CN103555611A - 一种嗜酸乳杆菌培养物饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）菌株YY13002，菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号CGMCC NO.8043，保藏时间为2013年8月16日。本发明公开了上述菌株在饲料添加剂中的应用。本发明还公开了一种饲料添加剂，包括，发酵菌株YY13002获得的菌体；发酵菌株YY13002过程中，培养基中添加葡萄糖，全脂奶粉和酸性蛋白酶。在饲料中添加本发明的饲料添加剂，能够显著提高仔猪的日采食量，并显著降低仔猪腹泻率。
Description
技术领域
本发明涉及饲料领域，尤其涉及一种饲料添加剂及其制备方法。
背景技术
嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）属于乳杆菌属，革兰氏阳性杆菌，杆的末端呈圆形，主要存在于小肠中，并释放出乳酸，乙酸和一些对有害菌起作用的抗菌素，但是抑菌作用比较弱。
嗜酸乳杆菌在动物体内达到一定数量时，有非常明显的健康促进效果。1.生物屏障作用。嗜酸乳杆菌于肠粘膜上皮细胞相互作用、密切结合构成了生物学屏障；同时，嗜酸乳杆菌能分泌抗生物素类物质(嗜酸乳菌素、嗜酸杆菌素、乳酸菌素等)，对肠道致病菌产生拮抗作用；通过其自身及其代谢物与其它细菌之间的相互作用，调整菌群之间的关系，维持和保证菌群最佳优势组合以及这种组合的稳定，阻止了致病菌的定植和入侵，拮抗致病菌和有害微生物的生长及其毒素的粘附。2.营养作用。乳酸菌发酵后产生的乳酸，可提高胃内食物的预消化，提高钙、磷、铁的利用率和维生素D的吸收；同时，乳酸菌发酵过程中还能产生大量B族维生素。3.增强机体免疫力。嗜酸乳杆菌进入动物体内后，能在肠道内定植，相当于自然免疫，这样能激活机体巨噬细胞活性，诱发特异性和非特异性的免疫反应，提高抗感染的能力。
本领域的技术人员致力于开发能够促进动物健康的饲料添加剂，开发含有嗜酸乳杆菌的饲料添加剂是一种很好的技术方案。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种饲料添加剂，能够显著促进动物的进食并改善动物的健康状况。
为实现上述目的，本发明提供了一株嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）菌株YY13002，菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号CGMCC NO.8043，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏时间为2013年8月16日。申请人意外的发现，本发明所记载的菌株YY13002，对促进动物特别是仔猪进食具有明显的效果，并能有效改善仔猪的营养性腹泻状况。
进一步地，本发明提供了一种嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）菌株YY13002在饲料添加剂中的应用。
进一步地，本发明提供了一种饲料添加剂，包括，发酵菌株YY13002获得的菌体；发酵菌株YY13002过程中，培养基中添加葡萄糖，全脂奶粉和酸性蛋白酶。优选地，所述葡萄糖和全脂奶粉的质量比为2：1～1.5。所述酸性蛋白酶在发酵培养基中的添加量为50～150IU/g物料干重。
进一步地，本发明提供了一种制备饲料添加剂的方法，包括如下步骤：
1）、种子活化：
活化培养基为MRS培养基，取菌株YY13002菌种，接种于活化培养中，38℃静置培养，至OD600值为6.8；
2）、种子一级扩培：
一级种子培养基：豆粕0.5%（W/V），麸皮2%（W/V），全脂奶粉1%（W/V），葡萄糖3%（W/V），水；
将步骤1）中活化好的嗜酸乳杆菌，按照10%的接种比例，接种到一级种子培养基中，38℃静置培养，至发酵液pH值达到4.0-4.1之间；
3）、种子二级扩培：
二级种子培养基：豆粕0.5%（W/V），麸皮2%（W/V），全脂奶粉1%（W/V），葡萄糖3%（W/V），水；
