CN103497958B - 水稻OsXrn4基因及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及水稻OsXrn4基因，该基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示。该基因来源于水稻。该基因序列是通过Blast软件对拟南芥AtXRN4序列进行同源分析，再进行序列扩增而获得。本发明获取的OsXRN4超表达转基因植物，主要应用于植物抗病毒侵染研究，避免病毒病害的为害。本发明对培育高抗病毒转基因植物具有重要的理论及实际意义，对植物病害防治其他领域也有指导作用。本发明具有以下三个特点：1）具有广谱抗性。2）抗性株系抗性稳定，不易丢失。3）抗性株系对植物与环境无安全隐患。

Description

水稻OsXrn4基因及其应用

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域及植物病害防治领域，尤其涉及水稻Xrn4（OsXrn4）基因在植物抗RNA病毒中的应用领域。

背景技术

植物病毒病是植物病害中的顽症，为害普遍，防治困难。病毒病几乎可感染所有的植物种类，全世界病毒病害每年对农业、林业、蔬菜与花卉等生产发展可造成数百亿美元的直接经济损失。植物病毒病害成为仅次于真菌病害的第二大病害。目前，全世界已发现的植物病毒已达700多种，其中我国最主要的粮食作物之一水稻上面的病毒及其类似病害已达11种。近年来，水稻黑条矮缩病、南方水稻黑条矮缩病和水稻条纹叶枯病在我国多达三分之二的省市持续发生或流行，近几年江浙区域水稻条纹叶枯病发病面积已达数千万亩次，严重威胁着我国粮食安全供给和农业可持续发展。植物病毒病害的防治是植物病害防治研究领域中亟需解决的重大科研难题。

目前应用于植物病毒病害防治的方式主要有化学防治与抗病品种的栽种。但化学防治存在施用时间受限，防治时效短，环境污染严重等多重弊端。当前通过传统方式获取的种质优良且高抗的品种种类非常稀少，且随着种植年限增多，抗性逐渐丧失。探索发现新型有效的生物防治策略成为目前病毒病害防治研究领域的研究热点。

在以往抗病毒转基因研究中，多将病毒来源的基因转入植物体内诱发植物的抗病效应。但存在着抗性水平不高、抗谱不宽、抗性逐步丧失等弊端，由此得不到广泛的应用。RNA干扰（RNA interference， RNAi）机制的发现为分子生物学和遗传学等领域带来巨大贡献。RNAi是植物体抵御外来核酸入侵的一种天然防御机制。基于RNAi技术的植物抗病毒研究成为近年来植物抗病毒领域的研究热点。然而，仅依赖单一抗性策略不利于抗性植株种质的可持续应用，并且具有病毒变异导致抗性丧失的潜在风险。由此不断发掘植物体内抗病毒途径的关键基因，并利用这些基因来设计新型抗病毒策略、应用于转基因育种，达到提高植物抗病毒能力，获取广谱抗病毒株系，丰富抗病毒种质的目的。

Xrn4是植物体内胞质定位的一种5'-3'核糖核酸外切酶，与酵母的Xrn1功能同源。酵母Xrn1在病毒与寄主的互作中具有重要作用，研究表明其参与病毒的RNA重组的抑制过程，影响病毒量在寄主体内的积累。近年来关于植物XRN4的研究也证实其可在RNAi途径下游行使功能参与植物抗病毒过程。拟南芥Xrn4可降解miRNA介导切割的靶基因mRNA片段；在烟草中表达AtXrn4导致CNV RNAs积累受到抑制。将烟草XRN4沉默或功能缺失可促使TBSV重组与积累，TMV侵染和CNV RNAs的积累。研究结果表明，Xrn4在植物抗病毒途径中可能参与作用。因而，本发明将水稻Xrn4基因在植物体内超表达，并通过抗性鉴定获得抗病毒转基因植物，这是首次将Xrn4基因作为一种抗病毒基因用于转基因抗病毒植物创制。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明的一个目的是提供一种水稻OsXrn4基因。本发明的第二个目的是采用上述的基因的植物表达载体、宿主细胞、植物受体细胞或组织。本发明的第三个目的是提供上述基因的用途。

