CN103494978B - 使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法，它是由芦荟粉和灵芝粉制备而成，首先将芦荟粉和灵芝粉按比例配制，加蒸馏水制成混合溶液，静置过夜后取上清液过滤澄清；用盐酸将pH值调至6.3-6.5，加热灭菌后冷却；再将冷却液的pH值调至4.2-4.5，经超滤膜超滤，截留获得分子量≤10000Da的含药溶液分装在安瓿瓶中冻干即可。本发明的优点在于突破了传统的将芦荟仅当做排毒养颜通便降脂产品的使用范围，运用现代医药学手段，将芦荟、灵芝按照一定比例配伍制成注射液冻干粉，使其药用领域拓宽到治疗肝腹水瘤方面，试验证明，本发明冻干粉针剂治疗效果突出且无毒副作用，大大拓宽了芦荟的药物治疗领域。
Description
技术领域
本发明涉及冻干粉针剂，尤其是涉及一种使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法。
背景技术
芦荟(Aloe)是一种多年生百合科肉质的草本植物，是一种具有食用、美容、保健、医药以及观赏等功能的植物。芦荟化学成分复杂，已发现的成分超过160多种,主要有多糖、蒽醌类化合物、有机酸、氨基酸、酶和多肽、维生素、甾族化合物、矿物质、微量元素等有效活性成分。目前芦荟行业只有芦荟（芦荟丁）罐头、芦荟液、全叶芦荟粉、芦荟凝胶粉等基础原料，可以制造成芦荟胶、芦荟胶囊、芦荟片剂、芦荟口服液等口服芦荟产品。口服芦荟制品具有排毒养颜，润通肠胃，增强免疫功能等作用，但实际效果主要集中在通便功能上，对其他人体疾病没有明显改善和治疗作用。
灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。以紫灵芝药效为最好，灵芝原产于亚洲东部，中国分布最广的在江西。灵芝作为拥有数千年药用历史的中国传统珍贵药材，具备很高的药用价值，经过科研机构数十年的现代药理学研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护肝，促进睡眠等方面均具有显著疗效。
从目前情况看，对芦荟产品进行的更深层次的研究和将其与灵芝配伍作为药物应用方面的研究还尚显欠缺。
发明内容
本发明的目的在于提供一种使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法。
为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：
本发明所述的使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法，包括下述步骤：
第一步，将芦荟粉50-99份重量份和灵芝粉1-50重量份混合成原料药，按100重量份原料药添加2000重量份蒸馏水的比例配制成混合水溶液；
第二步，将混合水溶液搅拌均匀使芦荟粉、灵芝粉完全溶解，静置过夜分离；
第三步，将第二步分离后的上清液过滤澄清；
第四步，将第三步得到的滤液用盐酸将pH值调至6.3-6.5，加热到112℃-120℃灭菌30分钟，然后自然冷却；
第五步，用盐酸将第四步得到的冷却液的pH值调至4.2-4.5，经超滤膜超滤，截留获得分子量≤10000Da的含药溶液；
第六步，将第五步得到的药液分装在安瓿瓶中冻干即可。
所述芦荟粉和灵芝粉的重量份配比为：芦荟粉:灵芝粉=50:50。
所述芦荟粉和灵芝粉的重量份配比可以为：芦荟粉:灵芝粉=70:30。
所述芦荟粉和灵芝粉的重量份配比也可以为：芦荟粉:灵芝粉=90:10。
所述芦荟粉和灵芝粉的重量份配比还可以为：芦荟粉:灵芝粉=99:1。
为保证本发明制备的针剂的疗效，所述芦荟粉的制备方法为：
