CN103610939A - 一种杀菌液 - Google Patents

Abstract

本发明涉及到一种可治疗牛皮癣等多种皮肤病的杀菌液，采用的生物原料有海红、海螺、牡蛎、蛤壳、柳树菇、蜈蚣。本制剂可杀灭多种皮肤病菌,特别对顽固性牛皮癣,还有湿疹、腋臭、灰指甲、疥癣、瘙痒、植物性过敏等都有良好治疗效果且无任何毒副作用。具有高效、快捷、复发率低等特点，采用患处低浓度药液清洗、高浓度药液擦拭的双管齐下的疗法。它既省钱又疗效快，治疗非常简单方便。本发明不含任何无机化学添加剂而只用水做浸出剂,是一种绿色药物。

Description

一种杀菌液

技术领域

本发明是涉及一种治疗皮肤病杀菌液。 

背景技术

牛皮癣（银屑病）是一种常见的易反复发作的皮肤顽症，我国属高发区，并较难治愈。此病虽然不危及生命，但却使患者皮肉搔痒、鳞屑脱落，甚至血痕斑斑，既影响患者的美观，又给患者的精神和身体带来不可言喻的痛苦，许多患者因得不到及时有效的治疗，使病情拖延日久，身体衰弱，引起各种并发症，影响心、肝、肾等功能，有的还把病遗传给后代。 

对于牛皮癣，目前国内多采用中西医结合的方法进行治疗，如煎中药汤洗，外抹药膏药水、睡眠疗法、放血疗法、注射等等；国外还有采用激素治疗等，上述各种治疗方法虽有一定的疗效，可是见效快复发也快，并且有一定的副作用。 

多功能牛皮癣杀菌液CN200310105020，本发明涉及到一种可治疗牛皮癣等多种皮肤病的杀菌液,即多功能牛皮癣杀菌液。长期以来象牛皮癣之类的许多皮肤病一直缺乏较好的药物,疗效差而多有反复性。本发明采用多种生物为原料制成生物制剂的办法取得良好效果,此即多功能牛皮癣杀菌液。采用的生物原料有海红、海螺、牡蛎、蛤壳、柳树菇、蜈蚣。本制剂可杀灭多种皮肤病菌,特别对顽固性牛皮癣,还有湿疹、腋臭、灰指甲、疥癣、瘙痒、植物性过敏等都有良好治疗效果且无任何毒副作用。本发明不含任何无机化学添加剂而只用水做浸出剂,是一种绿色药物。 

透骨草民间用全草入药，治感冒、跌打损伤，外用治毒疮、湿疹、疥疮。根及叶的鲜汁或水煎液对菜粉蝶、家蝇和三带喙库蚊的幼虫有强烈的毒性。根含透骨草素（phrymarolin)及透骨草醇乙酸酯(leptostachyol acetate)，后者为杀虫成分。民间用全草煎水消灭蝇蛆和菜青虫。 

山茱萸（学名：Cornus officinalis），山茱萸科落叶灌木或小乔木。其成熟果实为中药，别名山萸肉、药枣、枣皮、蜀酸枣、肉枣、薯枣、鸡足、实枣、萸肉、药枣、天木籽、山芋肉、实枣儿；山茱萸味酸、涩性，微温。归肝、肾经。补益肝肾，涩精固脱。用于眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿尿频，崩漏带下，大汗虚脱，内热消渴，为固涩药. 

发明内容：

本发明的目的在于提供一种针对真菌感染的皮肤病具有高效、快捷、复发率低等特点的杀菌液药剂，采用患处低浓度药液清洗、高浓度药液擦拭的双管齐下的疗法。它既省钱又疗效快，治疗非常简单方便。 

本发明所述杀菌液的重量份数组成如下： 

天麻粉3-6份，山茱萸提取物5-10份，透骨草提取物6-12份，枯草芽孢杆菌发酵液提取物15-25份，黄芩提取物1-9份，含氯化氢36%—38%的浓盐酸8-13份，碘酒1-3份，水9-25份； 

所述透骨草提取物制备方法如下： 

称取透骨草；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70℃-90℃保持2-4h，添加混合物料2-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60℃-78℃保持3-4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得透骨草提取物。 

所述乙醇和丙醇的质量比例为1：1-1.3；乙醇浓度为95%；丙醇浓度为100%； 

所述山茱萸提取物的制备方法如下： 

将山茱萸粉碎至粒径为2毫米以下置于容器中，添加3-6倍重量的水，控制温度40℃-60℃保持2-4h，控制温度至65℃-75℃保持3-5h，添加混合物料2-3倍重量的乙醇和甲醇的混合物，控制温度至30℃-40℃保持3-8h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得山茱萸提取物。 

所述乙醇和甲醇的质量比例为1：2，乙醇浓度85-95%。甲醇浓度100%. 