为了实现上述的第一个目的，本发明采用了以下的技术方案：

水稻OsXrn4基因，该基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示。该基因来源于水稻。该基因序列是通过Blast软件对拟南芥AtXRN4序列进行同源分析，再进行序列扩增而获得。

为了实现上述的第二个目的，本发明采用了以下的技术方案：

包含所述的水稻OsXrn4基因的植物表达载体。作为优选，所用载体为pCV1300。

宿主细胞该宿主细胞由上述的植物表达载体转化。作为优选，所述的转化菌株为农杆菌菌株EHA105。

植物受体细胞或组织，其特征在于：该植物受体细胞或组织采用权利要求3或4所述的宿主细胞转化获得。

为了实现上述的第三个目的，本发明采用了以下的技术方案：

水稻OsXrn4基因的用途，该基因用于制备转基因抗病毒植物体。作为优选，所述的基因用于制备抗水稻条纹叶枯病毒（Rice stripe virus）的水稻或抗烟草花叶病毒（Tobacco Mosaic Virus）的烟草。

一种所述的水稻OsXrn4基因制备重组农杆菌的方法，该方法包括以下的步骤：

1）水稻OsXrn4基因的克隆

通过与已报道的拟南芥的AtXrn4序列进行Blast分析，获得水稻OsXrn4基因序列，同源性达95%以上，以此序列设计引物，获取基因全长，水稻OsXrn4基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示；引物序列如下：

RXRN4 f:  5’-CCGAGACTCCGAGAGAGATTAG-3’，

RXRN4 r:  5’-GCTTACACATTTACAATGGCCG-3’；

2）载体构建

分析全序列水稻OsXrn4基因酶切位点及双元表达载体pCV-GFP-2N的多克隆位点，设计引物，构建载体；引物序列如下：

RX1f: 5’-TCTAGAATGGGAGTCCCGGCGTTCTACC-3’，

RX1r: 5’-TCTAGACCTCTGCTGATTCAT-3’，

RX3f: 5’-GGATCCTAGGATGGCCATGGATA-3’，

RX3r: 5’-GAGCTCTCACTCACTCAGGCCATTGG-3’；

3）转化农杆菌

取-70 ℃保存的EHA105农杆菌感受态，置冰上融解；取1μl抽纯OsXrn4-Pcv-2N质粒加入到100 μl感受态中，混匀，加入到处理好的电击杯；设置2.2V电压，电击转化；点击完成加入900 μl的YEP液体培养基；28 ℃，200 rpm摇床培养2 h，菌液涂布在含50 μg/ml卡那霉素和100 μg/ml利福平平板上，28 ℃培养至形成单菌落。

一种抗水稻条纹叶枯病毒（Rice stripe virus）的水稻的制备方法，该方法采用上述的宿主细胞对水稻成熟胚进行的遗传转化获得。

一种抗烟草花叶病毒（Tobacco Mosaic Virus）的烟草的制备方法，该方法采用上述的宿主细胞对烟草叶盘法进行遗传转化获得。

本发明通过设计引物克隆基因阅读框全长，构建表达载体，通过遗传转化与分子技术检测，获取稳定遗传的OsXrn4超表达转基因植株。然后对转基因植株接种病毒，进行抗病毒分析，筛选抗病株系。

本发明获取的OsXRN4超表达转基因植物，主要应用于植物抗病毒侵染研究，避免病毒病害的为害。本发明对培育高抗病毒转基因植物具有重要的理论及实际意义，对植物病害防治其他领域也有指导作用。与通过其他抗病毒策略获得的抗性株系相比，本发明具体优势如下：

1）具有广谱抗性。XRN4基因是植物体保守存在、不可缺少的功能基因，在RNAi下游，通过参与植物病毒的代谢途径行使抗病毒功能。XRN4基因在植物体内的参与植物抗病毒途径，不针对特定病毒行使功能，没有抗病种类局限性。通过在植物体内超表达XRN4基因，植物本身的抗病毒能力增强，具有广谱抗病毒能力；

