CN103444547A - 一种楤木悬浮细胞培养的方法 - Google Patents

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CN103444547A CN 201310423763 CN201310423763A CN103444547A CN 103444547 A CN103444547 A CN 103444547A CN 201310423763 CN201310423763 CN 201310423763 CN 201310423763 A CN201310423763 A CN 201310423763A CN 103444547 A CN103444547 A CN 103444547A
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  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
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Abstract

本发明公开了一种楤木悬浮细胞培养的方法，包括无菌叶片的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的增殖，悬浮细胞的培养。本发明建立了楤木的悬浮细胞培养的方法，可以在短期内获得大量的楤木愈伤组织和悬浮细胞，用于药用成分的提取和制药工业。

Description

一种楤木悬浮细胞培养的方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养的快繁方法，属于植物技术领域。
背景技术
楤木，五加科，小乔木或灌木，别名仙人仗、鹊不踏、刺包头，分布黄河以南至两广北部、西南、东南各省区。生于林内、林缘或灌丛中，喜生于沟谷、阴坡、半阴坡海拔250~1000m的杂树林、阔叶林、阔叶混交林或次生林中。耐寒，但在阳光充足、温暖湿润的环境下生长更好。空气湿度在30%~60%之间，喜肥沃而略偏酸性的土壤。楤木以根皮和茎入药，药材味苦、辛，性平。有补气安神、强精滋肾、健胃利水、祛风除湿、活血止痛的功用。楤木主治神经衰弱、风湿性关节炎、肝炎、慢性胃炎、胃痉挛、胃及十二指肠溃疡、肾炎水肿、糖尿病及阳虚气弱、慢性病气虚无力、颅外伤后无力综合症、肾虚阳痿等症，还具有降血压、降血糖及抗放射的作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种楤木悬浮细胞的培养方法，由该方法可以获得大量的楤木悬浮细胞，并规模化的为药厂提供制药的原料。
本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的：
将楤木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分，获得的楤木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA0.5mg/L+IBA 3mg/L中进行愈伤组织诱导，培养条件为温度25℃，暗室培养，湿度30%~60%，将楤木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA 1mg/L+2，4-D 0.3 mg/L中进行增殖培养，培养条件温度25℃，光照强度1000-2000lx，光期10h，暗期14h，湿度30%~60%，增殖后的楤木愈伤组织接种到MS+KT0.3mg/L+TDZ0.1mg/L培养基中，每50ml悬浮细胞添加100ml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养，继代培养3代，获得大量的楤木悬浮细胞。
采用本发明制备的楤木悬浮细胞，周期短，产量大，能耗少，利于大生产操作。
下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
实施例1
将楤木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分，获得的楤木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA 0.5mg/L+IBA3mg/L中进行愈伤组织诱导，培养条件为温度25℃，暗室培养，湿度30%~60%，将楤木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA 1mg/L+2，4-D 0.2 mg/L中进行增殖培养，培养条件温度25℃，光照强度1000-2000lx，光期10h，暗期14h，湿度30%~60%，增殖后的楤木愈伤组织接种到MS+KT0.2mg/L+TDZ0.05mg/L培养基中，每50ml悬浮细胞添加100ml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养，继代培养3代，获得大量的楤木悬浮细胞。
实施例2
将楤木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分，获得的楤木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA 0.5mg/L+IBA3mg/L中进行愈伤组织诱导，培养条件为温度25℃，暗室培养，湿度30%~60%，将楤木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA 2mg/L+2，4-D0.5 mg/L中进行增殖培养，培养条件温度25℃，光照强度1000-2000lx，光期10h，暗期14h，湿度30%~60%，增殖后的楤木愈伤组织接种到MS+KT0.4mg/L+TDZ0.2mg/L培养基中，每50ml悬浮细胞添加100ml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养，继代培养3代，获得大量的楤木悬浮细胞。
实施例3
将楤木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分，获得的楤木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA 0.5mg/L+IBA 3mg/L中进行愈伤组织诱导，培养条件为温度25℃，暗室培养，湿度30%~60%，将楤木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA 1mg/L+2，4-D 0.3 mg/L中进行增殖培养，培养条件温度25℃，光照强度1000-2000lx，光期10h，暗期14h，湿度30%~60%，增殖后的楤木愈伤组织接种到MS+KT0.2mg/L+TDZ0.2培养基中，每50ml悬浮细胞添加100ml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养，继代培养3代，获得大量的楤木悬浮细胞。
实施例4
将楤木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分，获得的楤木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA 0.5mg/L+IBA3mg/L中进行愈伤组织诱导，培养条件为温度25℃，暗室培养，湿度30%~60%，将楤木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA 2mg/L+2，4-D0.3 mg/L中进行增殖培养，培养条件温度25℃，光照强度1000-2000lx，光期10h，暗期14h，湿度30%~60%，增殖后的楤木愈伤组织接种到MS+KT0.4mg/L+TDZ0.05mg/L培养基中，每50ml悬浮细胞添加100ml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养，继代培养3代，获得大量的楤木悬浮细胞。

Claims (5)

1.一种楤木悬浮细胞培养的方法，包括无菌叶片的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的增殖，悬浮细胞的培养和优化，其主要步骤如下：
（1）按照常规植物组织培养的消毒方法对楤木叶进行消毒处理，获得无菌的楤木叶片；
（2）将步骤（1）所获得的楤木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA 0.5mg/L+IBA 3mg/L中进行愈伤组织诱导；
（3）将步骤（2）诱导出来的楤木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA 1-2mg/L+2，4-D 0.2-0.5 mg/L中进行增殖培养；
（4）将步骤（3）增殖过的楤木愈伤组织接种到MS+KT0.2-0.4mg/L+TDZ0.05-0.2mg/L培养基中振荡培养，继代培养3代，得到楤木悬浮细胞。
2.按照权利要求1所述的一种楤木悬浮细胞培养的方法，其特征在于：步骤中所述无菌的楤木叶片按下列消毒方法得到：将楤木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分。
3.按照权利要求1所述的一种楤木悬浮细胞培养的方法，其特征在于：步骤中楤木愈伤组织诱导的条件为温度25℃，暗室培养，湿度30%~60%。
4.按照权利要求1所述的一种楤木悬浮细胞培养的方法，其特征在于：步骤中楤木愈伤组织增殖的条件为温度25℃，光照强度1000-2000lx，光期10h，暗期14h，湿度30%~60%。
5.按照权利要求1所述的一种楤木悬浮细胞培养的方法，其特征在于：步骤中愈伤组织悬浮细胞的培养，每50ml悬浮细胞添加100ml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110235784A (zh) * 2019-07-19 2019-09-17 东北农业大学 一种诱导辽东楤木不定根发生及增殖的方法
CN110278869A (zh) * 2019-06-22 2019-09-27 张文平 野生资源白九股牛愈伤组织快速扩繁的一种方法
CN110583481A (zh) * 2019-05-05 2019-12-20 东北农业大学 一种诱导辽东楤木体细胞胚发生及植株再生的方法

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