所述黄芩提取物制备方法如下： 

称取黄芪；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后置于容器中添加3-6倍重量的水，控制温度75℃～80℃保持2～4h，然后降温至45-60℃，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60℃～78℃保持3～4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得黄芪提取物。 

所述混合酶制剂添加量为混合物料总重量的5-10%。 

所述混合酶制剂的重量份数组成为：内β-葡聚糖酶10-20份，外β-葡聚糖酶10-20份，β-葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，β-淀粉酶10-15份，中性蛋白酶10-15份。 

所述枯草芽孢杆菌发酵液提取物制备方法如下： 

所述菌株具体为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）突变株HYX-008。该菌株已于2013年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏号为CGMCC No.7926。 

菌种特征如下： 

1.菌体细胞呈直杆状、芽孢中生或近端生的革兰氏阳性。 

2.菌落特征为白色圆形，隆起，表面光滑，不透明，湿润，挑起粘连。 

3.能够利用多种糖类，如葡萄糖、半乳糖、木糖、纤维二糖、棉籽糖等；产淀粉酶、蛋 白酶、能够水解明胶，V.P、甲基红阳性。 

4.最适培养温度37℃，最适pH7.0。 

所述枯草芽孢杆菌发酵液提取物是枯草芽孢杆菌发酵液中含有的抑菌物质，所述抑菌物质可以有效抑制牛皮癣的复发。1-2%浓度的抑菌物质溶液可以有效抑制牛皮癣的复发。 

从发酵液中提取抑菌物质的方法为有机溶剂沉淀法： 

首先将发酵液高速离心，温度0-4℃，转速为7000转/分钟，离心十分钟，保留上清液；上清液中加入等体积有机溶剂（甲醇:乙醇=1:3），充分溶解后置于三口烧瓶中，水浴控制温度50摄氏度，搅拌速度为40rpm，时间为4小时，收集有机相，采用真空蒸馏法除去有机溶剂。蒸馏温度45-65℃，蒸馏20分钟，将有机溶剂去除。收集沉淀物质即得。 

本菌种分类地位如下：细菌域（Bacteria）；厚壁菌门（Firmicutes）；芽孢杆菌纲（Bacillales）；芽孢杆菌目（Bacillaceae）；芽孢杆菌科（Bacillus）；芽孢杆菌属（Bacillus）；枯草芽孢杆菌种（Bacillus subtilis）。 

所述杀菌液的制备方法如下： 

将上述几种物质按照比例混合均匀，灌装，杀菌包装即可。 

有益效果： 

1、药物渗透性极佳，杀菌面深而广；药物化解能力极强，真菌入侵产生的毒素，瞬间就被解除；达到高效、高速。 

2、操作虽然严格，但是治疗简单，在专业人员指导下易于掌握。 

3、药物廉价，使用时只要极少的药量，治疗一个部位仅需0.5-1g，病人经济实惠。 

4、没有任何毒性，且治愈率很高。 

5、本发明产品采用中药材有效提取成分和枯草芽孢杆菌发酵提取物，进行有机组合，组合产物对治疗常见牛皮癣等皮肤病疗效显著。 

具体实施方式

下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。 

菌株具体为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）突变株，保藏号为CGMCC No.7926。 

所述菌株由酸性土壤分离的野生菌LI002经反复的紫外诱变及亚硝基胍诱变筛选获得，特性是产耐高温α-淀粉酶的酶活力高，耐热、耐酸性强。 

本发明所制备的耐高温α-淀粉酶酶活力为30000-35000u/ml；适用温度范围为105-115℃，最适反应温度110℃，在110℃酶活完全稳定；适用反应pH值范围为3.0-7.0，在pH值为3.0时酶活完全稳定，最适反应pH值为4.2。 

本发明所获得菌株在调整条件进行发酵时，意外发现发酵液提取物中含有高效杀菌物质， 杀菌物质具有良好的预防和治疗牛皮癣皮肤病的效果，发明人进而利用本发明开发了此款产品。 

实施例1： 

杀菌液的重量份数组成如下： 

天麻粉5份，山茱萸提取物8份，透骨草提取物10份，枯草芽孢杆菌发酵液提取物20份，黄芩提取物5份，含氯化氢36%—38%的浓盐酸10份，碘酒2份，水20份； 

所述透骨草提取物制备方法如下： 

称取透骨草；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加5倍重量的水，控制温度80℃保持3h，添加混合物料3倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制温度至75℃保持3h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得。 

