CN103520228B - 芒果粗提物在制备防治心血管疾病的药物和食品用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种芒果提取物在制备防治肿瘤疾病的药物或保健品中的应用。所述芒果提取物为芒果果皮或种仁经80%丙酮提取,C18固相萃取初步纯化获得的粗纯粉末,主要成分为五倍没食子单宁及其衍生物。所述药物或保健品中由芒果提取物与制剂允许的赋形剂或食品添加剂制成。研究证实芒果提取物具有抑制乳腺癌、肝癌和白血病的活性,可制备治疗抑制乳腺癌、肝癌和白血病细胞活性的药物或开发成功能食品或保健品。本发明为芒果加工副产物芒果果皮和种仁提取物提供了肿瘤治疗药物或保健品的新用途。
Description
技术领域
本发明属医药领域,涉及天然来源的芒果粗提物在氧化应激导致血管内皮细胞损伤中的保护作用,尤其涉及一种芒果粗提物在制备预防心血管疾病的药物及功能食品或保健品中的应用。
背景技术
芒果为漆树科植物芒果(Mangiferaindica)的果实,含有丰富的营养物质。近年来的研究表明,芒果中因含有类胡萝卜素,黄酮及其衍生物以及酚酸类等活性物质而具有抗氧化,消炎,抑菌,免疫调节,抑制肿瘤以及降血糖等活性,受到人们的广泛关注。但是,对芒果果肉及种仁中富含五倍没食子单宁及芒果果皮中富含的芒果苷的关注较少。
氧化应激导致血管内皮细胞结构和功能的改变是多种心血管疾病的共同病理基础,因此,对血管内皮细胞损伤进行有效预防或治疗,将对心肌缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化及高血脂等心血管疾病的发生发展起到积极的抑制作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种芒果粗提物在制备预治心血管疾病的药物中的应用,所述的芒果粗提物是芒果果皮、果肉及种仁的粗提物粉末,主要成分为五倍没食子单宁及芒果苷。所述心血管疾病是因血管内皮细胞损伤所致。
本发明芒果粗提物通过以下制备步骤获得:(1)干燥的芒果果皮、果肉或种仁用80%丙酮(固液比1:20)浸泡超声30分钟,离心取上清,提取两次,过滤,合并两次滤液,在旋转蒸发仪上蒸干并溶于双蒸水中,得到水粗提物;(2)采用C18固相萃取柱(Waters12cc,2g),经甲醇活化,水平衡后,将步骤(1)得到的水粗提物加入到固相萃取柱上,充分吸附后,先用水洗,去除糖酸等水溶性杂质,然后用甲醇洗脱,甲醇洗脱液真空浓缩蒸干制得芒果粗提物粉末。
本发明的另一个目的是提供所述的芒果粗提物在制备预防心血管疾病发生和辅助治疗心血管疾病的功能食品或保健品中的应用。所述心血管疾病是因血管内皮细胞损伤所致。
本发明所述的芒果粗提物与制剂允许的药物辅料或赋形剂制备成药物。所述药物的制剂形式选用胶囊剂。
本发明所述的芒果粗提物与食品允许的食品添加剂制备成功能食品或保健品。所述食品的剂型选用胶囊剂。
本发明所述心血管疾病包括急性心肌缺血再灌注损伤、高脂血证、动脉粥样硬化及氧化应激引起的血管内皮细胞损伤。实验显示芒果粗提物能有效的保护血管内皮细胞免于氧化应激损伤的保护作用。
本发明为芒果粗提物发掘了新的医疗用途,开拓了一个新的应用领域。本发明通过实验证明了主要成分为芒果苷的芒果果皮粗提物具有显著的血管内皮细胞保护作用。本发明不仅为心血管疾病的防治提供潜在的天然来源的活性物质,同时可以使芒果加工过程的副产物变废为宝,为芒果的深加工提供新思路。本发明同时关注芒果果肉、果皮及种仁粗提物的血管内皮细胞保护活性,为芒果果肉、果皮及种仁粗提物在防治心血管疾病的药物、功能食品或保健品中的应用提供科学依据。
附图说明
图1A是五倍没食子单宁单体的HPLC色谱图(λ=280nm)。
图1B是马切苏芒果种仁没食子单宁提取物的HPLC色谱图(λ=280nm)。
