CN103404383A

CN103404383A - 一种烟草tmv抗性的苗期水培鉴定方法

Info

Publication number: CN103404383A
Application number: CN2013103727174A
Authority: CN
Inventors: 李梅云; 刘勇; 肖炳光; 李永平; 焦芳婵; 陈学军
Original assignee: Yunnan Academy of Tobacco Agricultural Sciences
Current assignee: Yunnan Academy of Tobacco Agricultural Sciences
Priority date: 2013-08-23
Filing date: 2013-08-23
Publication date: 2013-11-27

Abstract

本发明公开了一种烟草TMV抗性的苗期抗性鉴定方法，包括保温水池建造、池水加热与循环、TMV接种烟苗、病情调查与分级等步骤。本发明具有发病迅速、重复性好、结果可靠、无其他病害干扰等特点。实现了用苗期鉴定结果代替传统大田鉴定结果。实现了在较小面积上鉴定大量材料、一年多次鉴定。提高了结果的可靠性、缩短了鉴定周期、节省鉴定成本。

Description

一种烟草TMV抗性的苗期水培鉴定方法

技术领域：

本发明属于作物抗病性鉴定技术领域，具体涉及烟草TMV抗性鉴定，特别是一种烟草TMV抗性的苗期水培鉴定方法。

背景技术:

烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）是目前世界上研究最为深入的模式病毒，是披盖病毒科（Togaviridae）烟草花叶病毒属（Tobamovirus）的单链RNA（ssRNA）病毒。TMV具有寄主范围广、抗逆性强、生产危害大等特点，可侵染十字花科、茄科、菊科、藜科和苋科等多种植物，在全世界主要烟草产区均有分布，使烟草和其他农作物的产量和品质大大降低。据报道全世界每年仅TMV造成的危害就超过1亿美元。生产实践表明，防治TMV最经济、有效、环保的措施就是选育抗病品种，抗性鉴定自然成为抗源挖掘利用、抗病育种、抗性监测等工作中重要的一环。

温室苗期鉴定接种法和病圃人工接种鉴定法，是目前常用的TMV鉴定方法，缺点是移栽缓苗后接种，时间长，工作量大。

我国烟草普遍采用漂浮育苗，漂浮育苗是当前国际上先进的育苗新技术，具有壮苗率高、操作简便、专业化程度高、省工节时、方便管理、有利环境保护等许多优点，近年来，在我省得到了大面积推广应用，因此，在漂浮育苗基础上，建立烟草TMV抗性的漂浮池水培接种鉴定方法，对抗病种质资源筛选、抗性遗传特性研究和抗病育种具有重要意义。

发明内容：

本发明的目的在于针对现有技术的步骤，提供一种烟草TMV抗性的苗期鉴定方法。用漂浮池恒温水培接种鉴定结果代替传统的土壤盆栽和大田鉴定结果。消除环境温度和湿度对鉴定结果的影响，避免其他病害对鉴定结果的干扰。提高鉴定结果的准确性。同时可节省场地和试验成本、缩短鉴定时间。

本发明目的通过以下技术方案予以实现：

1）池水保温循环漂浮池建造

在玻璃温室或塑料大棚温室内建造。池底垫一层厚约4cm的泡沫塑料板，铺2层塑料膜，整个池壁四周用泡沫塑料板保温。苗池一端设控温电加热棒（中山超信电器厂产品）和池水循环泵（广东海利集团有限公司产品）。控温电加热棒和池水循环泵通过控温装置联动。池水为深井水或自来水。水深5cm～20cm。设置水温为28.0℃。

2）烟苗移植及日常管理

烟苗一次剪叶后，苗龄40d～50d，每个待鉴定材料挑选45株，移植到新的漂浮盘中。

以三生-NN为抗病对照，革新三号为中抗对照，G140和红花大金元为感病对照。漂浮池营养液的氮素浓度控制在100mg/kg～250mg/kg。根据池水蒸发量，经常补充池水至初始水深。采用自动温湿度记录仪（杭州哈泰克公司产品）每小时记录一次水温。

3）接种体制备及接种

采用高压喷枪接种病毒稀释液，喷射压力为1.5-2kg/cm²，接种浓度为1%，接种后15-21天，感病对照品种病情指数不低于60时进行病情调查。每品种设3个重复，每重复接种15株。接种后将育苗盘放入28℃恒温池。

4）病情调查与分级

病害严重度分级标准按GB/T23222-2008的规定。

本发明与现有技术相比具有如下的优点和有益效果：1)在塑料拱棚温室中均匀提高土壤温度难度大，恒温温室造价高。本发明通过在普通漂浮池基础上，增加简单的保温材料、加热控温设备和水循环泵，以低成本成功解决了温度问题。2）采用市售的肥料和自来水配制营养液，与MS营养液和无菌水相比，成本大幅度降低。3）漂浮池恒温水培鉴定可在一个月之内完成，使得提高烟苗密度、减少占地面积。4）无需移栽，节省了大量的人力、物力，节省时间。

漂浮池恒温水培鉴定方法的实用性在于：发病迅速，从接种到调查结束可在一个月内完成；占地面积小，在几十平方米的面积上一次可同时鉴定上千株烟苗；结果重复性高，能有效排除土壤温度差异和其他病害对抗性结果的干扰，有利于年度间和不同实验室间结果重现和比较；结果可靠性高，抗感品种的发病率和病情指数差异明显，品种的抗性评价结果与他人多年的抗性评价结果基本一致。该方法在抗病资源和育种中间材料的抗性鉴定、抗性遗传规律研究中应用潜力较大。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的说明，但实施例不是对本发明保护范围的限定。

