CN103570954A

CN103570954A - 氧化纤维素的溶解和通过溶剂和非溶剂沉淀的颗粒制备

Info

Publication number: CN103570954A
Application number: CN201310369316.3A
Authority: CN
Inventors: 瓦伦蒂诺·特拉蒙塔诺; 菲利普·布拉什科维奇; 勒基特·厄里; 丹尼尔·S·科斯塔; 约书亚·肯尼迪; 赛义达·法努基
Original assignee: Covidien LP
Current assignee: Covidien LP
Priority date: 2012-06-28
Filing date: 2013-06-28
Publication date: 2014-02-12
Also published as: AU2013206594A1; CA2819786A1; US20160369013A1; EP2679603A1; AU2013206594B2; EP2679603B1; CA2819786C; US20140005376A1; US9447196B2

Abstract

一种用于溶解改性纤维素的方法，其包括：使改性纤维素溶液与至少一种非溶剂接触以形成多个改性纤维素颗粒。

Description

氧化纤维素的溶解和通过溶剂和非溶剂沉淀的颗粒制备

相关申请的交叉引用

本申请要求享受2012年6月28日提交的U.S.临时申请No.61/665,529的优先权，在此通过引用将其全部内容并入本发明。

技术领域

本发明涉及用于溶解纤维素的体系和方法。特别地，本发明提供了用于溶解改性纤维素的方法。

背景技术

纤维素是最丰富的生物可再生材料，且纤维素衍生的产品已经用于多种工业中，包括织物和医疗产品的制造。除了使用未改性的含纤维素材料(例如木材、棉花)之外，现代纤维素技术需要从初始原料开始使用从现代化学工业开始时就改变极小的技术萃取和处理纤维素。

纤维素和纤维素产品的全部潜力并没有全部得到开发，部分是因为向石油基聚合物的历史性变迁，并且还因为其中纤维素能够容易溶解的普通溶剂的数量有限。传统的纤维素溶解方法，包括铜铵和黄原酸盐法通常是麻烦或昂贵的，并且需要在相对苛刻的条件下使用不常见的溶剂，这些溶剂典型的具有高的离子强度。

现有技术已经公开了多种溶解纤维素的方法。例如参见McCormick等人的“Solution Studies of Cellulose in Lithium Chloride andN,N-Dimethylacetamide,”Macromolecules，1985，Vol.18，No.12，1985，pp.2394-2401；Timpa的“Application of Universal Calibration in Gel PermeationChromatography for Molecular Weight Determination of Plant Cell WallPolymers：Cotton Fiber,”J.Agric.Food Chem.，1991,39，270-275；和Strlic等人的“S ize Exclusion Chromatograhy of Cellulose inLiCl/N,N-Dimethylacetamide,”J.Biochem.Biophys.Methods，2003，56，pp.265-279。

人们仍然渴望改进溶解纤维素的方法，以克服需要过高的热处理、过多的物理操作(例如搅拌)和/或过长的处理时间，所有这些都导致纤维素的降解和从氧化的纤维素上除去氧化基团。

发明内容

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：通过在惰性气氛中使改性纤维素与溶剂接触形成混合物以形成溶胀的改性纤维素；将混合物调整到大约115℃到大约145℃的第一温度；在惰性气氛中使溶胀的改性纤维素与盐接触以形成改性纤维素溶液；并且将改性纤维素溶液调整到大约90℃到大约120℃的第二温度。

根据以上实施方案的一个方面，第一温度为大约120℃到大约140℃。

根据以上实施方案的一个方面，第一温度为大约130℃到大约135℃。

根据以上实施方案的一个方面，第二温度为大约100℃到大约110℃。

根据以上实施方案的一个方面，所述溶剂选自N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮以及它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述盐选自卤化锂、卤化钠、卤化钾以及它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述改性纤维素是氧化纤维素。

根据以上实施方案的一个方面，改性纤维素溶液包括氧化度为溶解之前(predissolved)的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％的溶解的氧化纤维素。

根据以上实施方案的一个方面，改性纤维素溶液包括分子量为溶解之前的氧化纤维素的分子量的大约80％到大约120％的溶解的氧化纤维素。

根据另一个实施方案，本发明公开提供了一种方法，其包括：通过在惰性气氛中使氧化的纤维素与溶剂接触形成混合物以形成溶胀的氧化纤维素，该氧化纤维素具有大约0.2到大约1.0的氧化度；将混合物调整到大约115℃到大约145℃的第一温度；在惰性气氛中使溶胀的氧化纤维素与盐接触以形成氧化纤维素溶液；以及将氧化的纤维素溶液调整到大约90℃到大约120℃的第二温度，其中溶解的氧化纤维素具有的氧化度是溶解之前的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％。

根据以上实施方案的一个方面，所述盐以氧化纤维素的大约0.1％重量到3％重量的量存在。

在进一步的实施方案中，本发明公开提供了一种方法，其包括：通过在惰性气氛中使改性纤维素与溶剂接触形成混合物以形成溶胀的改性纤维素；将混合物调整到大约115℃到大约145℃的第一温度；在惰性气氛中使溶胀的改性纤维素与盐接触以形成惰性气氛中的改性纤维素溶液；以及将改性纤维素溶液调整到大约90℃到大约120℃的第二温度，其中溶解的改性纤维素具有的分子量是溶解之前的改性纤维素的分子量的大约80％到大约100％。

根据以上实施方案的一个方面，所述盐以改性纤维素的大约0.1％重量到3％重量的量存在。

在一个实施方案中，本发明提供了一种改性纤维素溶液，其通过在惰性气氛中使改性纤维素与溶剂接触以形成溶胀的改性纤维素；将混合物调整到第一温度；在惰性气氛中使该溶胀的改性纤维素与盐接触以形成改性纤维素溶液；将改性纤维素溶液调整到低于第一温度的第二温度；以及使改性纤维素溶液与至少一种多价阳离子接触以形成多个(a plurality of)改性纤维素颗粒而形成。

根据以上实施方案的一个方面，溶胀的改性纤维素的接触在调整第一温度后进行。

本发明还提供了改性纤维素的溶液，其包括分子量为溶解之前的改性纤维素的分子量的大约80％到大约100％的溶解的改性纤维素。

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：形成改性纤维素溶液；以及使改性纤维素溶液与至少一种多价阳离子接触以形成多个改性纤维素颗粒。

根据以上实施方案的一个方面，改性纤维素溶液的形成包括：在惰性气氛中使改性纤维素与溶剂接触以形成溶胀的改性纤维素；将溶胀的改性纤维素混合物调整到第一温度；在惰性气氛中使溶胀的改性纤维素与盐接触以形成改性纤维素溶液；以及将改性纤维素溶液调整到低于第一温度的第二温度。

根据以上实施方案的一个方面，所述至少一种多价阳离子选自钙、钡、锌、镁、铬、铂和铁阳离子。

根据以上实施方案的一个方面，该方法进一步包括剪切改性的溶液以形成多个改性纤维素颗粒。

根据以上实施方案的一个方面，第一温度为大约115℃到大约145℃并且第二温度为大约90℃到大约120℃。

根据以上实施方案的一个方面，多个改性纤维素颗粒包括氧化度是溶解之前的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％的氧化纤维素。

根据以上实施方案的一个方面，多个改性纤维素颗粒包括分子量是溶解之前的氧化纤维素的分子量的大约80％到大约120％的氧化纤维素。

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：形成氧化纤维素溶液；以及使氧化纤维素溶液与至少一种多价阳离子接触以形成多个氧化纤维素颗粒，其具有的氧化度是溶解之前的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％。

根据以上实施方案的一个方面，氧化纤维素溶液的形成包括：在惰性气氛中使氧化纤维素与溶剂接触以形成具有大约0.2到大约1.0的氧化度的溶胀的氧化纤维素；将该溶胀的氧化纤维素调整到第一温度；在惰性气氛中使该溶胀的氧化纤维素与盐接触以形成氧化纤维素溶液；以及将氧化纤维素溶液调整到低于第一温度的第二温度。

根据以上实施方案的一个方面，第一温度为大约120℃到大约140℃且第二温度为大约100℃到大约110℃。

根据以上实施方案的一个方面，其包括剪切该氧化溶液以形成多个氧化纤维素颗粒。

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：形成改性纤维素溶液；以及使改性纤维素溶液与至少一种多价阳离子接触以形成多个改性纤维素颗粒，其所具有的分子量是溶解之前的改性纤维素的分子量的大约80％到大约100％。

根据以上实施方案的一个方面，该方法进一步包括剪切改性溶液以形成多个改性纤维素颗粒。

根据以上实施方案的一个方面，其中所述改性纤维素是氧化纤维素。

在一个实施方案中，本发明提供了一种用于形成组合物的方法，其包括：形成改性纤维素溶液；形成可用改性纤维素溶液交联的阳离子组合物；以及使改性纤维素溶液与阳离子组合物在处理位点上接触，由此形成离子性交联凝胶。

根据以上实施方案的一个方面，所述改性纤维素溶液具有大约8.0到大约9.5的pH值。

根据以上实施方案的一个方面，所述阳离子组合物是具有大约2.0到大约6.0的pH值的壳聚糖水溶液。

根据以上实施方案的一个方面，所述阳离子组合物是至少一种多价阳离子的水溶液。

根据以上实施方案的一个方面，所述方法进一步包括将改性纤维素溶液和阳离子组合物集中应用在处理位点上。

在一个实施方案中，本发明提供了一种用于形成组合物的方法，其包括：形成改性纤维素溶液；形成凝胶化组合物；以及使改性纤维素溶液和组合物在处理位点上接触，由此形成凝胶。

根据以上实施方案的一个方面，所述改性纤维素溶液的形成包括：在惰性气氛中使改性纤维素与溶剂接触以形成溶胀的改性纤维素；将溶胀的改性纤维素混合物调整到第一温度；在惰性气氛中使溶胀的改性纤维素与盐接触以形成改性纤维素溶液；以及将改性纤维素溶液调整到低于第一温度的第二温度。

根据以上实施方案的一个方面，所述凝胶化组合物是具有大约2.0到大约6.0的pH值的壳聚糖水溶液。

根据以上实施方案的一个方面，所述凝胶化组合物是至少一种多价阳离子的水溶液。

根据以上实施方案的一个方面，凝胶化组合物选自水、盐水、磷酸盐缓冲盐水以及它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述凝胶化组合物是羧甲基纤维素的水溶液，其中该羧甲基纤维素以溶液的大约0.5重量％到溶液的大约5重量％的量存在。

根据以上实施方案的一个方面，所述凝胶化组合物是基于甲基丙烯酸甲酯、丙烯酸羟乙基酯、甲基丙烯酸羟乙基酯、丙烯酸甘油酯、甲基丙烯酸甘油酯、丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酰胺或甲基丙烯酰胺以及它们的组合中的至少一种的丙烯酸类聚合物溶液。

根据以上实施方案的一个方面，所述溶液包括选自丙酮、乙酸乙酯、二甲基醚和它们的组合的溶剂。

根据以上实施方案的一个方面，所述凝胶化组合物包括选自阿莫西林、头孢氨苄和它们的组合的席夫碱(Schiff-base)化合物。

根据以上实施方案的一个方面，所述凝胶化组合物包括三赖氨酸、白蛋白、聚乙二醇胺和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述方法进一步包括将改性纤维素溶液和凝胶化组合物集中应用在处理位点上。

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：形成改性纤维素溶液；以及使改性纤维素溶液与至少一种非溶剂接触以形成多个改性纤维素颗粒。

根据以上实施方案的一个方面，所述至少一种非溶剂选自链烷烃、油脂甘油、二醇类和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述方法进一步包括剪切改性的溶液以形成多个改性纤维素颗粒。

根据以上实施方案的一个方面，第一温度为大约115℃到大约145℃且第二温度为大约90℃到大约120℃。

根据以上实施方案的一个方面，所述多个改性纤维素颗粒包括氧化度是溶解之前的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％的氧化纤维素。

根据以上实施方案的一个方面，所述多个改性纤维素颗粒包括分子量是溶解之前的氧化纤维素的分子量的大约80％到大约120％的氧化纤维素。

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：形成氧化纤维素溶液；以及使氧化纤维素溶液与至少一种非溶剂接触以形成氧化度是溶解之前的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％的多个氧化纤维素颗粒。

根据以上实施方案的一个方面，氧化纤维素溶液的形成包括：在惰性气氛中使氧化纤维素与溶剂接触以形成溶胀的氧化纤维素，该氧化纤维素具有大约0.2到大约1.0的氧化度；将溶胀的氧化纤维素调整到第一温度；在惰性气氛中使溶胀的氧化纤维素与盐接触以形成氧化纤维素溶液；以及将氧化纤维素溶液调整到低于第一温度的第二温度。

根据以上实施方案的一个方面，所述方法进一步包括剪切氧化的溶液以形成多个氧化纤维素颗粒。

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：形成改性纤维素溶液；以及使改性纤维素溶液与至少一种非溶剂接触以形成分子量是溶解之前的改性纤维素的分子量的大约80％到大约100％的多个改性纤维素颗粒。

在一个实施方案中，本发明提供了一种用于形成组合物的方法，其包括：形成改性纤维素溶液；形成沉淀组合物；以及在处理位点处使改性纤维素溶液和沉淀组合物接触，由此从改性纤维素溶液中沉淀出改性纤维素并且形成凝胶。

根据以上实施方案的一个方面，所述沉淀组合物选自水、盐水、磷酸盐缓冲盐水和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述沉淀组合物是羧甲基纤维素的水溶液，其中该羧甲基纤维素以溶液重量的大约0.5％到溶液重量的大约5％的量存在。

根据以上实施方案的一个方面，所述沉淀组合物是基于甲基丙烯酸甲酯、丙烯酸羟乙基酯、甲基丙烯酸羟乙基酯、丙烯酸甘油酯、甲基丙烯酸甘油酯、丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酰胺或甲基丙烯酰胺以及它们的组合中的至少一种的丙烯酸类聚合物溶液。

