CN103494738A

CN103494738A - 一种天然防腐中药复方提取液的制备方法

Info

Publication number: CN103494738A
Application number: CN201310455009.7A
Authority: CN
Inventors: 李成亮; 袁圆; 卞春亮
Original assignee: Shanghai Laibo Bio-chemical Co Ltd
Current assignee: Shanghai Laibo Bio-chemical Co Ltd
Priority date: 2013-09-29
Filing date: 2013-09-29
Publication date: 2014-01-08

Abstract

一种天然防腐中药复方提取液的制备方法，包括以下制备步骤：将原料用提取溶剂提取；用纳滤装置脱除大分子物质。本发明的制备方法克服了传统中药小极性有效成分的脱色难问题。

Description

一种天然防腐中药复方提取液的制备方法

技术领域

本发明设计一种提取液的制备方法，更具体地说，涉及一种天然防腐中药复方提取液的制备方法。

背景技术

目前中药制备最常用脱色方法为活性炭脱色，活性炭对小极性物质的吸附效果特别好，不适合使用极性较小的溶剂提取溶液的脱色，会使有效成分大量损失。也有用大孔树脂进行脱色处理的，但该法成本非常高，相对产量低，生产周期也很长；采用耐有机试剂的纳滤装置进行脱色精制，是开发简单易行的色素脱除技术，特别是小极性物质中的色素脱除技术的可行思路。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服了传统中药小极性有效成分的脱色难，成本高等问题，提供了一种天然防腐中药复方提取液及其制备方法，该方法进行脱色精制，在满足化妆品美感和节约成本上有突出贡献。

本发明提供的天然防腐中药复方提取液的制备方法，包括：

（1）将复方（饮片）用乙醇-水提取

（2）过滤

（3）过滤液加入纳滤装置的搅拌罐中；

（4）开启循环，调节回流阀使压力表压力保持0.5～0.7MP；

（5）接收池接收60～80%透过液时，打开回流阀，并在储罐中加入0.2～0.4倍溶剂，循环2min；

（6）调节回流阀使压力表压力保持0.5～0.7MP；

（7）继续收集透过液至原液量，停止循环；

浓缩除去溶剂，置换成所需溶剂，如丙二醇，甘油，丁二醇，及其含水溶液，辛酸/癸酸甘油三酯等。

本案天然防腐中药复方中的有效成分主要为分子量小于300道尔顿的成分，而叶绿素等色素的分子量在900道尔顿左右，可利用孔径介于这两类分子大小之间的膜将其分离。

本发明的突出技术效果在于：

（1）本发明找到小极性物质脱色的新方法，在有效保留有效成分的基础上，脱除叶绿素等大分子有色成分，并且增加产品的稳定性；

（2）与传统的柱层析技术相比，膜分离技术能有效的缩短生产周期，大幅提高产量，降低生产成本，并降低工人的劳动强度；

（3）采用刚性高分子微孔板做支撑的平板式过滤设计，能承受高的压力，提高膜分离的效率，并且易进行高压反冲，便于膜的清洗；

通过中药组合以及特殊的纯化工艺开发出具有高效抗菌且具有化妆品美感的产品。

（4）化妆品用的植物提取液需要有较浅的颜色并保持澄清和稳定，而叶绿素等有色物质的存在使提取液的颜色很深，并且因其分子量较大易引起提取液不稳定，严重影响产品的性能。特别是在使用极性较小的溶剂进行提取时，叶绿素的溶出更为严重。本发明针对防腐中药复方有效成分主要集中在极性较小部位，以极性较小溶剂进行提取后叶绿素大量溶出这一情况，采用耐有机溶剂的纳滤膜进行纳滤的技术，选择性的除去叶绿素等脂溶性大分子物质，使提取液颜色变浅，稳定性增加。该法同样适合使用极性较小的溶剂提取后的叶绿素等脂溶性大分子物质的去除，对中药提取液在化妆品中添加应用，乃至传统中药的制备工艺，都有重要的指导意义。

附图说明

图1为本发明的制备工艺的示意图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

实施例1：

工艺流程：

制备装置及工艺如图1所示，包含搅拌罐1，泵2，纳滤装置3和回流阀4，其中，纳滤装置3包括有机膜301，微孔板302及钢支撑板303，中药复方经常规的提取过滤后加入搅拌罐1，通过泵2不断循环，再通过纳滤装置3时小分子量物质不断透过有机膜301，未透过有机膜301的液体循环回到搅拌罐1中，通过回流阀4可以调节纳滤装置内的压力，透过液5即为脱色后的液体。图1中箭头的指向为液体的流向。