将步骤2）中活化好的嗜酸乳杆菌，按照10%的接种比例，接种到二级种子培养基中，38℃静置培养，至发酵液pH值达到4.0-4.1之间。
4）、发酵嗜酸乳杆菌：
100重量份底物培养基含：豆粕16重量份，麸皮74重量份，葡萄糖10重量份，全脂奶粉5重量份；
将水和经二级扩培的种子混合，加入酸性蛋白酶，混合均匀后加入底物培养基中，充分搅拌后，38℃静置培养96小时；
5）、干燥粉碎
步骤4）中发酵产物，经低温干燥后，粉碎得饲料添加剂成品。
优选地，上述方法中，选用粗蛋白含量为40～50%的豆粕和粗蛋白含量为10～15%的麸皮。
优选地，步骤4）中水：底物培养基：二级扩陪的种子液质量比为100:80～120：10～20。
优选地，步骤4）中具体操作为：将100重量份的水和15重量份经过二级扩配的种子加入搅拌混合罐中，再按照100IU/g底物培养基物料比例加入酸性蛋白酶，获得的混合物经充分混合均匀后，接入上述底物培养基中，充分搅拌均匀后，放入密闭的发酵罐中，38℃静置培养96小时，至pH值达到4.0，此时物料的菌浓6*108CFU/g物料，物料经真空低温干燥机40℃干燥后，再经过粉碎，制得饲料添加剂成品。
成品中水分≤10%，活菌数1*108CFU/g，总有机酸含量≥10%，小分子蛋白含量≥10%；该成品含大量的嗜酸乳杆菌及嗜酸乳杆菌的代谢产物。
本发明中嗜酸乳杆菌培养物必须通过2次扩配，扩培的种子培养基原料组成与底物培养基成份一致，有利于缩短发酵过程中的适应期，同时在培养基中必须加入全脂奶粉和在底物培养基中加入酸性蛋白酶，才能保证添加的10%的葡萄糖被充分转化成有机酸，使得最终产品的总有机酸含量才能达到10%以上。
底物培养基的粗蛋白含量配制成与饲料的粗蛋白一致，这样方便成品在饲料中的应用。
具体实施方式
实施例1
1.种子活化：
活化培养基：MRS培养基
具体操作，取出穿刺培养保藏的嗜酸乳杆菌，用穿刺针将嗜酸乳杆菌接种到MRS培养基中，38℃静置培养，至OD值达到6.8，此时培养基的菌浓为8.2*108CFU/mL，种子活化结束。
2.种子一级扩培：
一级种子培养基：豆粕0.5%（W/V），麸皮2%（W/V），1%的全脂奶粉，葡萄糖3%（W/V）；
将1中活化好的嗜酸乳杆菌，按照10%的接种比例，接种到种子培养基中，38℃静置培养，至发酵液pH值达到4.0，此时发酵液中的菌浓为3*108CFU/mL。
3.种子二级扩培：
二级种子培养基：豆粕0.5%（W/V），麸皮2%（W/V），1%的全脂奶粉，葡萄糖3%（W/V）；
将2中活化好的嗜酸乳杆菌，按照10%的接种比例，接种到种子培养基中，38℃静置培养，至发酵液pH值达到4.1，此时发酵液中的菌浓为3*108CFU/mL。
4.嗜酸乳杆菌培养物的生产：
为方便最后获得的嗜酸乳杆菌培养物成品非常容易被使用，按照我们设计的产品最后用在乳仔猪料中，故我们按照乳仔猪对营养的需求蛋白19%来对底物培养基进行配制，配比如下
底物培养基（100kg）：豆粕（粗蛋白：43%）：16kg，麸皮（粗蛋白：14%）：74kg，葡萄糖：10kg，全脂奶粉：5kg；
具体操作：将100kg的水和15kg经过二级扩配的种子加入搅拌混合罐中，再按照100IU/g物料比例加入酸性蛋白酶（杰能科，酶活：2*106IU/g），获得的混合物经充分混合均匀后，接入上述底物培养基100kg中，充分搅拌均匀后，放入密闭的发酵罐中，38℃静置培养96小时，至pH值达到4.0，此时物料的菌浓6*108CFU/g物料，物料经真空低温干燥机40℃干燥后，再经过粉碎，成品的指标为水分10%，活菌数1*108CFU/g物料，总有机酸含量13%，小分子蛋白含量15%；该成品含大量的嗜酸乳杆菌及嗜酸乳杆菌的代谢产物。
实施例2
1.种子活化：
活化培养基：MRS培养基
具体操作，取出穿刺培养保藏的嗜酸乳杆菌，用穿刺针将嗜酸乳杆菌接种到MRS培养基中，38℃静置培养，至OD600值达到6.8，此时培养基的菌浓为8.3*108CFU/mL，种子活化结束。
2.种子一级扩培：
一级种子培养基：豆粕0.5%（W/V），麸皮2%（W/V），1%的全脂奶粉，葡萄糖3%（W/V）；