根据以上实施方案的一个方面，所述沉淀组合物溶液包括选自丙酮、乙酸乙酯、二甲基醚以及它们的组合的溶剂。

根据以上实施方案的一个方面，所述方法进一步包括将改性纤维素溶液和沉淀组合物集中应用在处理位点上。

在一个实施方案中，本发明提供了一种用于形成组合物的方法，其包括：形成改性纤维素溶液；形成可与改性纤维素溶液共价交联的可交联的组合物；以及使改性纤维素溶液与组合物在处理位点处接触，由此形成交联凝胶。

根据以上实施方案的一个方面，可交联的组合物包括选自阿莫西林、头孢氨苄和它们的组合的席夫碱化合物。

根据以上实施方案的一个方面，可交联的组合物包括三赖氨酸、白蛋白、聚乙二醇胺和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，可交联的组合物是水溶液。

根据以上实施方案的一个方面，所述方法进一步包括将改性纤维素溶液和可交联的组合物集中的应用在处理位点上。

在一个实施方案中，本发明提供了一种用于形成组合物的方法，其包括：形成改性纤维素溶液；形成凝胶化组合物；以及使改性纤维素溶液和组合物在处理位点处接触，由此形成凝胶。

根据以上实施方案的一个方面，所述凝胶化组合物是具有大约2.0到大约6.0的pH值的壳聚糖的水溶液。

根据以上实施方案的一个方面，所述凝胶化组合物选自水、盐水、磷酸盐缓冲盐水和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述凝胶化组合物是羧甲基纤维素的水溶液，其中该羧甲基纤维素以溶液重量的大约0.5％到溶液重量的大约5％的量存在。

根据以上实施方案的一个方面，所述凝胶化组合物包括选自阿莫西林、头孢氨苄和它们的组合的席夫碱化合物。

根据以上实施方案的一个方面，所述方法进一步包括将改性纤维素溶液和凝胶化组合物集中的应用在处理位点处。

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：形成改性纤维素溶液；以及使溶解的改性纤维素与至少一种中和剂接触以形成多个改性纤维素颗粒。

根据以上实施方案的一个方面，所述至少一种中和剂选自氨水、氢氧化铵、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化锂、碳酸钾、碳酸氢钾和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述方法进一步包括剪切所述溶解的改性溶液以形成多个改性纤维素颗粒。

根据以上实施方案的一个方面，所述改性纤维素是氧化纤维素且多个改性纤维素颗粒包括氧化度是溶解之前的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％的氧化纤维素。

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：形成氧化纤维素溶液；以及使溶解的氧化纤维素与至少一种中和剂接触以形成多个氧化纤维素颗粒，该颗粒所具有的氧化度是溶解之前的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％。

根据以上实施方案的一个方面，氧化纤维素溶液的形成包括：在惰性气氛中使氧化纤维素与溶剂接触以形成具有大约0.2到大约1.0的氧化度的溶胀的氧化纤维素；将溶胀的氧化纤维素调整到第一温度；在惰性气氛中使溶胀的氧化纤维素与盐接触以形成氧化纤维素溶液；以及将氧化纤维素溶液调整到低于第一温度的第二温度。

根据以上实施方案的一个方面，所述方法进一步包括剪切所述溶解的氧化溶液以形成多个氧化纤维素颗粒。

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：形成改性纤维素溶液；以及使溶解的改性纤维素与至少一种中和剂接触以形成多个改性纤维素颗粒，其所具有的分子量是溶解之前的改性纤维素的分子量的大约80％到大约100％。

根据以上实施方案的一个方面。改性纤维素溶液的形成包括：在惰性气氛中使改性纤维素与溶剂接触以形成溶胀的改性纤维素；将溶胀的改性纤维素混合物调整到第一温度；在惰性气氛中使溶胀的改性纤维素与盐接触以形成改性纤维素溶液；以及将改性纤维素溶液调整到低于第一温度的第二温度。

在一个实施方案中，本发明提供了一种用于形成微球的方法，其包括：使溶剂与改性纤维素接触以形成溶液；使改性纤维素溶液与至少一种生物活性剂接触以形成不连续相液体；使不连续相液体与连续相液体接触以形成乳液；以及使该乳液与第三相液体接触以便从乳液中萃取出溶剂，由此形成多个改性纤维素微球。

根据以上实施方案的一个方面，所述生物活性剂选自亲水性生物活性剂、蛋白质治疗剂、生物制剂和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，第三相液体与连续相液体和不连续相液体混溶。

根据以上实施方案的一个方面，第三相液体选自肉豆蔻酸异丙酯、己烷、甘油三酯和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，第三相液体以连续相液体体积的大约130％到大约170％的量存在。

根据以上实施方案的一个方面，改性纤维素溶液的形成包括：在惰性气氛中使改性纤维素与溶剂接触以形成溶胀的改性纤维素；将溶胀的改性纤维素混合物调整到第一温度；在调整到第一温度之后，在惰性气氛中使溶胀的改性纤维素与盐接触以形成改性纤维素溶液；以及将改性纤维素溶液调整到大约90℃到大约120℃的第二温度。

根据以上实施方案的一个方面，连续相选自基于植物的油、基于石油的油、基于硅氧烷的油和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述方法进一步包括：使多个改性纤维素微球与可生物降解的聚合物的溶液和水溶液接触以形成乳液；以及萃取出包封多个改性纤维素微球的多个可生物降解聚合物微球。

根据以上实施方案的一个方面，所述可生物降解的聚合物是脂肪族聚酯。

根据以上实施方案的一个方面，所述水溶液包括至少一种乳化剂和水。

根据以上实施方案的一个方面，所述至少一种生物活性剂是亲水性的。

在一个实施方案中，本发明提供了一种微球，其包括：改性纤维素；和至少一种生物活性剂。

根据以上实施方案的一个方面，所述微球通过以下方法形成：使包括溶剂的改性纤维素溶液与至少一种生物活性剂接触以形成不连续相液体；使该不连续相液体与连续相液体接触以形成乳液；以及使乳液与第三相液体接触以便将溶剂从乳液中萃取出来，由此形成多个微球。

根据以上实施方案的一个方面，第三相液体与连续的组合物和不连续的组合物混溶。

在一个实施方案中，本发明提供了一种用于形成微球的方法，其包括：形成包括至少一种生物活性剂和改性纤维素的第一多个微球；使第一多个微球与可生物降解的聚合物溶液接触以形成不连续相液体；使该不连续相液体与连续相液体接触以形成乳液；以及从乳液中萃取第二多个微球，该第二多个微球包含第一多个微球。

根据以上实施方案的一个方面，所述至少一种生物活性剂选自亲水性生物活性剂、蛋白质治疗剂、生物制剂和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述脂肪族聚酯选自聚丙交酯、聚丙交酯-共-聚乙交酯、聚丙交酯-聚己内酯和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述连续相液体包括至少一种乳化剂和水。

在一个实施方案中，本发明提供了一种微球，其包括包封至少一种其他微球的第一可生物降解聚合物，该至少一种其他微球包括第二可生物降解聚合物和至少一种生物活性剂，其中第一可生物降解聚合物和第二可生物降解聚合物不同并且第一可生物降解聚合物或第二可生物降解聚合物中的至少一种是改性纤维素。

根据以上实施方案的一个方面，第一可生物降解聚合物或第二可生物降解聚合物中的至少一种是脂肪族聚酯。

根据以上实施方案的一个方面，所述脂肪族聚酯选自聚交酯、聚交酯-共-乙交酯、聚交酯-聚己内酯和它们的组合。

根据以上实施方案的一个方面，所述微球进一步包括至少一种其他生物活性剂。

根据以上实施方案的一个方面，所述至少一种生物活性剂选自亲水性生物活性剂、蛋白质治疗剂、生物制剂和它们的组合，且第一可生物降解聚合物是改性纤维素。

在一个实施方案中，本发明提供了一种医疗产品，其包括至少一种由改性纤维素溶液形成的可控(predictably)降解涂层、膜或纤维。

根据以上实施方案的一个方面，所述溶液通过以下方法形成：在惰性气氛中使改性纤维素与溶剂接触以形成溶胀的改性纤维素；将溶胀的改性纤维素混合物调整到第一温度；在惰性气氛中使溶胀的改性纤维素与盐接触以形成改性纤维素溶液；以及将改性纤维素溶液调整到第二温度。

根据以上实施方案的一个方面，纤维、涂层或膜中的至少一种通过从溶液中蒸发溶剂而形成。

根据以上实施方案的一个方面，纤维、涂层或膜中的至少一种通过在基质上沉积改性纤维素溶液并且从溶液中蒸发溶剂而形成。

根据以上实施方案的一个方面，所述改性纤维素是氧化纤维素且纤维、涂层或膜中的至少一种包括氧化纤维素，该氧化纤维素具有的氧化度是溶解之前的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％。

根据以上实施方案的一个方面，纤维、涂层或膜中的至少一种包括氧化纤维素，该氧化纤维素具有的分子量是溶解之前的氧化纤维素的分子量的大约80％到大约120％。

根据以上实施方案的一个方面，所述改性纤维素溶液与至少一种生物相容性增塑剂接触。

根据以上实施方案的一个方面，所述至少一种生物相容性增塑剂选自卵磷脂、癸二酸二丁酯、柠檬酸、聚乙二醇、聚丙二醇和它们的组合。

在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：在惰性气氛中使改性纤维素与溶剂接触以形成溶胀的改性纤维素；将溶胀的改性纤维素混合物调整到第一温度；在惰性气氛中使溶胀的改性纤维素与盐接触以形成改性纤维素溶液；将改性纤维素溶液调整到低于第一温度的第二温度；以及由该改性纤维素溶液形成纤维、涂层或膜中的至少一种。

根据以上实施方案的一个方面，所述方法进一步包括使改性纤维素溶液与至少一种生物相容性增塑剂接触。

附图说明

下面将参考附图描述本发明的不同实施方案，其中：

图1是根据本发明用于溶解纤维素的体系的示意图；

图2是根据本发明的双重包封微球的示意图；

图3是根据本发明的多重包封微球的示意图；

图4是根据本发明的包括多种生物活性剂的多重包封微球的释放轮廓曲线；

图5是根据本发明的包括单独生物活性剂的多重包封微球的释放轮廓曲线；

图6是根据本发明的溶解的氧化纤维素的色谱图；

图7是根据本发明的溶解的未改性纤维素的色谱图；

图8A-B是根据本发明的氧化纤维素微球的扫描电镜图片；

图9A-B是根据本发明的包括18％负载的维生素B-12的氧化纤维素微球的扫描电镜图片；

图10A-B是根据本发明的包括布比卡因游离碱的氧化纤维素微球的扫描电镜图片；

图11A-B是根据本发明的包括布比卡因盐酸盐形式的氧化纤维素微球的扫描电镜图片；

图12是根据本发明的维生素B-12的紫外光-可见光光谱标准校准曲线；

图13A-B是根据本发明的包括30％负载的维生素B-12的氧化纤维素微粒的扫描电镜图片；

图14A-B是根据本发明的包括25％负载的维生素B-12的氧化纤维素微粒的扫描电镜图片；

图15是根据本发明的载有顺-二氯二氨合铂(II)的氧化纤维素微球的光学显微镜图片；

图16是根据本发明的包封了图15的载有顺-二氯二氨合铂(II)的氧化纤维素微球的聚D,L-交酯微球的光学显微镜图片；

图17是根据本发明的图16的微球的横截面的扫描电镜图片；

图18是根据本发明的氧化纤维素的电导滴定曲线图；以及

图19是根据本发明的氧化纤维素的pH滴定曲线图。

具体实施方式

本发明提供了一种用于溶解纤维素的体系和方法。在实施方案中，本发明提供了一种使用极性质子惰性溶剂和盐的方法，其以逐步的方法添加以便溶解氧化的或未改性的纤维素。根据本发明的溶解方法通过在惰性和干燥气氛中进行该方法、以特定的次序引入盐、在预定的温度下和时间内加热溶液以及使溶液上的剪切力最小化而使氧化纤维素的降解最小化。

正如本发明所述，纤维素包括天然(例如未改性的)或改性(例如处理过的)纤维素，它们包括但不限于氧化纤维素、烷基纤维素、羟烷基纤维素、纤维素醚、纤维素酯、硝化纤维素、它们的组合，等等。合适的改性纤维素衍生物的其他实例包括但不限于甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、羟丁基甲基纤维素、醋酸纤维素酯、丙酸纤维素酯、乙酸丁酸纤维素酯、乙酸邻苯二甲酸纤维素酯、羧甲基纤维素、三乙酸纤维素酯和纤维素硫酸钠盐。

本发明所使用的氧化纤维素表示至少一部分羟基基团通过氧化被羧基、醛基和/或酮基团取代的纤维素。氧化纤维素可以使用任何本领域技术人员眼界范围内的技术形成。例如，纤维素可以通过将其暴露于氧化介质而被氧化，例如浓稠的或超临界流体，包括但不限于二氧化氮、二氧化碳、它们的组合，等等。在实施方案中，氧化介质可以包括浓稠的或超临界流体的组合，例如溶解在二氧化碳中的二氧化氮。在大约20℃到大约60℃下、在实施方案中大约30℃到大约45℃的温度下且在大约20巴到大约250巴，在实施方案中大约30巴到大约90巴的压力下，纤维素材料可以在氧化介质中暴露大约20分钟到大约24小时，在实施方案中暴露大约1小时到大约5小时。使用浓稠流体氧化纤维素材料的方法已经公开，例如U.S.专利申请公开No.2008/0194805，将其通过引用全部并入本发明。其他制备氧化纤维素材料的方法也已经公开，例如U.S.专利Nos.3,364,200、4,626,253、5,484,913和6,500,777，将其中的每一个的全部的公开内容都通过引用并入本发明。

现在转向图1，其提供了根据本发明的溶解纤维素，包括氧化纤维素，的体系。体系10包括反应器容器12，其可以是三口圆底烧瓶。该反应器容器12包括气体入口14和气体出口16，二者均连接到惰性气体源(未显示)。反应器容器12还可以包括任何数量的入口、套管和其他连接件以提供方便的分别向容器12添加反应剂和/或从其中除去产物。氧化纤维素的溶解可以作为连续的过程或间歇的过程进行。