抑菌试验步骤：

（1）试验菌株

金黄色葡萄球菌（ATCC8739），大肠杆菌（ATCC6538），绿脓杆菌（ATCC9027），白色念珠球菌（ATCC10231），黑曲霉菌（ATCC16404）。

（2）培养基

TSB固体培养基：蛋白胨10g/L，NaCl10g/L，K2HPO42.5g/L，酵母提取物3g/L，琼脂15g/L，蒸馏水溶解，调节pH为7.2±0.2，115℃高压灭菌20min；TSB液体培养基：蛋白胨10g/L，NaCl10g/L，K2HPO42.5g/L，酵母提取物3g/L，蒸馏水溶解，调节pH为7.2±0.2，115℃高压灭菌20min；

SDB固体培养基：蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，K2HPO43g/L，酵母提取物5g/L，琼脂15g/L，蒸馏水溶解，115℃高压灭菌20min；SDB液体培养基：蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，K2HPO43g/L，酵母提取物5g/L，蒸馏水溶解，115℃高压灭菌20min。

（3）菌悬液制备及接种

取甘油保藏的金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，绿脓杆菌100μL涂布于TSB固体培养基上，37℃培养2d，用生理盐水重悬，得到菌悬液，并用平板培养法计数，将测试菌浓度调整为10⁵～10⁶CFU/mL。

白色念珠球菌和黑曲霉菌100μL涂布于SDB固体培养基上，30℃培养2d，用生理盐水重悬，得到菌悬液，并用平板培养法计数，将测试菌浓度调整为10⁵～10⁶。

（4）样品抑菌作用的测定

杯碟法

在培养皿中倒入TSB或SDB固体培养基，待凝固后，在此培养基上均匀涂布测试菌100μL。在培养基上等距离放2个无菌牛津杯[内径(6.0±0.1)mm，外径(8.0±0.1)mm，高(10.0±0.1)mm，在杯内分别注入200μL待测样品，用生理盐水或含一定量的DMSO的生理盐水作为对照。37℃或30℃恒温箱中培养2d后，用直尺测量各种药品的抑菌圈直径，取其平均值。

微孔板法

在微孔中加入100μL待测样品（初始浓度），再加入含测试菌浓度1.0×10⁵CFU/mL为2×TSB或2×SDB液体培养基100μL，混匀，即待测样品的测试浓度为初始浓度的50%。30℃或37℃恒温箱中培养2d后，观察有无菌生长。结果判断的前提是生长对照良好，空白对照无菌生长清晰。

（5）最低抑菌浓度(MIC值)的测定

①最低抑制金黄色葡萄球菌浓度（MIC）、最低抑制大肠杆菌浓度（MIC）、最低抑制绿脓杆菌浓度（MIC）、最低抑制白色念珠球菌浓度（MIC）的测定方法如下：

（1）药液制备

将待测样品用生理盐水稀释成实验浓度。

（2）菌液制备用2×TSB或2×SDB液体培养基稀释菌悬液，使其最终菌浓度为10⁵CFU/mL。

（3）培养及结果判读在微孔中加入菌液100μL和药液100μL，同时设不加菌的阴性对照和不加药液的正常生长对照，每种药做3个平行，取平均值。置37℃或30℃湿盒孵育，48h后观察结果，采用直接法读取数据。结果判断的前提是生长对照良好，空白对照无菌生长清晰，其它孔随药物浓度梯度升高而菌的生长受到抑制。

②最低抑制黑曲霉浓度（MIC）测定

采用杯碟法，在培养皿中倒入SDB固体培养基，待凝固后，在此培养基上加入黑曲霉菌（10⁵CFU/ml）100μL，均匀涂布。在培养基上等距离放3个无菌牛津杯[内径(6.0±0.1)mm，外径(8.0±0.1)mm，高(10.0±0.1)mm，在杯内分别注入200μL不同浓度的样品（用生理盐水稀释）。同时设不加测试样品的正常生长对照和生理盐水对照。结果判断的前提是生长对照和生理盐水对照生长良好，其它随药物浓度梯度升高而菌的生长受到抑制。

