的式Ⅰ化合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药。 

在另一个方面，本发明药物组合物或药盒产品中的式Ⅰ化合物可以与一种或多种无毒生理可耐受或可接受的稀释剂、载体、辅料或媒介物（本文可将它们统称为载体〉一起配制成组合物，以固体或液体形式口服给药或局部给药等等。 

本发明药物组合物或药盒产品中的式Ⅰ化合物也可含有辅料，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止微生物的作用。还期望包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸铝和明胶。 

混悬剂中除活性化合物外还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或者这些物质的混合物等。 

本发明药物组合物或药盒产品中的式Ⅰ化合物可以呈供口服给药的固体剂 型，所述供口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性的药物可接受赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b）粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c）保湿剂如甘油；d）崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e）溶液阻滞剂如石蜡；f）吸收加速剂如季铵化合物；g）湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h）吸附剂如高岭土和膨润土，以及润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型中也可包含缓冲剂。 

本发明药物组合物或药盒产品中的式Ⅰ化合物可以呈供口服给药的液体剂型，所述供口服给药的液体剂型包括药物可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。液体剂型除含有活性化合物外还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-二羟基-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类（特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油）、甘油、四氧糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酷及它们的混合物。 

本发明的式Ⅰ化合物，经过理化性质测定，紫外、红外、质谱和核磁共振波谱解析，最终确证其结构。 

相比现有技术，本发明具有如下有益效果： 

本发明美啉醇为全合成，容易工业化推广应用。特别是本发明除具有较CN1255853所述喹啉酮更强的抗幽门螺杆菌作用、以及CN1255853所述喹啉酮所不具有的好于奥美拉唑的质子泵抑制作用和对人体肠道正常益身菌无抑制作用外，还具有肿瘤血管新生抑制作用，从而克服了其技术缺陷，为本发明用于治疗幽门螺旋杆菌引起消化系统感染和治疗消化系统溃疡及其肿瘤提供了可能。 

本申请人在承担国家重大新药创制课题研究中的重大突破是，4-喹啉醇母核的2位被不同碳原子数目的饱和烷基或带侧链的饱和烷基取代，该4-喹啉醇也具有抗幽门螺旋杆菌作用；进一步地，4-喹啉醇母核的2位用不同碳原子数目的 直链烷基取代，3位为甲基取代时，产生具有更强的抗幽门螺旋杆菌作用；更进一步地，随2位取代烷基中碳原子数目增加，特别是碳原子数目达到或超过11烷基取代时，不仅具有抗幽门螺旋杆菌活性超过CN1255853公开的1-羟基-2-（2-反-壬烯基）-3-甲基-4（1H）-喹啉酮，而且还对质子泵抑制作用也显著增强，好于奥美拉唑，并且对人体肠道正常益身菌如嗜酸乳酸菌、乳酸乳球菌和嗜热链球菌等无任何作用，特别是4位酮基变羟基后，还产生极其显著的肿瘤血管新生抑制作用，从而为本发明既可用于治疗幽门螺旋杆菌引起消化系统感染性疾病，又可用于消化系统溃疡及其肿瘤提供了可能。 

本发明提供的式Ⅰ化合物的药物组合物和药盒产品经过药效学、毒理学、制备工艺、质量检测和稳定性考察等研究。本申请人经过反复实验，发现本发明式Ⅰ所示化合物及其药物组合与临床现有主流药物比较，还具有下述优点： 

1.本发明Ⅰ相同剂量抗幽门螺旋杆菌作用，优于现有化学药物阿莫西林和克林霉素。 

2.本发明式Ⅰ相同剂量对质子泵抑制作用，优于化学药物奥美拉唑。 

3.本发明式Ⅰ人体肠道正常益身菌无作用，选择性优于现有化学药物阿莫西林和克林霉素。 

4.本发明式Ⅰ还具有肿瘤血管新生抑制作用。 

对于上述优点，申请人将在后述具体实施方式里面，还将列举具体的实施例和实验数据进行解释、说明和验证。 

附图说明

图1是美啉醇对新生血管形成的抑制作用试验空白对照组（图中示形成完整的血管腔）； 

图2是美啉醇对新生血管形成的抑制作用试验含有DMSO溶剂空白对照组（图中示形成完整的血管腔）； 

图3是美啉醇对新生血管形成的抑制作用阳性药物组（图中示未形成完整的血管腔）； 

图4是美啉醇对新生血管形成的抑制作用试验美啉醇处理组（图中示未形成完整的血管腔）； 

图5是流式细胞术测定美啉醇对EA.hy926细胞株细胞周期的影响（空白试验对照组）； 

图6流式细胞术测定美啉醇对EA.hy926细胞株细胞周期的影响（含DMSO空白试验对照组）； 

图7是流式细胞术测定美啉醇对EA.hy926细胞株细胞周期的影响（美啉醇处理组，示被美啉醇阻滞在G2/M期）； 

图8是MTT法检测美啉醇处理24h对人静脉内皮细胞生长活力的影响； 

图9是MTT法检测美啉醇处理48h对人静脉内皮细胞生长活力的影响。 

具体实施方式

为表明本发明效果，下面通过具体的实施例或试验例进一步说明本发明。但是，应当理解为，这些实施例或试验例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。 

