CN103536505A

CN103536505A - 一种活性蛋清精华的提取方法及蛋清精华护肤品

Info

Publication number: CN103536505A
Application number: CN201310450945.9A
Authority: CN
Inventors: 邹潮
Original assignee: JIANGYIN CORNELL BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2013-09-26
Filing date: 2013-09-26
Publication date: 2014-01-29

Abstract

本发明涉及一种活性蛋清精华的提取方法及蛋清精华护肤品。活性蛋清精华的提取方法包括：从禽蛋中分离出蛋清，去除杂蛋白，制备粗提液，然后通过阴离子树脂交换柱、阳离子树脂交换柱、滤膜或分子筛凝胶进行分离提纯，获得含分子量在50—100KD的蛋清生物活性组分；该发明专利提取出的活性蛋清精华有效地发挥了禽蛋蛋清的生物功效，具有很好的推广价值。

Description

一种活性蛋清精华的提取方法及蛋清精华护肤品

技术领域：

本发明涉及一种活性蛋清精华的提取方法及蛋清精华护肤品。

背景技术：

随着生活水平的提高人们对健康护肤的意识和需求也越来越强烈，尤其是天然护肤品受到了越来越多人的青睐。鸡蛋是广泛为人们食用的健康食品，也是自古以来为人们所信赖的天然美容品。相传古埃及艳后就是每晚用鸡蛋清做成的面膜养颜护肤，养得肌肤白润无暇，青春焕发。然而，由于粗蛋清中真正活性成分含量太低，难以有效发挥其生物功效。而且，粗蛋清中含有许多杂蛋白不利于细胞活性成分功效的发挥，也不利于制造高级护肤品。此外，生蛋清中还存在细菌、病毒(如禽流感病毒)，未经适当杀毒处理，不适合直接用作美容产品添加剂。

发明内容：

本发明是为了克服上述现有技术中缺陷，提供了一种活性蛋清精华的提取方法及蛋清精华护肤品。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种活性蛋清精华的提取方法，包括以下步骤：

步骤①：从禽蛋中分离出蛋清，调节蛋清pH值至2—6，离心或过滤除去不溶性的杂蛋白，分离出含生物活性成分的蛋清上清粗提液；

进一步的，为了纯化蛋清生物活性成分：

步骤②：将蛋清上清粗提液或来自其它方法处理过的蛋清提取液的pH值调至6—8，离心或过滤除去不溶性的杂蛋白提取清液，将此清液通过阴离子树脂交换柱，收集含生物活性成分的穿流组分；

进一步的，为了纯化蛋清生物活性成分：

步骤③：将通过阴离子树脂交换柱的穿流组分或来自其它方法处理过的蛋清提取液的pH值调至4-8，离心或过滤除去不溶性的杂蛋白提取清液，将此清液通过阳离子脂交换柱，使生物活性成分吸附在树脂上，再用含不同盐浓度的中性缓冲液将杂蛋白洗出，然后用含0.3-1mol盐浓度的中性缓冲液将蛋清生物活性成分洗脱，收集含生物活性成分的洗脱组分；

进一步的，为了纯化蛋清生物活性成分：

步骤④：将通过阳离子树脂交换柱的活性组分或来自其它方法处理过的蛋清提取液离心或过滤除去不溶性的杂蛋白，提取清液，将此清液用100KD Cut Off的滤膜或分子筛凝胶进行分离，收集滤过液获得含100KD以下分子量的活性组分；

进一步的，为了纯化蛋清生物活性成分：

步骤⑤：将含分子量100KD以下活性组分或来自其它方法处理过的蛋清提取液离心或过滤除去不溶性的杂蛋白，提取清液，将此清液用用50KD Cut Off的滤膜或分子筛凝胶进行分离，收集50KD以上分子量的活性组分。

上述技术方案中，禽蛋选用自以下至少一种：鸽蛋、鹌鹑蛋、燕子蛋、鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋。