2）抗性株系抗性稳定，不易丢失。XRN4基因是植物体自身的抗病相关功能基因，功能保守，进化过程中不易发生功能缺失与更改，植物病毒短时间内无法进化出抵抗此抗病途径的能力，本发明获取的OsXRN4超表达转基因植物抗性稳定，不易丢失；

3）抗性株系对植物与环境无安全隐患。因为转入的OsXRN4基因属于植物的内源或同源基因，进行超表达之后不会对植物体与环境造成危害，不存在基因污染等问题，对环境无安全隐患。

附图说明

图1：含有OsXrn4基因的载体图谱。

图2：转OsXrn4基因水稻的PCR检测结果，其中1号泳道是阴性对照。

图3：转OsXrn4基因水稻的Southern blot结果。

图4：转OsXrn4基因水稻的real-time PCR结果。

图5：转OsXrn4基因水稻的抗水稻条纹病毒鉴定。

图6：转OsXrn4基因烟草的PCR检测结果，其中19号泳道是阴性对照。

图7：转OsXrn4基因烟草的抗烟草花叶病毒鉴定。

具体实施方式

实施例1  转OsXRN4水稻的获得与抗RSV功能分析

本发明所转水稻品种为日本晴。

1.    重组农杆菌的获得

1）OsXrn4的克隆

本发明通过与已报道的拟南芥的AtXrn4序列进行Blast分析，获得水稻OsXrn4基因序列，同源性达95%以上，以此序列设计引物，获取基因全长。引物序列如下：

RXRN4 f:  5’-CCGAGACTCCGAGAGAGATTAG-3’

RXRN4 r:  5’-GCTTACACATTTACAATGGCCG-3’

2）载体构建

分析全序列OsXrn4酶切位点及双元表达载体pCV-GFP-2N的多克隆位点，设计引物。构建完成的载体图谱如图1显示。引物序列如下：

RX1f: 5’-TCTAGAATGGGAGTCCCGGCGTTCTACC-3’

RX1r: 5’-TCTAGACCTCTGCTGATTCAT-3’

RX3f: 5’-GGATCCTAGGATGGCCATGGATA-3’

RX3r: 5’-GAGCTCTCACTCACTCAGGCCATTGG-3’

3）转化农杆菌

取-70 ℃保存的EHA105农杆菌感受态，置冰上融解。取1μl抽纯OsXrn4-Pcv-2N质粒加入到100 μl感受态中，混匀，加入到处理好的电击杯。设置2.2V电压，电击转化。点击完成加入900 μl的液体培养基（YEP）。28 ℃，200 rpm摇床培养2 h，菌液涂布在含50 μg/ml卡那霉素 (Kan) 和100 μg/ml利福平 (Rif) 平板上，28 ℃培养至形成单菌落；

4）阳性克隆的鉴定与保存

挑取转化的农杆菌单菌落接种于含50 μg/ml Kan、100 μg/ml Rif的液体培养基中，28 ℃，200 rpm摇培16 h，取1μl菌液进行PCR检测。检测引物为Rxrb4f、RXrn4r。取检测结果为阳性的菌液，混合15-30%甘油，置甘油管中，于-70℃超低温冰箱中保存。

PCR体系如下：

混匀后按以下条件进行PCR循环：

 

2. 农杆菌介导的水稻遗传转化

本发明是利用水稻成熟胚进行的遗传转化。具体操作过程如下：

1) 菌液的准备

取-70 ℃保存的阳性转化菌株，于含50 μg/ml卡那霉素 (Kan) 和100 μg/ml利福平 (Rif) 平板上划线，28 ℃培养至形成单菌落，挑取单菌落于含50 μg/ml Kan、100 ug/ml Rif的YEP液体培养基中培养，28℃，220rpm振荡培养24 h；将菌液按1:100用YEP 培养基稀释，继续震荡培养至OD₆₀₀为0.6左右。