本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。 

实施例1，制备合成美啉醇化合物：

制备2-十一烷基-3-甲基-4（1H）-美啉醇化合物，具体包括以下步骤： 

步骤1:取邻氨基苯丙酮13mmol，月桂酰氯20mmol，置250ml双颈圆底烧瓶中，加入三乙胺18mmol，二氯甲烷60-80ml，在10-30℃下搅拌反应4-20小时，加饱和氯化铵溶液60-100ml，取有机相，减压浓缩，残物硅胶柱层析，收集目的物，减压浓缩，干燥，获月桂酰氨基苯丙酮； 

步骤2:将步骤1月桂酰氨基苯丙酮11mmol，置250ml双颈圆底烧瓶中，加入乙醇钠30-40mmol，无水乙醇180-240ml,回流反应12-36小时，减压浓缩回收乙醇，加水100-200ml洗脱一次，残物硅胶柱层析，收集目的物，减压浓缩，干燥，获2-十一烷基-3-甲基-4（1H）-美啉醇。 

检测结果：无定型粉末，甲醇中结晶获片状晶体，熔点211.4-212.1℃；ESI-MS[M+H]⁺：314；¹H NMR(DMSO-d6,500MHz):8.06(d,J=7.85Hz,1H,ArH), 7.51(m,2H,ArH)，7.21(t,J=7.26Hz,1H,ArH),2.67(t,J=7.5Hz,2H,CH₂),2.00(s,3H,CH₃),1.63(m,2H,CH₂),1.31(m,16H,CH₂),0.86(t,J=6.5Hz,3H)；¹³C NMR(DMSO-d6,500MHz):166.4,159.2,137.8,133.2,127.1,123.5,119.4,118.8,114.7，31.7,31.3,29.0,28.9,28.8,28.8,28.7,28.6,28.3,22.1,14.0,11.0。 

上述合成的本发明化合物最终确证为2-十一烷基-3-甲基-4（1H）-喹啉醇，化学式为C₂₁H₃₁NO。通俗地命名为美啉醇。化学结构如下： 

实施例2，制备美啉醇片剂制剂的方法： 

以实施例1制备的美啉醇为原料，制备美啉醇片剂，1000粒片剂的配方如下： 

美啉醇(以C21H31NO计)	淀粉等辅料
		100	150

将原、辅料混合，研成细粉，过100目筛，按配方取量，压片成型，包装即可。 

实施例3，制备美啉醇制胶囊的方法： 

以制备实例1制备的美啉醇化合物为原料，制备美啉醇胶囊，1000粒胶囊的配方如下： 

美啉醇(以C21H31NO计)	淀粉等辅料
		100	150

将原、辅料混合，研成细粉，过100目筛，按配方取量，制粒、包装即可。 

生物学试验1:美啉醇抗菌作用： 

按照文献（Ibrahim M，Khan AA，Tiwari SK，et a1.Antimierobial activity  of Sapindus mukorossi and Rheum emodi extracts against H.priori：in vitro and in vivo studies.World J Gastroenterol，2006.14：7136-7142.）方法对美啉醇抗临床分离的幽门螺旋杆菌SW-2和标准菌株作用进行了试验（表1），试验结果提示美啉醇对临床分离和标准幽门螺旋杆菌株抑制作用优于阿莫西林和克林霉素。 

表1美啉醇对幽门螺旋杆菌生长的MIC（单位：μg/ml） 

生物学试验2:美啉醇对人体肠道益生菌的影响：

用MRS为乳酸菌培养基，以植物乳酸杆菌AS1.577，嗜酸乳酸杆菌6082，嗜热链球菌6035，乳酸乳球菌6029，干酪乳酸杆菌21001，双歧双歧杆菌6173和副干酪乳杆菌6112为靶体菌，按照文献李仪奎（中药药理学实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：286）方法进行美啉醇对供试菌生长的影响，并以阿莫西林和克林霉素为阳性对照。试验结果（见表2）表明阿莫西林和克林霉素在0.001mg/ml时对上述供试益生菌抑菌直径达30mm左右，而美啉醇对供试乳酸菌在0.001-10mg/ml无抑制作用，提示本发明化合物具有较好选择性。 