将1中活化好的嗜酸乳杆菌，按照10%的接种比例，接种到种子培养基中，38℃静置培养，至发酵液pH值达到4.1，此时发酵液中的菌浓为3*108CFU/mL。
3.种子二级扩培：
二级种子培养基：豆粕0.5%（W/V），麸皮2%（W/V），1%的全脂奶粉，葡萄糖3%（W/V）；
将2中活化好的嗜酸乳杆菌，按照10%的接种比例，接种到种子培养基中，38℃静置培养，至发酵液pH值达到4.0，此时发酵液中的菌浓为3*108CFU/mL。
4.嗜酸乳杆菌培养物的生产：
为方便最后获得的嗜酸乳杆菌培养物成品非常容易被使用，按照我们设计的产品最后用在乳仔猪料中，故我们按照乳仔猪对营养的需求蛋白19%来对底物培养基进行配制，配比如下
底物培养基（100kg）：豆粕（粗蛋白：43%）：16kg，麸皮（粗蛋白：15%）：74kg，葡萄糖：10kg，全脂奶粉：5kg；
具体操作：将100kg的水和10kg经过二级扩配的种子加入搅拌混合罐中，再按照150IU/g物料比例加入酸性蛋白酶（杰能科，酶活：2*106IU/g），获得的混合物经充分混合均匀后，接入上述底物培养基120kg中，充分搅拌均匀后，放入密闭的发酵罐中，38℃静置培养96小时，至pH值达到4.1，此时物料的菌浓6*108CFU/g物料，物料经真空低温干燥机40℃干燥后，再经过粉碎，成品的指标为水分8%，活菌数1*108CFU/g物料，总有机酸含量12%，小分子蛋白含量15%；该成品含大量的嗜酸乳杆菌及嗜酸乳杆菌的代谢产物。
实施例3
1.种子活化：
活化培养基：MRS培养基
具体操作，取出穿刺培养保藏的嗜酸乳杆菌，用穿刺针将嗜酸乳杆菌接种到MRS培养基中，38℃静置培养，至OD600值达到6.8，此时培养基的菌浓为8.3*108CFU/mL，种子活化结束。
2.种子一级扩培：
一级种子培养基：豆粕0.5%（W/V），麸皮2%（W/V），1%的全脂奶粉，葡萄糖3%（W/V）；
将1中活化好的嗜酸乳杆菌，按照10%的接种比例，接种到种子培养基中，38℃静置培养，至发酵液pH值达到4.1，此时发酵液中的菌浓为3*108CFU/mL。
3.种子二级扩培：
二级种子培养基：豆粕0.5%（W/V），麸皮2%（W/V），1%的全脂奶粉，葡萄糖3%（W/V）；
将2中活化好的嗜酸乳杆菌，按照10%的接种比例，接种到种子培养基中，38℃静置培养，至发酵液pH值达到4.0，此时发酵液中的菌浓为3*108CFU/mL。
4.嗜酸乳杆菌培养物的生产：
为方便最后获得的嗜酸乳杆菌培养物成品非常容易被使用，按照我们设计的产品最后用在乳仔猪料中，故我们按照乳仔猪对营养的需求蛋白19%来对底物培养基进行配制，配比如下
底物培养基（100kg）：豆粕（粗蛋白：43%）：16kg，麸皮（粗蛋白：15%）：74kg，葡萄糖：10kg，全脂奶粉：5kg；
具体操作：将100kg的水和20kg经过二级扩配的种子加入搅拌混合罐中，再按照50IU/g物料比例加入酸性蛋白酶（杰能科，酶活：2*106IU/g），获得的混合物经充分混合均匀后，接入上述底物培养基80kg中，充分搅拌均匀后，放入密闭的发酵罐中，38℃静置培养96小时，至pH值达到4.1，此时物料的菌浓6*108CFU/g物料，物料经真空低温干燥机40℃干燥后，再经过粉碎，成品的指标为水分7%，活菌数1*108CFU/g物料，总有机酸含量15%，小分子蛋白含量18%；该成品含大量的嗜酸乳杆菌及嗜酸乳杆菌的代谢产物。
实施例4
选用21日断奶仔猪（外三元：杜×长×大），随机分组，每组25头，共12组，每个试验3组平行，以下表为试验日粮配方进行动物喂养试验：
试验日粮配方
（单位：kg）
| 日粮原料 | 对照组 | 试验1组 | 试验2组 | 试验3组 |
| 玉米 | 49 | 49 | 49 | 49 |
| 大豆粕 | 4.5 | 4.5 | 4.5 | 4.5 |
| 面粉 | 10 | 10 | 10 | 10 |
| 发酵豆粕 | 6 | 6 | 6 | 6 |