该溶解过程在惰性、即无氧气且干燥的气氛中进行。在实施方案中，反应器容器12可以在开始溶解过程之前通过使惰性气体通过入口14和出口16循环穿过反应器容器12而用惰性气体净化。该气体还可以在溶解过程中穿过反应器容器12循环。合适的惰性气体包括但不限于氮气和稀有气体(noblegases)，例如氦气、氖气、氩气和它们的组合。

首先，通过任何合适的入口将溶剂添加到反应器容器12中。在实施方案中，用于溶解氧化纤维素的溶剂可以是任何极性质子惰性有机溶剂，其具有大约175℃到大约205℃的沸点，在实施方案中沸点为大约180℃到大约202℃。合适的溶剂包括但不限于N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)和它们的组合。

溶剂还可以通过惰性气体而被引入气体(例如气体在那里鼓泡)以从中除去水分和溶解的氧气。然后将纤维素加入溶剂中并且可以通过搅拌器18搅拌以使纤维素溶胀。搅拌在相对低速下进行以防止纤维素的降解。搅拌可以是大约每分钟100转(rpm)到大约500rpm，在实施方案中大约150rpm到大约250rpm。如上所述，反应器容器12可以是圆底容器，其进一步通过搅拌器18使赋予纤维素的剪切力最小化。

溶剂和氧化纤维素的混合物可以加热到大约115℃到大约145℃的温度，在实施方案中为大约120℃到大约140℃，在进一步的实施方案中为大约130℃到大约135℃。在实施方案中，使用根据本发明的方法溶解的氧化纤维素的氧化度可以是大约0.2到大约1.0，在实施方案中该氧化度为大约0.3到0.9，在进一步的实施方案中为大约0.5到大约0.7。本发明中使用的术语“氧化度”指的是纤维素的羧基基团与羟基基团的比例。所述“氧化度”还指的是全部纤维素样品的平均氧化度。不受任何特殊理论的限制，可以认为溶剂和氧化纤维素混合物的温度取决于氧化纤维素的氧化度。随着氧化度的增加，溶胀氧化纤维素所需要的温度降低。相反，随着氧化度的降低，溶胀氧化纤维素所需要的温度升高。溶解过程中使加热纤维素最小化。加热纤维素会导致其降解，包括氧化纤维素的反应性基团的破坏和分子量的降低。

可以将溶剂和具有大约0.5或更高氧化度的氧化纤维素的混合物加热到大约115℃到大约135℃的温度，在实施方案中该温度为大约125℃到大约130℃。可以将溶剂和具有大约0.25到大约0.5的氧化度的氧化纤维素的混合物加热到大约130℃到大约145℃的温度，在实施方案中，该温度为大约135℃到大约140℃。

由于其相对高的极性，溶剂首先溶胀纤维素。氧化纤维素的溶胀可以持续大约1小时到大约4小时，在实施方案中其为大约1.5小时到大约2.5小时。氧化纤维素溶胀后，降低混合物的温度。在实施方案中，在加入盐之前，氧化纤维素的混合物可以冷却到大约90℃到大约120℃的温度，在实施方案中，该温度为大约100℃到大约110℃。

不受任何特殊理论的限制，可以认为将盐引入混合物中提供了盐向纤维素的插层。用溶剂溶胀纤维素增强了盐向纤维素中的引入，其反过来又影响最终的纤维素溶解。在实施方案中，盐可以是任何卤化碱盐。合适的盐包括但不限于卤化锂，例如氟化锂、氯化锂、溴化锂和碘化锂；卤化钠，例如氟化钠、氯化钠、溴化钠和碘化钠；卤化钾，例如氟化钾、氯化钾、溴化钾和碘化钾；以及前述物质的任意组合。该盐以氧化纤维素重量的大约0.1％到3％的量存在，在实施方案中为氧化纤维素重量的大约0.25％到大约2％。常规的溶解方法依赖高的盐浓度以溶解未改性的纤维素，这对于溶解氧化纤维素来说是不合适的。较低的盐浓度阻止或减少了包括上述氧化纤维素的反应性基团的破坏和分子量降低的氧化纤维素的降解。

溶解过程是以逐步的方式进行的，即，首先在引入盐之前，纤维素在溶剂中溶胀，这允许纤维素在比通常要求高于150℃的温度的常规方法更低的温度下溶解。在较低温度下的逐步溶解过程还阻止或减少了包括上述氧化纤维素的反应性基团的破坏和分子量降低的氧化纤维素的降解。在实施方案中，溶解的氧化纤维素的氧化度可以是处理之前的、即未溶解的、氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％，在实施方案中，其为大约90％到大约110％。在实施方案中，溶解的氧化纤维素的分子量可以是处理之前的、即未溶解的、氧化纤维素的分子量的大约80％到大约100％，在实施方案中，其为大约90％到大约95％。本发明中使用的术语“分子量”指的是纤维素的重均分子量(M_w)。术语“分子量”还指的是整个纤维素样品的平均分子质量。未溶解的(例如溶解前)氧化纤维素可以具有大约50000道尔顿到大约500000道尔顿的分子量，在实施方案中，该分子量为大约100000道尔顿到大约400000道尔顿。

如果氧化纤维素没有充分溶解，该方法可以在搅拌下继续并且在大约40℃到大约80℃的较低温度下加热，在实施方案中，该温度为大约50℃到大约60℃，搅拌持续大约1小时到大约5小时，在实施方案中，该时间为大约2小时到大约3小时，直到氧化纤维素溶解。得到的氧化纤维素溶液包括以大约5毫克/毫升(mg/mL)到大约25mg/mL的浓度存在的氧化纤维素，在实施方案中，该浓度为大约10mg/mL到大约20mg/mL。

图1的体系还可以用于溶解未改性的纤维素。溶解未改性的纤维素的方法可以使用与上述溶解氧化纤维素相同的溶剂。首先，未改性的纤维素在溶剂中溶胀。溶剂和未改性的纤维素的混合物可以加热到大约135℃到大约165℃的温度，在实施方案中该温度为大约145℃到大约155℃。由于其相对高的极性，溶剂首先溶胀纤维素。未改性的纤维素的溶胀可以持续大约1小时到大约4小时，在实施方案中其为大约1.5小时到大约2.5小时。未改性的纤维素溶胀之后，降低混合物的温度。在实施方案中，未改性的纤维素的混合物可以在加入盐之前冷却到大约140℃到大约160℃的温度，在实施方案中该温度为大约145℃到大约155℃。

盐以未改性的纤维素的大约0.1重量％到10重量％的量存在，在实施方案中，其为未改性的纤维素的大约0.5重量％到大约9重量％。如果未改性的纤维素没有充分溶解，则该方法可以在搅拌下继续进行并且在大约40。℃到大约80℃的较低的温度下加热，在实施方案中，该温度为大约50℃到大约60℃，加热持续大约12小时到大约36小时的一段时间，在实施方案中，该时间为大约16小时到大约24小时，直到未改性的纤维素溶解。

之后，溶解的氧化纤维素可以被用于形成大颗粒、微粒或纳米颗粒。在本申请中，术语“大颗粒”、“大球”、“大胶囊”、“微粒”、“微球”、“微囊”、“纳米颗粒”、“纳米球”和“纳米胶囊”表示任何具有任何规则或不规则的形状和大约0.001μm到大约2mm的尺寸的颗粒，在实施方案中该尺寸为大约0.01μm到大约1mm。

颗粒的形成可以在作为与溶解过程一起的连续的过程(例如，使溶液经受高剪切力，加入中和剂和/或加入阳离子)或间歇的过程进行。在实施方案中，纤维素颗粒通过在溶剂或非溶剂、中和剂、具有多价阳离子的水溶液和它们的组合的存在下使溶解的纤维素经受高剪切力(例如，在高剪切设备中，如搅拌器、挤出机，等等)形成。

本发明中使用的术语“非溶剂”使用其最广义的含义并且包括其中纤维素不能溶于其中的任何物质或物质的混合物。合适的溶剂和共溶剂包括但不限于NMP、DMAc和水溶液，以及它们的组合。合适的非溶剂包括但不限于链烷烃、油脂甘油、二醇类和它们的组合。溶剂或非溶剂以纤维素重量的大约1％到大约45％的量存在，在实施方案中，其为纤维素重量的大约5％到大约30％，在进一步的实施方案中，其为纤维素重量的大约10％到大约20％。

在实施方案中，氧化纤维素颗粒可以通过使溶解的纤维素与具有中和剂的水溶液接触而形成。溶解的纤维素和水性中和溶液还可以经受高剪切力。在实施方案中，中和剂可以用于中和纤维素中羧酸侧基以调整最终的颗粒尺寸和形态，因此本发明的中和剂还可以指的是“碱性中和剂”。根据本发明可以使用任何合适的碱性中和剂。在实施方案中，合适的碱性中和剂可以包括无机碱性试剂和有机碱性试剂。合适的碱性试剂可以包括氨水、氢氧化铵、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化锂、碳酸钾、碳酸氢钾和它们的组合，等等。合适的碱性试剂还可以包括具有至少一个氮原子的单环化合物和多环化合物，例如举例来说有仲胺，其包括氮丙啶、吖丁啶、哌嗪、哌啶、吡啶、双吡啶、三联吡啶、二氢吡啶、吗啉、N-烷基吗啉、1，4-二氮杂二环[2.2.21辛烷，1，8-二氮杂二环十一烷，1，8-二氮杂二环十一碳烯、二甲基化的戊胺、三甲基化的戊胺、嘧啶、吡咯、吡咯烷、吡咯烷酮、吲哚、二氢吲哚、二氢茚酮、苯并偶氮酮(benzindazones)、咪唑、苯并咪唑、咪唑啉酮、咪唑啉、噁唑、异噁唑、噁唑啉、噁二唑、噻二唑、咔唑、喹啉、异喹啉、萘啶、三嗪、三唑、四唑、吡唑、吡唑啉和它们的组合。在实施方案中，单环和多环化合物在环的任何碳位点处可以是取代的或未取代的。

中和剂可以作为固体使用，例如举例来说有氢氧化钠薄片，并且其可以溶解在水中以形成水溶液。中和剂可以添加到氧化纤维素中使溶液的pH值为大约5到大约9，在实施方案中其为大约6到大约8。正如以上指出的，可以添加碱性中和剂以中和纤维素所带有的羧酸基团(例如氧化纤维素)。纤维素颗粒形成中通过使来自羧酸基团负电荷的颗粒间斥力最小化而使侧链羧酸中和。碱性中和剂的添加由此使包括带有酸基团的纤维素乳液的pH值升至大约5到大约12，在实施方案中，该pH值为大约6到大约11。

在实施方案中，氧化纤维素颗粒可以通过使溶解的纤维素与具有多价阳离子的水溶液接触而形成，该多价阳离子包括二价和三价阳离子。溶解的纤维素和阳离子溶液还可以经受高剪切力。在实施方案中，纤维素颗粒可以通过连续的两相喷雾制备而形成，其中首先将阳离子溶液喷在基质上，之后将溶解的纤维素溶液喷在上面。在进一步的实施方案中，如下面进一步详述的，阳离子溶液可以与氧化纤维素溶液就地结合形成交联的凝胶。

合适的阳离子包括但不限于钙(Ca⁺²)、钡(Ba⁺²)、锌(Zn⁺²)、镁(Mg⁺²)、铁(Fe⁺²，Fe⁺³)、铂(Pt⁺⁴)、铬(Cr⁺⁶)和它们的组合。在实施方案中，阳离子可以通过溶解合适的阳离子的盐而引入，其包括单不限于卤化物、硫酸盐、碳酸盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、氧化物、乙酸盐和它们的组合，等等。阳离子以氧化纤维素重量的大约0.01％到25％的量存在，在实施方案中，其为氧化纤维素重量的大约1％到大约18％，在进一步的实施方案中其为氧化纤维素重量的大约2％到大约15％，这取决于氧化纤维素溶液最终的用途。阳离子通过交联沉积的氧化纤维素上的悬垂羧酸基团而起到交联剂的作用，由此形成纤维素颗粒。可以使用储存了水性阳离子溶液和氧化纤维素溶液的双舱喷雾装置(例如微流化装置)，同时喷出溶液，由此混合颗粒并且形成沉积在基质(例如织物)上的颗粒。混合两种组分的施药器已经在共同拥有的U.S.专利Nos.7,611,494、8,033,483、8,152,777和U.S.专利申请公开Nos.2010/0065660和2010/0096481中公开，所有这些的全部内容通过引用并入本发明。

在实施方案中，由本发明的溶解的氧化纤维素形成的氧化纤维素颗粒的氧化度可以是处理之前的，即未溶解的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％，在实施方案中，其为大约90％到大约110％。在实施方案中，氧化纤维素颗粒的分子量可以是处理之前的，即未溶解的氧化纤维素的分子量的大约80％到大约100％，在实施方案中，其为90％到95％。未溶解的(例如溶解前)氧化纤维素可以具有大约50,000道尔顿到大约500,000道尔顿的分子量，在实施方案中其为大约100,000道尔顿到大约400,000道尔顿。

溶解的纤维素和/或纤维素颗粒可以用于形成多种适合各种外科和创伤应用的医疗产品。根据本公开的医疗器材可以是任何适合被粘附或植入组织、身体器官或管腔中的任何结构体，包括但不限于：微粒和纳米颗粒、织物和无纺织物、涂层、贴片、膜、泡沫、撕裂层、脱脂棉试子、组织移植物、移植片固定模、支架、支持物、伤口敷料、网状织物和/或组织增强物。

在实施方式中，正如上面指出的，一种或多种生物活性剂可以添加到溶剂中以使生物活性剂混合到氧化纤维素溶液中，然后可以将该溶液用于形成多种医疗器材。多种生物活性剂包括极性和非极性化合物，被溶解于上述适用于形成根据本公开的氧化纤维素溶液的溶剂中。在实施方式中，生物活性剂还可以在氧化纤维素颗粒形成之后加入。术语“生物活性剂”和“活性治疗剂”(ATA)可互换使用并且在其最广泛的含义中包括任何具有临床用途的物质或物质的混合物。因此，生物活性剂本身可以具有或可以不具有药理活性，例如染料或香精。可选择性地，生物活性剂可以是任何提供治疗或预防效果的制剂，可以是影响或参与组织生长、细胞生长、细胞分化的化合物，可以是抗粘连化合物，可以是能够激活生物行为(例如免疫应答)的化合物，或者其能够在一种或多种生物过程中起到任何其他的作用。可以预料的是生物活性剂可以以任何合适的实体形式应用于本公开的医疗器材中，例如膜、粉末、液体、凝胶等。

