CN103408554B

CN103408554B - 一种具有降高血压活性的吡咯香豆素类化合物及制备方法

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Publication number: CN103408554B
Application number: CN201310330064.3A
Authority: CN
Inventors: 贺怀贞; 贺浪冲; 王涛; 王程; 周楠; 贺建宇
Original assignee: Xian Jiaotong University
Current assignee: Xian Jiaotong University
Priority date: 2013-07-31
Filing date: 2013-07-31
Publication date: 2015-07-08
Anticipated expiration: 2033-07-31
Also published as: CN103408554A

Abstract

一种具有降高血压活性的吡咯香豆素类化合物及制备方法，化合物化学结构式为：

Description

一种具有降高血压活性的吡咯香豆素类化合物及制备方法

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，涉及一种降高血压的化合物，特别涉及一种具有降高血压活性的吡咯香豆素类化合物及制备方法。

背景技术

高血压是最常见的心血管疾病，是全球范围内的重大公共卫生问题，它是导致充血性心力衰竭、脑卒中、冠心病、肾功能衰竭、主动脉瘤的发病率和病死率升高的主要危险因素。全世界高血压病患者大约有10亿人，而我国就约占其人数的1/5，高血压的患病率达18.8%，相当于每10个人中就有2人患有高血压。然而我国高血压的达标率仅有6.1%，大部分患者的血压未得到控制，我国所面临的高血压防治任务日益严峻。可见，心脑血管疾病现已成为威胁我国人口健康的头号杀手之一。而防治心脑血管疾病的关键是高血压的防治。

目前，对于高血压的防治主要分为非药物性治疗和药物性治疗。非药物性治疗主要是通过改变生活方式来起到早期预防和控制高血压的目的，而对于已经患有高血压的病人还主要是通过化学药物来进行控制。当前对于高血压治疗的药物种类繁多，其治疗达到的预期效果也不尽相同，由于不同作用机制的高血压药物本身存在的缺陷，在治疗的过程中会存在着不同程度的毒副作用。因此，开发具有长效、低毒副作用的新型高血压药物是目前药学领域发展方向之一。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种具有降高血压活性的吡咯香豆素类化合物及制备方法，该吡咯香豆素类化合物表现出舒张血管、抗高血压的活性，能够用于抗高血压药物的制备。

为了达到上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现：

一种具有降高血压活性的吡咯香豆素类化合物，其化学结构式为：

其中，R为氢原子、烷基、烯基或取代的氨基。

所述的R为氢原子、异戊烷基、异戊烯基、烯丙基、2-(二甲氨基)-乙基、2-(二异丙氨基)-乙基、2-(吡咯-1-基)-乙基、2-(哌啶-1-基)-乙基、2-(氮杂环庚-1基)-乙基、2-(4-二苯甲基哌嗪)-乙基、2-吗啉基乙基、2-(二甲氨基)乙基、2-(苄基(甲基)氨基)-乙基、3-(二甲氨基)-丙基或3-(二甲氨基)-2-甲基丙基。

所述的一种具有降高血压活性的吡咯香豆素类化合物的制备方法，包括以下步骤：

1）当R为氢原子时，以香兰素为原料，经过酰化、硝化、水解、Henry反应，还原反应、缩合反应、Pechmann反应得到吡咯香豆素化合物9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮；

2）9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮的酚羟基发生醚化反应，与至少含有2个碳原子的侧链相连接，得到吡咯香豆素类化合物；其中，-OR中的R为氢原子、烷基、烯基或取代的氨基。

所述的9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮的制备为：

1）将10.00g香兰素溶于50mL质量浓度为5%～10%的氢氧化钠溶液中，之后将配制成的0.1mol/L～10mol/L的醋酸酐-四氢呋喃溶液滴加到其中，香兰素与醋酸酐的摩尔比为1:1.5～1:3，待滴完后在室温下继续反应4h～24h，反应完毕后分液，水相用乙醚萃取，合并有机相，然后依次用清水、饱和NaCl水溶液洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后析出白色固体，加入20mL冰乙醇搅拌分散，抽滤，并用冰乙醇3×10mL洗涤滤饼，避光干燥得到乙酰化香兰素；