2) 水稻成熟胚愈伤组织的诱导与培养

取水稻成熟种子，人工或者机械脱壳，挑选饱满光洁无菌斑的种子。将种子放入100 ml无菌烧杯中，倒入70%酒精消毒1分钟，无菌水洗3遍；加入100 ml 20%次氯酸钠（NaClO）溶液，浸泡30分钟；倒去次氯酸钠溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍，最后一遍浸泡30分钟；种子放在无菌滤纸上吸干，置入成就胚诱导培养基中，每皿12－14颗；操作完毕用封口膜（Micropore ^TM Surgical Tape）封好培养皿，在28℃光照培养箱，培养3周；在超净工作台上打开培养皿，用镊子挑取自然分裂的胚性愈伤组织（淡黄色，致密呈球状），置入继代培养基中，在28℃光照培养箱，继代培养1周。

3）愈伤组织与农杆菌的共培养

收集菌体，用含200 μmol/L As的AAM感菌液制成悬浮液，使菌液OD₆₀₀的终浓度为0.1左右；将长到一定大小的水稻愈伤组织挑出，放入农杆菌悬浮液侵染5分钟；将愈伤组织取出，置于无菌的滤纸上沥干30-40分钟；将愈伤组织置于共培养基上。26℃暗培养2.5天。

4）抗性愈伤的筛选与分化

将愈伤组织取出，用无菌水清洗1遍，再用含500 mg/L头孢拉定（或头孢噻肟钠）的无菌水浸泡30 min，清洗3遍，置于无菌滤纸上沥干2小时。随后将晾干的愈伤转入选择培养基上进行第一轮选择，28℃，光照培养14天；将长有抗性愈伤的初始愈伤进行第二轮选择，28℃，光照培养，直到颗粒性的抗性愈伤组织长出；挑取颜色鲜黄的抗性愈伤3-4颗，移入装有分化培养基的塑料广口瓶中（每瓶放置4颗），放入恒温培养室中，等待分化成苗（15-30天）。

5）生根壮苗和移载

当抗性愈伤组织分化的芽长至约2 cm时,将小苗移到生根培养基上,培养两周左右。选择高约10 cm、根系发达的小苗，洗去培养基，在温室内移栽入土。水面以不淹没小苗为度。

3. 转基因再生水稻的分子生物学检测

1) PCR检测

用CTAB法提取转基因再生水稻的基因组DNA。取0.2g材料放入2 mlEP管，用液氮快速研磨，加入500 μl 2×CTAB，剧烈震荡。65 ℃水浴20 -30min，每10 min上下混匀一次。然后加入等体积氯仿，剧烈混匀。12000 rpm离心10 min，取上清至新的EP管中。加入1/10体积的醋酸钠（NaAc, 3M, pH 5.2）和等体积的异丙醇，颠倒混匀。12000 rpm离心10 min。去上清，沉淀用70%乙醇洗涤，12000 rpm离心10 min。去上清，沉淀室温干燥10 min，然后加入30-50 μl的ddH₂O进行溶解。然后取0.2μl的DNA作为模板，进行PCR检测。检测结果如图2所示。检测引物序列如下：

2) Southern blot分析

为确认我们所转入基因是否已整合到植物基因组中以及拷贝数，我们提取T2代转基因阳性植株总DNA进行基因组Southern blot分析。具体操作过程参照Roche的DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit Ⅱ说明书。检测结果如图3所示，表明转入的OsXrn4基因已经整合到转基因水稻染色体中。

3) Real-Time PCR分析

提取T1代阳性转基因植株的总RNA，进行real time-PCR分析以确定OsXrn4的表达水平。利用Trizol法提取植物总RNA。具体操作过程如下：

样品置2 ml Eppendorf管中，液氮研磨，加入1 ml Trizol，剧烈振荡混匀，室温放置5 min。4℃，13,000 rpm离心5 min。取上清，加入1/5体积氯仿，剧烈混匀，室温放置2~3 min。4℃， 13,000 rpm离心10 min。吸取上层含RNA的无色水相，转入新的EP管，加入等体积的异丙醇，颠倒混匀，低温静置0.5-1 h。4℃ 13,000 rpm离心30 min，去上清。加入1 ml预冷的75％乙醇，洗涤沉淀。4℃ 12,000 rpm离心5 min。去上清，空气干燥10 min，加20-30μlDEPC处理水溶解。取1μl RNA样品测量OD值，计算浓度。