可以用于根据本发明的生物活性剂类别的实例包括抗粘连剂、抗微生物剂、止痛剂、退热剂、麻醉剂、抗癫痫剂、抗组胺剂、抗炎剂、心血管药、诊断剂、类交感神经药、类胆碱药、抗蕈毒碱药、止痉挛药、激素、生长因子、肌肉松驰剂、肾上腺素能神经元阻滞剂、抗肿瘤药、免疫原性剂、免疫抑制剂、胃肠药、利尿剂、类固醇、脂质、脂多糖、多糖、血小板激活药、凝血因子和酶。当然也可以使用生物活性剂的组合。

抗粘连剂可以用于防止在植入的医疗产品和与靶向组织相反的周围组织之间形成粘连。此外，抗粘连剂可以用于防止包覆的植入医疗产品和封装物质之间形成粘连。这些试剂的一些实例包括但不限于亲水性聚合物，例如聚(乙烯基吡咯烷酮)、羧甲基纤维素、透明质酸、聚环氧乙烷、聚乙烯醇和它们的组合。

合适的抗微生物剂包括：三氯生(还称作2，4，4′-三氯-2′-羟基二苯基醚)，氯己定和其盐(包括醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、盐酸氯己定和硫酸氯己定)，银和其盐(包括乙酸银、苯甲酸银、碳酸银、柠檬酸银、碘酸银、碘化银、乳酸银、月桂酸银、硝酸盐、氧化银、棕榈酸银、蛋白银和磺胺嘧啶银)，多粘菌素，四环素，氨基糖甙类(例如妥布霉素和庆大霉素)，利福平，杆菌肽，新霉素，氯霉素，咪康唑，喹诺酮类(例如噁喹酸、诺氟沙星、萘啶酸、培氟沙星、依诺沙星和环丙沙星)，青霉素(例如苯唑西林和哌拉西林)，壬苯醇醚9，夫西地酸，头孢菌素和它们的组合。此外，抗微生物蛋白质和多肽，例如牛乳铁传递蛋白和乳铁蛋白B也可以作为生物活性剂而被包括在本公开的生物活性涂层中。

其他生物活性剂包括：局部麻醉剂；非甾体抗生育剂；拟副交感神经药；心理治疗剂；镇静剂；减充血药物；镇静催眠剂；类固醇；磺胺类药物；拟交感神经药；疫苗；维生素，例如维生素A、B-12、C、D、它们的组合等；抗疟疾药物；抗偏头痛剂；抗帕金森剂，例如左旋多巴；抗痉挛药物；抗胆碱剂(例如奥昔布宁)；止咳药；支气管扩张剂；心血管剂，例如冠状血管扩张剂和硝酸甘油；生物碱；止痛剂；麻醉药，例如可待因、二氢可待因酮、杜冷丁、吗啡等；非麻醉剂，例如水杨酸盐、阿司匹林、扑热息痛、d-丙氧酚等；阿片样受体拮抗剂，例如纳曲酮和纳洛酮；抗癌药物；抗惊厥药物；止吐剂；抗组胺剂；抗炎剂，例如激素剂、氢化可的松、氢化波尼松、强的松、非激素剂、别嘌呤醇、消炎痛、保泰松等；前列腺素和细胞毒性药物；化学治疗剂，雌激素；抗细菌剂；抗生素；抗真菌药物；抗病毒剂；抗凝剂；抗惊厥药；抗抑郁药；抗组胺剂；以及免疫剂。

合适的生物活性剂的其他实例还包括生物制剂和蛋白质治疗剂，例如病毒，细菌，脂质体，氨基酸，细胞，肽，多肽和蛋白质，类似物，突变蛋白和它们的活性片段，例如免疫球蛋白、抗体、细胞因子(例如淋巴因子、单核因子、趋化因子)、凝血因子、造血因子、白介素(IL-2，IL-3，IL-4，IL-6)、干扰素(β-IFN、a-IFN和γ-IFN)、促红细胞生成素、核酸酶、肿瘤坏死因子、集落刺激因子(例如GCSF、GM-CSF、MCSF)、胰岛素、抗癌剂和肿瘤抑制剂，血蛋白，纤维蛋白，凝血酶，纤维蛋白原，合成凝血酶，合成纤维蛋白，合成纤维蛋白原，促性腺激素(例如FSH、LH、CG等)，激素和激素类似物(例如生长激素)，疫苗(例如肿瘤、细菌和病毒抗原)；生长激素释放抑制因子；抗原；凝血因子；生长因子(例如神经生长因子、胰岛素样生长因子)；骨形成蛋白，TGF-B，蛋白质抑制剂，蛋白质拮抗剂和蛋白质激动剂，核酸，例如反义分子、DNA、RNA、RNAi；低聚核苷酸；多核苷酸；以及核糖核酸酶。

本发明还提供了用于将一种或多种生物活性剂包封在氧化纤维素中的微球的组合物和制造方法。合适的生物活性剂在以上已经更详细的进行了说明。氧化纤维素微球可以具有大约80％到大约120％的生物活性剂承载量，在实施方案中为大约90％到大约110％，在进一步的实施方案中为大约95％到大约105％，在其他实施方案中为大约98％到大约102％。

合适的氧化纤维素，由于其溶解于上述极性溶剂中，因此允许形成包括包封在氧化纤维素中的亲水性生物活性剂的微球。这可以通过使用油包油型乳液的方法、之后是在萃取介质中的溶剂萃取步骤来实现。本发明中使用的术语“乳液”指的是两种或更多种不混溶的液体的混合物，其中一种液体形成连续相且另一种液体形成不连续相。本发明中使用的术语“不连续”和“分散”相可互换使用并且指的是通过连续相分散的化合物且可以包括生物活性剂、任选包封聚合物和/或相应的溶剂或溶剂化试剂。本发明中使用的术语“连续”相指的是液体，例如油，其用于从不连续相中萃取溶剂或溶剂化试剂。这些液体通常与在不连续相中使用的溶剂不混溶。本发明中使用的术语“稀释剂”和“第三相”可互换使用并且指的是降低连续相粘度的液体，其与连续相混溶并且/或从微球的表面除去残留的连续相。在实施方案中，稀释剂可以与不连续相不混溶。本发明中使用的术语“油包油”乳液表示其中连续相和不连续相均是有机液体的乳液。

在通过油包油溶剂萃取法形成可溶性氧化纤维素微球时，一种或多种亲水性生物活性剂可以添加到氧化纤维素溶液中并且充分混合以保证均匀的悬浮液或均相溶液。氧化纤维素以溶液重量的大约0.05％到45％的量存在于溶液中，在实施方案中，其为溶液重量的大约5％到大约30％，在实施方案中，其为溶液重量的大约10％到大约20％。

生物活性剂和氧化纤维素溶液形成不连续相，其被逐滴添加到包括形成连续相的液体的容器中。连续相液体可以是任何合适的与用于形成氧化纤维素溶液的极性溶剂不混溶的非极性化合物。合适的连续相液体包括但不限于基于石油的油，例如、轻质、中等或重质矿物油(例如具有大约40个碳原子到大约60个碳原子的链烷烃的混合物)，基于植物的油，例如棉籽油，基于硅氧烷的油以及它们的组合。在实施方案中，连续相可以包括两种或更多种油，例如，举例来说有重油和轻油，其竞争性的用于不连续相的萃取。在实施方案中，重油和轻油以大约1：5到大约1：1的比例存在，在实施方案中，其为大约1：3到大约3：4。不连续相液体以连续相液体体积的大约2％到大约40％的量存在，在实施方案中，其为大约5％到大约20％。

装有连续相的容器可以安装有隔板。该容器可以包括具有配置为以大约25rpm到大约60000rpm的速率旋转的叶轮的搅拌器，在实施方案中，其为大约100rpm到大约15000rpm，在其他实施方案中其为大约250rpm到大约5000rpm。搅拌可以持续大约5秒到大约4小时，在实施方案中其为大约15秒到大约1小时。可以调整旋转的速率以获得期望的颗粒尺寸。微球的尺寸可以通过调整均化(例如不连续相和连续相的搅拌)的持续时间和速度、温度和/或压力、改变连续相和不连续相的比例、剪切速率和氧化纤维素与生物活性剂的分子量和浓度进行设计。

一旦完成不连续相溶液向连续相中的递送，可以向乳液中加入第三相以除去来自不连续相液体的溶剂。合适的第三相液体包括任何可以与连续相和不连续相液体混溶的化合物。由于溶剂在连续相液体不混溶但是在第三相液体中混溶，因此发生溶剂的萃取。合适的第三相液体包括肉豆蔻酸异丙酯、己烷、正庚烷、甘油三酯和它们的组合。第三相液体以连续相液体体积的大约130％到大约170％的量存在，在实施方案中，其为大约140％到大约150％。

从连续相中除去溶剂方便了包括被氧化纤维素包封的生物活性剂的微球的形成。乳液可以搅拌大约1小时到大约24小时，在实施方案中其为大约2小时到大约5小时以帮助从微球中萃取极性溶剂。之后可以通过过滤收集微球并且洗涤(例如用正庚烷)以除去微球表面上任何痕量的连续相和不连续相液体。然后可以收集微球并且将其转移到氮气或氩气覆盖的玻璃闪烁管(glass scintillation vial)中。

由于油包油型乳液不与生物活性剂的水屏障反应，因此氧化纤维素微球还适用于包封亲水性药物，例如盐酸布比卡因以及病毒、细菌、氨基酸、肽、蛋白质、脂质体、疫苗和它们的组合。

在其他实施方案中，氧化纤维素溶液还可以用于形成多种类型的纤维。在实施方案中，纤维可以是固体、中空的、多孔的和它们的组合。纤维可以通过任何合适的方法来形成，包括电纺丝，溶液流延，挤出和它们的组合。由氧化纤维素溶液形成的纤维可以用于形成多种医疗产品。根据本发明的医疗产品可以是任何适合贴附或植入组织中的结构。由纤维形成的合适的结构例如包括膜、泡沫、切片，纱布、组织移植、支架、台架、支持物、创伤敷料、筛网和/或组织增强物。在实施方案中，纤维可以用于形成无纺布筛或条带，其可以用作被动止血钳。由于其透过液体和/或气体的能力，由氧化纤维素溶液形成的纤维性筛的无纺布结构使其本身用作创伤敷料。

氧化纤维素溶液还可以用于形成膜和/或涂层。涂层或膜可以通过沉积溶液本身，或通过溶液流延、浸渍、分层、压延、喷雾和它们的组合在基质上形成，蒸发溶剂，由此在基质上形成膜或涂层。膜可以通过使用本领域技术人员眼界内的任何合适的方法将溶液应用在产品或其一部分的表面上而混合在其他医疗产品上。

在实施方案中，氧化纤维素溶液可以用于形成可喷雾的传质工具。在其他实施方案中，氧化纤维素溶液可以与以下将进一步详细描述的形成凝胶或影响氧化纤维素沉淀的第二组分结合。

形成纤维、膜和其他医疗产品的溶液的粘度可以进行调整以获得期望的粘度。这可以通过添加一种或多种增塑剂实现。合适的增塑剂的实例包括任何可生物相容的增塑剂，例如卵磷脂、癸二酸二丁酯、柠檬酸、醇酯、聚乙二醇、聚丙二醇和它们的组合。

由溶解的氧化纤维素形成的医疗产品的用途包括封闭和修复内脏器官壁缺陷和切口，包括由于肿瘤切除造成的切口、伤口、血管愈合和瘘管。该医疗产品可以改进胃肠道接合处的修复并且可以对瘘管的管理和防止提供有效的途径。该医疗产品还可以防止息肉切除术的并发症(例如出血和穿孔)。在实施方案中，该医疗产品可以用筛网(例如形成基质筛网)增强用于腹股沟疝和/或切口疝的处理。

由氧化纤维素形成的医疗产品的体外和体内生物降解的速率可以通过控制最终得到的(例如溶解和处理的)氧化纤维素的初始氧化度进行调节。氧化纤维素的氧化度越高，其体外和体内生物降解的速率就越快。本发明提供了在溶解处理期间使氧化纤维素的降解最小化的方法，由此提供了具有期望氧化度的纤维素。更进一步地，纤维素的生物降解性可以通过在溶解期间调整分子量和氧化度进行控制以提供具有预期降解概况的预期降解的氧化纤维素。可预期的降解概况表示已知的或预定的用于估计氧化纤维素降解持续时间的降解速率。无实质影响氧化度的溶解和处理允许可预料的最终产品(例如医疗产品)的生物可降解性。因此，氧化纤维素基体的降解速率的控制可以通过改变氧化度实现，由此控制生物活性剂的洗脱速率。氧化纤维素的氧化度还可以在溶解过程中调整以获得期望的氧化度。

溶解的氧化纤维素还可以用于形成原位凝胶。氧化纤维素溶液例如可以使用以上列出的方法、例如溶剂、条件等制备。氧化纤维素溶液可以具有大约7.0到大约10.0的pH值，在实施方案中其为大约8.0到9.5。氧化纤维素溶液可以与凝胶化组分结合，该组分一旦与氧化纤维素溶液接触就会形成凝胶。凝胶可以用作密封组织的粘合剂和/或提供用于以下将进一步详细描述的生物活性剂的递送。

在实施方案中，氧化纤维素溶液可以与阳离子物质(例如阳离子多糖)结合。在实施方案中，阳离子多糖可以是壳聚糖，羧甲基甲壳素，瓜尔胶和它们的组合，任选在溶液中。壳聚糖是N-乙酰基-D-葡萄糖胺(乙酰化单元)和D-葡萄糖胺(非乙酰化单元)的天然线型共聚物。壳聚糖可以通过甲壳素的部分或全部脱乙酰化制备。甲壳素可以从天然原料中提取，例如乌贼，甲壳类动物(例如虾)的外骨骼，或从植物原料(例如蘑菇)中提取。壳聚糖还可以是合成制备的或通过改性微生物例如细菌合成。

