CN103497222B - 一种从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法，其创新点为：在鲜活药材采收后立即进行灭酶处理；所述灭酶处理为：将采收后12h内的鲜活大青叶用药材与溶媒重量比1:1-5的比例添加35-70%的乙醇或甲醇中任意一种溶剂，混合粉碎，调pH值小于6；本发明提供的一种菘蓝苷的提取方法，有效的避免了菘蓝苷的水解和氧化，并且方法简单，适合工业化生产。

Description

一种从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法

技术领域

本发明提供了一种中药材活性成分提取方法，更具体的说涉及一种从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法。

技术背景

大青叶是我国的传统中药，为十字花科植物菘蓝IsatisindigoticaFortune的干燥叶，同时商品中也常采用蓼科植物蓼大青PolygonumtinctiriumLour；爵床科植物马蓝BaphicacanthuscusiafNees)Bremek.和马鞭草科植物路边青ClerodendroncyrtophyllumTurcz.作为大青叶的代用品。菘蓝的根和叶，具有清热解毒、凉血、消斑的功效，主治温病发热、发斑、发疹、风热感冒、咽喉肿痛、流行性脑脊髓膜炎、乙型脑炎、肝炎、腮腺炎、丹毒、痛肿等症，是治疗感冒常用的大宗药材。大青叶(菘蓝叶)中的主要成分有菘蓝苷(isatanB)、菘蓝苷易水解为靛玉红(indirubin)和靛蓝(indigo)，色胺酮(trptanthrin)、β-谷留醇、二十九烷、苯甲酸、临位氨基苯甲酸、在大青叶的全株中还含有芥苷(glucobrassicin)、新芥苷(neoglucobrassicin)、1-磺基苷(1-sulpho-3-indolylmethylglucosinolate)、吲哚醇、1-硫氰酸-2-羟基-3丁烯(1-thiocyano-2-hydroxy-3-butene)、腺苷(adenosine)、棕榈酸、γ-谷甾醇等，天门冬氨酸、苏氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸及高含量的铁和锰。据报道，在大青叶的四个品种中都含有靛蓝、靛玉红，其中，菘蓝叶中菘蓝苷(isatanB，有的也称大黄素B和靛红烷B)含量最高，据报道最高含量达到1％。所述菘蓝苷的结构式为：

发明内容

研究发现，菘蓝苷在各大青叶品种的鲜品中大量存在，尤其是菘蓝中含量最高，但是在大青叶采收和干燥的过程中，由于大青叶自身酶的作用和氧化的原因，导致大青叶中菘蓝苷损失，在储藏超过半年的大青叶中，一般很难检测出菘蓝苷。为解决上述问题，本发明提供了一种从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法；具体内容为：

一种从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法，其创新点为：在鲜活药材采收后立即进行灭酶处理；

所述灭酶处理为：将采收后12h内的鲜活大青叶用药材与溶媒重量比1:1-5的比例添加35-70％的乙醇或甲醇中任意一种溶剂，混合粉碎，调pH值小于6。

上述从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法，包括以下步骤：

1)将采收后12h内的鲜活大青叶用药材与溶媒重量比1:1-5的比例添加30-70％的乙醇，混合粉碎得到提取原浆；

2)过滤提取原浆，除去固体杂质，回收为密度大于1.1的浸膏；

3)用热的氯仿、一氯甲烷、二氯甲烷、四氯甲烷中的一种或几种的混合物作为溶媒，除去浸膏中的杂质，得到菘蓝苷粗产品。

3.根据权利要求2所述的从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法，其特征在于：步骤2)所述的除去固体杂质为用高速离心除杂或用超微过滤方法除去原浆中的固体杂质。

根据步骤3)所述的除去浸膏中的杂质为将用溶媒对浸膏进行回流提取或索氏提取，直至溶媒无色；在这里需要说明的是，由于回流提取和索氏提取的的原理类似，但是索氏提取适合实验室操作，而回流提取适合工业化生产；本领域技术人员可以根据生产量和生产条件自行选择方法)。

所述步骤3)操作后，还对菘蓝苷粗产品进行了进一步的纯化；

所述纯化工艺是用甲醇溶解，加热浓缩，降温析出菘蓝苷纯品。

本发明的有益技术效果是：本发明提供的一种菘蓝苷的提取方法，有效的避免了菘蓝苷的水解和氧化，并且方法简单，适合工业化生产。

具体实施方式

实施例1不同处理方法对原药材中菘蓝苷含量的影响考察

种植次年7-10月采收大青叶(菘蓝)鲜品，5-25℃，避光，存储备用；在采收后12h内，分别取样5组，每组大青叶鲜品1kg；分别给名为60℃干燥组、120℃干燥组、回流制样组、冷浸制样组；阴干组；采购市售大青叶作为市售组。