取1μg RNA样品利用一步法进行去除DNA并完成cDNA第一链合成。具体操作参照Prime Script^TM RT reagent Kit with gDNA Eraser（TaKaRa）。

利用反转录合成的cDNA样品进行Real-Time PCR（SYBR Green Reatime PCR Master Mix，TOYOBO）分析。分析结果如图4显示不同转基因株系的OsXrn4基因表达水平均有不同程度的提高。检测引物序列如下：

4. 转基因水稻抗性鉴定

本发明中对转OsXrn4水稻进行了抗水稻条纹叶枯病毒（Rice stripe virus，RSV）的分析。RSV是一种负链RNA病毒，属于纤细病毒属（Tenuivirus），由介体昆虫灰飞虱携带传播感染水稻，导致水稻条纹叶枯病。水稻条纹叶枯病俗称水稻上的癌症，可对水稻生产造成毁灭性为害。十年间此病害已对水稻农业生产造成30%-50%的减产。

本发明选取T2代阳性转OsXrn4水稻进行抗性鉴定。具体操作内容如下：

1）利用携带RSV灰飞虱对转OsXrn4水稻进行饲毒

选取转OsXrn4水稻6个株系，进行浸种与催芽，每个株系选取20-30粒健康种子。种子露白之后进行种植，每株系分别种植在7cm×10cm的营养钵中。用未转基因的野生株（日本晴）作为对照。

植株生长到1.5-2叶期，将其转入接虫笼中，按照有效接虫量3-5头/株，将2-4龄的带毒灰飞虱转入接虫笼，对转基因植株与野生株进行饲毒48-72h。接虫期间，每天赶虫两次，确保接种的稻苗均匀获毒。

饲毒完成后，移除所有灰飞虱，将植株移栽到大田，进行病害调查与分析。

2）转OsXrn4水稻抗RSV能力分析鉴定

跟踪观察转基因植株与野生株的表型差异与发病情况。对所有的实验株进行取样，提取植物总蛋白，利用Dot-ELISA技术进行发病率统计，实验结果如图5显示，表明转基因水稻对RSV的抗性均有不同程度的提高，其中转基因株系11-2发病率最低，抗性程度最强。Dot-ELISA具体操作过程如下：

将样品进行液氮研磨，称重，按重量体积比1: 10-1: 50（克/毫升）加入0.01 mol/L PBS，8000 rpm离心3min；在硝酸纤维素膜（NC膜，Amersham Hybond TM-C Nitrocellulose membrance）上划好7mm×7mm大小点样格，每格点取2μl样品上清，室温干燥10min。将干燥好的NC膜浸入含5%脱脂奶粉的封闭液中室温封闭30 min。弃掉封闭液，将膜转入含有一抗（RSV CP antibody，本实验室提供，按1：5000稀释）的抗体稀释液中，室温孵育30-60min。弃掉抗体稀释液，PBST洗膜3-4次，每次3-5min。加入含有二抗（Anti-Rabbit-IgG，SIGMA，按1：10000稀释）的抗体稀释液，室温孵育30-60min。PBST洗膜5-6次，每次3-5min。加入适当体积显色液（BCIP/NBT Liquid Substrate System，SIGMA）暗处显色。显色完成后，弃掉显色液，用去离子水漂洗膜，记录结果。

所用试剂：

10×PBS：80g NaCl，2g KCl，2.4g KH₂PO₄，1.44gNa₂HPO₄，加水定容至1L。

PBST：100ml 10×PBS，0.5ml Tween-20，加水定容至1L。

封闭液：5g脱脂奶粉，溶于100ml 1×PBS。

一抗稀释液：同封闭液。

二抗稀释液：1g脱脂奶粉，2g PVP，溶于100ml 1×PBS。

实施例2转OsXrn4烟草的获得与抗TMV功能分析

本发明所转烟草品种为本氏烟。

1. 重组农杆菌的获得(同转OsXRN4水稻的获得)

