CN103405484A - 一种白花败酱根抗氧化制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明所属保健食品加工技术领域，本发明涉及一种白花败酱根抗氧化制剂的制备方法。将干燥的白花败酱（Patriniavillosa）根粉末，用75%乙醇室温下浸提后再超声提取，静置过滤，将滤液减压蒸馏得粗浸膏，将粗浸膏加适量水稀释成混悬液，再用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇分别萃取3次，合并正丁醇层萃取液，将正丁醇层萃取液减压浓缩，后冷冻干燥至恒重，得到正丁醇萃取物，备用。本发明所得白花败酱根提取物具有较好的清除DPPH自由基和ABTS自由基的能力。本发明专利可用于食品、药品、保健品等领域开发新的抗氧化剂，本发明产品利于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种白花败酱根抗氧化制剂的制备方法，属于保健食品加工技术领域。本发明可用于食品、药品、保健品等领域开发新的天然抗氧化剂，本发明产品利于工业化生产。
背景技术
自由基是机体细胞新陈代谢的副产物，这些化合物是一类性质活泼、具有极强氧化能力的化学物质。研究表明生物体内大量产生的自由基，如超氧阴离子自由基、羟基自由基等可导致DNA损伤，蛋白质氧化以及脂质过氧化作用。生物体内产生过量的自由基已与许多临床疾病，如心脏病、糖尿病、肝损伤、癌症和衰老相关，当先天性防御不足以中和严重或持续的氧化所引起的自由基时，补充外源性抗氧化剂对于维持抗氧化剂与人体内自由基的平衡是非常关键的。然而化学合成的抗氧化剂，如丁基羟基茴香醚（BHA）和二丁基羟基甲苯（BHT），对人体肝、脾、肺等器官均有较大的毒、副作用，因此寻找安全可靠的天然抗氧化剂是目前研究的热点。
白花败酱（Patrinia villosa）是败酱科（Valerianaceae）败酱属（Patrinia）植物，为多年生草本植物，除西北外，全国均有分布。白花败酱在民间作为药用和食用，其全草入药，具有散瘀消肿、活血排脓、治肠痈有脓、血气心腹痛, 目赤障膜弩肉及敷疮疖疥癣之功效，用于治疗阑尾炎、痢疾、肝炎、扁桃体炎、痈肿疮毒等症。经查阅大量文献发现，白花败酱中主要含有环烯醚萜类化合物、黄酮类化合物和三萜类皂苷（败酱苷)等。对于白花败酱根的药理活性研究较少，并且未见白花败酱根提取物抗氧化活性的报道。通过本文的研究，为深入研究白花败酱提供了理论依据。
本发提供了一种具有抗氧化作用的白花败酱根提取物的制备方法，为其在食品、药品、保健品等领域开发新的天然抗氧化剂提供参考依据。
发明内容
本发明所属保健食品加工技术领域，本发明涉及一种白花败酱（Patrinia villosa）根为原料的抗氧化剂的制备方法，本发明产品可用于食品、药品、保健品等领域开发新的天然抗氧化剂，本发明产品利于工业化生产。
1、本发明所提供的技术方案特征在于：
(1)取白花败酱根，水洗，烘干或晾干，粉碎后，分别用10倍、8倍、6倍量的75%乙醇浸泡8-10h后，超声1h，温度为30℃，功率为80W；
(2)将步骤(1)中溶液静置过滤，用旋转蒸发仪减压回收乙醇后得到粗浸膏；
(3)将步骤(2)中粗浸膏加适量水稀释成混悬液，再用4-5倍量石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇分别萃取三次，合并正丁醇层萃取液；
(4)将步骤(3)中正丁醇层萃取液减压浓缩，冷冻干燥至恒重，得到正丁醇萃取物，备用。
2、根据权利要求1所述制备方法，所述白花败酱根为白花败酱（Patrinia villosa）的根。
3、根据权利要求1所述一种白花败酱根提取物的用途，该提取物可作为天然抗氧化剂在制备功能食品、药品、保健品等领域中的应用。
本发明中的“%”是重量百分比。
具体实施方式
下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1：
1、一种白花败酱根提取物的制备方法及其用途，其特征在于包括以下步骤：