壳聚糖与其他多糖(例如纤维素)的粘合包括不同类型的相互作用，例如静电相互作用，氢键和疏水性相互作用，其导致与氧化纤维素离子交联。在某些情况中，壳聚糖是包含NH₃ ⁺基团的阳离子聚合物。壳聚糖的正电荷伯胺基团与其他聚合物的阴离子基团相吸引。因此，壳聚糖和阴离子聚合物能够形成聚电解质络合物。聚电解质络合物的形成可改进聚合物的机械性质并且产生了新的结构，例如沉淀、膜、纤维和凝胶。

壳聚糖与其他聚合物的粘合还可以通过在粘合配方的两组分之间产生共价键增强配方的机械性质而得到促进。壳聚糖具有可以与羧基基团共价反应的NH₂基团。因此，壳聚糖可以与具有羧基基团的官能化的聚合物(例如氧化纤维素混合)。

壳聚糖可以具有大约1,000g/mol到大约5,000,000g/mol的分子量，在实施方案中，其为大约5,000g/mol到大约220,000g/mol。在实施方案中，壳聚糖具有大约450,000g/mol到大约550,000g/mol的高分子量(HMW)。在其他实施方案中，壳聚糖具有大约50,000g/mol到大约150,000g/mol的低分子量(LMW)。

在实施方案中，壳聚糖溶液可以通过使用化学计量量的酸(例如盐酸或乙酸)将壳聚糖溶解在蒸馏水中，以保证所有NH₂基团完全质子化。最终的溶液可以包含大约0.5％(w/w)到大约5％(w/w)的壳聚糖，在实施方案中其为大约2％(w/w)到大约4％(w/w)的壳聚糖。壳聚糖溶液可以具有大约1.0到大约7.0的pH值，在实施方案中其为大约2.0到大约6.0。壳聚糖溶液的较低pH值允许pH值敏感性生物活性剂悬浮在氧化纤维素或壳聚糖中的一种溶液中而不会损害pH值敏感性生物活性剂的生物活性。

在实施方案中，会在高pH值被降低或破坏了生物活性的生物活性剂，例如包封了多肽的化学治疗剂可以悬浮在壳聚糖溶液中并且其一旦与氧化纤维素溶液接触就混合到原位形成的凝胶中。这种凝胶可以固定在目标位置上，例如器官、组织等并且锚定包封的肽，所述肽之后可以释放。一旦形成，得到的凝胶可以是中性pH值，或者可以使用壳聚糖溶液或氧化纤维素溶液的pH值调整该pH值以提供对需要保持的肽的生物活性友好的pH值。

另一种合适的用于与氧化纤维素溶液凝胶化的组合物包括多价阳离子的水溶液，其通过氧化纤维素和阳离子的离子交联形成凝胶。合适的阳离子包括但不限于钙(Ca⁺²)、钡(Ba⁺²)、锌(Zn⁺²)、镁(Mg⁺²)、铁(Fe⁺²，Fe⁺³)、铂(Pt⁺⁴)、铬(Cr⁺⁶)和它们的组合。在实施方案中，阳离子可以通过将合适的阳离子盐溶解在合适的溶剂，例如水、甲醇、乙醇和它们的组合的溶剂中而引入，所述盐包括但不限于卤化物、硫酸盐、碳酸盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、氧化物和它们的组合，等等。阳离子的存在量可为溶液重量的大约0.01％到大约25％，在实施方案中其为溶液重量的大约1％到大约18％，在实施方案中，其为溶液重量的大约2％到大约15％，以获得相对氧化纤维素溶液期望的混合比例。氧化纤维素溶液和阳离子溶液形成可逆的离子交联凝胶。在实施方案中，该凝胶可以通过添加包括具有大于7.0的pH值的水溶液的阴离子溶液而进行可逆操作，例如尿素溶液，氨水，氨基酸(例如赖氨酸和氨基乙酸)，阴离子多糖，例如藻酸盐，右旋糖苷，羧甲基纤维素和它们的组合。

氧化纤维素溶液还可以与沉淀和/或凝胶化组合物接触，其通过氧化纤维素的稀释和/或沉淀形成凝胶。沉淀可以通过使氧化纤维素溶液与包括溶剂或非溶剂的组合物接触而实现。合适的凝胶化组合物包括但不限于水，盐水，磷酸盐缓冲盐水和它们的组合。在实施方案中，还可以使用羧甲基纤维素(“CMC，，)的水溶液。羧甲基纤维素以大约0.5重量％或体积％到大约5重量％或体积％的量存在于溶液中，在实施方案中其为大约1重量％或体积％到大约2重量％或体积％。

在实施方案中，任何具有一种或多种伯胺(包括但不限于三赖氨酸，白蛋白、聚乙二醇胺和它们的组合)的交联剂的水溶液，可以用作沉淀凝胶化组合物。在其他实施方案中，任何合适的席夫碱化合物的水溶液也可以用作沉淀凝胶化组合物。本发明中使用的术语“席夫碱”化合物表示任何具有包括碳-氮双键且氮原子与具有通式的R₁R₂C＝NR₃的芳基或烷基基团相连的官能团的化合物，其中R₃与R₁和R₂中的至少一个是芳基或烷基基团。合适的席夫碱化合物包括但不限于阿莫西林，头孢氨苄，2，2-二甲基苯并咪唑啉，2-甲基-2-乙基苯并咪唑啉，2-甲基-2-丙基苯并咪唑啉，2-甲基-2-丁基苯并咪唑啉，2-甲基-2-己基苯并咪唑啉，2-甲基-2-癸基苯并咪唑啉，2，2-二甲基-5-甲基苯并咪唑啉，2-甲基-2-丁基-6-甲基苯并咪唑啉，2，2-二乙基苯并咪唑啉，2，2-二乙基苯并咪唑啉，2-乙基-2-己基苯并咪唑啉，2-甲基-2-异戊基-5-甲基苯并咪唑啉，2，2-二辛基苯并咪唑啉，2，2-二癸基苯并咪唑啉，2-丙基-2-戊基苯并咪唑啉，2，2-二乙基-6-乙基苯并咪唑啉，2，2-二丙基-5-异丙基苯并咪唑啉，2，2-二丙基-5-甲基苯并咪唑啉，2，2-二丁基-6-甲基苯并咪唑啉，2，2-二丁基-6-十二烷基苯并咪唑啉，2-甲基-2-丙烯基苯并咪唑啉，2-乙基-2-丙烯基-5-甲基苯并咪唑啉，2-甲基-2-丁烯基苯并咪唑啉，2-乙基-2-丁烯基-6-甲基苯并咪唑啉，2，2-二己基苯并咪唑啉，2，2-二己基-5-甲基苯并咪唑啉和它们的组合。席夫碱化合物和/或小分子交联剂溶液与氧化纤维素溶液的接触导致氧化纤维素的共价交联，其由此制备了凝胶。在实施方案中，水溶液可以包括CMC以及席夫碱化合物。

在实施方案中，一种或多种丙烯酸类聚合物的溶液也可以用于沉淀氧化纤维素以形成根据本发明的凝胶。合适的丙烯酸类聚合物包括但不限于基于甲基丙烯酸甲酯，丙烯酸羟乙酯，甲基丙烯酸羟乙酯，丙烯酸甘油酯，甲基丙烯酸甘油酯，丙烯酸，甲基丙烯酸，丙烯酰胺，甲基丙烯酰胺和它们的组合的那些。合适的溶剂包括丙酮、乙酸乙酯、二甲醚和它们的组合。

一旦氧化纤维素溶液与沉淀组合物接触，通过用于形成氧化纤维素溶液的溶剂的稀释并且后续沉淀氧化纤维素而原位形成凝胶。由于氧化纤维素溶液的极性溶剂与水和/或上述有机溶剂混溶，因此，氧化纤维素因为溶剂的稀释而以凝胶的形式沉淀出来。

在实施方案中，沉淀组合物可以包括生物活性剂，其可以悬浮在沉淀组合物中。在实施方案中，生物活性剂首先可以作为以上描述的多个微球悬浮在沉淀组合物中。然后微球可以再悬浮在氧化纤维素组合物和/或凝胶化组合物中。得到的氧化纤维素凝胶阻止了微球从目标位置上的迁移。

正如以上指出的，通过氧化纤维素溶液和凝胶化组合物的溶液形成的凝胶可以用于将生物活性剂递送到组织，或者凝胶可以用于形成包含生物活性剂的制品或在其上的涂层。凝胶将生物活性剂、微球、微粒或它们的组合锚定在目标位置上，例如器官、组织等。包含生物活性剂的微球和微粒可以进一步使用以上描述的方法通过在微球或微粒形成之前将期望的生物活性剂悬浮在氧化纤维素溶液中而形成。得到的颗粒可以悬浮在氧化纤维素溶液中，其之后可以与阳离子和/或壳聚糖溶液结合。这可以用于在期望的位点上保护生物活性剂，包括肿瘤切除位点处的化学治疗剂(例如顺-二氯二氨合铂(II))，以便由此提供从保护性的凝胶和/或微粒中持续释放化学治疗剂。

凝胶化组合物和/或氧化纤维素溶液可以是液体形式并且可以放置在注射器或任何其他合适的递送工具中，例如喷雾器，用于即刻或推迟使用。该溶液可以放置在不同体积的递送工具中以便达到每种组分的特定比例。

溶液可以集中的应用于期望的组织位点以便在其上形成凝胶。本发明中使用的术语“集中”表示在应用处理(例如中间物流)期间或者在基质的表面上，应用于基质(例如组织，医疗产品等)的组合物至少部分覆盖于其上。

用于形成凝胶的溶液还可以直接涂布在基质，例如筛网上。该基质可以通过在期望的溶液中浸泡并且干燥(例如在烘箱中或在层流净化器中)而制备。在实施方案中，该方法可以重复多次以保证展现出用于选择性的用途展示(例如腹膜外或腹膜后筛网的固定、皮瓣的封闭等)所需粘度性质的合适的涂层。

可以调整每种组分的比例以提供期望的配方。每种配方的特征都在于其混合比(MR)。本发明中使用的术语“混合比”表示相对于存在于氧化纤维素上的游离羧基基团的量来说，造成凝胶化的化合物和/或反应性基团的量，例如壳聚糖的游离胺基和/或阳离子的量。该混合比可以至少为大约1，在实施方案中为大约1到大约40，在其他实施方案中为大约10到大约30。在实施方案中，凝胶的每种组分都可以在用于pH调整之前用缓冲液稀释。

本发明还提供了制造微球的组合物和方法，所述微球其中具有包封了一种或多种APIs或生物活性剂的额外的微球。图2显示了其中包封了一种或多种微球22的微球20。本发明中使用的“多重包封的微球”表示在单个较大的微球20中包封一种或多种小微球22，例如颗粒、球体、胶囊和它们的组合。在实施方案中，多重包封的微球以相同或不同的负载水平包封一种或多种生物活性剂。

在所谓“初级包封”中，可溶性氧化纤维素可以用于包封生物活性剂、水溶性化合物、水敏感性化学治疗剂和/或活性药物成分，由此形成氧化纤维素微球，例如微球22，如上所述。可溶性氧化纤维素的初级包封可以使用基于乳液的溶剂蒸发和/或萃取方法进行，包括但不限于单-乳液法，例如水包油(o/w)和油包水(w/o)，双-乳液法，例如水包油-油包水(w/o/w)和水包油-油包固体(s/o/w)，以及基于非乳液的方法，例如流化床、喷雾干燥和流延/研磨法。初级氧化纤维素微球之后可以进一步包封在其他可生物降解的聚合物中，而不是氧化纤维素中，在所谓“二级包封”中形成包封了微球22的微球20。

本发明中使用的与材料有关的术语“可生物降解的”指的是材料能够被身体无害吸收的性质。在本申请中，术语“可生物降解的”、“可生物再吸收的”、“可生物侵蚀的”和“可生物吸收的”可互换使用并且意在表示材料在身体条件(例如酶降解或水解)下分解或者失去结构完整性、或者在体内在生理条件下崩解(物理或化学)以至于降解产物在给定的时间段后被身体排出或吸收的特征。该时间段可以不同，从大约1小时到大约几个月或更长，这取决于材料的化学特性。在实施方案中，该材料可以不完全被吸收，只要未吸收的物质不会造成健康风险并且是可生物相容的。

氧化纤维素微球可以使用上述油包油型乳化过程形成。然后氧化纤维素微球可以通过使用基于乳液的溶剂蒸发法进一步微囊化，其中氧化纤维素微球悬浮在可生物降解聚合物的溶液中，或者交联并且进一步在另一种氧化纤维素微囊化过程中包封。该溶液可以包括任何合适的可生物降解聚合物、溶剂和任选的乳化剂和/或表面活性剂。在实施方案中，额外的生物活性剂可以添加到可生物降解聚合物溶液中，其可以与包括在氧化纤维素微球中的生物活性剂相同或不同。在进一步的实施方案中，一些轮次的包封可以不包括基于期望用途和/或者表现出多重包封微球(例如改变释放速率)的特征的生物活性剂。

用于形成根据本发明的微球的合适的可生物降解聚合物包括但不限于脂肪族聚酯，聚酰胺，多元胺，聚亚烃基草酸盐，聚(酸酐)，聚酰胺酯，共聚(醚-酯)，包括酪氨酸衍生的碳酸酯的聚(碳酸酯)，聚(羟基链烷酸酯)如聚(羟基丁酸)、聚(羟基戊酸)和聚(羟基丁酸酯)，聚酰亚胺碳酸酯，聚(亚氨基碳酸酯)如聚(双酚A-亚氨基碳酸酯等)，聚正酯，包括包含胺基基团的那些聚氧杂酯(polyoxaesters)，含磷氮链聚合物，聚(富马酸亚丙酯)(poly(propylene fumarate))，聚氨酯，聚合物药物如聚二氟尼松、聚阿司匹林和蛋白质治疗剂，生物改性(例如蛋白质、肽)的可生物吸收聚合物和共聚物、嵌段共聚物、均聚物、共混物和它们的组合。