| 乳清粉 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| 小麦麸 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 葡萄糖 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 膨化大豆粉 | 15 | 15 | 15 | 15 |
| 预混料 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| 嗜酸乳杆菌培养物 | 0 | 1 | 3 | 5 |
经过1周的换料后，按照随机试验设计方法，分别随机选取3组作为对照组、试验1组、试验2组、试验3组，试验共计进行40天，试验结果如下，表中各数值为平均值：
试验结果显示，在保育日粮中加入嗜酸乳杆菌培养物能显著提升采食量和降低腹泻率，但对最后的料肉比没有明显影响。同时，仔猪随着日采食量提高，日增重也随之增加，有利于增强体质，提高猪的抗病能力，并能缩短商品猪的出栏时间。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。
Claims (10)
1.一种嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）菌株YY13002，菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号CGMCCNO.8043，保藏时间为2013年8月16日。
2.如权利要求1所述的嗜酸乳杆菌菌株YY13002，在饲料添加剂中的应用。
3.一种饲料添加剂，其特征在于，包括发酵菌株YY13002获得的菌体；发酵菌株YY13002过程中，培养基中添加葡萄糖，全脂奶粉和酸性蛋白酶。
4.如权利要求3所述的饲料添加剂，其中，所述葡萄糖和全脂奶粉的质量比为2：1～1.5。
5.如权利要求3所述的饲料添加剂，其中，所述酸性蛋白酶在发酵培养基中的添加量为50～150IU/g物料干重。
6.一种制备饲料添加剂的方法，包括如下步骤：
1）、种子活化：
活化培养基为MRS培养基，取权利要求1所述菌株YY13002菌种，接种于活化培养中，38℃静置培养，至OD600值为6.8；
2）、种子一级扩培：
一级种子培养基：豆粕0.5%（W/V），麸皮2%（W/V），全脂奶粉1%（W/V），葡萄糖3%（W/V），水；
将步骤1）中活化好的嗜酸乳杆菌，按照10%的接种比例，接种到一级种子培养基中，38℃静置培养，至发酵液pH值达到4.0-4.1之间；
3）、种子二级扩培：
二级种子培养基：豆粕0.5%（W/V），麸皮2%（W/V），全脂奶粉1%（W/V），葡萄糖3%（W/V），水；
将步骤2）中活化好的嗜酸乳杆菌，按照10%的接种比例，接种到二级种子培养基中，38℃静置培养，至发酵液pH值达到4.0-4.1之间。
4）、发酵嗜酸乳杆菌：
100kg底物培养基含：豆粕16kg，麸皮74kg，葡萄糖10kg，全脂奶粉5kg；将水和经二级扩培的种子液混合，加入酸性蛋白酶，混合均匀后加入底物培养基中，充分搅拌后，38℃静置培养96小时；
5）、干燥粉碎
步骤4）中发酵产物，经低温干燥后，粉碎得饲料添加剂成品。
7.如权利要求6所述的方法，其中，选用粗蛋白含量为40～50%的豆粕和粗蛋白含量为10～15%的麸皮。
8.如权利要求6所述的方法，其中，步骤4）中水：底物培养基：二级扩陪的种子液质量比为100:80～120：10～20。
9.如权利要求6所述的方法，其中，步骤4）中具体操作为：将100重量份的水和15重量份经过二级扩配的种子加入搅拌混合罐中，再按照100IU/g物料比例加入酸性蛋白酶，获得的混合物经充分混合均匀后，接入上述底物培养基中，充分搅拌均匀后，放入密闭的发酵罐中，38℃静置培养96小时，至pH值达到4.0，此时物料的菌浓6*108CFU/g物料，物料经真空低温干燥机40℃干燥后，再经过粉碎，制得饲料添加剂成品。
10.如权利要求6所述的方法，其中步骤5）中，干燥温度低于40℃。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20140205 |