CN103642713B

CN103642713B - 一种用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群及其制备方法

Info

Publication number: CN103642713B
Application number: CN201310557152.7A
Authority: CN
Inventors: 陈元彩; 吕源财; 胡勇有
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: South China University of Technology SCUT
Priority date: 2013-11-11
Filing date: 2013-11-11
Publication date: 2015-12-02
Anticipated expiration: 2033-11-11
Also published as: CN103642713A

Abstract

本发明公开了一种用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群及其制备方法。该制备方法先分别挑取土壤杆菌（Agrobacterium？sp.），杆状菌（Bacillus？sp.）、戈登氏菌（Gordonia）、恶臭假单胞菌（Pseudomonas？putida），接种培养；按体积百分比计，分别取2～5%土壤杆菌（Agrobacterium？sp.），10～15%杆状菌（Bacillus？sp.），48～58%戈登氏菌（Gordonia）和16～35%恶臭假单胞菌（Pseudomonas？putida）混合；得用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群；应用时，优势菌群活化后，混合投入到废水中即可。本发明通过菌种间的协调作用，能显著提高了微生物处理十溴联苯醚废水的降解效率。

Description

一种用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群及其制备方法

技术领域

本发明涉及十溴联苯醚废水处理领域，具体是一种用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群及其制备方法。

背景技术

生物处理是当前常用的废水处理方法，这种方法通过微生物的新陈代谢作用，将废水中的污染物质分解、吸收，从而达到治理污染的目的。生物处理法与其他方法相比，其成本低，效率高，而且容易操作，最重要的是没有二次污染，因此，在废水处理中得到了广泛的应用。随着经济的发展，废水的成分日益复杂，尤其当废水中含有有毒、难降解的有机污染物时，由于对该类有机物具有专项降解能力的微生物在环境中的种类、数量较少，同时它在种间竞争中处于劣势，因此，传统的生物处理技术面临极大挑战。如果在传统的生物处理体系中投加具有特定功能的微生物或某些基质，增强它对特定污染物的降解能力，从而改善整个污水处理体系的处理效果，我们称这种技术为生物强化技术。

生物强化技术中投加的微生物可以来源于原有处理体系，经过驯化、富集、筛选、培养，从而达到一定数量的微生物，也可以是原来不存在的外源微生物或遗传工程菌。其中优势菌种在系统中的稳定性是决定生物强化运行的关键所在。我们前期研究表明经过统计学方法可以研究微生物种群间的相互作用，筛选组成微生物优势种群，其生物强化作用优于单一菌种的生物强化效果。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群及其制备方法。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群的制备方法，包括如下步骤：

（1）四种细菌对数生长期细胞的制备：

分别挑取土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），杆状菌（Bacillussp.）、戈登氏菌（Gordonia）、恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）四种细菌的1～2环，将其分别转移到含20～50mL营养液中，每种细菌在27～35℃的条件下培养1～2天；再将培养后的四种菌分别以1:9～1:12体积比例接种至含300～500mL无菌增殖培养基的容器中，采用不同的增殖培养基培育，其中，土壤杆菌（Agrobacteriumsp.）和杆状菌（Bacillussp.）采用营养肉汤，以浓度计，其组成为：牛肉膏3.0～4.0g/L，胰蛋白胨4.0～5.0g/L；戈登氏菌（Gordonia）采用酵母膏葡萄糖培养基，其组成为：葡萄糖8.0～10.0g/L，酵母膏8.0～10.0g/L，其余为水；恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）采用细菌培养基，其组成为：牛肉膏1.5g～2.0/L，葡萄糖1.0～2.0g/L，胰蛋白胨6.0～7.0g/L，酵母粉3.0～4.0g/L，其余为水；然后在27～35℃的条件下培养1～2天，以6000～7000rpm的速度离心10～15min后，分别获得四种菌体的对数生长期细胞；所述营养液的主要成分为1.5～2.0g/L牛肉膏，1.0～2.0g/L葡萄糖，5.5～6.5g/L胰蛋白胨，3.0～4.0g/L酵母粉；pH值为6.0～8.0，其余为水；

（2）四种菌体的混合菌群的培养：

将所述四种菌体的对数生长期细胞取出，用磷酸盐缓冲液洗涤后，按体积百分比计，分别取2～5%土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），10～15%杆状菌（Bacillussp.），48～58%戈登氏菌（Gordonia）和16～35%恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）混合；得用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群。