更特别的，脂肪族聚酯包括但不限于聚丙交酯，聚丙交酯-共-乙交酯，聚丙交酯-聚己内酯，丙交酯(包括乳酸，D-，L-和内消旋丙交酯)的均聚物和共聚物，乙交酯(包括乙醇酸)，ε-己内酯，p-二氧环己酮(1，4-二氧六环-2-酮)，三亚甲基碳酸酯(1，3-二氧六环-2-酮)，三亚甲基碳酸酯的烷基衍生物，Δ-戊内酯，β-丁内酯，γ-丁内酯，ε-癸内酯，羟基丁酸酯，羟基戊酸酯，1，4-二氧杂环庚烷-2-酮(包括其二聚体1，5，8，12-氧杂环十四烷-7，14-二酮)，1，5-二氧杂环庚烷-2-酮，6,6-二甲基-1，4-二氧六环-2-酮，2,5-二酮吗啉，新戊内酯，α，α-二乙基丙内酯，碳酸亚乙酯(ethylene carbonate)，草酸亚乙酯(ethyleneoxalate)，3-甲基1，4-二氧六环-2，5-二酮，3，3-二乙基1，4-二氧六环-2.5-二酮，6,8-二氧杂二环辛烷-7-酮(6,8-dioxabicycloctane-7-one)和它们的聚合物共混物以及共聚物。

合适的用于形成用于二级包封的不连续相的可生物降解聚合物溶液的溶剂包括但不限于乙酸乙酯、二氯甲烷、六氯乙烷，三氯乙烯，六氟异丙醇(HFIP)，氯仿，四氢呋喃，二甲基甲酰胺以及在ICH Q3C(国际标准联合会-用于医药工艺的残留溶剂)中列出的那些药用溶剂和它们的组合。

乳化剂以溶剂重量和/或体积的大约0.01到大约25％的量存在，在实施方案中，其为溶剂重量和/或体积的大约0.1％到大约10％，在其他实施方案中其为溶剂重量和/或体积的大约0.5％到大约5％。对于油包油的方法，乳化剂的使用是任选的。合适的乳化剂包括但不限于水溶性聚合物，例如聚乙烯醇(“PVA”)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)、PLURONICS^TM、TWEENS^TM、多糖、磷脂和它们的组合。

用于二级包封的连续相还可以包括表面活性剂以稳定微球并且调整生物活性剂的负载效率。可以使用一种、两种或多种表面活性剂。可以使用的表面活性剂的实例例如包括聚丙烯酸，纤维素甲醚(methalose)，甲基纤维素，乙基纤维素，丙基纤维素，羟乙基纤维素，羧甲基纤维素，聚乙二醇十六烷基醚，聚乙二醇十二烷基醚，聚乙二醇辛基醚，聚乙二醇辛基苯基醚，聚乙二醇油烯基醚，聚乙二醇山梨醇单月桂酸酯，聚乙二醇十八烷基醚，聚乙二醇壬基苯基醚，二烷基苯氧基聚(乙烯基氧)乙醇，泊洛沙姆(polyoxamers)，它们的组合，等等。

氧化纤维素微球的二级包封可以包括交联所述微球以稳定后续的包封并且之后在上述可生物降解聚合物溶液中形成微球的悬浮体。氧化纤维素微球可以使用任何上述的阳离子物质交联。然后悬浮液涡流或密切搅拌以形成乳液。在实施方案中，氧化纤维素微球可以即刻悬浮在可生物降解聚合物溶液中而不必交联。

基于乳液的溶剂蒸发可以通过以大约25rpm到大约60,000rpm的速率搅拌悬浮液或乳液而实现，在实施方案中，其为大约100rpm到大约15,000rpm，在进一步的实施方案中其为大约250rpm到大约5,000rpm。该乳液可以搅拌大约5秒到大约4小时的一段时间，在实施方案中其为15秒到大约1小时。搅拌还可以用于从乳液中除去不连续相溶剂，保留双重包封的微球。

对于第二轮包封，溶剂可以蒸发掉和/或萃取出来。溶剂蒸发和/或萃取后，乳液保留了由包封了氧化纤维素微球的可生物降解聚合物形成的微球。该乳液还包括悬浮在乳液中游离的未包封的氧化纤维素微球。双重包封或多重包封的微球的尺寸可以是大约0.001μm到大约2mm，在实施方案中微球的尺寸可以是大约0.01μm到大约1mm，在进一步的实施方案中微球的尺寸可以是大约0.1μm到大约500μm。微球的尺寸可以通过调节搅拌的持续时间和速度、温度和/或压力、改变连续相和不连续相的比例、搅拌期间产生的剪切速率和可生物降解聚合物的分子量和浓度、乳化剂和表面活性剂以及本领域技术人员眼界中的其他变量来进行调整。

通过氧化纤维素的初级包封保护了生物活性剂不受在任何后续包封中使用的有机溶剂的损害。氧化纤维素可以用于包封亲水性和疏水性生物活性剂。虽然疏水性生物活性剂也可以使用包括其他可生物降解聚合物的乳液法包封，但是通过溶解的氧化纤维素进行的亲水性生物活性剂的包封是特别方便的。

可溶性氧化纤维素通过溶解在上述极性溶剂中，允许包括包封在氧化纤维素中的亲水性和/或疏水性生物活性剂的微球的形成，而其他可生物降解聚合物可以用于包封疏水性生物活性剂。氧化纤维素用于第一轮微包封是有利的，这是因为它并不溶解在大多数的极性或非极性溶剂中，除了以上列举出的与氧化纤维素的溶解有关的溶剂，因此这消除了第二轮包封期间微球溶解的风险。这允许之后又可以包封在另一种微球中的疏水性和亲水性生物活性剂的微囊化。

在实施方案中，任何微球的第一层可以使用可生物降解聚合物而不是上述包封法中使用的氧化纤维素形成，之后它可以进一步包封在氧化纤维素微球中。使用可生物降解聚合物的生物活性剂的初级包封可以使用基于乳液的溶剂蒸发法进行，其包括但不限于单-乳液法，例如水包油(o/w)和油包水(w/o)，双-乳液法，例如水包油-油包水(w/o/w)和水包油-油包固体(s/o/w)，以及基于非乳液的方法，例如流化床、喷雾干燥和流延/研磨法。

其中生物活性剂首先包封在可生物降解聚合物中，生物活性剂可以溶解在溶液中以形成不连续相。合适的用于溶解生物活性剂的溶剂包括水、盐水和醇，其实例包括甲醇、乙醇、它们的组合，等等。可生物降解聚合物还可以使用上述溶剂溶解以形成不连续相。如果期望在微球的负载中减小颗粒尺寸则可以将均质化用于不连续相。均质化可以通过现有技术中本领域技术人员眼界中的任何合适的方法进行，其包括但不限于搅拌、研磨、热能、超声波能、它们的组合，等等。

基于乳液的溶剂蒸发可以通过以大约25rpm到大约60,000rpm的速率搅拌悬浮液或乳液实现，在实施方案中其为大约100rpm到大约15,000rpm，在其他实施方案中其为大约250rpm到大约5,000rpm。乳液可以搅拌大约5秒到大约4小时的一段时间，在实施方案中其为大约15秒到大约1小时。搅拌还可以用于从乳液中除去不连续相溶剂，保留双重包封的微球。

溶剂蒸发后，乳液保留了由包封了生物活性剂的可生物降解聚合物形成的微球。乳液还包括悬浮在乳液中的游离的未包封的一部分生物活性剂。微球的尺寸可以是大约0.001μm到大约2mm，在实施方案中，微球的尺寸可以是大约0.01μm到大约1mm，在进一步的实施方案中，微球的尺寸可以是大约0.1μm到大约500μm。微球的尺寸可以通过调节搅拌的持续时间和速率、温度和/或压力、改变连续相和不连续相的比例、搅拌期间产生的剪切速率以及可生物降解聚合物的分子量和浓度、乳化剂和表面活性剂以及现有技术中本领域技术人员眼界内的其他变量而进行调整。

由可生物降解聚合物而不是氧化纤维素形成的微球，之后可以悬浮在氧化纤维素的溶液中，其根据以上描述的方法形成。在通过油包油-油包固体溶剂萃取法形成可溶性氧化纤维素微球时，可以将可生物降解聚合物微球添加到氧化纤维素溶液中并且充分混合以保证均匀的悬浮液。氧化纤维素可以溶液重量的大约1％到45％的量存在于溶液中，在实施方案中，其为溶液重量的大约5％到大约30％，在实施方案中其为溶液重量的大约10％到大约20％。在实施方案中，其他生物活性剂可以添加到氧化纤维素溶液中，所述其他生物活性剂可以与可生物降解聚合物微球中的生物活性剂(例如亲水性和疏水性生物活性剂)相同或不同。

微球、氧化纤维素溶液和如果存在的其他生物活性剂形成不连续相，被逐滴添加到包括形成连续相的液体的容器中。连续相液体可以是与用于形成氧化纤维素溶液的极性溶剂不混溶的任何合适的非极性化合物。合适的连续相液体包括但不限于轻质、中等或重质矿物油(例如具有大约40个碳原子到大约60个碳原子的链烷烃混合物)、棉籽油和它们的组合。其他连续相可以在乳化期间加入。不连续相液体可以连续相液体体积的大约2％到大约40％的量存在，在实施方案中其为大约5％到大约20％。

基于乳液的溶剂蒸发可以通过以大约25rpm到大约60,000rpm的速率搅拌悬浮液或乳液而实现，在实施方案中，其为大约100rpm到大约15,000rpm，在其他实施方案中其为大约250rpm到大约5,000rpm。该乳液可以搅拌大约5秒到大约4小时，在实施方案中其为15秒到大约1小时。搅拌还可以用于从乳液中除去不连续相溶剂，保留双重包封的微球。

一旦完成不连续相溶液向连续相中的递送，可以向乳液中加入第三相以除去或萃取来自不连续相液体的溶剂。合适的第三相液体包括任何可以与连续相混溶且可以与不连续相溶剂混溶的化合物。由于溶剂在连续相液体中不混溶但是在第三相液体中混溶，因此发生溶剂的萃取。合适的第三相液体包括肉豆蔻酸异丙酯、己烷、甘油三酯和它们的组合。第三相液体以连续相液体体积的大约130％到大约170％的量存在，在实施方案中，其为大约140％到大约150％。

从不连续相中萃取溶剂方便了包括通过可生物降解聚合物而不是氧化纤维素包封生物活性剂并且之后进一步通过氧化纤维素包封的双重包封微球的形成。该乳液可以搅拌大约1小时到大约24小时，在实施方案中其为大约2小时到大约5小时以帮助从微球中萃取极性溶剂。之后可以通过过滤收集微球并且洗涤(例如用正庚烷)以除去微球表面上任何痕量的连续相和不连续相液体。然后可以收集微球并且将其转移到氮气或氩气覆盖的玻璃闪烁管中。在实施方案中，微球可以用阳离子溶液交联并且之后干燥。

在其他实施方案中，如图3所示，双重包封的微球32，例如包封了微球34的那些之后可以进一步包封在由可生物降解聚合物或氧化纤维素形成的其他微球30中，这取决于用于第二层包封中的物质。换句话说，氧化纤维素用于每隔一轮(例如交替)的包封(例如微球30和34)，相邻轮次(例如微球32)使用可生物降解聚合物而不是氧化纤维素形成。因此，在其中溶解的氧化纤维素用于初始轮次包封(例如形成微球34)的实施方案中，可生物降解聚合物可以用于第二(例如形成微球32)、第四、第六等轮次并且氧化纤维素用于第三(例如形成微球30)、第五、第七等轮次。反过来，在其中可生物降解聚合物用于初始轮次包封(例如形成微球34)的实施方案中，溶解的氧化纤维素可以用于第二(例如形成微球32)、第四、第六等轮次，且可生物降解聚合物用于第三(例如形成微球30)、第五、第七等轮次。使用溶解的氧化纤维素和/或可生物降解聚合物的后续包封可以以与相应的包封步骤相关的上述方式进行。

多重包封的微球提供了多种治疗优点，例如举例来说有如图4和5的曲线40和50显示的多重生物活性剂的连续释放。曲线40说明了多重包封的微球的释放概况，例如微球30，其具有三种分别包封在微球30、32、34中的每一个中的独特的生物活性剂A、B和C。随着微球30降解，释放出生物活性剂A，对应于微球30的降解的释放概况随着时间衰减。这之后，首先包封的微球32开始降解，由此释放出生物活性剂B。最后，一旦微球34开始降解，就释放出第三生物活性剂C。生物活性剂A、B和C的释放概况可以通过调节包封材料(例如氧化纤维素和/或可生物降解聚合物)的量调节。在实施方案中，该释放概况可以交迭以至于一种生物活性剂(例如A)与另一种生物活性剂(例如B)同时释放。在其他实施方案中，基于期望的用途和治疗需要，每种生物活性剂的释放概况可以是离散的(例如并不交迭)。

曲线50说明了多重包封微球的释放概况，例如微球30，其具有包封在微球30、32和34中的每一个中的相同的生物活性剂A。与不同的生物活性剂A、B和C的多重释放概况不同，包封了单独生物活性剂A提供了突释样(burst-1ike)的释放概况，即随着各微球30、32和34降解，生物活性剂A的供给剂量增加。此外，多个层提供了有效的方法以便进一步使生物活性剂的释放速率慢下来。

多重包封的微球提供了独特的优点，这是使用常规的在单一的可生物降解微球中包封了一种或多种生物活性剂的微球不能达到的。在单一的微球中包封多种生物活性剂提供了多种生物活性剂的同时释放，而不是如图4所示的逐步释放轮廓。对于单独的生物活性剂，单一的微球不能在其降解期间进一步提供如图5所示的生物活性剂的突释和/或脉冲式释放。

多重包封的微球提供了更有效的生物活性剂的负载。在实施方案中，当使用油包油(o/o)乳液溶剂蒸发法将水溶性亲水性生物活性剂包封在作为包封的第一层的氧化纤维素中时，水溶性亲水性生物活性剂在富含油的疏水环境中没有损失。在第二轮次微囊化期间，例如在水包油o/w法中，水溶性亲水性生物活性剂已经具有了保护层，其再次降低了生物活性剂到水性介质中的损失，产生了较高的生物活性剂负载，以及之后的双重包封。更有效的生物活性剂负载的优点对于包封高亲水性生物活性剂分子是有用的。

