CN103497912B - 一株降解生物胺的壁画盐单胞菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于食品生物技术领域。本发明公开了一株可以降解生物胺的壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001，保藏编号为CGMCC No.7316。该壁画盐单胞菌BTH001不但本身不产生生物胺，而且可以同时降解多种生物胺。该壁画盐单胞菌适用的范围广泛(温度20‑40℃，pH4‑9，氯化钠浓度≤15％，乙醇浓度≤4％)，可用于发酵制品的同步发酵剂，也可用于降解产品中的生物胺，对控制食品中的生物胺具有重要意义。

Description

一株降解生物胺的壁画盐单胞菌及其应用

技术领域

该发明涉及一株壁画盐单胞菌菌株，特别是一株本身不产生物胺、且对生物胺有降解能力的壁画盐单胞菌。

背景技术

生物胺是一类含氮低分子化合物的总称，主要包括组胺、色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、酪胺和精胺等。生物胺主要来源于相应氨基酸的脱羧反应，产生生物胺的三个基本条件：①存在前体氨基酸；②存在能产生氨基酸脱羧酶的微生物；③有适合微生物产氨基酸脱羧酶和酶发挥作用的环境。生物胺多存在于氨基酸含量高的食品中，如发酵香肠、鱼露、咸肉、咸鱼、干酪和腐乳等。人体自身的胺类氧化酶可以对摄入的低剂量生物胺进行解毒，但生物胺在人体积累到较高数量时会产生毒害。组胺会中毒后主要损伤的器官是血管和平滑肌，导致头痛、支气管痉挛、心跳加快等疾病；酪胺、苯基乙胺和色胺会引起高血压，也会导致头痛、呕吐、瞳孔扩张；腐胺和尸胺的毒性相对较小，主要会造成低血压、心动过缓、破伤风、四肢麻痹等；许多因素会增加生物胺对机体的毒性，主要是基因导致的人体胺类氧化酶的缺乏、外在因素引起的机体内单胺氧化酶、多胺氧化酶等的减少。

目前，尚没有有效控制食品中生物胺的方法。为了保证食品的安全，各国科学家都在积极探索有效控制生物胺的方法。由于食品生产工艺的特殊性，一般很难通过改变生产过程的物理参数来实现对生物胺的控制；而通过物理(高温、辐照等)或者添加化学物质的方法对终产品进行处理，则可能会导致食品中营养成分的流失、风味的改变，甚至引入新的不安全因素。在食品中引入具备降解生物胺能力、不存在安全隐患的微生物作为发酵剂，该方法体现了较大的应用潜力。目前，尚没有实际应用的生物胺降解微生物。为了控制食品中的生物胺，还需进一步筛选降解效果好、降解生物胺种类多的微生物，开展生物胺降解实际应用技术的研究。

发明内容

本发明提供了一株具备较强生物胺降解能力的壁画盐单胞菌(Halomonasmuralis)BTH001。

本发明的壁画盐单胞菌已于2013年3月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7316。

所述壁画盐单胞菌系从广东省汕头市汕头鱼露厂有限公司的鱼露样品中筛选分离得到，是一株对生物胺有较强降解能力的菌株，经系统分类鉴定，为壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)。

所述壁画盐单胞菌保藏方法：从加盐LB固体培养基(胰蛋白胨1％，酵母浸膏0.5％，氯化钠3％，琼脂2％)平板上挑选生长良好的单菌落接种至加盐LB液体培养基(胰蛋白胨1％，酵母浸膏0.5％，氯化钠3％)，30℃、160rpm培养24h，取1mL培养液加入到含有1mL40％甘油的保藏管中，于-80℃冰箱保藏。

所述壁画盐单胞菌的培养过程：将保藏的壁画盐单胞菌在加盐LB固体培养基平板上划线，30℃恒温培养24h，挑取单菌落接种至加盐LB液体培养基中，30℃、160rpm培养24h。

本发明同时提供了一种利用所述壁画盐单胞菌进行发酵食品中生物胺的控制方法：对壁画盐单胞菌进行培养后，离心(8000rpm，30min，4℃)收集菌体，将菌体用无菌生理盐水(氯化钠0.85％，w／v)制备成1.0×10⁶CFU／mL-1.0×10⁸CFU／mL的菌悬液，将该菌悬液作为发酵剂加入食品原料中，进行同步发酵，或者加入超标食品中，对其中的生物胺进行降解。