2）将40mL发烟硝酸冷却至-20℃～-40℃，之后在搅拌下将步骤1）得到的乙酰化香兰素在20min～1h内投入到发烟硝酸中，投料完毕后继续搅拌反应15min～1h，待反应完毕后将反应液倒入200mL冰水中，析出白色固体，抽滤，并用冰水洗涤滤饼，干燥，得到2-硝基乙酰化香兰素；

3）在搅拌下，将步骤2）得到的2-硝基乙酰化香兰素溶解在60mL质量浓度为5%～20%NaOH溶液中，少量不溶物加热使其溶解，搅拌20min～2h后，在冰水浴下加入2mol/L HCl调节pH=3-4，此时有淡黄色固体析出，抽滤，用冰水洗涤滤饼，避光干燥，得2-硝基香兰素；

4）将步骤3）得到的2-硝基香兰素用100mL冰醋酸溶解，并依次加入醋酸铵、硝基甲烷，其中，2-硝基香兰素、醋酸铵及硝基甲烷的摩尔比为1:2.5:3～1:4:6，原料在室温下搅拌混合均匀，之后升温回流搅拌反应2h～8h，待原料反应完毕后降温至40℃，并将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，再用清水、饱和NaCl水溶液依次洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，flash色谱柱分离，得4-羟基-3-甲氧基-2,β-二硝基苯乙烯；

5）将步骤4）得到的4-羟基-3-甲氧基-2,β-二硝基苯乙烯溶于10mL无水甲醇中，加入钯碳加氢催化剂,含量以Pd计≥10.0%，其中，4-羟基-3-甲氧基-2,β-二硝基苯乙烯与钯碳加氢催化剂重量比为1:0.1～1:0.01，搅拌均匀后依次加入甲酸铵、冰醋酸，其中，4-羟基-3-甲氧基-2,β-二硝基苯乙烯、甲酸铵及冰醋酸的摩尔比为1:5:0.5～1:20:1，室温搅拌5h～10h，之后再补加5～20倍摩尔量的甲酸铵搅拌反应过夜，待原料反应完毕后，过滤除去钯碳加氢催化剂，保留滤液并减压除去溶剂，加入清水并用乙酸乙酯萃取，然后依次用清水、饱和NaCl水溶液洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，柱层析分离，得6-羟基-7-甲氧基吲哚；

6）将丙炔酸溶于二氯甲烷中，配制成0.1mol/L～10mol/L的丙炔酸-二氯甲烷溶液，冰水浴至0℃，搅拌1min～10min，后加入1～3倍摩尔量的DCC，待反应液由澄清变为白色浊液时，加入0.5～1倍摩尔量的步骤5）得到的6-羟基-7-甲氧基吲哚，这时反应液的颜色变为棕色浊液，最后将0.1～0.3倍摩尔量的DMAP加入到反应液当中，之后在0℃下反应2h～4h。待反应结束后，减压旋蒸除去溶剂，之后加入乙酸乙酯，抽滤，并用乙酸乙酯洗涤滤饼，合并有机相，后依次用清水、饱和NaCl水溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，经柱层析分离，得6-丙炔酸酯基-7-甲氧基吲哚；

7）将步骤6）得到的6-丙炔酸酯基-7-甲氧基吲哚溶于10mL二氧六环和1,2-二氯乙烷体积比1:1的混合液中，后加入10%摩尔量的PtCl₄，在60℃～80℃下反应1.5h～3h，待反应结束后，降温过滤除去PtCl₄，减压旋蒸除去溶剂，所得残留物质用50mL乙酸乙酯溶解，并依次用清水、饱和NaCl水溶液洗涤有机相，后用无水硫酸钠干燥，后经柱层析分离，得9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮。

所述的9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮的酚羟基发生醚化反应为：

将0.05g9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮溶解于40mL～100mL无水丙酮中，然后加入过量的无水碳酸钾，室温搅拌20min后，再加入足量的与酚羟基发生醚化反应的提供侧链的化合物，氮气保护，在60℃～80℃下反应10h～36h。