2. 农杆菌介导的烟草遗传转化

本发明利用烟草叶盘法进行遗传转化，具体操作内容如下。

1) 菌液的准备

取-70 ℃保存的阳性转化菌株，于含50 μg/ml卡那霉素 (Kan) 和100 μg/ml利福平 (Rif) 平板上划线，28 ℃培养至形成单菌落，挑取单菌落于含50 μg/ml Kan、100 ug/ml Rif的YEP液体培养基中培养，28℃，220rpm振荡培养24 h；将菌液按1:100用YEP 培养基稀释，继续震荡培养至OD₆₀₀为0.6左右。5000 rpm离心5 min，收集菌体备用。

2）烟草叶片预培养

选取五叶期本氏烟生长状况良好的叶片，用无菌水冲洗数遍，70 %乙醇表面消毒1min，无菌水冲洗3遍25%的次氯酸钠消毒2-3min，无菌水冲洗数遍；用无菌滤纸吸干表面水分后，利用无菌手术刀将叶片切成1cm²小块，置于含有6-BA（2 mg/L）的MS培养基上进行预培养2-3d。

3）烟草叶片与农杆菌共培养

将收集好的菌体用100ml MS液体培养基（含200μl 200μM AS）悬浮30min，取出预培养后的烟草叶片，放入MS悬浮的农杆菌液中浸泡约10 min，不间断的轻轻晃动。之后取出叶片置于无菌滤纸上吸干，置于含6-BA (3 mg/L)、NAA(0.2 mg/L)、AS（100μM）的共培养培养基上，26℃暗培养2-3d。

4）筛选培养

将共培养后的叶片取出，无菌水清洗数遍，无菌滤纸吸干残余的水分，置于含抗生素（50 mg/L Carb和50 mg/L Hyb）的MS筛选培养基上，26℃，16 h光照培养，每两周更换一次筛选培养基，直至长出绿色小芽。

5）生根培养与移栽

待小芽长到1 cm以上单独成株后，切去芽基部的愈伤组织，转移到含有(50 mg/L Carb和50 mg/L Hyb)的1/2MS生根培养基上培养。待幼苗长至5 cm左右,根部长出后，清洗掉根部的培养基，将苗移栽到营养土中，暗光条件练苗1-2天，使其适应外界环境后再转移到正常光照环境下培养。

3. 转基因再生烟草的分子生物学检测

1) PCR检测

用CTAB法提取转基因再生烟草的基因组DNA。具体操作方法同转基因再生水稻的分子生物学检测。取0.2μl的DNA作为模板，进行PCR检测。检测结果如图6所示，表明外源基因已经转入烟草中。检测引物序列如下：

4. 转基因烟草抗性鉴定

本发明对转OsXRN4烟草进行了烟草花叶病毒（Tobacco Mosaic Virus，TMV）的抗性分析。TMV是一种正单链RNA病毒，属于Tobamovirus属，可通过汁液进行传播，感染植物，特别是烟草及其他茄科植物，感病植株叶片呈现花叶斑驳症状，严重影响作物的经济价值。

本发明选取T1代的转OsXRN4烟草植株进行抗性鉴定。分析结果如图7所示，相对于对照植株，转基因植株表现出对TMV的抗性，死亡率降低。具体操作过程如下：

1）选取转OsXrn4烟草6个株系，进行播种育苗。每个株系种植20株。未转基因的野生株（本氏烟）作为对照。

2）取-70 ℃保存的转入pCB30:TMV-GFP的农杆菌菌株，于50 μg/ml卡那霉素 (Kan) 和100 μg/ml利福平 (Rif) 平板上划线，28 ℃培养至形成单菌落，挑取单菌落于含50 μg/ml Kan、100 μg/ml Rif的YEP液体培养基中培养，28℃，220rpm振荡培养24 h；将菌液按1:100用YEP 培养基稀释，继续震荡培养至OD₆₀₀为0.6左右。4000rpm离心10min收集菌体，用瞬时转染液悬浮菌体，调节OD₆₀₀至1.0左右。