其中，60℃干燥组和120℃干燥组分别为在60℃和120℃鼓风烘干干燥制备得到干品；回流制样组为用药材重量5倍的水回流提取样品；阴干组为在常温条件下，通风干燥，干燥时间约1周；冷浸制样组为将鲜活大青叶用药材重量3倍的甲醇混合粉碎，调pH值至4-6，制备得到样品。

分别提取冷浸制样组和回流制样制样组进行检测，分别测定菘蓝苷、靛玉红和靛蓝的含量；分别将60℃干燥组、120℃干燥组、阴干组和市售组取药材适量用药材重量5倍的甲醇超声提取，H检测药材中的菘蓝苷、靛玉红和靛蓝的含量。具体内容如表1所示。

表1不同处理中大青叶有效成分的比较

注：除市售组以外，各组的原药材重量以鲜品计算。

从表1中的数据可知，在采收12小时内，对大青叶进行处理，均能检测出菘蓝苷；而市售大青叶干品中不能检出菘蓝苷；据报道，菘蓝苷该物质水解氧化后变成靛蓝、靛玉红和呋喃木糖酮酸，采用大青叶干品提取靛红烷B收率很低，据分析其主要原因是因为在大青叶干品烘干或贮藏的过程中被氧化，也有可能是因为鲜品中含有的酶导致靛红烷B发生水解。具体如下：

实施例2不同溶媒对菘蓝苷转移率的影响

种植次年7-10月采收大青叶(菘蓝)鲜品，5-25℃，避光，存储备用；在采收后12h内，分别取样6组，每组大青叶鲜品1kg；在采收后12h内，分别给名为20％乙醇制样组、30％乙醇制样组、60％乙醇制样组、70％乙醇制样组、90％乙醇制样组、甲醇制样组和氯仿制样组。分别将上述各组样品用药材重量5倍的20％、30％、60％、70％、90％和甲醇混合，粉碎，调pH值为4-6，过滤，得到提取液，氯仿组用用药材重量5倍的氯仿与大青叶混合，粉碎，调pH为4-6，反复搅拌，过滤，取氯仿层，挥干氯仿，用甲醇溶解，对甲醇溶液进行检测。具体结果见表2所示。

表2不同溶媒提取大青叶中有效成分的比较

注：除市售组以外，各组的原药材重量以鲜品计算。

从成本和生产安全性的角度考虑，选用30-70％的乙醇代替甲醇，更能够适应工业化生产的需要。

实施例3菘蓝苷提取方法考察

称取大青叶(菘蓝)鲜品10kg；采用实施例2的方法制备提取液，检测提取液中菘蓝苷的转移率为每千克鲜药材1582.45mg；将上述提取液采用高速离心机(15000rpm)除杂；取上清液，浓缩，制备得到密度大于1.1的浸膏，称量浸膏重量为75.25g。

分别取上述浸膏5.12g、4.71g、5.78g和5.01g，分别为氯仿除杂组、一氯甲烷除杂组、二氯甲烷除杂组和四氯甲烷除杂组；将各组用浸膏重量10倍的氯仿、一氯甲烷、二氯甲烷和四氯甲烷作为溶媒进行索氏提取除杂，直至溶媒呈无色。分别测定各组菘蓝苷的含量，具体如表3所示：

表3不同纯化溶媒对菘蓝苷转移率的影响

将上述各组的到菘蓝苷粗提物，添加甲醇加热溶解，缓慢，降温，析出菘蓝苷，得到的菘蓝苷的纯度均可以高于95％。

Claims (4)

1.一种从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法，其特征在于：在鲜活药材采收后立即进行灭酶处理；

其中，具体的提取方法包括以下步骤：

1）将采收后12h内的鲜活大青叶用药材与溶媒重量比1:1-5的比例添加60-70%的乙醇，调pH值为4-6混合粉碎得到提取原浆；

2）过滤提取原浆，除去固体杂质，回收为密度大于1.1的浸膏；

3）用热的氯仿、一氯甲烷、二氯甲烷、四氯甲烷中的一种或几种的混合物作为溶媒，除去浸膏中的杂质，得到菘蓝苷粗产品。

2.根据权利要求1所述的从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法，其特征在于：步骤2）所述的除去固体杂质为用高速离心除杂或用超微过滤方法除去原浆中的固体杂质。

3.根据权利要求1所述的从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法，其特征在于：根据步骤3）所述的除去浸膏中的杂质为：用溶媒对浸膏进行回流提取或索氏提取，直至溶媒无色。

4.根据权利要求1所述的从鲜活大青叶中提取菘蓝苷的方法，其特征在于：所述步骤3）操作后，还对菘蓝苷粗产品进行了进一步的纯化；

所述纯化工艺是用甲醇溶解，加热浓缩，降温析出菘蓝苷纯品。