所述乙醇和丙醇的质量比例为1：1；乙醇浓度为95%；丙醇浓度为100%； 

所述山茱萸提取物的制备方法如下： 

将粉碎至粒径为2毫米以下山茱萸置于容器中，添加5倍重量的水，控制温度50℃保持3h，控制温度至70℃保持4h，添加混合物料3倍重量乙醇和甲醇的混合物，控制温度至35℃保持5h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得山茱萸提取物。 

所述乙醇和甲醇的质量比例为1：2，乙醇浓度85%，甲醇浓度100%。 

黄芩提取物制备方法如下： 

称取黄芪；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中添加5倍重量的水，控制温度75℃保持3h，然后降温至55℃，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为6，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制温度至70℃保持3h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得。 

所述混合酶添加量为混合物料总重量的6%。 

所述混合酶的重量份数组成为：内β-葡聚糖酶13份，外β-葡聚糖酶15份，β-葡萄糖苷酶12份，木聚糖酶16份，β-淀粉酶12份，中性蛋白酶12份。 

枯草芽孢杆菌发酵液提取物制备方法如下： 

菌株具体为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。该菌株已于2013年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏号为CGMCC7926。 

（1）菌种活化 

将保存完好的枯草芽孢杆菌的斜面菌种接种于斜面培养基，40℃培养30h进行菌种活化，如此活化2-3次； 

所述斜面培养基组成为：牛肉膏6g，氯化钠10g，蛋白胨15g，葡萄糖3g,琼脂18g，蒸馏水l000mL，pH值6，121℃灭菌20min； 

（2）液体种子扩大培养 

①一级种子培养：将步骤（1）活化后的斜面菌种1-2环接入500毫升摇瓶中，培养基装量100毫升，旋转式摇床180转/分，培养温度40℃，培养时间12h； 

②二级种子培养：将一级种子按照10%的接种量接入500毫升二级种子摇瓶中，培养条件与一级种子相同； 

③三级种子培养：将二级种子以10%接种量接入5000毫升三级种子摇瓶中，培养基装量1000毫升，旋转式摇床100转/分，培养温度40℃，培养时间12h； 

④一级种子罐培养：将三级种子以10%接种量接入总容积为150L的一级种子罐，发酵培养基装量100L，培养温度40℃，搅拌速度300rpm，通风量（V/V）1:1,罐压0.05Mpa,培养时间15h； 

所述一级、二级、三级种子培养基重量组成为： 

酵母粉0.3%，葡萄糖1.5%，蛋白胨0.3%，牛肉膏0.5%，磷酸氢二钾0.8%，硫酸钙1g,氯化镁2g,柠檬酸钠1g，不足部分纯净水补足，pH值5，121℃灭菌30min。 

所述种子罐培养基重量组成为： 

麦芽糊精10%，酵母粉0.4%，蛋白胨0.3%，玉米浆0.4%，磷酸氢二钾1.0%，硫酸镁0.08%，柠檬酸钠0.3%，不足部分纯净水补足，pH值6，121℃灭菌30min。 

所述种子罐发酵液菌体浓度为7.0x108个/ml； 

（3）发酵罐发酵 

将步骤（2）中一级种子罐发酵液以6%接种量接入发酵罐，培养温度36℃，搅拌速度300r/m，通风量（V/V）1:2,培养时间36h。 

溶解氧控制：通过调整搅拌转速及通风量，控制溶解氧20%； 

PH控制：通过补氨水或稀磷酸，控制发酵过程中pH值保持在5； 

补料控制：当发酵液中的还原糖含量降至3mg/ml时，开始添加补料培养基，补料量以维持发酵液还原糖含量为4mg/ml； 

放罐标准：40%菌体衰老自溶。 

所述发酵培养基组成为：麦芽糊精100g，玉米粉50g，豆饼粉25g，透骨草10g，黄芩20g，酵母粉6g，玉米浆3g，硫酸铵2g，磷酸氢二钾1g，磷酸二氢钾1g，柠檬酸钠3g，消泡剂0.1g,纯净水l000mL，pH值6，121℃灭菌20min； 