表2美啉醇对人体肠道益生菌的影响（抑菌圈直径：mm） 

生物学试验3:美啉醇对质子泵的作用：

按照文献徐瑞明和张建军（中国药理通讯2012年第二十九卷第三期）的方法进行了美啉醇和庚啉酮对质子泵（H⁺+K⁺+ATP酶）抑制作用试验（表3）。结果表明 美啉醇抑制率优于奥美拉唑。 

表3美啉醇对质子泵（H⁺+K⁺+ATP酶）作用 

综合评价分数：通过计算机药物辅助设计计算模拟综合评分值。 

生物学试验4:美啉醇对试验动物溃疡的治疗作用：

按照文献Maria do Carmo Souzaa,,Angela Márcia Selhorst Beserraa,和Dely Cristina Martinsa等（Journal of Ethnopharmacology123(2009)452–458）方法，雄性Wistar大鼠（170-200g）接种幽门螺旋杆菌AATTCC43504菌株菌液（9×10⁸cfu/ml），感染1周后，开始治疗，按2.5,5.0和10mg/kg灌胃给药，并以三联疗法为阳性药物对照，每天给药1次，连续10天，停药后第二天进行解剖检查（表4）。实验结果表明美啉醇对幽门螺旋杆菌感染和动物胃溃疡有较好治疗作用。 

表4美啉醇对试验动物溃疡的治疗作用 

生物学试验5:美啉醇对新生血管形成的抑制作用

人脐静脉内皮EA.hy926细胞株引自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库；RPMI1640培养基为Hyclone公司产品；胎牛血清为Gibco公司产品；matrigel为BD公司产品，阳性药SU5416为Merck公司产品；倒置显微镜及图像软件系统（日本，Nikon公司）；式I以DMSO溶解并稀释至相应浓度备用。人脐静脉内皮EA.hy926细胞株为上皮A549细胞系与人脐静脉内皮细胞杂交融合后产生的永生细胞株，用RPMI1640培养基(含10%灭活胎牛血清，10⁵U/L青、链霉素)于37℃、饱和空气湿度、含5%CO₂的培养箱内常规传代培养。取人工基底膜（Matrigel）放置4℃冰浴中，将使用的96孔培养板、加样枪头等使用用品保持在0℃，将混匀后的Matrigel加入到96孔培养板中，每个孔加50ul，摊平，37℃放置1h，用胰酶-EDTA消化EA.hy926细胞，每孔放置10⁴个细胞，置37℃，5%CO₂培养箱培养，给予浓度为6×10^－5M的美啉醇样品以及浓度1μM的阳性药SU5416（VEGF受体FLK-1/KDR酪氨酸激酶抑制物）直接加入培养基中，培养18h后观察美啉醇对新生血管形成的抑制作用。当美啉醇衍生物浓度为6×10 ^－5M时，与正常对照组和溶剂对照相比,式I组，几乎不能形成完整的血管腔（见图1-4）。 

生物学试验6:流式细胞术测定美啉醇对EA.hy926细胞株细胞周期的影响。

取指数生长期EA.hy926细胞，1000rpm离心5min，弃去上清液后用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，制成细胞悬液，计数后稀释成浓度为10⁵个细胞/ml的细胞悬液，接种于培养瓶中，5ml/瓶，在无血清培养基饥饿同步化24h以后，给予浓度为6×10^－5M的美啉醇样品，继续作用24h后收集细胞。收集细胞时，将培养瓶中的细胞用细胞刮刮下后，转移至离心管，1000rpm离心5min，细胞沉淀，用PBS液洗细胞两次，2ml的预冷（保存于4℃）的70%冰乙醇固定细胞，固定细胞时逐滴加入冰乙醇，并不断振荡确保细胞悬浮均匀不成团块， 于4℃固定过夜，离心沉淀，弃上清，200ul碘化丙啶染液重悬细胞，同时加入RNA酶，充分混匀，4℃静置30min，用流式细胞仪FL2通道检测细胞的周期分布情况（每个样本计数2×10⁴个细胞）。通过流式细胞术分析发现，在正常对照组中，大约有58.1%和8.43%的细胞分别分布于G0/G1和G2/M期，而经过6×10^－5M的式I处理后，G2/M期所占细胞比例分别上升至17.85%，而G0/G1期细胞所占比例相应下降（见图5-7），这些结果提示人脐静脉内皮细胞株被美啉醇阻滞在G2/M期。 

生物学试验7：MTT法检测美啉醇对人脐静脉内皮EA.hy926细胞株生长的抑制作用

人脐静脉内皮EA.hy926细胞株引自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库；RPMI1640培养基为Hyclone公司产品，胎牛血清为Gibco公司产品，二甲基亚砜（DMSO）和噻唑蓝（MTT）为sigma公司产品；全自动酶标仪(美国，Thermo公司)；恒温CO₂培养箱(美国，Thermo公司)；美啉醇：按制备例（1）制备，并以DMSO溶解并稀释至相应浓度。 