所述的具有降高血压活性的吡咯香豆素类化合物应用于抗高血压药物的制备。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明提供的吡咯香豆素类化合物是一种新的具有抗高血压活性的化合物，其是在天然植物提取物欧前胡素的基础上进行结构修饰与优化，所设计的结构母核9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮为全新的化合物结构，在保留原有欧前胡素药理活性的基础上，改善其理化性质，增强其成药性。

本发明提供的吡咯香豆素类化合物的制备方法，具有原料来源易得，反应条件温和，反应过程操作简单，所用试剂便宜易得的优点。

本发明所制备的吡咯香豆素类化合物抗高血压类化合物是吡咯香豆素的衍生物，离体血管环张力研究表明吡咯香豆素类化合物对大鼠肠系膜微血管有舒张作用，可应用于抗高血压药物的制备。

附图说明

图1为血管环的舒张量效图对比结果图，其中，图1-1～图1-2为不同的吡咯香豆素类化合物与Control的舒张量效图对比，横坐标为浓度的对数，纵坐标为最大舒张率。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明做详细描述。

本发明提供的具有降高血压活性的吡咯香豆素类化合物，其化学结构式为：

其中，R为氢原子、烷基、烯基或取代的氨基。

以下为具体的合成路线，并通过实施例来阐述具有抗高血压活性的吡咯香豆素类化合物的制备方法，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例19-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮，通过以下步骤制备：

1）由化合物A香兰素经酸酐的酰化作用，得到化合物B乙酰化香兰素

称取10.00g（0.066mol）化合物A香兰素置于250mL的圆底烧瓶中，加入50mL质量浓度6%的NaOH溶液搅拌溶解，之后剧烈搅拌下缓慢滴加60mL醋酸酐（0.093mol）的四氢呋喃溶液，待滴完后继续反应4h，展开剂用乙酸乙酯：石油醚=1：2对反应进行检测，反应完毕后分液，水相用乙醚萃取（2×50mL），合并有机相，然后用水（3×50mL）、饱和食盐水（2×50mL）洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后洗出白色固体，加入20mL冰乙醇搅拌分散，抽滤，并用冰乙醇3×10mL多次洗涤滤饼，避光干燥得11.1g白色针状固体，产率87%。

其理化性质为：m.p.76-77℃；质谱为：EI-MS（m/z）=194.1[M]⁺；红外光谱为：IR(KBr):2960，2847，1750，1680，1279，1209cm^-1；核磁共振氢谱为：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ=2.35(s，3H)，3.91(s，3H)，7.23(d，J=7.6Hz，1H)，7.52–7.46(m，2H)，9.95(s，1H)。

2）由化合物B乙酰化香兰素经发烟硝酸的硝化反应，得到化合物C2-硝基乙酰化香兰素

量取40mL发烟硝酸置于100mL的圆底烧瓶中，冷却至-20℃，将10.00g（0.052mol）化合物B乙酰化香兰素在20min内投入到发烟硝酸中，投料完毕后继续搅拌反应0.5h，展开剂用乙酸乙酯︰石油醚=1︰2对反应进行检测，反应完毕后将反应液倒入200mL冰水中，析出大量白色固体，抽滤，用冰水5×10mL多次洗涤滤饼，干燥，得10.30g白色固体，产率84%。

其理化性质为：m.p.84-85℃；质谱为：EI-MS（m/z）=239.1[M]⁺；红外光谱为：IR(KBr)：2960，2870，1776，1709，1550，1373，1277，1182cm^-1；核磁共振氢谱为：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ=2.42(s，3H)，3.96(s，3H)，7.45(d，J=8.4Hz，1H)，7.72(d，J=8.4Hz，1H)，9.91(s，1H)。

3）由化合物C2-硝基乙酰化香兰素在碱性条件下经水解反应，得到化合物D2-硝基香兰素

在剧烈搅拌下，将10.30g（0.043mol）化合物C2-硝基乙酰化香兰素溶解在60mL质量浓度为7%NaOH溶液中，少量不溶物加热使其溶解，展开剂用乙酸乙酯︰石油醚=1︰2对反应进行检测，搅拌20min后，在冰水浴下加入适量的2mol/L HCl调节pH=3-4，此时有大量淡黄色固体析出，抽滤，用冰水5×10mL多次洗涤滤饼，避光干燥，得8.23g淡黄色固体，产率97%。