所述补料培养基重量组成为：麦芽糊精25%，玉米粉15%，豆粉20%，不足部分纯净水 补足，pH值6，121℃灭菌30min。 

所述发酵培养基的调配方法为： 

按比例准确称取原料，将原料中的纯净水、玉米粉、豆饼粉投入配料罐中，调节PH值6，加入中温淀粉酶（3u/g玉米粉）与高温淀粉酶（30u/g玉米粉），同时边搅拌边升温至70℃保温15min，然后缓慢升温至90℃保温30min进行液化，最后加入其它原料，搅拌均匀，调初始pH6，121℃灭菌30min备用。 

从发酵液中提取抑菌物质方法为有机溶剂沉淀法： 

首先将发酵液高速离心，温度2℃，转速为7000转/分钟，离心十分钟，保留上清液；上清液中加入等体积有机溶剂（甲醇:乙醇=1:3），充分溶解后置于三口烧瓶中，水浴控制温度50摄氏度，搅拌速度为40rpm，时间为4小时，收集有机相，采用真空蒸馏法除去有机溶剂。蒸馏温度55℃，蒸馏20分钟，将有机溶剂去除。收集沉淀物质即得。 

所述杀菌液的制备方法如下：将上述几种物质按照比例混合均匀，灌装，杀菌包装即可。 

实施例2： 

杀菌液的重量份数组成如下： 

天麻粉3份，山茱萸提取物8份，透骨草提取物6份，枯草芽孢杆菌发酵液提取物25份，黄芩提取物9份，含氯化氢36%的浓盐酸8份，碘酒3份，水21份。 

实施例4：实验效果 

实例：治疗牛皮癣 

2007年浙江松阳县斋坦乡花桥头村的周玉法，年龄28岁。观察到的病情，左面项颈连肩部附近，约有10平方厘米的表面，有银白色燥皮屑脱落，时间有8年了。里面发痒，十分难受。一搔才知皮下红肿发炎。右面项颈连肩部附近约有10多平方厘米的表面，跟左面不同，却是一片黑色，撕开少量的黑皮，皮下也红肿发炎，不堪忍受。患者说到乡卫生院、县医院求医多年均无效。 

诊断：属于重症牛皮癣。①先用防蔓延抗复发的清洗液擦洗一次。②由于患者年轻力壮，承受力强，病历也较长。为了高速治病，清洗隔10分钟，马上用此高档杀菌液对患部擦拭5—7秒钟。值得提醒的是：取药棉时必须十分小心，先用镊子夹住1立方厘米大小的棉球，打开瓶口，即插入药剂中，然后拉至瓶口稍稍揉压，湿度如同酒精棉。先盖好瓶口，再到患部擦拭。快慢以秒针走动的速度为准。第二次施药中间隔2天。以此类推，左颈患部治疗4次，右颈患部也治疗4次，一共8次。几年了，周玉法颈部安然无恙，一直在松阳县城做工。 采用此方法用本发明产品先后治愈100多例此类病人。 

Claims (8)

1.一种杀菌液，重量份数组成如下：天麻粉3-6份，山茱萸提取物5-10份，透骨草提取物6-12份，枯草芽孢杆菌发酵液提取物15-25份，黄芩提取物1-9份，含氯化氢36%—38%的浓盐酸8-13份，碘酒1-3份，水9-25份；

所述枯草芽孢杆菌发酵液提取物制备方法如下：

所述菌株具体为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CGMCC7926；

从发酵液中提取抑菌物质的方法为有机溶剂沉淀法：

首先将发酵液高速离心，温度0-4℃，转速为7000转/分钟，离心十分钟，保留上清液；上清液中加入等体积有机溶剂（甲醇:乙醇=1:3），充分溶解后置于三口烧瓶中，水浴控制温度50摄氏度，搅拌速度为40rpm，时间为4小时，收集有机相，采用真空蒸馏法除去有机溶剂；蒸馏温度45-65℃，蒸馏20分钟，将有机溶剂去除。收集沉淀物质即得。

2.根据权利要求1所述杀菌液，其特征在于所述透骨草提取物制备方法如下：

称取透骨草；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70℃-90℃保持2-4h，添加混合物料2-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60℃-78℃保持3-4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得透骨草提取物。

3.根据权利要求1所述杀菌液，其特征在于所述山茱萸提取物的制备方法如下：

将山茱萸粉碎至粒径为2毫米以下置于容器中，添加3-6倍重量的水，控制温度40℃-60℃保持2-4h，控制温度至65℃-75℃保持3-5h，添加混合物料2-3倍重量的乙醇和甲醇的混合物，控制温度至30℃-40℃保持3-8h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得山茱萸提取物；