人脐静脉内皮EA.hy926细胞株为上皮A549细胞系与人脐静脉内皮细胞杂交融合后产生的永生细胞株，用RPMI1640培养基(含10%灭活胎牛血清，10⁵U/L青、链霉素)于37℃、饱和空气湿度、含5%CO₂的培养箱内常规传代培养。 

取指数生长期EA hy926细胞株，1000rpm离心5min，弃去上清液，用相应的培养基打匀，制成细胞悬液，计数后稀释成浓度为3×10⁴个细胞/m1的细胞悬液，接种于96孔板，每孔200μl，置于细胞培养箱24h后给药，分别设置美啉醇样品5个浓度梯度（10^－7M、10^－6M、10^－5M、10^－4M、10^－3M），每个浓度设置3个复孔，加药后将96孔板分别培养于细胞培养箱中24h和48h后，每孔加20ul MTT溶液（用PBS将MTT粉末配成5mg/ml的储存液)，在细胞培养箱中继续孵育4h后离心弃去上清液，每孔加入100ul DMSO，轻微振荡使紫色晶体完全溶解，用酶标仪于570nm处测定每孔吸光度（OD值）,计算3个复孔OD值平均值，并计算细胞抑制率：抑制率(IR%)＝(对照组细胞OD均值－给药组细胞OD均值/对照组细胞OD均值－背景OD均值)×100%，并用SPSS13.0软件计算各给药组在24h和48h的IC₅₀。 

通过MTT法检测发现，经美啉醇各浓度（10^－7M、10^－6M、10^－5M、10^－4 M、10^－3M）分别处理24h和48h后，对人脐静脉内皮细胞株的生长有显著抑制作用，并且有明显的时间和剂量依赖关系。如图8和图9所示，美啉醇在24h的IC₅₀3.97μM，在48h的IC₅₀为7.15μM。 

本发明是在申请人承担的国家科技部重大新药创制科研项目中研究发现的，经过反复实验确证式Ⅰ具有高效选择性抗幽门螺旋杆菌和抑制质子泵作用。对式Ⅰ化合物开发必将给消化系统患者带来福音,本发明工业应用前景十分看好。 

本发明的化合物具有选择性抗幽门螺旋杆菌和抑制质子泵等作用，从而为开发一种新的治疗幽门螺旋杆菌引起消化系统感染和溃疡的药物提供了可能。 

Claims (7)

1.一种美啉醇化合物，其特征在于，结构式如Ⅰ，名称为2-十一烷基-3-甲基-4-羟基-喹啉，其化学式为C₂₁H₃₁NO，命名为美啉醇；

2.根据权利要求1所述的美啉醇化合物，其特征在于，式I化合物为无定形物或结晶型。

3.一种美啉醇化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）取邻氨基苯丙酮13mmol，月桂酰氯20mmol，置250ml双颈圆底烧瓶中，加入三乙胺18mmol，二氯甲烷60-80ml，在室温下搅拌反应4-20小时，加饱和氯化铵溶液60-100ml，取有机相，减压浓缩，残物硅胶柱层析，收集目的物，减压浓缩，干燥，获月桂酰氨基苯丙酮；

2）取步骤1）获得的月桂酰氨基苯丙酮11mmol，置250ml双颈圆底烧瓶中，加入乙醇钠30-40mmol，无水乙醇180-240ml,回流反应4-36小时，减压浓缩回收乙醇，加水100-200ml洗脱一次，残物硅胶柱层析，收集目的物，减压浓缩，干燥，获2-十一烷基-3-甲基-4（1H）-喹啉醇，即式Ⅰ化合物。

4.根据权利要求3所述美啉醇化合物的制备方法，其特征在于，所述合成步骤1）在10-30℃下进行反应；所述合成步骤2）在60-80℃的温度下进行回流，所述的回流优选5至8小时。

5.一种药物组合物，其特征在于，包含式Ⅰ化合物，用于制备治疗十二指肠溃疡、胃溃疡、反流性食管炎药物、胃酸过多或肿瘤的药物。

6.一种药物组合物，其特征在于，包含式Ⅰ化合物，在制备用于预防和/或治疗幽门螺旋杆菌引起的消化系统疾病或肿瘤的药物中的用途。

7.根据权利要求5或6所述药物组合物，其特征在于，包含式Ⅰ化合物，其为单位剂量形式中的量，以式Ⅰ化合物，C₂₁H₃₁NO，为40-120mg；

其中，所述的单位剂量形式选自：片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射液、注射用粉剂、透皮贴剂、软膏剂、凝胶剂、栓剂、口服溶液、口服混悬液、注射用乳剂、口服乳剂、缓释片剂或控释片剂。

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