其理化性质为：m.p.135-136°C；质谱为：EI-MS（m/z）=197.0[M]⁺；红外光谱为：IR(KBr)：3276，2959，2928，1670，1575，1525，1373，1317，1275，1202cm^-1；核磁共振氢谱为：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ=3.98(s，3H)，6.40(s，1H)，7.22(d，J=8.4Hz，1H)，7.66(d，J=8.4Hz，1H)，9.81(s，1H)。

4）由化合物D2-硝基香兰素与硝基甲烷反应，得到化合物E4-羟基-3-甲氧基-2,β-二硝基苯乙烯

将8.23g(0.042mol)化合物D2-硝基香兰素置于250mL圆底烧瓶中，加入100mL冰醋酸搅拌溶解，之后再加入8.00g（0.104mol）醋酸铵，溶解后加入7.64g（0.125mol）硝基甲烷，混合均匀，升温搅至120℃回流搅拌反应2h，用二氯甲烷检测原料是否反应完毕，原料反应完毕后降温至40℃，并将反应液倒入300mL冰水中，用乙酸乙酯萃取（6×100mL），合并有机相，再用水（1×100mL）、饱和食盐水（2×50mL）洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，flash色谱柱分离，洗脱剂为CH₂Cl₂，得7.38g黄色固体，产率74%。

其理化性质为：m.p.164-166℃；质谱为：EI-MS（m/z）=239.9[M]⁺；红外光谱为：IR(KBr)：3414，3109，2945，2928，2852，1603，1525，1342，1298，1220，1064cm^-1；核磁共振氢谱为：¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)：δ=3.97(s，3H)，7.44(s，1H)，7.58(s，1H)，8.25(d，J=13.2Hz，1H)，8.44(d，J=13.2Hz，1H)，10.88(s，1H)；核磁共振碳谱为：¹³C NMR(400MHz，CDCl₃)：61.53，112.59，119.34，124.67，130.94，138.86，139.34，146.42，154.98。

5）由化合物E4-羟基-3-甲氧基-2,β-二硝基苯乙烯在合适的催化剂条件下，合成反应得到化合物F6-羟基-7-甲氧基吲哚

将0.50g（0.002mol）化合物E4-羟基-3-甲氧基-2,β-二硝基苯乙烯溶于10mL无水甲醇中，加入0.05g钯碳加氢催化剂,含量以Pd计≥10.0%，搅拌均匀后加入1.21g（0.019mol）甲酸铵和0.10mL冰醋酸，室温搅拌15h，之后再补加1.21g的甲酸铵搅拌反应过夜，用丙酮︰石油醚=1︰2检测原料是否反应完毕，待原料反应完毕后，过滤除去钯碳加氢催化剂，保留滤液并减压除去溶剂，加入少量清水并用乙酸乙酯萃取（3×50mL），然后用水（1×50mL）、饱和食盐水（2×50mL）洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后为棕色粘稠液体，柱层析分离，洗脱剂为丙酮︰石油醚=1︰2，所得油状产物再通过乙醚和石油醚进行重结晶，得0.13g白色固体，产率38%。

其理化性质为：m.p.85℃；质谱为：EI-MS（m/z）=163.1[M]⁺；红外光谱为：IR(KBr)：3495，3420，3105，2947，2843，1620，1506，1411，1333，1236，1202，1047，725cm^-1；核磁共振氢谱为：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ=3.98(s，3H)，5.27(s，1H)，6.50(s，1H)，6.81(d，J=8.4Hz，1H)，7.11(s，1H)，7.25(s，1H)，8.09(s，1H)；核磁共振碳谱为：¹³C NMR(400MHz，CDCl₃)：60.82，103.40，110.30，116.61，123.30，124.14，129.20，131.78，143.42。