实施例1

1材料与方法

1.1苗期水培鉴定方法

在玻璃温室或塑料大棚温室内建造。池底垫一层厚约4cm的泡沫塑料板，铺2层塑料膜，整个池壁四周用泡沫塑料板保温。苗池一端设控温电加热棒（中山超信电器厂产品）和池水循环泵（广东海利集团有限公司产品）。控温电加热棒和池水循环泵通过控温装置联动。池水为深井水或自来水。水深15cm。设置水温为28.0℃。烟苗一次剪叶后，苗龄40d，每个待鉴定材料挑选45株，移植到新的漂浮盘中。以三生-NN为抗病对照，革新三号为中抗对照，G140和红花大金元为感病对照。漂浮池营养液的氮素浓度控制在100mg/kg～250mg/kg。根据池水蒸发量，经常补充池水至初始水深。采用自动温湿度记录仪（杭州哈泰克公司产品）每小时记录一次水温。采用高压喷枪接种病毒稀释液，喷射压力为1.5-2kg/cm2，接种浓度为1%，接种后15-21天，感病对照品种病情指数不低于60时进行病情调查。每品种设3个重复，每重复接种15株。接种后将育苗盘放入28℃恒温池。病害严重度分级标准按GB/T23222-2008的规定。病害严重度的分级标准按国家行业标准YC/T39-1996规定执行，根据病害严重度及对照品种的发病情况，确定病级并计算病指。根据感病对照达到感病时调查的各品种病指，将品种的抗性划分为四级：抗病（R）：病指25以下；中抗（MR）：病指在25.1-50；中感（MS）：病指在50.1-75；感病（S）：病指75以上。

2结果与分析：见下表。

温室水培人工接种病情

在苗期水培鉴定中，已知三生-NN对TMV免疫，G140、红大对TMV感病，革新三号对TMV中抗。供试52个品种中，免疫品种18个，分别为LY0414、JZ7-07、CF224、毕纳1号、FJ312、CF223、PVH2310、PVH2269、106126、1477、鄂烟1号、TN90LC、22083、AOV708、AOV405、AOV506、PVH2254、三生-NN；抗病品种4个，分别为CF225、YN116、白肋烟9907、云烟119；中抗品种17个，分别为Y106、NC89、PVH1452、HB029、LS-2、GY0802、K326、PVH2291、YK01、NCT13、6527、HC100、OA1011、NC196、PVH2248、云烟206、革新三号；中感品种13个，分别为优选1号、Y8190、0408、C7、云烟117、云烟118、NX0916、HN0508、贵烟3号、Va934、云晒1号、G140、红大。

实施例2

重复实施例1，有以下不同点：苗龄50d。

实施例3

重复实施例1，有以下不同点：苗龄30d。

实施例4

重复实施例1，有以下不同点：人工摩擦接种。

参考文献：

[1]陈瑞泰,朱贤朝,王智发,等.全国16个主产烟省(区)烟草侵染性病害调研报告[J].中国烟草科学,1997,1(4):1-7.

[2]苗洪芹.植物病毒检测技术和防治策略[J].河北农业科学,2005,9(3):103-106.

[3]耿召良,商胜华,陈兴江,等.植物源抗烟草花叶病毒天然产物研究进展[J].中国烟草科学,2011-02,32(1):84-91.

[4]中华人民共和国国家标准.烟草病害分级及调查方法（GB/T23222-2008）[S].北京：中国标准出版社出版发行，2008.

[5]中华人民共和国烟草行业标准.YC/T41-1996中华人民共和国行业标准烟草品种抗病性鉴定[S].国家烟草专卖局，1996。

Claims

1.一种烟草TMV抗性的苗期水培鉴定方法，其特征在于包括以下顺序的步骤：

1）池水保温循环漂浮池建造

在玻璃温室或塑料大棚温室内建造漂浮池，池底垫一层厚4cm的泡沫塑料板，铺2层塑料膜，整个池壁四周用泡沫塑料板保温；苗池一端设控温电加热棒和池水循环泵，控温电加热棒和池水循环泵通过控温装置联动；池水为深井水或自来水，水深5cm～20cm，设置水温为28.0℃；

2）烟苗移植及日常管理

烟苗一次剪叶后，当苗龄40d～50d时，每个待鉴定材料挑选45株，移植到新的漂浮盘中；以三生-NN为抗病对照，革新三号为中抗对照，G140和红花大金元为感病对照，控制漂浮池内营养液的氮素浓度在100 mg/kg～250 mg/kg，根据池水蒸发量，经常补充池水至初始水深，采用自动温湿度记录仪每小时记录一次水温；

3）接种体制备及接种

采用高压喷枪接种病毒稀释液，喷射压力为1.5-2kg/cm²，接种浓度为1%，接种后15-21天，感病对照品种病情指数不低于60时进行病情调查，每品种设3个重复，每重复接种15株，接种后将育苗盘放入28℃恒温池；

4）病情调查与分级

病害严重度分级标准按GB/T 23222-2008的规定。

2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：步骤1）所述的池水保温循环漂浮池为常规漂浮池增加泡沫塑料保温层和金鱼缸用加热控温设备和水泵，设置水温为28.0℃。

3.根据权利要求1所述的鉴定方法。其特征在于：步骤2）所述的营养液为市售的烟草漂浮育苗专用肥料配制，漂浮池营养液的氮素浓度控制在100 mg/kg～200 mg/kg。

4.根据权利要求1所述的鉴定方法,其特征在于：步骤1）所述控温电加热棒采用中山超信电器厂产品；所述池水循环泵采用广东海利集团有限公司产品。

5.根据权利要求1所述的鉴定方法,其特征在于：步骤2所述自动温湿度记录仪采用杭州哈泰克公司产品。