图1C是马切苏芒果果皮没食子单宁提取物提取物的HPLC色谱图(λ=280nm)。
图2是芒果果肉的HPLC色谱图。马切苏果肉提取物经SPE纯化粉末。
图3是芒果苷的HSCCC分离纯化图谱。‘绿皮芒’果皮粗提物20mg进样HSCCC分离纯化图谱。
图4芒果果皮提取物对过氧化氢引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生存率下降的保护作用。
图5芒果果皮提取物对过氧化氢引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。
图6芒果种仁提取物对过氧化氢引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生存率下降的保护作用。
图7芒果种仁提取物对过氧化氢引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。
图8芒果果肉提取物对过氧化氢引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生存率下降的保护作用。
图9芒果果肉提取物对过氧化氢引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。
具体实施方式
本发明结合附图和实施例作进一步的说明。
实施例1
本发明中主要成分为没食子单宁的芒果种仁及果肉粗提物操作方法按照如下两个步骤来进行:
(1)从芒果副产物中富集没食子单宁:分别称取1.5g马切苏(MQS)、台农1号(TN1)、紫花芒(ZHM)果实种仁和果皮冷冻干燥粉末,用80%丙酮(固液比1:20)超声提30分钟提取两次,8000rpm离心10min,合并两次上清液,在旋转蒸发仪上蒸干得浸膏,溶于25mlddH2O中;
(2)C18固相萃取柱(Waters12cc,2g)首先用15ml甲醇活化,再用15ml水平衡,然后将25ml提取液上样,充分吸附后,用25ml水淋洗,去除糖酸等水溶性杂质,然后用25ml甲醇洗脱,用15ml氯仿洗脱柱子中遗留的色素等杂质,最后用15ml甲醇再生柱子。甲醇洗脱液在真空干燥上蒸干成粉末,其HPLC色谱图参见图1A-1C、图2。五倍没食子单宁结构式:
。
实施例2
本发明中主要成分为芒果苷的的芒果果皮粗提物操作方法按照如下步骤来进行:
(1)称取芒果果皮10g,加200ml提取液(甲醇:乙醇:丙酮1:1:1,v/v/v)浸泡2h,超声30min,过滤取上清,滤渣再添加200ml提取液超声30min,过滤,合并两次上清液,45℃旋转蒸发至浸膏,双蒸水溶解浸膏得到210ml粗提液;
(2)210ml粗提液,乙酸乙酯等体积萃取2次,乙酸乙酯相浓缩后再用水萃取1次,合并下相45℃旋转蒸发去除乙酸乙酯得到207ml水相萃取液;
(3)207ml,进HPD100大孔树脂(20ml),流速2ml/min,进样结束后静置1h,水洗10BV,5%乙醇洗10BV,30%乙醇洗脱10BV,合并30%洗脱部分45℃旋转蒸发至浸膏,得到粉末,芒果苷纯度≥30%。
(4)采用HSCCC分离芒果苷:配制乙酸乙酯–正丁醇–水(4:1:5,v/v/v)溶剂体系,充分摇匀过夜后,上相为固定相,下相为流动相,固定相首先以20ml/min流速泵入HSCCC,稳定后,调逆流色谱仪转速至800rpm,同时流动相以2ml/min速度通过HSCCC,待流出液分层后,将过HPD100后得到的粉末20mg溶于5ml下相中进样,根据色谱仪检测器采集的图谱分管收集各组分,用HPLC测定各组分的纯度,分别合并含有单一芒果苷的试管,在旋转蒸发仪上45℃蒸干即得到芒果苷。该步纯化得到芒果苷5.8mg,纯度≥98%。结果参见图3。芒果苷结构式:
.