6）由化合物F6-羟基-7-甲氧基吲哚与丙炔酸经缩合反应，得到化合物G6-丙炔酸酯基-7-甲氧基吲哚

将50mL二氯甲烷置于100mL圆底烧瓶中，冰水浴至0℃，在二氯甲烷中先加入0.67mL（0.011mol）的丙炔酸，搅拌5min，后加入5mL溶有2.25g（0.011mol）DCC的二氯甲烷溶液，待反应液由澄清变为白色浊液的时，加入5mL溶有1.18g（0.007mol）化合物F6-羟基-7-甲氧基吲哚的二氯甲烷溶液，这时反应液的颜色变为棕色浊液，最后向反应液中加入5mL溶有0.12g（0.001mol）的DMAP的二氯甲烷溶液，此时反应液变为棕红色浊液，并随着反应时间的加长颜色变深，反应2h后结束反应，减压旋蒸除去溶剂，之后加入25mL的乙酸乙酯，抽滤，并用乙酸乙酯少量多次洗涤滤饼，收集有机相，有机相依次用清水（2×50mL）、饱和食盐水（2×50mL）洗涤，后用无水硫酸钠干燥，浓缩后为棕红色粘稠液体，用乙酸乙酯︰石油醚=1︰2进行柱层析分离，得0.74g白色固体，产率48%。

其理化性质为：m.p.112-113℃；质谱为：EI-MS（m/z）=215.1[M]⁺；红外光谱为：IR(KBr)：3392，3259，2941，2810，2123，1732，1600，1500，1338，1242，1200，1057，750cm^-1；核磁共振氢谱为：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ=3.09(s，1H)，4.00(s，3H)，6.55(s，1H)，6.85(d，J=8.8Hz，1H)，7.23(s，1H)，7.34(d，J=8.8Hz，1H)，8.40(s，1H)；核磁共振碳谱为：¹³C NMR(400MHz，CDCl₃)：61.08，74.24，103.41，115.00，115.98，125.16，128.59，129.37，136.05，136.89，151.35。

7）由化合物G6-丙炔酸酯基-7-甲氧基吲哚在合适的催化剂条件下，合成反应得到化合物H9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮

将0.74g（0.003mol）化合物G6-丙炔酸酯基-7-甲氧基吲哚溶于10mL的二氧六环和1,2-二氯乙烷（体积比1︰1）的混合液中，后加入0.06g的5mol%PtCl₄，在65℃下反应1.5h，待反应结束后，降温过滤除去PtCl₄，减压旋蒸除去溶剂，所得残留物质用50mL乙酸乙酯溶解，并依次用清水（1×50mL）、饱和NaCl水溶液（2×50mL）洗涤有机相，后用无水硫酸钠干燥，浓缩后进行柱层析分离，300-400目硅胶，洗脱剂为丙酮︰石油醚=1︰2，柱层析分离，得0.14g淡黄色固体，产率20%。

其理化性质为：m.p.175-176℃；质谱为：EI-MS（m/z）=201.0[M]⁺；红外光谱为：IR(KBr)：3238，3092，2926，2852，1780，1636，1500，1402，1188，1024，760cm^-1；核磁共振氢谱为：¹H NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)：δ=5.76(d，1H，J=9.2Hz)，6.33(s，1H)，6.52(d，J=5.2Hz，1H)，6.87(d，J=9.6Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.62(d，J=5.2Hz，1H)，12.58(s，1H)；核磁共振碳谱为：¹³C NMR(400MHz，(CD₃)₂SO)：89.38，108.58，122.00，124.20，124.94，126.74，130.87，133.04，155.73，173.75，178.94。

实施例29-[2-(4-二苯甲基哌嗪)-乙氧基]-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮，通过以下步骤制备：

步骤1）至步骤7）与实施例1相同，即从化合物A香兰素到化合物H9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮的制备步骤相同；之后酚羟基与1-二苯甲基-4-（2-氯乙基）哌嗪盐酸盐发生醚化反应，具体为：