进一步地，所述优势菌群降解含十溴联苯醚废水时，取优势菌群的混合菌液与培育营养液以1:15～1:30的体积比例投加到培育营养液中进行培养6～12h，使优势菌群活化后直接投入到含十溴联苯醚的废水中，每1升含十溴联苯醚的废水加入混合菌液1～2mL；曝气处理7～10d，曝气量为2～4L/h。

所述培育营养液的主要成分为1.5～2.0g/L牛肉膏，1.0～2.0g/L葡萄糖，5.5～6.5g/L胰蛋白胨，3.0～4.0g/L酵母粉；pH值为6.0～8.0，其余为水。

按体积百分比计，所述磷酸盐缓冲液的成分为氯化钠8.0～9.0g/L，氯化钾0.2～0.3g/L，磷酸氢二钾1.1～1.2g/L和磷酸二氢钾0.2～0.3g/L，其余为水。

所述磷酸盐缓冲液的洗涤次数为2～3次。

一种用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群，由上述制备方法制得。

本发明具有如下优点：

1）本发明提供的利用土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），杆状菌（Bacillussp.），戈登氏菌（Gordonia），恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）四种菌按一定比例组成优势菌群投加进行废水的生物强化处理：恶臭假单胞菌经常被用于废水处理，它有降解芳香烃类例如甲苯和苯酚的能力；杆状菌是一种常见的土壤细菌并能使芳香烃产生二次降解，并且对五氯酚、多溴联苯醚等芳香族持久性有机污染物具有一定的降解作用；戈登氏菌是一种石油降解菌，它能将正十六烷，苯，萘，蒽，菲作为碳源和能量来源，而土壤杆菌是从土壤中分离出来菌种，对于土壤中的多数有机物污染物和重金属等污染物均有一定的降解作用。本发明发现优势菌群对十溴联苯醚的降解效果远高于任何一株单一菌株，说明不同微生物之间产生一定的相互作用。这是由于不少生物活动是单株微生物所不能完成或只能微弱进行的，必须借助两种或多种微生物在同一环境中的相互作用来实现。采用单一菌群和基因工程菌进行污染物降解过程中，常常由于抑制性中间代谢产物的生成或中间产物进入截止式代谢产物途径(endproductpathways)而抑制了污染物降解酶活性，使得污染物降解效率不高或降解不彻底。利用微生物间有益的相互作用，将微生物混合培养与驯化，将细菌对污染物的中间代谢产物流向进行某些改进，使抑制性中间产物不生成或尽快转化，从而提高污染物降解效率。因此，利用微生物相互作用，在微生物的实际应用中所采用的混合细菌微生物培养驯化法更具有重要意义。

2）在本发明中，我们发现从受电子垃圾污染的土壤中分离出来的土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），杆状菌（Bacillussp.）都能产生烟酸羟基化酶和环开裂加双氧酶等，这些酶能对废水中含有的十溴联苯醚具有良好的降解作用，能将其降解生成低溴代的联苯醚（四、五和六溴代联苯醚）甚至是低分子量的有机物。然而由于这些低溴代的联苯醚生物毒性增强，其浓度的增加会对上述两种菌的代谢活动产生严重的抑制作用，导致烟酸羟基化酶和环开裂加双氧酶等酶的活性降低。恶臭假单胞菌和戈登式菌可以将低溴代的联苯醚降解生成毒性更低的低溴代联苯醚（一、二和三溴代联苯醚）甚至是无毒的二苯醚和小分子有机物。随着高毒性多溴联苯醚的降解，土壤杆菌和杆状菌的代谢活动又恢复正常，进而继续分泌大量的烟酸羟基化酶和环开裂加双氧酶，实现对十溴联苯醚的降解。在这个系统中，微生物的生长底物之间没有竞争性，烟酸羟基化酶和环开裂加双氧酶等酶的活性不会受到抑制，能够实现对十溴联苯醚的持续降解。由于各不同的菌株之间的互补和协同作用，它们联合作用就对十溴联苯醚具有很高的降解率。

附图说明

图1为实施例1中四种菌体在无菌增殖培养基中培养的生长情况图。

图2为实施例2中四种菌体在无菌增殖培养基中培养的生长情况图。

图3为实施例3中四种菌体在无菌增殖培养基中培养的生长情况图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。