第一步，将新鲜芦荟叶浸泡30-60分钟，清洗干净后粉碎成芦荟浆汁；
第二步，将芦荟浆汁倒入加热反应罐中导入蒸汽加热至8-12℃，同时按芦荟浆汁总重量的0.125%加入果胶酶或蛋白酶，50-60分钟后，将温度升至75-80℃，保温3-5个小时进行灭活处理；
第三步，将第二步经过灭活处理后的的溶液过滤、浓缩、干燥后即可得到外观为淡黄色的芦荟粉成品。
为保证本发明制备的针剂的疗效，所述灵芝粉的制备方法为：
第一步，将灵芝清洗干净后烘干粉碎成0.02-15微米的超微粉；
第二步，将第一步得到的灵芝超微粉按100:2000重量份之比例加入蒸馏水溶解，倒入加热反应罐中导入蒸汽加热至75-80℃，保温5-6个小时，浓缩、干燥后即可得到外观为锗红色的灵芝粉成品。
本发明的优点在于突破了传统的将芦荟仅当做排毒养颜通便降脂产品的使用范围，运用现代医药学手段，将芦荟、灵芝按照一定比例配伍制成注射液冻干粉，使其药用领域拓宽到治疗肝腹水瘤方面，试验证明，本发明制备的注射液冻干粉针剂治疗效果突出且无毒副作用，可替代现有的西药产品，大大拓宽了芦荟和灵芝的药物治疗领域。
具体实施方式
本发明所述的使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法包括下述步骤：
第一步，制备芦荟粉：
将新鲜芦荟叶浸泡30-60分钟，清洗干净后采用食品用不锈钢破碎机将其粉碎成芦荟浆汁；粉碎时可将芦荟叶去皮粉碎或不去皮全叶进行粉碎；将芦荟浆汁倒入加热反应罐中导入蒸汽加热至8-12℃，同时按芦荟浆汁总重量的0.125%加入果胶酶或蛋白酶，以促进芦荟的降解，50-60分钟后，将温度升至75-80℃，保温3-5个小时进行灭活处理；最后将处理好的溶液采用振筛、硅藻土或板框过滤，也可将两种方式相结合进行过滤，如果需要脱色，还可加入活性炭进行脱色处理；浓缩后（浓缩汁的可溶性固形物控制在10%以内）采用喷雾干燥或冻干的方法将其制成外观为淡黄色的芦荟粉基础原料。
第二步，制备灵芝粉：
将灵芝清洗干净后烘干粉碎成0.02-15微米的超微粉；将灵芝超微粉按100:2000的重量份比例加入蒸馏水溶解，倒入加热反应罐中导入蒸汽加热至75-80℃，保温5-6个小时，浓缩后真空干燥或冷冻干燥得到外观为锗红色的灵芝粉成品。
第三步，制备冻干粉针剂：
1、将芦荟粉和灵芝粉按50-99:1-50之比例混合成原料药（实际制作时，芦荟粉和灵芝粉可以按50:50之比例混合, 也可以按70:30,90:10或 90:10之比例混合），按100g原料药添加2000g蒸馏水的比例配制成混合水溶液（工业生产时可按此比例放大）；
2、将混合水溶液搅拌均匀或超声溶解15分钟，使芦荟粉、灵芝粉完全溶解，得到浅棕色溶液静置过夜分离（可使用上海东华高压均质机设备）；
3、将分离后的上清液过滤澄清；
4、将滤液用37%的盐酸将pH值调至6.3-6.5，加热到112℃-120℃高温灭菌30分钟，然后自然冷却；
5、用37%的盐酸将冷却液的pH值调至4.2-4.5，使用超滤工艺，经超滤膜超滤，截留获得分子量≤10000Da的含药溶液（工业生产可使用合肥风云膜分离技术有限公司生产的全自动膜分离超滤设备，实验室使用4号滤斗）；
6、将得到的药液分装在10mm的安瓿瓶中，-30℃冻干即可（可使用兰州科近真空冻干技术有限公司生产的JDG-100F全自动真空冻干机）。
注射时，用0.9%生理盐水稀释溶化成注射液即可使用。
本发明制备的冻干粉针剂分为两种：
1、采用去皮芦荟制得的注射液冻干粉针剂，呈淡棕色，规格：每瓶含可溶性芦荟有效成分0.75克，以下简称ZD-01。
2、采用不去皮芦荟（全叶芦荟）制得的注射液冻干粉针剂，呈棕色，规格：每瓶含可溶性芦荟有效成分0.9克，以下简称ZD-02。