将0.05g化合物H9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮溶于40ml无水丙酮中，1.00g碳酸钾搅拌20min，之后加入0.13g1-二苯甲基-4-（2-氯乙基）哌嗪盐酸盐，氮气保护下，回流反应18h，反应结束后冷却至室温；旋干溶剂，加入30ml水，乙酸乙酯萃取，并依次用水（2×50ml）、饱和食盐水（2×50ml）洗涤，用无水硫酸钠干燥，经300-400目硅胶柱分离（洗脱剂为乙酸乙酯︰石油醚=2.5︰1），得白色固体0.06g，产率50%。

其理化性质为：m.p.83-85℃；质谱为：EI-MS（m/z）=479.0[M]⁺；核磁共振氢谱为：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ=7.40(s，2H)，7.38(s，2H)，7.26(t，4H)，7.17(t，2H)，7.07(s，1H)，7.05(d，J=5.2Hz，1H)，6.69(d，J=9.6Hz，1H)，6.29(d，J=5.2Hz，1H)，6.13(s，1H)，5.68(d，J=9.6Hz，1H)，4.37(s，2H)，4.20(s，1H)，2.80-2.25(m，10H)。

实施例39-(2-(1-吡咯烷基)-乙氧基)-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮，通过以下步骤制备：

步骤1）至步骤7）与实施例1相同，即从化合物A香兰素到化合物H9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮的制备步骤相同；之后酚羟基与1-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐发生醚化反应，具体为：

称取0.04g化合物H9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮置于50ml圆底烧瓶中，加入30mL无水丙酮，搅拌溶解，再加入无水碳酸钾0.40g，室温搅拌30min，后加入0.15g1-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐，氮气保护下，70℃油浴控温反应24h。反应结束后，减压除去丙酮，用10mL水溶解后，用乙酸乙酯4×20ml多次萃取，无水硫酸钠干燥，减压得粗品，用柱层析分离，洗脱剂为丙酮︰石油醚=1︰2，得淡褐色固体0.03g，产率57%。

质谱为：EI-MS（m/z）=298.0[M]⁺；核磁共振氢谱为：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ=7.10(d，J=2.8Hz，1H)，7.07(d，J=5.6Hz，1H)，6.71(d，J=9.2Hz，1H)，6.30(d，J=5.2Hz，1H)，6.16(d，J=2.8Hz，1H)，5.69(d，J=9.6Hz，1H)，4.47–4.28(m，2H)，2.87–2.74(m，2H)，2.59–2.46(m，4H)，1.82–1.67(m，4H)。

吡咯香豆素类化合物的舒张血管、抗高血压活性验证实验：

本发明提供的吡咯香豆素类化合物具有抗高血压作用，对大鼠肠系膜微血管有舒张作用，可用于高血压的治疗。

抗高血压验证采用血管环张力法检测待测吡咯香豆素类化合物对肠系膜微血管的舒张，实验步骤如下：

A．Kreb’s溶液的配制

（1）制备新鲜的超纯水1000mL；（2）精确称取氯化钙0.617g，加入少量超纯水超声振荡溶解，溶解完全后待用；（3）按照表1所示配制出氯化钙的缓冲盐体系，将其溶于超纯水总量的2/3中，用干净的玻璃棒搅拌使其全部溶解；（4）将（2）中配制好的待用溶液加入至（3）中，搅拌后加入水定容至终体积，配制成终浓度；（5）测定Kreb’s溶液的pH值，用1mol/LHCl调节pH=7.4。

表1Kreb’s溶液配制

化合物	分子量（M）	g/L	mM
				NaCl	58.48	6.950	119
NaHCO₃	84.01	1.260	15
				KCl	74.55	0.343	4.6
MgCl₂·6H₂O	203.30	0.244	1.2
				NaH₂PO₄·2H₂O	156.01	0.187	1.2
CaCl₂	110.99	0.167	1.5
				Glucose·2H₂O	198.77	1.090	5.5