所述乙醇和甲醇的质量比例为1：2，乙醇浓度85-95%。甲醇浓度100%。

4.根据权利要求1所述杀菌液，其特征在于所述黄芩提取物制备方法如下：

称取黄芪；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后置于容器中添加3-6倍重量的水，控制温度75℃～80℃保持2～4h，然后降温至45-60℃，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60℃～78℃保持3～4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得黄芪提取物；

所述混合酶制剂添加量为混合物料总重量的5-10%；

所述混合酶制剂的重量份数组成为：内β-葡聚糖酶10-20份，外β-葡聚糖酶10-20份，β-葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，β-淀粉酶10-15份，中性蛋白酶10-15份。

5.根据权利要求1所述杀菌液，其特征在于所述杀菌液的制备方法如下：

将上述几种物质按照比例混合均匀，灌装，杀菌包装即可。

6.根据权利要求1所述杀菌液，其特征在于所述杀菌液的重量份数组成如下：

天麻粉5份，山茱萸提取物8份，透骨草提取物10份，枯草芽孢杆菌发酵液提取物20份，黄芩提取物5份，含氯化氢36%—38%的浓盐酸10份，碘酒2份，水20份。

7.根据权利要求1或6所述杀菌液，其特征在于所述枯草芽孢杆菌发酵液提取物制备方法如下：

菌株CGMCC7926；

（1）菌种活化

将保存完好的枯草芽孢杆菌的斜面菌种接种于斜面培养基，40℃培养30h进行菌种活化，如此活化2-3次；

所述斜面培养基组成为：牛肉膏6g，氯化钠10g，蛋白胨15g，葡萄糖3g,琼脂18g，蒸馏水l000mL，pH值6，121℃灭菌20min；

（2）液体种子扩大培养

①一级种子培养：将步骤（1）活化后的斜面菌种1-2环接入500毫升摇瓶中，培养基装量100毫升，旋转式摇床180转/分，培养温度40℃，培养时间12h；

②二级种子培养：将一级种子按照10%的接种量接入500毫升二级种子摇瓶中，培养条件与一级种子相同；

③三级种子培养：将二级种子以10%接种量接入5000毫升三级种子摇瓶中，培养基装量1000毫升，旋转式摇床100转/分，培养温度40℃，培养时间12h；

④一级种子罐培养：将三级种子以10%接种量接入总容积为150L的一级种子罐，发酵培养基装量100L，培养温度40℃，搅拌速度300rpm，通风量（V/V）1:1,罐压0.05Mpa,培养时间15h；

所述一级、二级、三级种子培养基重量组成为：

酵母粉0.3%，葡萄糖1.5%，蛋白胨0.3%，牛肉膏0.5%，磷酸氢二钾0.8%，硫酸钙1g,氯化镁2g,柠檬酸钠1g，不足部分纯净水补足，pH值5，121℃灭菌30min；

所述种子罐培养基重量组成为：

麦芽糊精10%，酵母粉0.4%，蛋白胨0.3%，玉米浆0.4%，磷酸氢二钾1.0%，硫酸镁0.08%，柠檬酸钠0.3%，不足部分纯净水补足，pH值6，121℃灭菌30min；

所述种子罐发酵液菌体浓度为7.0x108个/ml；

（3）发酵罐发酵

将步骤（2）中一级种子罐发酵液以6%接种量接入发酵罐，培养温度36℃，搅拌速度300r/m，通风量（V/V）1:2,培养时间36h；

溶解氧控制：通过调整搅拌转速及通风量，控制溶解氧20%；

PH控制：通过补氨水或稀磷酸，控制发酵过程中pH值保持在5；

补料控制：当发酵液中的还原糖含量降至3mg/ml时，开始添加补料培养基，补料量以维持发酵液还原糖含量为4mg/ml；

放罐标准：40%菌体衰老自溶；

从发酵液中提取抑菌物质方法为有机溶剂沉淀法：

首先将发酵液高速离心，温度2℃，转速为7000转/分钟，离心十分钟，保留上清液；上清液中加入等体积有机溶剂（甲醇:乙醇=1:3），充分溶解后置于三口烧瓶中，水浴控制温度50摄氏度，搅拌速度为40rpm，时间为4小时，收集有机相，采用真空蒸馏法除去有机溶剂。蒸馏温度55℃，蒸馏20分钟，将有机溶剂去除。收集沉淀物质即得。

8.根据权利要求1所述杀菌液，其特征在于所述杀菌液的重量份数组成如下：

天麻粉3份，山茱萸提取物8份，透骨草提取物6份，枯草芽孢杆菌发酵液提取物25份，黄芩提取物9份，含氯化氢36%的浓盐酸8份，碘酒3份，水21份。