由于多溴联苯醚是近几年才开始关注的一类持久性有机污染物，目前还没有对主要含多溴联苯醚的废水进行分类。故本实施例中采用自制的模拟废水。本发明实施例中，十溴联苯醚废水为自制的模拟废水。自制的十溴联苯醚模拟废水其制备方法如下：准确称取5.000～10.000mg的十溴联苯醚加入到1L的无菌无机盐培养基中，搅拌30～60min后将pH调节至6.0～8.0。其中配制废水的溶液为无菌无机盐培养基，其主要成分为CaCl₂0.01～0.02g/L，KH₂PO₄2.0～2.5g/L，MgSO₄0.25～0.30g/L，酒石酸铵0.5～0.6g/L，NH₄NO₃0.5～0.6g/L，其余为水。按上述方法制得的十溴联苯醚模拟废水浓度为5～10mg/L，pH6.0～8.0。

实施例1：

分别挑取四种菌1环：土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），杆状菌（Bacillussp.）、戈登氏菌（Gordonia）、恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）（从电子垃圾污染的土壤中分离得到的）将其分别转移到含20mL营养液（其成分为1.5g/L牛肉膏，1.0g/L葡萄糖，5.5g/L胰蛋白胨，3.0g/L酵母粉，pH6.0，其余为水）的容器中，每种细菌在35℃的条件下培养1天，再将培养后的四种菌分别以1:9的体积比例（菌体与增殖培养基）接种至含300mL无菌增殖培养基的容器中在27℃的条件下培养2天，以6000rpm的速度离心15min后，分别获得上述四种菌体的对数生长期细胞。其中，四种不同的细菌采用不同的增殖培养基，土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），杆状菌（Bacillussp.）采用营养肉汤，其组成如下：牛肉膏3.0g/L，胰蛋白胨4.0g/L，其余为水；戈登氏菌（Gordonia）采用酵母膏葡萄糖培养基，其组成如下：葡萄糖8.0g/L，酵母膏8.0g/L，其余为水；恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）采用细菌培养基，其组成如下：牛肉膏1.5g/L，葡萄糖1.0g/L，胰蛋白胨6.0g/L，酵母粉3.0g/L，其余为水。适当培育后四种细菌的生长情况如图1所示。从图1中可以看出，四种细菌的生长曲线都呈现出迟缓期、对数期和稳定期，但是不同菌种达到各个时期所需的时间不一致。土壤杆菌（Agrobacteriumsp.）在培养5h进入对数生长期，20h后进入稳定期，杆状菌（Bacillussp.）在培养2h进入对数生长期，15h后进入稳定期，戈登氏菌（Gordonia）在培养2h进入对数生长期，8h后才进入稳定期，恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）在培养6h后才进入对数生长期，12h进入稳定期。

将上述四种菌体的对数生长期细胞取出，用磷酸盐缓冲液（其主要成分氯化钠8.0g/L，氯化钾0.2g/L，磷酸氢二钾1.1g/L和磷酸二氢钾0.2g/L，其余为水）洗涤3次后，按体积百分比计，分别取4%土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），15%杆状菌（Bacillussp.），56%戈登氏菌（Gordonia）和25%恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）混合，并悬浮于生理盐水中，冷藏备用；

取上述得到的混合菌液以1:15的体积比例（混合菌液与营养液）投加至培育营养液进行培养6h，使其活化后直接投入到1L含十溴联苯醚的废水中，避光曝气处理10d，曝气量为2L/h。以质量浓度计，培育营养液的成分为1.5g/L牛肉膏，1.0g/L葡萄糖，5.5g/L胰蛋白胨，3.0g/L酵母粉，pH6.0，其余为水。

上述自制的十溴联苯醚模拟废水其制备方法如下：准确称取5.000mg的十溴联苯醚加入到1L的无菌无机盐培养基中，搅拌30min后将pH调节至6.0。其中配制废水的溶液为无菌无机盐培养基，其主要成分为CaCl₂0.01g/L，KH₂PO₄2.0g/L，MgSO₄0.25g/L，酒石酸铵0.5g/L，NH₄NO₃0.5g/L，其余为水。所制得的模拟废水十溴联苯醚的浓度为5mg/L，pH6.0。