多重包封的微球更进一步的提供了脆弱的，即对环境条件易受损的生物活性剂(例如生物制剂或蛋白质治疗剂)的额外保护。多重包封在控制它们的释放，同时保持它们的活性并且保护它们不变性方面提供明显的优点。这使得例如当用氧化纤维素进行第一层的包封时，提供了微囊化的第二(或之后的)轮次中防止任何苛刻条件的保护性屏障。这种优点开启了一些非常脆弱的生物治疗剂(例如蛋白质治疗剂)的有效的包封和控制释放的可能性。

对于图2，多种包封还提供了同时释放多种生物活性剂的能力。生物活性剂A、B和C可以单独包封在微球22中，其之后包封在微球20中，这允许生物活性剂A、B和C同时释放，而同时保证这些分子不会在释放前相互反应。此外，外部包封可以不含任何生物活性剂并且可以起到缓冲防止生物活性剂释放，直到外部包封生物降解。

以下实施例用于说明本发明的实施方案。这些实施例仅仅意在说明并且并不意在限制本发明的范围。此外，除非另有说明，份数和百分数均为重量。本发明中使用的“室温”或“环境温度”指的是大约20℃到大约25℃的温度。

实施例

对比实施例1

本实施例描述了具有0.6的氧化度的氧化纤维素在包括8重量％的氯化锂(LiCl)和N-甲基-2-N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)的溶液中的不完全溶解。

首先将大约1.6克(g)的LiCl溶解在大约20毫升(mL)的DMAc中以形成8％的LiCl的DMAc溶液。将大约20毫升(mL)8％的LiCl的DMAc溶液添加到反应器容器中，并且在氩气中加热到大约160℃。将大约149毫克(mg)具有0.6的氧化度的氧化纤维素加入反应器容器中。混合物加热大约1.17小时，冷却到环境温度并且将其从反应器容器中倒出。样品并没有充分溶解，并且观察到明显的褪色，这表明氧化纤维素发生了进一步的氧化。

对比实施例2

本实施例描述了具有0.6的氧化度的氧化纤维素在8重量％LiCl的DMAc溶液中的不完全溶解。

将大约20mL以上对比实施例1中制备的8重量％LiCl的DMAc溶液和大约90mg的具有0.6的氧化度的氧化纤维素添加到反应器容器中。将混合物在氩气下加热到大约150℃并且加热大约5.3小时，冷却到环境温度并且将其从反应器容器中倒出。样品并没有充分溶解，并且观察到明显的褪色，这表明氧化纤维素发生了进一步的氧化。

对比实施例3

本实施例描述了具有0.6的氧化度的氧化纤维素在水中的预处理。

将大约22mg具有0.6的氧化度的氧化纤维素放置在反应器容器中并且向其中添加大约0.66克去离子水。该混合物搅拌大约2分钟到大约3分钟的一段时间。然后在真空中除去水，并且将大约20mL来自对比实施例1的8重量％LiCl的DMAc溶液加入反应器容器中。将混合物加热到大约155℃并且加热大约4.6小时。然后冷却到环境温度并且将其从反应器容器中倒出。样品并没有充分溶解，因此氧化纤维素在水中的预处理对溶解并没有明显的影响。

对比实施例4

本实施例描述了在惰性气氛中纤维素在包括1重量％LiCl的N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)溶液中的溶解。

将大约20mL的NMP和大约80mg的未改性纤维素添加到反应器容器中。该混合物在氩气中加热到大约150℃并且加热大约6小时，之后冷却到大约110℃，这之后将大约0.2g的LiCl添加到反应器容器中。在冷却到大约80℃之前，该反应器容器在大约110℃下保持额外的1小时。反应器容器在大约80℃下保持大约14.5小时，这之后观察到样品并没有溶解并且在反应器容器中观察到未改性的纤维素的断片，这表明1％LiCl的NMP溶液不能完全溶解纤维素。

实施例1

本实施例描述了具有0.6的氧化度的氧化纤维素在包括1重量％LiCl的N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)溶液中的溶解。

将100mL三口圆底烧瓶用作反应器容器并且其安装有气体入口、机械搅拌器和气体出口，然后将其与流速监控器相连。该烧瓶用氩气以大约0-4升每分钟(L/min)的速率净化5分钟，其通过流速监控器测量为每秒大约5个气泡。

将大约20mL无水NMP吸液到烧瓶中，然后其再次用氩气净化。将氩气流速调节到大约0.2L/min的速率或者在流速监控器上观察为每秒大约2个气泡到每秒大约3个气泡。

将氦气管线连接到烧瓶上并且使氩气停止流动。将氦气管线插入反应器中并且淹没在液体水平线下，且将氦气流的流速设定为大约0.2L/min以引入NMP中。引入气体大约45分钟后，去掉氦气管线并且再次以大约0.2L/min的速率开启氩气流动。

将大约80mg具有0.6的氧化度的氧化纤维素切割成大约0.5cm×0.5cm的正方形片。将氩气流临时提高到大约0.4L/min并且将氧化纤维素加入烧瓶中，这之后将氩气流回复到大约0.2L/min。

混合物在大约200转每分钟(rpm)下搅拌。使用温度控制加热套将烧瓶加热到大约130℃到大约135℃。随着混合物搅拌，在氩气中该温度保持大约2小时。之后，将混合物冷却到大约100℃到大约110℃的温度。

用氩气净化准备添加LiCl的闪烁管。在管中称重大约0.2克的无水LiCl。临时暂停搅拌并且将氩气流提高到大约0.4L/min，期间将LiCl添加到反应器容器中。添加完LiCl之后，氩气流回复到大约0.2L/min。以大约450rpm重新开始搅拌大约5分钟，并且之后将其降低到大约200rpm。

将温度保持在大约100℃到大约110℃。加入LiCl之后大约5分钟用肉眼观察混合物并且之后每15分钟观察一次以确定氧化纤维素是否溶解。观察到氧化纤维素完全溶解。终止加热并且将溶液冷却到环境温度，且以大约200rpm搅拌。然后将该溶液转移到氩气气氛中的闪烁管中并且密封。将该溶液储存在环境条件下。

实施例2

本实施例描述了在环境气氛下具有0.6的氧化度的氧化纤维素在包括l重量％LiCl的NMP溶液中的溶解。

除了在环境气氛中进行溶解之外，根据以上实施例1所列出的内容进行相同的处理。观察到氧化纤维素完全溶解。

实施例3

本实施例描述了在环境气氛下没有氦气净化时具有0.6的氧化度的氧化纤维素在包括1重量％LiCl的NMP溶液中的溶解。

除了在环境气氛中并且在没有氦气净化下进行溶解之外，根据以上实施例1所列出的内容进行相同的处理。观察到氧化纤维素完全溶解。

下表1总结了对实施例1-3的溶解的氧化纤维素测定的分子量。

表1

实施例	Mn(g/mol)
		1	2.7×10^5
2	1.4×10^5
		3	1.8×10^5

如表1所示，实施例1溶解的氧化纤维素具有最高的分子量，而实施例2和3溶解的氧化纤维素具有低得多的分子量。不受任何特殊理论的约束，可以认为在环境气氛下进行溶解使氧化纤维素降解，这导致较低的分子量。

实施例4

本实施例描述了未改性的纤维素在8重量％LiCl的NMP溶液中的溶解并且使用凝胶渗透色谱(GPC)分析实施例1的溶解的氧化纤维素，本实施例未改性的纤维素和普鲁兰多糖(pullalan)标准样品。

根据以上实施例l所列出的内容进行相同的处理，除了溶解大约80mg未改性的纤维素，将未改性的纤维素和溶剂的混合物加热到大约145℃到大约155℃，并且将1.6克无水LiCl加入混合物中以获得8重量％LiCl的NMP溶液，这是因为如对比实施例4所示l％的LiCl溶液是无效的。此外，加入LiCl之后，温度在大约100℃到大约110℃下保持至少1小时。观察到未改性的纤维素完全溶解。

使用GPC分析实施例1溶解的纤维素样品、本实施例未改性的纤维素和普鲁兰多糖标准样品。制备用于GPC的1重量％的LiCl的NMP溶液的流动相。将大约1.5升(L)NMP添加到2L容量瓶中，然后用玻璃塞给该容量瓶松松的盖上盖子。搅拌NMP。将大约20克LiCl添加到NMP中并且搅拌大约60分钟直到它溶解。将大约0.5L的NMP添加到2L的标记处并且停止搅拌。将额外的NMP添加到标记处并且通过手动翻转搅拌该溶液。将1微米的聚四氟乙烯(PTFE)滤膜放置在过滤设备中并且对其应用真空，这使得LiCl的NMP溶液流过膜，由此过滤溶液。在环境条件下储存流动相溶液。

实施例1溶解的氧化纤维素样品、实施例4未改性的纤维素和普鲁兰多糖标准样品分别通过1微米的PTFE滤膜过滤到3个分开的高效液相色谱(HPLC)瓶中。此外，还通过在单独的HPLC瓶中合并大约500微升(μL)实施例1溶解的氧化纤维素和大约500μL的普鲁兰多糖标准样品(以大约2mg/mL的浓度)制备了合并的样品。

所有的样品都使用在系列结构中具有两个300毫米(mm)×7.5mmPolymer Laboratories′PLGEL^TM柱的凝胶渗透色谱系统进行GPC分析。

来自(Wyatt Technology of Santa Barbara，CA)的HELEOS^TM II多角度激光散射系统用于绝对分子量的测定。在分子量分析期间还使用了WyattTechnology供应的与光散射检测器联用的折射率模型数字

在大约50℃的温度下以大约1mL每分钟的流动速率进行GPC，注射体积为大约100μL。图6和图7中分别显示了实施例1的氧化纤维素和实施例4的未改性纤维素的GPC色谱。

实施例5

本实施例描述了具有0.39的氧化度的氧化纤维素在8重量％LiCl的DMAc溶液中的溶解。

在氩气中将大约20mL的DMAc添加到反应器容器中，之后用氦气对其净化大约10分钟。将大约19mg具有0.39的氧化度的氧化纤维素添加到反应器容器中，开始将其加热到大约144℃。添加氧化纤维素之后，将温度升高到大约152℃并且在该温度下保持大约3.2小时。然后将反应器容器冷却到大约95℃并且向混合物中加入大约1.6克的LiCl以形成8％LiCl的DMAc溶液。然后将该混合物加热到大约95℃并且在该温度下保持大约45分钟，之后将其冷却到环境温度。该溶液在环境温度下搅拌大约64小时，并且将其从反应器容器中倒出。观察到氧化纤维素已经完全溶解。

实施例6

本实施例描述了具有0.39的氧化度的氧化纤维素在包括8.8重量％LiCl的NMP溶液中的溶解。

在氩气中将大约20mL的NMP添加到反应器容器中，之后用氦气对其净化大约1小时。将大约10.2mg具有0.39的氧化度的氧化纤维素添加到反应器容器中，开始将其加热到大约148℃到大约154℃的温度并在该温度下大约2.5小时。将反应器容器冷却到大约103℃并且将大约1.77克LiCl添加到混合物中以形成8.8％LiCl的NMP溶液。然后将该混合物加热到大约103℃到大约105℃的温度并且在该温度下大约1小时，之后将其冷却到环境温度。该溶液在环境温度下搅拌大约24小时，并且将其从反应器容器中倒出。观察到氧化纤维素已经完全溶解。

实施例7

本实施例描述了具有0.39的氧化度的氧化纤维素在包括1重量％LiCl的NMP溶液中的溶解。

在氩气中将大约20mL的NMP添加到反应器容器中，之后用氦气对其净化大约1小时。将大约11mg具有0.39的氧化度的氧化纤维素添加到反应器容器中，开始将其加热到大约143℃到大约148℃的温度并在该温度下大约2小时。然后将反应器容器冷却到大约100℃并且将大约0.20克LiCl添加到混合物中以形成1％LiCl的NMP溶液。然后将该混合物加热到大约93℃并且在该温度下大约8分钟，之后将其冷却到环境温度。该溶液在环境温度下搅拌大约24小时，并且将其从反应器容器中倒出。观察到氧化纤维素已经完全溶解。

实施例8

本实施例描述了由包括1重量％LiCl的N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)的氧化纤维素溶液形成氧化纤维素微球。

将600mL的玻璃烧杯放置在环形架上。安装具有中等剪切叶轮的恒定扭矩搅拌器，将其插入到烧杯中。将大约200mL的重质白色矿物油添加到烧杯中，期间将搅拌器设定为以大约1,500rpm的速率旋转。大约15分钟内将大约1.7克氧化纤维素溶液(NMP中的氧化纤维素)逐滴加入到搅拌中的矿物油漩涡中直到所有的溶液都加入油中以形成包括多个氧化纤维素微球的乳液。

将大约150mL肉豆蔻酸异丙酯加入到乳液中，将搅拌器速度降低至大约900rpm并且保持大约45分钟。这之后，向乳液中加入另外150mL肉豆蔻酸异丙酯以至于肉豆蔻酸异丙酯与油以大约3：2的比存在并且将旋转降低到大约600rpm。

将乳液搅拌大约2小时到大约3小时以便从氧化纤维素微球中萃取出NMP。萃取出NMP后，通过过滤收集微球。然后用足够体积的正庚烷洗涤微球以除去微球表面上任何痕量的处理油。微球干燥大约24小时。使用ZeissLeo435、扫描电镜(SEM)对收集的微球成像，其分别以100×和250×显示于图8A-B中。该SEM图像显示微球具有球形形状和光滑的外表面。

实施例9

本实施例描述了由包括l重量％LiCl的N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)溶液的15重量/体积％的氧化纤维素溶液形成负载了18重量％(理论负载量)的维生素B-12的氧化纤维素微球。