一种蛋清精华护肤品，组分包括：去离子水、蛋清精华提取液。

上述技术方案中，去离子水和蛋清精华提取液的比列为：1：9至1：0.01。

上述技术方案中，去离子水和蛋清精华提取液的比列为：1：5至1：0.1。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

采用阴、阳离子交换柱对蛋清生物活性成分进行提纯，得到纯度较高的活性蛋清精华，可以有效发挥其生物功效，去除杂蛋白后，可以有利于利用活性蛋清精华制造护肤品；经过处理后，蛋清中的细菌、病毒大部分被消灭，可以用来作为安全的化妆品添加剂。

具体实施方式：

实施例1：一种活性蛋清精华的提取方法，其步骤为：

(1)选取新鲜鸡蛋一公斤，将蛋壳破开，弃去蛋黄分离出蛋清约400毫升，向蛋清中加入适量5％柠檬酸缓冲液并调节pH至4.5，搅拌均匀后室温静置1-3小时或冷藏过夜，在5℃下以10000rpm高速离心30分钟，除去不溶性的杂蛋白，分离出上清液；用400毫升去离子水稀释上清液，然后再加入1／50的1molpH7.4的PBS缓冲液，再用1mol的NaOH调节pH至7.4，搅拌均匀后室温静置1—3小时或冷藏过夜，在5℃下以10000rpm高速离心30分钟，除去不溶性的杂蛋白，分离出上清液(组分1)，冷藏备用；

(2)准备一床容积约为100ml的DEAE Sepharose Fast Flow阴离子树脂交换柱，用PBS缓冲液平衡后，将上述第二次离心后的pH7.4的上清液流经该DEAE Sepharose Fast Flow阴离子树脂交换柱，控制流速约在1ml／min，收集穿流组分(组分2)；

(3)准备一床容积约为100ml的SP—Sepharose Fast Flow阳离子树脂交换柱，用PBS缓冲液平衡后，将上述流经DEAE Sepharose Fast Flow阴离子树脂交换柱的穿流组分流经该SP-Sepharose Fast Flow阳离子树脂交换柱，控制流速约在1ml／min，再用500ml的0.3mol氯化钠-PBS缓冲液洗涤阳离子树脂交换柱，然后用含0.6mol氯化钠-PBS缓冲液洗脱，收集洗脱活性组分(组分3)；

(4)将上述收集的洗脱组分用100KD Cut Off的滤膜进行分离，收集滤过液以获得含100KD以下分子量的组分，然后，再将该组分用50KD Cut Off的滤膜进行分离浓缩，收集滤膜上部的浓缩液以获得含50KD以上分子量的组分(组分4)。

所获蛋清活性各组分经体外生物活性检测，体外生物活性检测方法按发明专利ZL200310103741.1中所述方法进行。

蛋清活性组分体外培养细胞寿命的影响：五组等数量成纤维细胞(一种皮肤细胞)分别播种在无添加、添加了蛋清活性组分1—4的DMEM培养液(无血清)中，在培养的第1天、第3天、第68天检测细胞存活数。实验结果发现：在无添加的培养液中细胞存活期不到3天，而在添加蛋清活性组分的各组培养液中细胞寿命明显延长，如下表所示：

实施例2：

一种蛋清精华护肤品——蛋清精华护肤霜，其组分包括：75份去离子水、5份蛋清精华提取液、10份白油、2份鲸蜡醇、3份肉豆蔻酸豆蔻酯、2份PEG-200甘油牛油酸酯、2.5份甘油、0.5份山梨酸钾。所述的蛋清精华提取液是采用实施例1中的活性组分4，也可采用活性组分1—3并增加用量2-3倍，可获得与活性组分4相似的效果。