采用本实施例方法处理水中5mg/L的十溴联苯醚1000ml，在10d内去除率达72.3%，明显高于没有投加优势菌群的对照组9.5%，同时也高于投加单一菌种38.9%（Agrobacteriumsp.），37.6%（Bacillussp.），54.7%（Gordonia）和49.2%（Pseudomonasputida），表明优势菌群对十溴联苯醚具有良好的降解效果，且明显优于单一菌种。十溴联苯醚采用Waters高效液相色谱测定，测定条件为色谱柱：WatersC₁₈柱(150×4.6mmI.D.，5μm)；流动相：甲醇/乙腈/水(V/V/V=80:17:3)；流速：lmL/min；紫外检测波长：226nm；柱温：28℃；进样量：20μL。

实施例2

分别挑取四种菌2环：土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），杆状菌（Bacillussp.）、戈登氏菌（Gordonia）、恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）（从电子垃圾污染的土壤中分离得到的）将其分别转移到含40mL营养液（其成分为2.0g/L牛肉膏，1.5g/L葡萄糖，6.5g/L胰蛋白胨，3.5g/L酵母粉，pH7.0，其余为水）的容器中，每种细菌在30℃的条件下培养1天，再将培养后的四种菌分别以以1:10的体积比例（混合菌液与营养液）接种至含400mL无菌增殖培养基的容器中在35℃的条件下培养1天，以7000rpm的速度离心10min后，分别获得上述四种菌体的对数生长期细胞。其中，四种不同的细菌采用不同的增殖培养基，土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），杆状菌（Bacillussp.）采用营养肉汤，其组成如下：牛肉膏3.5g/L，胰蛋白胨5.0g/L，其余为水；戈登氏菌（Gordonia）采用酵母膏葡萄糖培养基，其组成如下：葡萄糖9.0g/L，酵母膏10.0g/L，其余为水；恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）采用细菌培养基，其组成如下：牛肉膏1.8g/L，葡萄糖2.0g/L，胰蛋白胨6.5g/L，酵母粉4.0g/L，其余为水。适当培育后四种细菌的生长情况如图2所示。从图2中可以看出，四种细菌的生长曲线都呈现出迟缓期、对数期和稳定期，但是不同菌种达到各个时期所需的时间不一致。土壤杆菌（Agrobacteriumsp.）在培养5h进入对数生长期，18h后进入稳定期，杆状菌（Bacillussp.）在培养2h进入对数生长期，18h后进入稳定期，戈登氏菌（Gordonia）在培养1h才进入对数生长期，5h后才进入稳定期，恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）在培养6h后才进入对数生长期，12h进入稳定期。

将上述四种菌体的对数生长期细胞取出，用磷酸盐缓冲液（其主要成分氯化钠9.0g/L，氯化钾0.25g/L，磷酸氢二钾1.2g/L和磷酸二氢钾0.25g/L，其余为水）洗涤3次后，按体积百分比计，分别取3%土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），11%杆状菌（Bacillussp.），52%戈登氏菌（Gordonia）和34%恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）混合并悬浮于生理盐水中，冷藏备用；

取上述得到的混合菌液以1:20的体积比例（混合菌液与营养液）投加至培育营养液进行培养8h，使其活化后直接投入到1L含十溴联苯醚的废水中，避光曝气处理7d，曝气量为4L/h。以质量浓度计，培育营养液的成分为2.0g/L牛肉膏，1.5g/L葡萄糖，6.5g/L胰蛋白胨，3.5g/L酵母粉，pH7.0，其余为水。

上述自制的十溴联苯醚模拟废水其制备方法如下：准确称取7.000mg的十溴联苯醚加入到1L的无菌无机盐培养基中，搅拌45min后将pH调节至8.0。其中配制废水的溶液为无菌无机盐培养基，其主要成分为CaCl₂0.02g/L，KH₂PO₄2.5g/L，MgSO₄0.27g/L，酒石酸铵0.6g/L，NH₄NO₃0.6g/L，其余为水。所制得的模拟废水十溴联苯醚的浓度为7mg/L，pH8.0。

采用本实施例方法处理水中7mg/L的十溴联苯醚1000ml，在7d内去除率达68%，高于没有投加优势菌群的对照组6.9%，同时也高于投加单一菌种31%（Agrobacteriumsp.），27%（Bacillussp.），47%（Gordonia）和43%（Pseudomonasputida），表明优势菌群对十溴联苯醚具有良好的降解效果，且明显优于单一菌种。。十溴联苯醚采用Waters高效液相色谱测定，测定条件为色谱柱：WatersC₁₈柱(150×4.6mmI.D.，5μm)；流动相：甲醇/乙腈/水(V/V/V=80:17:3)；流速：lmL/min；紫外检测波长：226nm；柱温：28℃；进样量：20μL。