本发明制备的治疗肝腹水瘤注射液冻干粉针剂ZD-01、ZD-02对小鼠S180腹水瘤的影响试验如下：
1. 目的
应用小鼠S180腹水瘤模型，考察ZD-01和ZD-02受试样品的抗肿瘤作用。
2. 材料
2.1. 样品: ZD-01，注射粉针形式，呈淡棕色，规格：每瓶含可溶性成分0.75克。ZD-02，注射粉针形式，呈棕色，规格：每瓶含可溶性成分0.9克。给药时直接用注射用无菌生理盐水溶解，并稀释成所用浓度。吉西他滨，0.2g/瓶，礼来公司。
2.2. 试剂： DMEM（Gibco），小牛血清(维森特，20130118)，Trypsin (Amresco)， DMSO(Sigma)，
2.3. 动物：雌性ICR小鼠，18-22g左右，由南京医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（苏）2013-0005。
2.4. 细胞株： S180肿瘤细胞株，由本实验室提供。
2.5. 仪器：GS-15R台式冷冻离心机（Beckman）；BP310s电子天平(sartorius)；Microfuge微量离心机（Beckman）；DK-8D电热恒温水浴槽（上海精宏实验设备有限公司）；MS1 Minishaker(IKA)；层流架（苏净集团安泰公司）；CO2培养箱（Thermal）；Millipore Q8纯水仪(Millipore，U.S.A)；SW-CJ-1FD净化工作台（苏净集团安泰公司）；Zeiss AVIVO型倒置显微镜（Zeiss）；
3. 方法
3.1 小鼠腹水瘤模型
取冻存S180瘤株在37℃下迅速解冻，1000 rpm、离心5 min，弃去上清液，下层细胞用无菌生理盐水调节细胞数至1×107个/ml，无菌条件下小鼠腹腔注射，每只0.3 ml。常规饲养至小鼠腹腔膨大（大致为接种后第7天），无菌条件下抽取S180荷瘤小鼠腹腔中淡黄色腹水3~5 mL，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，下层细胞用无菌PBS缓冲液(pH 7)洗涤3次，经台盼蓝排斥试验检查细胞存活率在95%以上，则加无菌生理盐水调节癌细胞浓度为1×107个/mL的细胞悬液。再次在无菌操作下小鼠腹腔注射0.3mL细胞悬液，随即将注射过肿瘤细胞悬液的小鼠随机分为6组，分别为模型组，阳性对照组（5-FU：20mg/kg），ZD-01高低剂量（144 mg/kg、288 mg/kg），ZD-02高低剂量（180 mg/kg、360 mg/kg），每组12只。分组24 h后，腹腔注射给药，连续15 d。每日观察动物的行为情况，并记录荷瘤小鼠在15天内的死亡数量。剩余小鼠继续给药，直至所有小鼠均死亡，记录所有小鼠的存活天数，计算荷瘤小鼠的生命延长率。
给药方式及时间
采用静脉注射给药，5 ml/kg，每天一次，给药时间取决于小鼠的存活状况。
评价指标
荷瘤小鼠的死亡率(%)及生命延长率(%)。生命延长率(%)=（给药组平均生存天数-模型组平均生存天数）/模型组组平均生存天数。
统计方法
计数数据采用卡方检验进行组间差异检验。
4. 结果
表1结果显示，模型组小鼠在腹腔接种腹水型S180肿瘤后在15天内全部死亡，死亡率达到100%，而各给药干预组则表现不同。ZD-01低剂量组小鼠的死亡率为50%，高剂量组小鼠死亡率为41.7%，分别比模型组下降了50%和58.3%，与模型组比较有显著性差异，p值分别小于0.05和0.01（表1）。同时在持续的给药中，ZD-01能明显的延长腹水型荷瘤小鼠的存活时间，低高剂量ZD-01对小鼠的生命延长率分别为45.2%和62.6%。ZD-02低剂量组小鼠的死亡率为66.7%，高剂量组小鼠死亡率为75%，分别比模型组下降了33.3%和25%，说明ZD-02亦能降低荷瘤小鼠的死亡率，但比较p值大于0.05，显示与模型组比较未见有显著性差异。相应的在小鼠生命延长率方面，ZD-02延长荷瘤小鼠生命期均在20%左右。