本发明提供的壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001，本身不产生物胺，且可以降解生物胺，可用于发酵制品的同步发酵剂，也可用于降解产品中的生物胺。

具体实施方式

实施例1：壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001的筛选方法

取不同发酵时期的鱼露为样品，加入到50mL的加盐LB液体培养基中，30℃，160r／m富集培养24h。用无菌生理盐水(氯化钠0.85％，w／v)梯度稀释培养液10，10²，10³，10⁴，10⁵倍，每个稀释度取0.1mL涂布于加盐LB固体培养基平板，30℃培养24h。根据菌落形态，样品来源信息挑取单菌落，在加盐LB固体培养基平板上划线分离三次，然后对获得的纯培养物进行培养，培养后保藏菌株。

对保藏菌株进行培养后，离心(8000rpm，30min，4℃)收集菌体，将菌体用无菌生理盐水(氯化钠0.85％，w／v)制备成1.0×10⁸CFU／mL的菌悬液。取1mL菌悬液加入到9mL含色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺和亚精胺八种生物胺各100mg／L的生理盐水，30℃、160rpm培养24h，通过丹磺酰氯柱前衍生-高效液相色谱法检测剩余生物胺的含量。

通过比较降解率，筛选到一株对生物胺有较强降解能力的菌株，降解效果如表1，该菌株对测定的八种生物胺都具有较好的降解作用，特别是可以100％降解色胺、苯乙胺和酪胺。通过16S rDNA序列分析可知该菌株为壁画盐单胞菌。

表1壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001对八种生物胺的降解率

实施例2：壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001本身不产生生物胺

对保藏的壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001进行培养后，离心(8000rpm，30min，4℃)收集菌体，将菌体用无菌生理盐水(氯化钠0.85％，w／v)制备成1.0×10⁷CFU／mL的菌悬液。取1mL加入到50mL含氨基酸1％的加盐LB液体培养基中，30℃、160rpm培养24h，通过丹磺酰氯柱前衍生-高效液相色谱法检测生物胺的含量。

检测结果表明，壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001本身不产生生物胺。

实施例3：影响壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001降解生物胺因素的研究

对保藏的壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001进行培养后，离心(8000rpm，30min，4℃)收集菌体，将菌体用无菌生理盐水(氯化钠0.85％，w／v)制备成1.0×10⁸CFU／mL的菌悬液。(1)取1mL菌悬液加入到9mL含色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺和亚精胺八种生物胺各100mg／L的生理盐水，在不同温度(4℃，10℃，20℃，30℃，40℃，50℃)下，160rpm培养24h；(2)取1mL菌悬液加入到9mL含色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺和亚精胺八种生物胺各100mg／L的生理盐水，用氢氧化钠和盐酸调节为不同pH(2，3，4，5，6，7，8，9，10)，30℃，160rpm培养24h；(3)取1mL菌悬液加入到9mL含色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺和亚精胺八种生物胺各100mg／L的生理盐水，添加不同量的氯化钠(0％，3％，5％，10％，20％，30％)，30℃，160rpm培养24h；(4)取1mL菌悬液加入到9mL含色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺和亚精胺八种生物胺各100mg／L的生理盐水，添加不同量乙醇(0％，2％，4％，6％，10％，15％，20％)，30℃，160rpm培养24h。通过丹磺酰氯柱前衍生-高效液相色谱法检测剩余生物胺的含量。

实验结果表明，壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001在温度20-40℃，pH4-9的范围对生物胺具有很好的降解效果，适用范围较广；当氯化钠浓度≤15％，壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001对生物胺具有很好的降解效果，说明所述壁画盐单胞菌可以应用于高盐环境；在乙醇浓度低于4％有很好的降解效果，在酒精浓度4-6％有部分降解效果，说明所述壁画盐单胞菌可以应用于低酒精环境。

可以理解的是，对于本领域普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，而这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。

Claims (3)

1.一株降解生物胺的壁画盐单胞菌(Halomonas muralis)BTH001，保藏编号为CGMCCNo.7316。

2.如权利要求1所述的壁画盐单胞菌，其特征在于本身不产色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺、亚精胺。

3.如权利要求1所述的壁画盐单胞菌应用于降解色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺、亚精胺。