实施例3

分别挑取四种菌2环：土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），杆状菌（Bacillussp.）、戈登氏菌（Gordonia）、恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）（从电子垃圾污染的土壤中分离得到的）将其分别转移到含50mL营养液（其主要成分为1.7g/L牛肉膏，2.0g/L葡萄糖，6.0g/L胰蛋白胨，4.0g/L酵母粉，pH8.0，其余为水）的容器中，每种细菌在27℃的条件下培养2天，再将培养后的四种菌分别以以1:12的体积比例（混合菌液与营养液）接种至含500mL无菌增殖培养基的容器中在35℃的条件下培养1天，以6000rpm的速度离心15min后，分别获得上述四种菌体的对数生长期细胞。其中，四种不同的细菌采用不同的增殖培养基，土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），杆状菌（Bacillussp.）采用营养肉汤，其组成如下：牛肉膏4.0g/L，胰蛋白胨4.5g/L，其余为水；戈登氏菌（Gordonia）采用酵母膏葡萄糖培养基，其组成如下：葡萄糖10.0g/L，酵母膏9.0g/L，其余为水；恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）采用细菌培养基，其组成如下：牛肉膏2.0g/L，葡萄糖1.5g/L，胰蛋白胨7.0g/L，酵母粉4.0g/L，其余为水。适当培育后四种细菌的生长情况如图3所示。从图3中可以看出，四种细菌的生长曲线都呈现出迟缓期、对数期和稳定期，但是不同菌种达到各个时期所需的时间不一致。土壤杆菌（Agrobacteriumsp.）在培养5h进入对数生长期，15h后进入稳定期，杆状菌（Bacillussp.）在培养3h进入对数生长期，20h后进入稳定期，戈登氏菌（Gordonia）在培养1h才进入对数生长期，5h后才进入稳定期，恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）在培养6h后才进入对数生长期，11h进入稳定期。

将上述四种菌体的对数生长期细胞取出，用磷酸盐缓冲液（其主要成分为氯化钠8.5g/L，氯化钾0.3g/L，磷酸氢二钾1.15g/L和磷酸二氢钾0.3g/L，其余为水）洗涤2次后，按体积百分比计，分别取5%土壤杆菌（Agrobacteriumsp.），11%杆状菌（Bacillussp.），55%戈登氏菌（Gordonia）和29%恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）混合并悬浮于生理盐水中，冷藏备用；

取上述得到的混合菌液以1:30的体积比例（混合菌液与营养液）投加至培育营养液进行培养12h，使其活化后直接投入到1L含十溴联苯醚的废水中，避光曝气处理8d，曝气量为3L/h。以质量浓度计，培育营养液主要成分为1.7g/L牛肉膏，2.0g/L葡萄糖，6.0g/L胰蛋白胨，4.0g/L酵母粉，pH8.0，其余为水。

上述自制的十溴联苯醚模拟废水其制备方法如下：准确称取10.000mg的十溴联苯醚加入到1L的无菌无机盐培养基中，搅拌60min后将pH调节至7.0。其中配制废水的溶液为无菌无机盐培养基，其主要成分为CaCl₂0.015g/L，KH₂PO₄2.3g/L，MgSO₄0.30g/L，酒石酸铵0.55g/L，NH₄NO₃0.55g/L，其余为水。所制得的模拟废水十溴联苯醚的浓度为10mg/L，pH7.0。采用本实施例方法处理水中十溴联苯醚为10mg/L的废水1000ml，在8d内去除率达62%，高于没有投加优势菌群的对照组5.7%，同时也高于投加单一菌种32.9%（Agrobacteriumsp.），32%（Bacillussp.），41%（Gordonia）和38%（Pseudomonasputida），表明优势菌群对十溴联苯醚具有良好的降解效果，且明显优于单一菌种。十溴联苯醚采用Waters高效液相色谱测定，测定条件为色谱柱：WatersC₁₈柱(150×4.6mmI.D.，5μm)；流动相：甲醇/乙腈/水(V/V/V=80:17:3)；流速：lmL/min；紫外检测波长：226nm；柱温：28℃；进样量：20μL。

