CN103385898A - 一种抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌穿心莲提取物的制备方法 - Google Patents
一种抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌穿心莲提取物的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种制备具有较高活性的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 穿心莲提取物的方法。所述方法包括如下步骤：取穿心莲药材，加水或乙醇或乙醇水溶液提取，回收溶剂制浸膏，浸膏加水稀释，加乙酸乙酯萃取，浓缩得所述穿心莲提取物。实验结果显示：所制得产品的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作用活性比现有穿心莲提取物高2到4倍，可作为天然的抗菌剂，应用于食品、药品等行业。且制备工艺简单，原料易得，成本低廉。
Description
技术领域
本发明属中药制药领域，涉及中草药穿心莲(Andrographis paniculata(Burm. f.)Nees)在抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的应用，尤其是涉及一种制备具有较高活性的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 穿心莲提取物的方法。
背景技术
众所周知，当前细菌耐药已成为全球范围的重大公共健康问题，抗生素的滥用是造成细菌耐药的重要原因。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，以下简称“MRSA”)具有多重耐药性并伴有高发病率和高死亡率，是导致坏死性肺炎、严重败血症、坏死性筋膜炎等疾病的重要致病菌，是医院感染和社区感染的重要病原菌之一，给临床治疗带来了极大的困难。MRSA对绝大多数的抗菌药耐药，甚至对目前临床抗耐药菌最为有效的万古霉素也开始出现耐药，一旦MRSA发展到对万古霉素普遍耐药的程度，感染MRSA的患者将面临无药可治的危险境地。因此，针对细菌耐药日趋严重的情况，寻找、开发具有抗耐药菌MRSA、对抗生素具有增敏作用的抗菌药物，刻不容缓。
穿心莲为爵床科植物穿心莲(Andrographis paniculata(Burm. f.)Nees)的全草或叶，味苦、性寒，具有清热解毒、消肿止痛、抗菌及抗癌作用。常用于急性细菌性痢疾、咽喉肿痛、疮痈疔毒、外伤感染等。临床应用于呼吸系统疾病、胃肠道系统疾病等。目前虽然有文献公开穿心莲的水提取物具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作用，但药效弱，应用于临床还有较大的差距，需要寻求更优 的提取工艺。
发明内容
本发明的目的是克服现有穿心莲提取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作用弱，不适用于临床应用的缺陷，而提供一种制备具有较高活性抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌穿心莲提取物的方法。
本发明的制备方法包括如下步骤：
取穿心莲药材，加水或乙醇或乙醇水溶液提取，回收溶剂制浸膏，浸膏加水稀释，加乙酸乙酯萃取，浓缩得所述穿心莲提取物。
本方法优选工艺为：
取穿心莲药材，用70%的乙醇水溶液提取，按药材重量与溶剂体积比为1:10的比例用70%乙醇水溶液提取三次，回收溶剂得浸膏，浸膏加水稀释后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液浓缩得所述穿心莲提取物。
本发明通过对穿心莲进行提取和分离，并对各提取物的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用进行筛选，来考察穿心莲各种提取物抗MRSA的作用。结果显示：穿心莲水、10%乙醇、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇提取物及相应乙酸乙酯、正丁醇、水层萃取物均具有抗MRSA作用，但乙酸乙酯萃取物的活性明显高于其他提取物，为其他提取物的2倍以上。其中，穿心莲70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位活性最强，为穿心莲水提取物的4倍。目前，穿心莲抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作用的有效成分及机理尚未完全明确，本发明方法制备的穿心莲提取物活性明显优于现有工艺制备的穿心莲提取物，因此发明人推断本发明的穿心莲提取物在成分构成上有别于现有工艺制备的穿心莲提取物，为一种新的物质。
本发明通过下述方法进行穿心莲提取物的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的药理作用的筛选。
以微量肉汤稀释法测定穿心莲提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。
菌株：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA，编号为M1-M20)临床分离株20株；金黄色葡萄球菌标准菌株(Sa，ATCC25923)均由中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物检验室提供，经中山大学附属第一医院临床微生物检验室检测确认其耐药性。
MH肉汤培养基：MH肉汤干粉(英国 OXOID LTD.)2.1g，定容至100ml，NaOH调节pH至7.0，高压灭菌，置4℃冰箱备用。
方法：参照美国国立临床试验标准化委员会(NCCLS)推荐的微量肉汤稀释法操作。
本发明的有益效果是：
用本发明的制备方法简单，原料易得，成本低廉。所得产品的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性比现有穿心莲提取物高2到4倍，可作为天然的抗菌剂，应用于食品、药品等行业；可实现穿心莲植物的综合利用并提高其附加值。
本发明的穿心莲提取物可作为抗菌类药物制剂的活性成分，制成片剂、胶囊、缓释剂、注射剂、栓剂、复方制剂等。
具体实施方式
以下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案。
实施例1
制备穿心莲水提取物及其萃取物
穿心莲(Andrographis paniculata(Burm. f.)Nees)由广东罗浮山国药股份有限公司提供。穿心莲300g，用水3000ml煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩得浸膏(水提取物)118.5g。取浸膏79.0g，用水200ml混悬后，每次200ml，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每种溶剂萃取三次，分别合并各萃取液，浓缩得石油醚萃取物2.6g、乙酸乙酯萃取物12.1g、正丁醇萃取物25.1g、水层萃取物39.2g。
实施例2
穿心莲水提取物及其萃取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用的筛选
1实验方法
1)最低抑菌浓度(MIC)的测定：
穿心莲水提取物及其萃取物、红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，调节接种菌为1.0×105CFU/ml。35℃培养24小时，无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。
2)最低杀菌浓度(MBC)的测定：
从1)项无菌生长的孔中移取50μl至血平板上，均匀涂布，35℃培养24小时，菌落计数，使最初的实验活菌数减少99.9％或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。
通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90，来评价药物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用。
2实验结果
穿心莲水提取物及其萃取物、四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验结果见表1。
穿心莲水提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外杀菌试验结果见表2。
经过统计分析，穿心莲水提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌和杀菌试验的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表3。
经过统计分析，四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌试验的MIC50、MIC90见表4：
表1 穿心莲水提取物及其萃取物、四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验结果
表2 穿心莲水提取物及其萃取物对MRSA的体外杀菌试验结果
表3 穿心莲水提取物及其萃取物对MRSA的体外抑菌和杀菌试验的统计结果
表4 四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验的统计结果
实验结果表明，穿心莲水提取物及其乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水层具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作用。其中水提取物的乙酸乙酯萃取物抗MRSA的活性最强。