3）用医用注射器将菌液注入1个月苗龄的烟草叶片中，注射48h开始在紫外灯下通过荧光扩散速率进行观察病毒的侵染情况并进行记录与统计，每12h观察统计一次。

实施例研究结果表明，OsXrn4基因在植物体内的表达能够赋予植物体对病毒的抗性，显示出其在抗病毒转基因植物培育过程中的应用，本发明所保护内容即在于这种利用OsXrn4基因进行植物抗病毒应用的方法。

<110>浙江省农业科学院

<120>水稻Xrn4基因及其应用

<130>无

<140>

<141>

<160> 1

<210> 1

<211> 2967

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 1

1        ATGGGAGTCC CGGCGTTCTA CCGGTGGCTG GCGGACCGGT ACCCGCAGAC GGTGTCGGAC

61       GCGGTGGAGG AGGAGCCCGT GGAGCTCGAG CCCGGCGCCT TCGTCCCCGT CGACCTCCGC

121      CGCCCCAACC CCAACGGCCT CGAGTTCGAC AACCTCTACC TCGACATGAA CGGCATCATC

181      CACCCCTGCT TCCACCCCGA GGGCCGCCCG GCTCCGACCA CCTACGACGA GGTGTTCAAG

241      TCGATTTTTG CCTACATTGA CCGCCTCTTC GGCCTCGTCC GCCCGAGGAA GCTCATCTAC

301      ATGGCCATCG ATGGCGTCGC GCCAAGGGCG AAGATGAATC AGCAGAGGTC TAGACGTTTC

361      CGGGCTGCTA AGGATGCGGC TGACGCGGCA GCTGAGGAGG AAAGGTTGAG GAAGGAATTT

421      GAGGCTGAAG GCAGGACTTT GGTTGCGAAG GAGAAGTCGG AAGCGATTGA CTCAAATGTC

481      ATAACTCCTG GGACACCATT CATGTTTGTA CTCTCTTCGG CGCTTCAATA CTACATACAG

541      CTGAGATTGA ACCACACACC TGGGTGGCAA TCTGTCAAGG TAATGCTTTC TGATTCGAAC

601      GTCCCTGGGG AGGGAGAACA CAAGATTATG TCATACATCC GCCTGCAGCG CAATCTCCCA

661      GGATTTGACC CAAATACACG CCATTGTTTA TATGGCCTTG ATGCTGATTT GATCATGCTT

721      TCTCTGGCTA CTCATGAGGT CCACTTCTCC ATTTTAAGAG AGGTGATTAC CATGCCAGGG

781      CAACATGAAA AATGCTTTCT CTGTGGTCAA GTTGGTCACT TGGCTGCTGA ATGCAGAGGA

841      TCTGGTCAGG CTGATAAGAC CGTGGAGCTC CCTCCTATCC ATAAGAAGAA GTATCAGTTT

901      CTTAACATCT GGGTTCTGCG TGAATACCTG GAGAAGGATT TGGAAATTGT TGATCCCCCC

961      TTCAAGATAA ACTTTGAGCG TGTTGTGGAT GATTTTGTTT TCATGTGTTT CTTTGTTGGG

1021     AATGACTTTC TGCCTCACAT GCCAACTTTG GAGATCCGCG AGGGTGCCAT TAATCTTCTC

1081     ATGAATATAT ATAGAAGGGA GTTCACATCA ATGGGTGGTT ACCTCACCGA TGGGGGTGAG

1141     GTTTTGTTGG ATCGAGTGGA GCATTTCATT CAATCTGTTG CTGTCCATGA AGAGCAAATT

1201     TTCCAGAAGC GTGCACGCAT TCAGAAGGCT ATCCAGAACA ATGAGGAGAG GAATAGAGTG

1261     CAGACAGAGA ACTCTGAGGA TAATCAATAT GTGGACAAGG TAAAATTAGG AGAACCAGGA

1321     TACAGGGTGA GATACTACGC TGAGAAGTTT AAAGAAGAGG CAGAACTAAA ACCCATTGAT

1381     CAAGTTCAGA GAGATGTTGT CCAGAAATAT GTGGAAGGTC TTTGCTGGGT TATGAGATAC