在本发明中，通过优化组合形成的微生物群落可以实现系统中四种微生物的协同与互补作用，克服了单一菌种降解十溴联苯醚过程中容易受到中间代谢产物抑制的问题，使整个系统无论是对低浓度还是高浓度的十溴联苯醚的废水都具有高效的降解能力（62～72.3%）。根据相关细菌十溴联苯醚降解报道：从广东贵屿电子垃圾污染的土壤中分离的梭形芽孢杆菌（LysinibacillusfusiformisDB‐1）被认为能有效的降解十溴联苯醚，其对十溴联苯醚的降解效率也不足20%[MengdeQiu,XingjuanChen,DaiyongDeng,etal.Effectsofelectrondonorsonanaerobicmicrobialdebrominationofpolybrominateddiphenylethers(PBDEs).Biodegradation,2012,23:351–361]，而厌氧消化污泥对十溴联苯醚的降解率也仅有30%[GrereckeAC,HartmanPC,HeebNV,etal.Anaerobicdegradationofdecabromodiphenylether.EnvironmentalScience&Technology,2005,39(4):1078‐1083]。这些单一细菌或者消化污泥对十溴联苯醚的降解效率明显低于本发明的优势菌群，因此该优势菌群在处理十溴联苯醚废水方面具有良好的应用前景。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)四种细菌对数生长期细胞的制备：

分别挑取土壤杆菌(Agrobacteriumsp.)、杆状菌(Bacillussp.)、戈登氏菌(Gordonia)和恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)四种细菌的1～2环，将其分别转移到含20～50mL营养液中，每种细菌在27～35℃的条件下培养1～2天；再将培养后的四种菌分别以1:9～1:12体积比例接种至含300～500mL无菌增殖培养基的容器中，采用不同的增殖培养基培育，其中，土壤杆菌(Agrobacteriumsp.)和杆状菌(Bacillussp.)采用营养肉汤，以浓度计，其组成为：牛肉膏3.0～4.0g/L，胰蛋白胨4.0～5.0g/L；戈登氏菌(Gordonia)采用酵母膏葡萄糖培养基，其组成为：葡萄糖8.0～10.0g/L，酵母膏8.0～10.0g/L，其余为水；恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)采用细菌培养基，其组成为：牛肉膏1.5g～2.0/L，葡萄糖1.0～2.0g/L，胰蛋白胨6.0～7.0g/L，酵母粉3.0～4.0g/L，其余为水；然后在27～35℃的条件下培养1～2天，以6000～7000rpm的速度离心10～15min后，分别获得四种菌体的对数生长期细胞；所述营养液的主要成分为1.5～2.0g/L牛肉膏，1.0～2.0g/L葡萄糖，5.5～6.5g/L胰蛋白胨，3.0～4.0g/L酵母粉；pH值为6.0～8.0，其余为水；

(2)四种菌体的混合菌群的培养：

将所述四种菌体的对数生长期细胞取出，用磷酸盐缓冲液洗涤后，按体积百分比计，分别取2～5％土壤杆菌(Agrobacteriumsp.)，10～15％杆状菌(Bacillussp.)，48～58％戈登氏菌(Gordonia)和16～35％恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)混合；得用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群。

2.根据权利要求1所述的用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群的制备方法，其特征在于，所述优势菌群降解含十溴联苯醚废水时，取优势菌群的混合菌液与培育营养液以1:15～1:30的体积比例投加到培育营养液中进行培养6～12h，使优势菌群活化后直接投入到含十溴联苯醚的废水中，每1升含十溴联苯醚的废水加入混合菌液1～2mL；曝气处理7～10d，曝气量为2～4L/h。

3.根据权利要求2所述的用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群的制备方法，其特征在于，所述培育营养液的主要成分为1.5～2.0g/L牛肉膏，1.0～2.0g/L葡萄糖，5.5～6.5g/L胰蛋白胨，3.0～4.0g/L酵母粉；pH值为6.0～8.0，其余为水。

4.根据权利要求1所述的用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群的制备方法，其特征在于，按体积百分比计，所述磷酸盐缓冲液的成分为氯化钠8.0～9.0g/L，氯化钾0.2～0.3g/L，磷酸氢二钾1.1～1.2g/L和磷酸二氢钾0.2～0.3g/L，其余为水。

5.根据权利要求1或3所述的用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的洗涤次数为2～3次。

6.一种用于降解十溴联苯醚废水的优势菌群，其特征在于，由权利要求1、4或5所述制备方法制得。