制备步骤：

（1）罗勒30g，金银花20g，迷迭香20g、夏枯草20g，丹参10g，用1000ml乙醇回流提取2h；

（2）定性滤纸过滤；

（3）过滤液转移进入搅拌罐，边搅拌边循环液体，调节回流阀使压力保持0.5～0.7MP，纳滤膜的孔径为900道尔顿；

（4）透过液收集至原液量70%时，搅拌罐中加入0.3倍乙醇，打开回流阀循环2min，调节回流阀使压力维持0.5～0.7MP，收集透过液至原液量，停止循环；

（5）浓缩至40ml，加丙二醇至200ml，搅匀即得。

实施例2：

（1）罗勒20g，金银花10g，迷迭香30g、夏枯草30g，丹参10g，用1000ml50%的乙醇回流提取2h；

（2）定性滤纸过滤；

（3）过滤液转移进入搅拌罐，边搅拌边循环液体，调节回流阀使压力保持0.5～0.7MP，纳滤膜的孔径为500道尔顿；

（4）透过液收集至原液量60%时，搅拌罐中加入0.4倍50%乙醇，打开回流阀循环2min，调节回流阀使压力维持0.5～0.7MP，收集透过液至原液量，停止循环；

（5）浓缩至40ml，加丙二醇至200ml，搅匀即得。

实施例3：

（1）罗勒20g，金银花10g，迷迭香30g、夏枯草20g，丹参20g，用1000ml75%的乙醇回流提取2h；（2）定性滤纸过滤；

（4）透过液收集至原液量80%时，搅拌罐中加入0.2倍75%乙醇，打开回流阀循环2min，调节回流阀使压力维持0.5～0.7MP，收集透过液至原液量，停止循环；

（5）浓缩至40ml，加丙二醇至200ml，搅匀即得。

对比实施例1：

传统煎煮-活性炭脱色法：

（1）罗勒30g，金银花20g，迷迭香20g、夏枯草20g，丹参10g，用1000ml95%的乙醇回流提取2h；

（2）定性滤纸过滤；

（3）过滤液加入0.5%活性炭（150目），煮沸搅拌0.5h，过滤；

（4）浓缩至40ml，加丙二醇至200ml，搅匀即得。

对比实施例2：

传统煎煮法：

（2）定性滤纸过滤；

（3）浓缩至40ml，加丙二醇至200ml，搅匀即得。

本发明与传统的生产方式相比，产品各项指标如表1所示：

表1

由表1可知，本发明的组方抑菌功效显著，具有广谱的抗菌功效，适合作为天然防腐剂使用，工艺方案保持了抑菌功效，并大幅降低产品的颜色，产品稳定，适合添加到化妆品中作为防腐剂使用。

本发明采用的平板纳滤膜为华东理工大学化学工程研究所提供的耐有机试剂膜，支撑板为温州市东瓯微孔过滤有限公司的0.3μm PE刚性高分子微孔板。

应当理解的是，本发明所述wt%均指的是质量百分含量。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims

1.一种天然防腐中药复方提取液的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：

（1）将原料用提取溶剂提取；

（2）用纳滤装置脱除大分子物质。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述原料为复方（饮片）。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述复方（饮片）的组成及重量配比为：罗勒20～30份，金银花10～20份，迷迭香20～30份、夏枯草20～30份以及丹参10～20份。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提取溶剂为50-100wt%乙醇溶液，所述纳滤装置为平板式耐高压的纳滤设备。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述纳滤装置为截留分子量为500～900道尔顿的耐有机溶剂的平板式纳滤膜，所述纳滤装置的支撑层为刚性高分子微孔板，操作压力0.5-0.7MP。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大分子物质的分子量大于500道尔顿。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述大分子物质为叶绿素。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）和步骤（2）之间，还包含过滤步骤；进一步地，所述步骤（2）包括开启循环，调节回流阀使压力表压力保持0.5～0.7MP；接收池接收60～80%透过液时，打开回流阀，并在储罐中加入0.2～0.4倍溶剂，循环2min；调节回流阀使压力表压力保持0.5～0.7MP；继续收集透过液至原液量，停止循环。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括步骤（3）：浓缩除去乙醇，置换成所需溶剂。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述所需溶剂为丙二醇，甘油，丁二醇和/或其含水溶液。