B．供试液的配制

（1）精密量取去甲肾上腺素注射液适量，加生理盐水配制成3×10^-6mol/L的NE制其储备液，其浓度为1×10^-4mol/L，4℃冰箱中避光保存。

（2）精密量取欧前胡素储备液，用水或DMSO稀释，确定实验室的终浓度为1×10^-7mol/L、3×10^-7mol/L、1×10^-6mol/L、3×10^-6mol/L、1×10^-5mol/L、3×10^-5mol/L、1×10^-4mol/L的系列溶液，4℃冰箱中避光保存。

C.微血管的分离

雄性SD大鼠，脱颈处死，迅速打开胸腔取出一段空肠，置于冰浴的Kreb’s溶液中，不断通入含有95%的氧气和5%的二氧化碳的混合气，以维持它的活性。本实验中主要选用的是肠系膜动脉的二级分支，取出肠系膜组织（空肠），显微镜下剥离脂肪，分离肠系膜动脉二级分支，剪成每段约3mm的血管环。

D.实验测定

（1）将分离好的血管两端分别与浴槽内的两个灌流针连接，用尼龙线固定好即挂于浴槽中，打开加热温度，设定温度37℃。调零稳定后，动脉环静息负荷预张力约为3mN，平衡2h，20min更换Kreb’s液一次，2h后，浴槽内加入终浓度为3×10^-6mol/L去甲状肾上腺素(NE)，以NE检验动脉环收缩性，两次收缩幅度相差小于10％者用于实验。血管收缩稳定后依次加入待测药物的浓度梯度溶液，考察吡咯香豆素类化合物对去甲肾上腺素所致的血管收缩的舒张作用。溶液放置于4℃冰箱中避光保存。

（2）准确称量待测衍生化合物的质量，用DMSO作溶剂，准确定容配制成吡咯香豆素类化合物的储备液，而水溶性相对较好的衍生化合物就直接用水作溶剂配。吡咯香豆素类化合物的舒张血管活性实验结果如表2和图1所示。

表2半数有效浓度对数值（pEC₅₀±SEM）和最大舒张率（Emax%±SEM）检测结果

其中，半数有效浓度对数值是-logEC₅₀，其代表的意义是化合物诱导血管环舒张率达到50%时的浓度；最大舒张率是Emax%，其代表的意义是吡咯香豆素类化合物诱导的血管环的最大舒张率；当中化合物NU-1、NU-2为吡咯香豆素类化合物：9-[2-(4-二苯甲基哌嗪)-乙氧基]-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮（NU-1）；9-(2-(1-吡咯烷基)-乙氧基)-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮（NU-2）。

可以看出吡咯香豆素类化合物NU-1、NU-2对大鼠肠系膜微血管细胞具有不同程度的舒张血管作用。

E.吡咯香豆素类化合物具有舒张血管的作用，应用于抗高血压药物的制备

所述的抗高血压的药物的制备为：

具有抗高血压活性的吡咯香豆素类化合物或其药物可接受的盐、衍生物、前药或立体异构体，应用于抗高血压的药物的制备；

或者具有抗高血压活性的吡咯香豆素类化合物或其药物可接受的盐、衍生物、前药或立体异构体作为药物组合物之一，结合药物可接受的赋形剂或稀释剂应用于抗高血压的药物的制备。

应用于抗高血压的药物的制备时，通过制药领域常用的手段可以制备成多种剂型，可以是口服剂型和注射剂，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、分散片、软胶囊、注射液、注射用冻干粉或注射用无菌分装粉。

Claims

1.一种吡咯香豆素类化合物，其特征在于，其化学结构式为：

2.根据权利要求1所述的一种吡咯香豆素类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将10.00g香兰素溶于50mL质量浓度为5％～10％的氢氧化钠溶液中，之后将配制成的0.1mol/L～10mol/L的醋酸酐-四氢呋喃溶液滴加到其中，香兰素与醋酸酐的摩尔比为1:1.5～1:3，待滴完后在室温下继续反应4h～24h，反应完毕后分液，水相用乙醚萃取，合并有机相，然后依次用清水、饱和NaCl水溶液洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后析出白色固体，加入20mL冰乙醇搅拌分散，抽滤，并用冰乙醇3×10mL洗涤滤饼，避光干燥得到乙酰化香兰素；