(1) 取白花败酱根，水洗，烘干或晾干，粉碎后，分别用10倍、8倍、6倍量的75%乙醇浸泡8h后，超声1h，温度为30℃，功率为80W；
(2)将步骤(1)中溶液静置过滤，用旋转蒸发仪减压回收乙醇后得到粗浸膏；
(3)将步骤(2)中流浸膏加适量水稀释成混悬液，再用4倍量石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇分别萃取三次，合并正丁醇层萃取液；
(4)将步骤(3)中正丁醇层萃取液减压浓缩，冷冻干燥至恒重，得到正丁醇萃取物，备用。
2、将上述正丁醇萃取物进行抗氧化实验，该正丁醇萃取物具有抗氧化作用。
实施例2：
1、一种白花败酱根提取物的制备方法及其用途，其特征在于包括以下步骤：
(1) 取白花败酱根，水洗，烘干或晾干，粉碎后，分别用10倍、8倍、6倍量的75%乙醇浸泡10h后，超声1h，温度为30℃，功率为80W；
(2)将步骤(1)中溶液静置过滤，用旋转蒸发仪减压回收乙醇后得到粗浸膏；
(3)将步骤(2)中流浸膏加适量水稀释成混悬液，再用5倍量石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇分别萃取三次，合并正丁醇层萃取液；
(4)将步骤(3)中正丁醇层萃取液减压浓缩，冷冻干燥至恒重，得到正丁醇萃取物，备用。
2、将上述正丁醇萃取物进行抗氧化实验，该正丁醇萃取物具有抗氧化作用。
药理试验 白花败酱根提取物抗氧化试验
1 材料、试剂
1.1 材料
白花败酱（Patrinia villosa）根提取物
1.2 试剂
DPPH、ABTS、Folin-Ciocalteu试剂、抗坏血酸（Sigma公司），过硫酸钾、无水乙醇、甲醇、磷酸盐缓冲溶液（PH=6.6）、无水碳酸钠（重庆川东化工有限公司化学试剂厂），分析水为超纯水。
2实验方法与步骤
2.1白花败酱根组分的提取
将白花败酱根粉末4kg，分别用10倍、8倍、6倍量的75%乙醇浸泡8-10h后，超声1h，温度为30℃，功率为80W，静置过滤，合并3次滤液，将滤液置于旋转蒸发仪中减压回收乙醇后得到粗浸膏，加适量水稀释粗浸膏成混悬液，再用4-5倍量石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇分别萃取三次，合并正丁醇层萃取液，减压浓缩，冷冻干燥至恒重，得到正丁醇萃取物，备用。
2.2 DPPH法测定抗氧化活性
2.2.1 样品溶液的制备
准确称取2.1中干燥至恒重的正丁醇萃取物250mg，在容量瓶中用无水乙醇定容至50ml，配成浓度为5mg/ml的样品母液，备用。将样品母液用无水乙醇逐级稀释成浓度为0.018mg/ml、0.037mg/ml、0.075mg/ml、0.15mg/ml、0.31mg/ml、0.62mg/ml、1.25mg/ml、2.5mg/ml的样品液待用。
2.2.2 DPPH溶液的制备
精密称取DPPH样品10mg，加入无水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到DPPH溶液，浓度为0.04mg/ml，整个过程都需要避光。
2.2.3样品测定
准确移取不同浓度的白花败酱根正丁醇萃取物溶液分别与DPPH溶液和无水乙醇溶液等体积混合于不同试管中，摇匀后于室温避光静置30min，在515nm处测定吸光度值分别为B和C。另取无水乙醇与DPPH溶液等体积混合于试管中，测定吸光度值分别为A。其中以无水乙醇为空白对照试验，用抗坏血酸做对照。并按照下面公式计算清除率。
DPPH清除率% = (A－B+C)/A×100 %
2.3 ABTS法测定抗氧化活性
2.3.1 样品溶液的制备
准确称取2.1中干燥至恒重的正丁醇萃取物250mg，在容量瓶中用无水乙醇定容至50ml，配成浓度为5mg/ml的样品母液，备用。将样品母液用无水乙醇逐级稀释成浓度为0.018mg/ml、0.037mg/ml、0.075mg/ml、0.15mg/ml、0.31mg/ml、0.62mg/ml、1.25mg/ml、2.5mg/ml的样品液待用。
2.3.2 ABTS+溶液的制备