蛋清精华护肤霜的制备方法为：

1、将10份白油、2份鲸蜡醇、3份肉豆蔻酸豆蔻酯、2份PEG-200甘油牛油酸酯搅拌混合、加热至70℃；

2、将75份去离子水、2.5份甘油、0.5份山梨酸钾搅拌混合，加热至70℃；

3、将1和2中所得混合物混合，均质乳化，搅拌冷却至45℃时加入5份蛋清精华提取液并搅拌混匀；

4、检测，灌装。

实施例3：

一种蛋清精华护肤品——蛋清精华护肤凝胶，其组分包括：85份去离子水、8份蛋清精华提取液、0.5份山梨酸钾、0.05份EDTA-Na2、0.05份二苯甲酮-4、0.2份透明质酸、0.5份三乙醇胺、5份甘油、0.7份Carbopol树脂。所述的蛋清精华提取液是采用实施例1中的活性组分4，也可采用活性组分1-3并增加用量2-3倍，可获得与活性组分4相似的效果。

蛋清精华护肤凝胶的制备方法为：

1、用20-25份去离子水将0.5份山梨酸钾、0.05份EDTA-Na2、0.05份二苯甲酮-4、0.2份透明质酸、0.5份三乙醇胺、5份甘油混合搅拌溶解；

2、用60-65份去离子水将0.7份Carbopol树脂搅拌混合溶胀；

3、将1和2中所得混合物混合，调pH至中性，加入8份蛋清精华提取液，搅拌混匀，真空脱气；

4、检测，灌装。

综上，该一种活性蛋清精华的提取方法提取出的活性蛋清精华有效地发挥了生物功效，具有很好的推广价值。

以上公开的仅为本发明的几个具体实施例，但是，本发明并非局限于此，任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本发明的保护范围。

Claims

1.一种活性蛋清精华的提取方法，包括以下步骤①至⑤中的任意一个步骤，所述步骤①至⑤分别为：

步骤①：从禽蛋中分离出蛋清，调节蛋清pH值至2-6，离心或过滤除去不溶性的杂蛋白，分离出含生物活性成分的蛋清上清粗提液；

步骤②：将蛋清上清粗提液或来自其它方法处理过的蛋清提取液的pH值调至6-8，离心或过滤除去不溶性的杂蛋白提取清液，将此清液通过阴离子树脂交换柱，收集含生物活性成分的穿流组分；

2.根据权利要求1所述的活性蛋清精华的提取方法，其特征在于：所述提取方法为步骤①至⑤中的任意两个步骤。

3.根据权利要求2所述的活性蛋清精华的提取方法，其特征在于：所述提取方法中第一步骤为步骤①，其后步骤为步骤②至⑤中的任意一个。

4.根据权利要求1所述的活性蛋清精华的提取方法，其特征在于：所述提取方法为步骤①至⑤中的任意三个步骤。

5.根据权利要求4所述的活性蛋清精华的提取方法，其特征在于：所述提取方法中第一步骤为步骤①，其后步骤为步骤②至⑤中的任意两个。

6.根据权利要求1所述的活性蛋清精华的提取方法，其特征在于：所述提取方法为步骤①至⑤中的任意四个步骤。

7.根据权利要求6所述的活性蛋清精华的提取方法，其特征在于：所述提取方法中第一步骤为步骤①，其后步骤为步骤②至⑤中的任意三个。

8.根据权利要求1所述的活性蛋清精华的提取方法，其特征在于：所述提取方法为步骤①至⑤。

9.根据权利要求1-8中任意一项所述的活性蛋清精华的提取方法，其特征在于：所述禽蛋选用自以下至少一种：鸽蛋、鹌鹑蛋、燕子蛋、鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋。

10.一种蛋清精华护肤品，其特征在于：所述蛋清精华护肤品组分包括：去离子水、蛋清精华提取液。

11.根据权利要求10所述的蛋清精华护肤品，其特征在于：去离子水和蛋清精华提取液的比列为：1：9至1：0.01。

12.根据权利要求10所述的蛋清精华护肤品，其特征在于：去离子水和蛋清精华提取液的比列为：1：5至1：0.1。