2)将40mL发烟硝酸冷却至-20℃～-40℃，之后在搅拌下将步骤1)得到的乙酰化香兰素在20min～1h内投入到发烟硝酸中，投料完毕后继续搅拌反应15min～1h，待反应完毕后将反应液倒入200mL冰水中，析出白色固体，抽滤，并用冰水洗涤滤饼，干燥，得到2-硝基乙酰化香兰素；

3)在搅拌下，将步骤2)得到的2-硝基乙酰化香兰素溶解在60mL质量浓度为5％～20％NaOH溶液中，少量不溶物加热使其溶解，搅拌20min～2h后，在冰水浴下加入2mol/L HCl调节pH＝3-4，此时有淡黄色固体析出，抽滤，用冰水洗涤滤饼，避光干燥，得2-硝基香兰素；

4)将步骤3)得到的2-硝基香兰素用100mL冰醋酸溶解，并依次加入醋酸铵、硝基甲烷，其中，2-硝基香兰素、醋酸铵及硝基甲烷的摩尔比为1:2.5:3～1:4:6，原料在室温下搅拌混合均匀，之后升温回流搅拌反应2h～8h，待原料反应完毕后降温至40℃，并将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，再用清水、饱和NaCl水溶液依次洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，flash色谱柱分离，得4-羟基-3-甲氧基-2,β-二硝基苯乙烯；

5)将步骤4)得到的4-羟基-3-甲氧基-2,β-二硝基苯乙烯溶于10mL无水甲醇中，加入钯碳加氢催化剂,含量以Pd计≥10.0％，其中，4-羟基-3-甲氧基-2,β-二硝基苯乙烯与钯碳加氢催化剂重量比为1:0.1～1:0.01，搅拌均匀后依次加入甲酸铵、冰醋酸，其中，4-羟基-3-甲氧基-2,β-二硝基苯乙烯、甲酸铵及冰醋酸的摩尔比为1:5:0.5～1:20:1，室温搅拌5h～10h，之后再补加5～20倍摩尔量的甲酸铵搅拌反应过夜，待原料反应完毕后，过滤除去钯碳加氢催化剂，保留滤液并减压除去溶剂，加入清水并用乙酸乙酯萃取，然后依次用清水、饱和NaCl水溶液洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，柱层析分离，得6-羟基-7-甲氧基吲哚；

6)将丙炔酸溶于二氯甲烷中，配制成0.1mol/L～10mol/L的丙炔酸-二氯甲烷溶液，冰水浴至0℃，搅拌1min～10min，后加入1～3倍摩尔量的DCC，待反应液由澄清变为白色浊液时，加入0.5～1倍摩尔量的步骤5)得到的6-羟基-7-甲氧基吲哚，这时反应液的颜色变为棕色浊液，最后将0.1～0.3倍摩尔量的DMAP加入到反应液当中，之后在0℃下反应2h～4h；待反应结束后，减压旋蒸除去溶剂，之后加入乙酸乙酯，抽滤，并用乙酸乙酯洗涤滤饼，合并有机相，后依次用清水、饱和NaCl水溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，经柱层析分离，得6-丙炔酸酯基-7-甲氧基吲哚；

7)将步骤6)得到的6-丙炔酸酯基-7-甲氧基吲哚溶于10mL二氧六环和1,2-二氯乙烷体积比1:1的混合液中，后加入10％摩尔量的PtCl₄，在60℃～80℃下反应1.5h～3h，待反应结束后，降温过滤除去PtCl₄，减压旋蒸除去溶剂，所得残留物质用50mL乙酸乙酯溶解，并依次用清水、饱和NaCl水溶液洗涤有机相，后用无水硫酸钠干燥，后经柱层析分离，得9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮；

8)将步骤7)得到的0.05g 9-羟基-8H-吡喃[3,2-f]吲哚-2-酮溶解于40mL～100mL无水丙酮中，然后加入过量的无水碳酸钾，室温搅拌20min后，再加入足量的与酚羟基发生醚化反应的提供侧链的化合物，氮气保护，在60℃～80℃下反应10h～36h，得到相对应的吡咯香豆素类化合物。