将5ml，14mM的ABTS和5ml，4.9Mm的过硫酸钾混合，在室温、避光的条件中静置16h，形成ABTS+·储备液，使用前用5mM PH7.4的磷酸盐缓冲液稀释成备用的工作液，要求该工作液在734nm波长下的吸光度为0.7±0.02。
2.3.3样品测定
取10μl样品溶液加入1ml ABTS+·工作液（Asample），1ml ABTS+·工作液和10μl无水乙醇为标准液（Acontrol），5min后在734nm波长下测定吸光度，用抗坏血酸作对照。
清除率（%）= [(Acontrol－Asample)/ Acontrol]×100%
2.4半数抑制率的计算
半数抑制率（IC50）指清除率为50%时所需抗氧化剂的浓度，根据不同浓度抗氧化剂的清除率作曲线求出。
2.5总酚含量测定
2.5.1 标准曲线的绘制
精密称取没食子酸20mg，甲醇溶解后转入100ml容量瓶，制成浓度为0.2mg/ml的标准品母液备用。然后将上述母液用甲醇逐级稀释成浓度为0.0125mg/ml、0.025mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml的标准品液待用。
分别移取300μl不同浓度没食子酸溶液，加入6ml 2%的Na2CO3溶液混合3 min，然后加入300μl 50%的福林酚试剂，摇匀，常温放置60 min后。以空白溶液为参比溶液，于756nm测定吸光度。对所测得的数据采用直线回归法计算出标准曲线的回归方程，并以对照的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。将数据进行回归分析得到标准曲线的回归方程为：Y=0.24467X+0.04626，R=0.99875。
2.5.2样品测定
取样品12.5mg于10ml容量瓶中，用甲醇定容，移取300μl样品溶液，加入6ml 2%的Na2CO3溶液混合3min，然后加入300μl 50%的福林酚试剂，摇匀，常温放置60 min后。以空白溶液为参比溶液，于756nm测定吸光度。
3结果与讨论
3.1 结果
白花败酱根正丁醇萃取物清除DPPH和ABTS的IC50值及总酚含量
见表1
表1 白花败酱根正丁醇萃取物的抗氧化活性及总酚含量
3.2 讨论
3.2.1 由表1可知，白花败酱根正丁醇萃取物的总酚含量较高，为5.2mg/20mg。DPPH法测得抗坏血酸的IC50值为0.001mg/ml，白花败酱根的正丁醇萃取物的IC50值为0.009mg/ml，接近于抗坏血酸。ABTS法测得的抗坏血酸的IC50值为0.092mg/ml，白花败酱根的正丁醇萃取物的IC50值接近于抗坏血酸，为0.122mg/ml。白花败酱根的正丁醇萃取物具有较强的抗氧化能力，能明显清除DPPH和ABTS自由基。
3.2.2 通过对白花败酱根正丁醇萃取物的抗氧化活性的研究，为其在食品、药品、保健品等领域开发新的天然抗氧化剂提供参考。
Claims (3)
1.一种白花败酱根抗氧化剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）取白花败酱根，水洗，烘干或晾干，粉碎后，分别用10倍、8倍、6倍量的75%乙醇室温下浸提8-10h后超声1h，温度为30℃，功率为80W；
（2）将步骤（1）中溶液静置过滤，用旋转蒸发仪减压回收乙醇后得到粗浸膏；
（3）将步骤（2）中粗浸膏加适量水稀释成混悬液，再用4-5倍量石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇分别萃取3次，合并正丁醇层萃取液；
（4）将步骤（3）中正丁醇层萃取液减压浓缩，后冷冻干燥至恒重，得到正丁醇萃取物，备用。
2.根据权利要求1所述的制备方法，所述白花败酱根为白花败酱（Patrinia villosa）的根。
3.根据权利要求1所述一种白花败酱根提取物的用途，该提取物可作为天然抗氧化剂在制备功能食品、药品、保健品等领域中的应用。
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