CN103638489B - 一种补肾丸的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种补肾丸的制备方法，由锁阳60g、龟板60g、熟地黄150g、枸杞子90g、天冬60g、知母60g、白芍60g、干姜15g、黄柏60g、五味子30g作为原料药，采用超临界萃取制备而成，使得含量有很大提高，服用量减少，本发明还提供了补肾丸在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种补肾丸的制备方法及应用。
背景技术
补肾丸记载于卫生部标准WS3-B-0291-90，处方为锁阳60g、龟板60g、熟地黄150g、枸杞子90g、天冬60g、知母60g、白芍60g、干姜15g、黄柏60g、五味子30g，以上十味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末加炼蜜90～110g，制成大蜜丸，即得。能锁阳固精，滋阴补肾。用于肾水不足，阴虚阳亢，头晕咳嗽，腰膝酸痛，梦遗滑精。
现有技术中，尚未有补肾丸在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采用打粉的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
发明内容
发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种补肾丸的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供一种补肾丸在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用。
技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
一种补肾丸的制备方法，由锁阳60g、龟板60g、熟地黄150g、枸杞子90g、天冬60g、知母60g、白芍60g、干姜15g、黄柏60g、五味子30g作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成：取锁阳60g、龟板60g、熟地黄150g、枸杞子90g、天冬60g、知母60g、白芍60g、干姜15g、黄柏60g、五味子30g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末加炼蜜100g，制成大蜜丸，即得400g，每丸重6g。
上述一种补肾丸的制备方法，所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
上述一种补肾丸的制备方法，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
上述一种补肾丸在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，补肾丸由锁阳60g、龟板60g、熟地黄150g、枸杞子90g、天冬60g、知母60g、白芍60g、干姜15g、黄柏60g、五味子30g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取锁阳60g、龟板60g、熟地黄150g、枸杞子90g、天冬60g、知母60g、白芍60g、干姜15g、黄柏60g、五味子30g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末加炼蜜100g，制成大蜜丸，即得400g，每丸重6g。
上述补肾丸在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，补肾丸制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
上述补肾丸在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，补肾丸制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
现有技术中，按本处方的量原工艺制备得补肾丸800g，每丸6g，每次1丸，一日2次，采用本发明制备成的补肾丸400g，每丸6g，每丸含有的药材量是原来的2倍多，因此每次1丸，一日1次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。
具体实施方式
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
取锁阳60g、龟板60g、熟地黄150g、枸杞子90g、天冬60g、知母60g、白芍60g、干姜15g、黄柏60g、五味子30g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30℃，CO2流量1m1/g生药·min，萃取时间150min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末加炼蜜100g，制成大蜜丸，即得400g，每丸重6g。
实施例2
取锁阳60g、龟板60g、熟地黄150g、枸杞子90g、天冬60g、知母60g、白芍60g、干姜15g、黄柏60g、五味子30g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度50℃，CO2流量3m1/g生药·min，萃取时间180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末加炼蜜100g，制成大蜜丸，400g，每丸重6g。
实施例3
取锁阳60g、龟板60g、熟地黄150g、枸杞子90g、天冬60g、知母60g、白芍60g、干姜15g、黄柏60g、五味子30g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2m1/g生药·min，萃取时间160min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末加炼蜜100g，制成大蜜丸，400g，每丸重6g。
实施例4：补肾丸抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖的实验研究资料
1实验材料
1.1实验用细胞株
人肺腺癌SPC-A-1细胞，南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
1.2实验药物
研究药物：本发明补肾丸：按实施例3方法制备。
药液储液：称取100mg补肾丸，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μl doff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
1.3实验试剂
DMEM（GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137）；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419）；NaHCO3（上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387）；Trypsin（AMRESCO公司批号：2010/04）；EDTA（AMRESCO公司批号：2009/10）；Penicillin G Sodium Salt（AMRESCO公司批号：2010242）；Streptomycin Sulfate（AMRESCO公司批号：2010382）；无水乙醇（南京化学试剂有限公司批号：080310182）；MTT(Biosharp批号：0793);PBS（实验室自配）；
1.4实验器材
莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DM1L）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号：SPECTRA MAX190）；CO2培养箱（FORMA型号：3111）；超净台（苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Spring公司型号：S/N020579）；精密移液器（法国吉尔森公司型号：P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型号：DHG9123A）；冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI）；液氮罐（CBS型号：2001）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000）；0.2μm滤器（MILLIPORE型号：SLGP033RB）；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