表1. ZD-01、ZD-02对腹水瘤小鼠死亡率及生命延长率的影响
注：与模型组比较，* p < 0.05, ** p < 0.01。
5. 结论
ZD-01给药后能明显降低小鼠的死亡率，并明显延长荷瘤小鼠的生存期，说明ZD-01对小鼠S180腹水型肿瘤有明显的抑制作用。ZD-02给药后也能降低小鼠的死亡率，并延长荷瘤小鼠的生存期，但其作用明显弱于ZD-01。
Claims (7)
1.一种使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法，其特征在于：它是由芦荟粉、灵芝粉按照下述重量份配比和方法制备而成：
第一步，将芦荟粉50-99份和灵芝粉1-50份混合成原料药，按100份原料药添加2000份蒸馏水的比例配制成混合水溶液；
第二步，将混合水溶液搅拌均匀使芦荟粉、灵芝粉完全溶解，静置过夜分离；
第三步，将第二步分离后的上清液过滤澄清；
第四步，将第三步得到的滤液用盐酸将pH值调至6.3-6.5，加热到112℃-120℃灭菌30分钟，然后自然冷却；
第五步，用盐酸将第四步得到的冷却液的pH值调至4.2-4.5，经超滤膜超滤，截留获得分子量≤10000Da的含药溶液；
第六步，将第五步得到的药液分装在安瓿瓶中冻干即可。
2.根据权利要求1所述的使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法，其特征在于：所述芦荟粉的制备方法为：
第一步，将新鲜芦荟叶浸泡30-60分钟，清洗干净后粉碎成芦荟浆汁；
第二步，将芦荟浆汁倒入加热反应罐中导入蒸汽加热至8-12℃，同时按芦荟浆汁总重量的0.125%加入果胶酶或蛋白酶，50-60分钟后，将温度升至75-80℃，保温3-5个小时进行灭活处理；
第三步，将第二步经过灭活处理后的的溶液过滤、浓缩、干燥后即可得到外观为淡黄色的芦荟粉成品。
3.根据权利要求1所述的使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法，其特征在于：所述灵芝粉的制备方法为：
第一步，将灵芝清洗干净后烘干粉碎成0.02-15微米的超微粉；
第二步，将第一步得到的灵芝超微粉按100:2000重量份之比例加入蒸馏水溶解，然后倒入加热反应罐中导入蒸汽加热至75-80℃，保温5-6个小时，浓缩、干燥后即可得到外观为锗红色的灵芝粉成品。
4.根据权利要求1所述的使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法，其特征在于：所述芦荟粉和灵芝粉的重量份配比为：芦荟粉:灵芝粉=50:50。
5.根据权利要求1所述的使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法，其特征在于：所述芦荟粉和灵芝粉的重量份配比为：芦荟粉:灵芝粉=70:30。
6.根据权利要求1所述的使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法，其特征在于：所述芦荟粉和灵芝粉的重量份配比为：芦荟粉:灵芝粉=90:10。
7.根据权利要求1所述的使用芦荟、灵芝制备治疗肝腹水瘤的冻干粉针剂的方法，其特征在于：所述芦荟粉和灵芝粉的重量份配比为：芦荟粉:灵芝粉=99:1。
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