由实施例1的氧化纤维素溶液制备不连续相。将大约3克的氧化纤维素溶液与大约100毫升的氰钴胺(维生素B-12)结合。

将l升的玻璃烧杯放置在环形架上。安装具有中等剪切叶轮的恒定扭矩搅拌器，将其插入到烧杯中。将大约300mL的重质白色矿物油添加到烧杯中，期间将搅拌器设定为以大约550rpm的速率旋转。然后在大约15分钟内将氰钴胺和氧化纤维素的溶液逐滴加入到搅拌的矿物油漩涡中直到所有的溶液加入到油中以形成乳液。

将大约300mL棉籽油加入乳液中。乳液在大约900rpm下搅拌大约60分钟。这之后，向乳液中加入另外300mL棉籽油。乳液再次在大约900rpm下搅拌大约60分钟。向乳液中添加约100mL正庚烷。

乳液搅拌大约60分钟以便从氧化纤维素微粒中萃取出NMP。萃取出NMP后，通过过滤收集微粒。然后用足够体积的正庚烷洗涤微粒以除去微粒表面上任何痕量的处理油。微粒干燥大约24小时。

使用Zeiss Leo435SEM对收集的微粒成像，其分别以500×和1100×显示于图9A-B中。该SEM图像显示微粒具有织纹表面，且一些微粒被拉长，有棒状形状且另一些具有类似球形的形状。

实施例10

本实施例描述了由包括1重量％LiCl的N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)溶液的15重量/体积％的氧化纤维素溶液形成负载了40重量％的布比卡因游离碱的氧化纤维素微粒。

除了将大约253.5毫克布比卡因游离碱添加到氧化纤维素溶液中之外，按照以上实施例9列出的内容进行相同的处理。

使用Zeiss Leo435SEM对收集的微粒成像，其分别以50×和250×显示于图10A-B中。该SEM图像显示微粒具有球形形状和织纹表面。不受任何特殊理论的约束，可以认为该粗糙的表面是由氧化纤维素微粒中的布比卡因游离碱的晶体的包围所导致的。

实施例11

本实施例描述了由包括1重量％LiCl的N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)的15重量/体积％的氧化纤维素溶液形成负载了40重量％的盐酸布比卡因的氧化纤维素微粒。

除了将大约250.2毫克盐酸布比卡因添加到氧化纤维素溶液中之外，按照以上实施例9列出的内容进行相同的处理。

使用Zeiss Leo435SEM对收集的微粒成像，其分别以50×和250×显示于图11A-B中。该SEM图像显示微粒具有不规则的、结晶形状和织纹表面。不受任何特殊理论的约束，可以认为微粒的结构是由活性组分的针状晶体的特征所引起的。

实施例12

本实施例描述了由包括1重量％LiCl的N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)的15重量/体积％的氧化纤维素溶液形成负载了30重量％(理论和实际测量)的维生素B-12的氧化纤维素微球。

除了将大约200毫克氰钴胺(维生素B-12)添加到氧化纤维素溶液中之外，按照以上实施例9列出的内容进行相同的处理。

使用Zeiss Leo435SEM对收集的微粒成像，其分别以1,000×和1,700×显示于图13A-B中。该SEM图像显示微球具有基本上是球形的形状和光滑的外表面。

实际上负载了30％的B-12的微球使用SpectraMax M2、UV-Vis分光光度计鉴定。将大约1mg的B-12溶解在大约10mL的水中并且从大约200nm扫描到大约800nm以便鉴定最大吸光度。在大约358nm下测得最大吸光度。在200mL水中使用大约10mg的B-12制备原液。由该原液制备一系列的稀释液并且如图12所示建立5点标准校正曲线。将大约2.55mg负载了30％的B-12的微球溶解在10mL水中，然后进一步稀释以获得大约1：2的微球和水的比例。如下表2所示在大约0.679的吸收浓度下分析并且测量该稀释的溶液。测量的维生素B-12的实际负载量为大约31％。

表2

实施例13

本实施例描述了由包括1重量％LiCl的N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)的15重量/体积％的氧化纤维素溶液形成负载了25重量％(理论负载量)的维生素B-12的氧化纤维素微球。

除了将大约150毫克维生素B-12添加到氧化纤维素溶液中之外，按照以上实施例9列出的内容进行相同的处理。

使用Olympus SZXl6、光学显微镜对收集的微粒成像，其分别以600×和1000×显示于图14A-B中。该图像显示微球具有基本上是球形的形状。

实施例14

本实施例描述了包封了负载有顺-二氯二氨合铂(II)(CDDP)的氧化纤维素微球的D,L-丙交酯(PDLLA)微球的形成。

将1升的玻璃烧杯放置在环形架上。安装具有中等剪切叶轮的恒定扭矩搅拌器，将其插入到烧杯中。将大约200mL的重质白色矿物油添加到烧杯中，期间将搅拌器设定为以大约1,800rpm的速率旋转。

将大约300毫克的CDDP添加到大约3克的具有大约15mg/mL浓度的氧化纤维素溶液中，其形成凝胶。该凝胶涡流旋转大约30秒直到获得均匀的一致性且没有肉眼可视的CDDP颗粒。

然后在大约15分钟内将CDDP和氧化纤维素的凝胶逐滴加入在大约1,800rpm下搅拌的棉籽油和矿物油的涡流中，直到所有的溶液都加入到油中以形成乳液。

将大约200mL棉籽油添加到乳液中并且在大约1分钟后将搅拌速度降低到大约700rpm。大约30分钟后，将大约200mL棉籽油与大约50mL的正庚烷一起加入并且乳液搅拌大约2.5小时以便从氧化纤维素微球中萃取出NMP。萃取出NMP后，在真空下通过Whatman No.4滤纸过滤收集微球。然后用足够体积的正庚烷洗涤微球并且除去微球表面上任何痕量的处理油。

收集的微球以大约1000×显示于图15中并且使用Olympus SZX16、光学显微镜成像。该光学图像显示，微球具有基本上是球形的形状和光滑的表面。该微球为黄色，这表明包封了CDDP。

将4升的玻璃烧杯放置在环形架上并且安装具有在中等剪切的底部叶轮上有高剪切径向叶轮的搅拌器。将大约2,500mL1％聚乙烯醇(PVA)的水溶液加入烧杯中并且将搅拌速度设定为大约1,800rpm。通过在大约5mL二氯甲烷中溶解大约1克PDLLA制备大约200mg/mL浓度的PDLLA溶液。然后将CDDP/氧化纤维素微球添加到PDLLA溶液中并且使其涡流以使微球在PDLLA溶液中均匀的分布，由此形成悬浮液。

然后将悬浮液加入到PVA溶液中。在1,810rpm下保持搅拌大约5分钟，这之后将该速度降低至大约1,150rpm，在该速度下搅拌大约60分钟。然后将大约500mL蒸馏水加入到乳液中以便从多重包封的微球中萃取出二氯甲烷，该微球称为包封了CDDP/氧化纤维素微球的PDLLA微球。大约2.5小时的搅拌后收获该多重包封的微球。用蒸馏水洗涤该微球以除去所有痕量的PVA。然后将它们各自通过筛网过滤收集起来。之后收集的微球空气干燥大约24小时。

使用Olympus SZX16、光学显微镜对收集的微球成像，该图像以大约1,000×显示于图16中。该微球还嵌入环氧树脂中并且获得其横截面切片，使用FBI Quanta600PEG SEM对该切片成像，其以大约1,475×显示于图17中。图16和17的图像显示了包封有多个氧化纤维素微球的较大的PDLLA微球，其显示金色(图16)，其依次包封了CDDP，该CDDP显示为红色(图17)。

CDDP，水溶性化合物，被成功地包封在使用油包油(o/o)、溶剂萃取法由可溶的氧化纤维素形成的微球中。之后这些微球使用水包油-油包固体、溶剂萃取法包封在聚丙交酯微球中。“微球包微球”颗粒自由流动并且易于处理，没有观察到其具有易碎性。由于CDDP包封不使用水进行，因此不需要使用氯化钠，当在包封CDDP中使用水性体系时使用氯化钠以防止顺式形式的CDDP转化为反式形式，这会减少生物活性效果。

实施例15

本实施例描述了实施例1的氧化纤维素的氧化度的分析。

溶解的氧化纤维素的氧化度使用电导测定和pH滴定进行分析并且与未溶解的氧化纤维素的氧化度对比。

由大约90mg到大约700mg的未溶解的氧化纤维素和大约560mg到大约4.4克的实施例1的大约16重量/体积％的氧化纤维素溶液制备多个样品。将每个样品溶解在大约15mL的具有大约0.05M到大约0.5M的摩尔浓度(M)的氢氧化钠(NaOH)溶液中。得到的溶液用大约0.05M到大约0.5M的盐酸(HC1)溶液在来自Radiometer Analytical SAS，Villeurganne Cedex，France的TIM845滴定装置上滴定并且获得电导和pH曲线。以相同的条件进行空白滴定以确定NaOH浓度。

电导滴定曲线显示强碱的存在，其对应于过量的NaOH且弱碱对应于羧基含量，如图18的说明性电导曲线所示。pH曲线的特征如图19所示，其等量点对应于样品中残留的NaOH。

每个样品的氧化度使用下式(I)和(II)计算：

(I)

DO = \frac{162 \times n (COOH)}{w - (14 \times n (COOH)}

(II)n(COOH)＝(V2-V1)×C(HCl)

其中V2是通过空白滴定获得的或来自如图18所示的电导曲线的以升计的HCl体积；V1是图18所示以升计的HCl的量，或者是来自图19的pH滴定的等当点；C是以摩尔每升(Mol/L)计的HCl浓度，且w是以克计算的未溶解的氧化纤维素的烘箱干燥样品的重量。

下表3总结了未溶解的氧化纤维素和实施例1样品的溶解的氧化纤维素的氧化度：

表3

可以显而易见的是以上公开的和其他特征以及功能、或者它们的选择性替换形式可以期望的与许多其他不同体系或应用合并。还显而易见的是多种无法预料的或未曾预料的选择性替换形式、改性形式、变形或其中的改进后续可以通过现有技术本领域技术人员实现，其被包含在后面的权利要求中。除非在权利要求中特别指出，关于任何具体次序、数量、位置、尺寸、形状、角度或物质，权利要求的步骤或组分将并不是由说明书或任何其他的权利要求暗示或引入的。

Claims

1.一种方法，其包括：

形成改性纤维素溶液；以及

使所述改性纤维素溶液与至少一种非溶剂接触以形成多个改性纤维素颗粒。

2.根据权利要求1的方法，其中，所述改性纤维素溶液的形成包括：

在惰性气氛中使改性纤维素与溶剂接触以形成溶胀的改性纤维素；

将所述溶胀的改性纤维素混合物调整到第一温度；

在惰性气氛中使所述溶胀的改性纤维素与盐接触以形成改性纤维素溶液；以及

将所述改性纤维素溶液调整到低于第一温度的第二温度。

3.根据权利要求1的方法，其中，所述至少一种非溶剂选自链烷烃、油脂甘油、二醇类和它们的组合。

4.根据权利要求1的方法，其进一步包括剪切改性的溶液以形成多个改性纤维素颗粒。

5.根据权利要求2的方法，其中，所述第一温度为大约115℃到大约145℃且所述第二温度为大约90℃到大约120℃。

6.根据权利要求2的方法，其中，所述溶剂选自N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮以及它们的组合。

7.根据权利要求2的方法，其中，所示盐选自卤化锂、卤化钠、卤化钾以及它们的组合。

8.根据权利要求1的方法，其中，所述改性纤维素是氧化纤维素。

9.根据权利要求1的方法，其中，所述多个改性纤维素颗粒包括氧化度是溶解之前的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％的氧化纤维素。

10.根据权利要求1的方法，其中，所述多个改性纤维素颗粒包括分子量是溶解之前的氧化纤维素的分子量的大约80％到大约120％的氧化纤维素。

11.一种方法，其包括：

形成氧化纤维素溶液；以及

使所述氧化纤维素溶液与至少一种非溶剂接触以形成氧化度是溶解之前的氧化纤维素的氧化度的大约80％到大约120％的多个氧化纤维素颗粒。

12.根据权利要求11的方法，其中，所述氧化纤维素溶液的形成包括：

在惰性气氛中使氧化纤维素与溶剂接触以形成溶胀的氧化纤维素，该氧化纤维素具有大约0.2到大约1.0的氧化度；

将所述溶胀的氧化纤维素调整到第一温度；

在惰性气氛中使所述溶胀的氧化纤维素与盐接触以形成氧化纤维素溶液；以及

将所述氧化纤维素溶液调整到低于第一温度的第二温度。

13.根据权利要求11的方法，其中，所述第一温度为大约115℃到大约145℃并且所述第二温度为大约90℃到大约120℃。

14.根据权利要求11的方法，其进一步包括剪切氧化的溶液以形成多个氧化纤维素颗粒。

15.根据权利要求12的方法，其中，所述溶剂选自N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮以及它们的组合。

16.根据权利要求12的方法，其中，所述盐选自卤化锂、卤化钠、卤化钾以及它们的组合。

17.根据权利要求11的方法，其中，所述至少一种非溶剂选自链烷烃、油脂甘油、二醇类和它们的组合。

18.一种方法，其包括：

形成改性纤维素溶液；以及

使所述改性纤维素溶液与至少一种非溶剂接触以形成多个改性纤维素颗粒，所述多个改性纤维素颗粒具有的分子量是溶解之前的改性纤维素的分子量的大约80％到大约100％。

19.根据权利要求18的方法，其中，所述改性纤维素溶液的形成包括：

将所述溶胀的改性纤维素混合物调整到第一温度；

将所述改性纤维素溶液调整到低于第一温度的第二温度。

20.根据权利要求19的方法，其中，所述溶剂选自N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮以及它们的组合。

21.根据权利要求19的方法，其中，所述盐选自卤化锂、卤化钠、卤化钾以及它们的组合。

22.根据权利要求19的方法，其中，所述第一温度为大约115℃到大约145℃并且所述第二温度为大约90℃到大约120℃。

23.根据权利要求18的方法，其进一步包括剪切改性纤维素溶液以形成多个改性纤维素颗粒。

24.根据权利要求18的方法，其中，所述至少一种非溶剂选自链烷烃、油脂甘油、二醇类和它们的组合。