2实验方法
1）人肺腺癌SPC-A-1细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%CO2进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。
2）将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中（37℃，5%CO2）常规培养。
3）根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入补肾丸溶液，继续培养24h。
4）24h后加入20μl MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。
5）4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
6）同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。
7）结果以药物对细胞的抑制率表示：
细胞增值抑制率（%）=（对照孔OD值-给药孔OD值）/对照孔OD值×100%。实验重复3次。
3统计处理
采用Microsoft Excel2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean±S.D.表示。
4实验结果
MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖抑制有差异（P<0.05），剂量在10mg/ml时该差异具有显著性（P<0.01），当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P<0.001）。
表1补肾丸对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖抑制影响研究(X±SD)
注：与对照组比较，*P<0.01；**P<0.001
5实验结论
补肾丸可以抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖，减少人肺腺癌SPC-A-1细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
Claims (3)
1.一种补肾丸在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，其特征在于补肾丸由锁阳60g、龟板60g、熟地黄150g、枸杞子90g、天冬60g、知母60g、白芍60g、干姜15g、黄柏60g、五味子30g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取锁阳60g、龟板60g、熟地黄150g、枸杞子90g、天冬60g、知母60g、白芍60g、干姜15g、黄柏60g、五味子30g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6％，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末加炼蜜100g，制成大蜜丸，即得400g，每丸重6g。
2.根据权利要求1所述一种补肾丸在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，其特征在于补肾丸制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％。
3.根据权利要求1所述一种补肾丸在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，其特征在于补肾丸制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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Owner name: NANJING ZHENGLIANG PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY CO., Free format text: FORMER OWNER: CHANGZHOU COLLECTION MEDICAL INSTRUMENT CO., LTD. Effective date: 20150420 |
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Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 213000 CHANGZHOU, JIANGSU PROVINCE TO: 211200 NANJING, JIANGSU PROVINCE |
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Effective date of registration: 20150420 Address after: Qingfeng Village Yong Yang town of Lishui County of Nanjing City, Jiangsu province 211200 Green Village building 301 room 22 Applicant after: Nanjing Zhengliang Medical Technology Co.,Ltd. Address before: 213000 West -256-1, building 4, West Taihu international wisdom garden, Wujin Economic Development Zone, Jiangsu, Changzhou Applicant before: CHANGZHOU KELIXIN MEDICAL DEVICES CO., LTD. |
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| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: THE FIRST AFFILIATED HOSPITAL OF XINXIANG MEDICAL Free format text: FORMER OWNER: NANJING ZHENGLIANG PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY CO., LTD. Effective date: 20150616 |
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Inventor after: Zhao Zhenxia Inventor after: Yang Yanrong Inventor after: Zhao Fucheng Inventor after: Zhu Yixin Inventor after: Zhao Zhenmin Inventor before: Chen Jun |
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| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: CHEN JUN TO: ZHAO ZHENXIA YANG YANRONG ZHAO FUCHENG ZHU YIXIN ZHAO ZHENMIN |
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Effective date of registration: 20150616 Address after: 453100 No. 88 health Road, Weihui, Henan, Xinxiang Applicant after: The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University Address before: Qingfeng Village Yong Yang town of Lishui County of Nanjing City, Jiangsu province 211200 Green Village building 301 room 22 Applicant before: Nanjing Zhengliang Medical Technology Co.,Ltd. |
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Granted publication date: 20150715 Termination date: 20171204 |
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