1441     TACTATCAAG GTGTTTGCTC ATGGCAGTGG TTTTATCCAT ACCATTATGC ACCTTTTGCA

1501     TCAGACCTGA AATGCTTGGC TGAATTGGAG ATTACATTTT TCTTGGGTCA ACCTTTCAAG

1561     CCATTTGATC AACTAATGGG AACACTACCA GCTGCTAGTT CCAATGCGTT GCCAAAGTAC

1621     TATGGGGATT TGATGAATGA TCCTAATTCA CCGTTGAAGT CTTTCTATCC CAAAGATTTT

1681     GAGATAGACA TGAACGGCAA ACGTTTTGCA TGGCAGGGTA TTGCAAAATT GCCTTTTATC

1741     GATGAAAGGC GTCTGCTTGC GGAGACGCAG AAGCTTGAAG AAACATTGAC AGATGAAGAG

1801     AGATTCAGGA ATAGGACAAT GTTTGACATC CTTTACGTGC GGGAAACTCA TCCATTGGCC

1861     GCTCAAATTG CATTTCTATA TCAGATGTGC TCTCAATCAC CAAATGCTTC CTATATAATT

1921     CCCATTGACC CTGCTGCTAG TGGTGGAATG AACGGATTTC TTTGTTTATC TGAAAGGAAC

1981     TGTTACAGCA TCGTGGTAAC ATCTCCAGTT AAGGGGTTCA ATGGCATCGC CCAGAACAGA

2041     GTTCTGAATG CAACCTACCT TAACCCTCAG TATCACAAAC ACATTCCTGA GCCTCCGGAA

2101     GGTGTCATCA TACCTGCAAA GATATTGAAG CCTAGTGATT TCAAACCCTT TCCTATTTTG

2161     TGGCATGAAG ATAATAGTCG GCGTCAGCCA AGAGAAAGGC CTCAGGTTTC TGGAGCTCTG

2221     TCAGGCTCTG TCTTAGGAGA GGCTGCACAT CGCCTGGTGA AAAACTCACT GCAGATAAAA

2281     TCCGGCTACT CTGCTGGGCT GCTTGACATG CCATACAGGG GTGCCCCCTA TGGTCCTGGA

2341     AACAGACCTA GGCCTGCTGG ACCATTGGGA TATGAGAGAG GTTTTGTTGA AAATTCATAC

2401     AATGGACACA TGTCCAGAAG CGTTCCAAAT TCTCATCCTC AGTTCTTCGG CGACGCTCAA

2461     GCCAACAGAC AGAATGTGAG GATACTGGAA CGACCAAACT ATCGAAACAA CGACAGTGCC

2521     ATCCATTCAG GGATGTCGCA ACTAACAATC CAAGATGGCC CAAGGATGCA TCAAAACAAC

2581     AGGATGCAGA ACTCCGGATT TTCACCTAAT CAGCCACATC CCAATCAGTA TGCAGGATTC

2641     CCACCCCAGC GTCCCATGCA GAACTCCGGT TTTACGCCAC AGCGACCTGC ACAATATTCA

2701     GGATTTCCAC ACCAGAGGCC TGTCCAAATA GGACTTCAAC ATCAGCCAGC AGTAAATGGG

2761     ATTCAACCAC CGTTACCCCC CAGTGCATGG ATTGGCAGGC CAATAAGTGG AGTCCCAGCA

2821     GGAGTACCTG CCAAGCAGGA TCCTAGGATG GCCATGGATA GGCAGCCCAA ACAAGATAAC

2881     TCGAGATCAC AGCATGACAA GAGACAGCAG GCTACTAAGG TAGTATACCG TGTCAAAGGT

2941     CAAGGTCCCA ATGGCCTGAG TGAGTGA

 

 

Claims (1)

1.水稻OsXrn4基因的用途，该基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示，其特征在于：该基因用于制备抗水稻条纹叶枯病毒（Rice stripe virus）的水稻。