实施例3
芒果果皮粗提物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用。具体步骤如下:胰酶消化对数生长期的HUVEC细胞,吹打成单细胞悬液,以7×103细胞/孔接种于96孔培养板,每孔培养基100微升,37℃、5%CO2培养箱中培养过夜;细胞贴壁,加入适当浓度的水果提取物(5、10、20μg/mL)预孵育4小时或阳性药NAC预孵育4小时,然后加入0.5mM过氧化氢;24小时后,10%三氯醋酸固定1小时;用双蒸水洗涤,干燥后,每孔加入100微升SRB溶液(4mg/mL),室温染色20分钟,1%醋酸洗涤,干燥;每孔加入100微升10mMTris溶液使SRB溶解;酶标仪检测各孔OD值(检测波长:515nm),按下列公式计算抑制率:存活率(%)=OD给药/OD对照×100%。其中10mg/ml及20mg/ml的果皮粗提物能显著抑制过氧化氢引起的HUVEC损伤,表现为细胞形态完整及生存率的提高。具体参见图4、图5。
实施例4
芒果种仁粗提物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用。具体步骤参见实施例3。其中10mg/ml及20mg/ml的种仁粗提物能显著抑制过氧化氢引起的HUVEC损伤,表现为细胞形态完整及生存率的提高。具体参见图6、图7。
实施例5
芒果果肉粗提物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用。具体步骤参见实施例3。其中10mg/ml及20mg/ml的果皮粗提物能显著抑制过氧化氢引起的HUVEC损伤,表现为细胞形态完整及生存率的提高。具体参见图8、图9。
实施例6胶囊制剂
芒果果皮、果肉或种仁1kg,按照实施例1或2的方法制备粗提物,加入适量辅料(如淀粉、糊精),混匀,装入45-50个胶囊中制成。
Claims (4)
1.一种芒果提取物在制备防治心血管疾病的药物中的应用,所述芒果提取物通过以下制备步骤获得:(1)干燥的芒果果皮、果肉或种仁用固液比1:20的80%丙酮浸泡超声30分钟,离心取上清,提取两次,过滤,合并两次滤液,在旋转蒸发仪上蒸干并溶于双蒸水中,得到水粗提物;(2)采用C18固相萃取柱,Waters12cc,2g,经甲醇活化,水平衡后,将步骤(1)得到的水粗提物加入到固相萃取柱上,充分吸附后,先用水洗,去除糖酸等水溶性杂质,然后用甲醇洗脱,甲醇洗脱液真空浓缩蒸干制得芒果粗提物粉末,所述心血管疾病是因血管内皮细胞损伤所致,所述芒果粗提物粉末即为芒果提取物。
2.根据权利要求1所述的一种芒果提取物在制备防治心血管疾病的药物中的应用,其特征在于,所述药物由芒果提取物与允许的赋形剂制成。
3.一种芒果提取物在制备防治心血管疾病的保健品中的应用,所述芒果提取物通过以下制备步骤获得:(1)干燥的芒果果皮、果肉或种仁用固液比1:20的80%丙酮浸泡超声30分钟,离心取上清,提取两次,过滤,合并两次滤液,在旋转蒸发仪上蒸干并溶于双蒸水中,得到水粗提物;(2)采用C18固相萃取柱,Waters12cc,2g,经甲醇活化,水平衡后,将步骤(1)得到的水粗提物加入到固相萃取柱上,充分吸附后,先用水洗,去除糖酸等水溶性杂质,然后用甲醇洗脱,甲醇洗脱液真空浓缩蒸干制得芒果粗提物粉末,所述心血管疾病是因血管内皮细胞损伤所致,所述芒果粗提物粉末即为芒果提取物。
4.根据权利要求3所述的一种芒果提取物在制备防治心血管的保健品中的应用,其特征在于,所述保健品由芒果提取物与允许的食品添加剂制成。
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