实施例3
制备穿心莲10%乙醇提取物及其萃取物
穿心莲(Andrographis paniculata(Burm. f.)Nees)由广东罗浮山国药股份有限公司提供。穿心莲300g，用10%乙醇3000ml回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩得浸膏(10%乙醇提取物)115.2g。取浸膏76.8g，用水200ml混悬后，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每种溶剂萃取三次，每次200ml，分别合并各萃取液，浓缩得石油醚萃取物2.8g、乙酸乙酯萃取物12.1g、正丁醇萃取物25.7g、水层萃取物36.2g。
实施例4
穿心莲10%乙醇提取物及其萃取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用的筛选
1实验方法
3)最低抑菌浓度(MIC)的测定：
穿心莲10%乙醇提取物及其萃取物、红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，调节接种菌为1.0×105CFU/ml。35℃培养24小时，无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。
4)最低杀菌浓度(MBC)的测定：
从1)项无菌生长的孔中移取50μl至血平板上，均匀涂布，35℃培养24小时，菌落计数，使最初的实验活菌数减少99.9％或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。
通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90，来评价药物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用。
2实验结果
穿心莲10%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验结果见表5。
穿心莲10%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外杀菌试验结果见表6。
经过统计分析，穿心莲10%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌和杀菌试验的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表7。
经过统计分析，四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌试验的MIC50、MIC90见表8：
表5 穿心莲10%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验结果
表6 穿心莲10%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外杀菌试验结果
表7 穿心莲10%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外抑菌和杀菌试验的统计结果
表8 四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验的统计结果
实验结果表明，穿心莲10%乙醇提取物及其乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水层具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作用。其中10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗MRSA的活性最强。
实施例5
制备穿心莲30%乙醇提取物及其萃取物
穿心莲(Andrographis paniculata(Burm. f.)Nees)由广东罗浮山国药股份有限公司提供。穿心莲300g，用30%乙醇3000ml回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩得浸膏(30%乙醇提取物)105.3g。取浸膏70.2g，用水200ml混悬后，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每种溶剂萃取三次，每次200ml，分别合并各萃取液，浓缩得石油醚萃取物3.3g、乙酸乙酯萃取物11.5g、正丁醇萃取物23.7g、水层萃取物31.7g。
实施例6
穿心莲30%乙醇提取物及其萃取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用的筛选
1实验方法
5)最低抑菌浓度(MIC)的测定：
穿心莲30%乙醇提取物及其萃取物、红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，调节接种菌为1.0×105CFU/ml。35℃培养24小时，无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。
6)最低杀菌浓度(MBC)的测定：
从1)项无菌生长的孔中移取50μl至血平板上，均匀涂布，35℃培养24小时，菌落计数，使最初的实验活菌数减少99.9％或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。
通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90，来评价药物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用。
2实验结果
穿心莲30%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验结果见表9。
穿心莲30%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外杀菌试验结果见表10。
经过统计分析，穿心莲30%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌和杀菌试验的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表11。
经过统计分析，四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌试验的MIC50、MIC90见表12：
表9 穿心莲30%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验结果
表10 穿心莲30%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外杀菌试验结果
表11 穿心莲30%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外抑菌和杀菌试验的统计结果
表12 四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验的统计结果
实验结果表明，穿心莲30%乙醇提取物及其乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水层具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作用。其中30%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗MRSA的活性最强。
实施例7
制备穿心莲70%乙醇提取物及其萃取物
穿心莲(Andrographis paniculata(Burm. f.)Nees)由广东罗浮山国药股份有限公司提供。穿心莲300g，用70%乙醇3000ml回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩得浸膏(70%乙醇提取物)92.1g。取浸膏61.4g，用水200ml混悬后， 分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每种溶剂萃取三次，每次200ml，分别合并各萃取液，浓缩得石油醚萃取物4.8g、乙酸乙酯萃取物11.4g、正丁醇萃取物21.0g、水层萃取物24.2g。
实施例8
穿心莲70%乙醇提取物及其萃取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用的筛选
1实验方法
7)最低抑菌浓度(MIC)的测定：
穿心莲95%乙醇提取物及其萃取物、红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，调节接种菌为1.0×105CFU/mL。35℃培养24小时，无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。
8)最低杀菌浓度(MBC)的测定：
从1)项无菌生长的孔中移取50μl至血平板上，均匀涂布，35℃培养24小时，菌落计数，使最初的实验活菌数减少99.9％或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。
通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90，来评价药物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用。
2实验结果
穿心莲70%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验结果见表 13。
穿心莲70%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外杀菌试验结果见表14。
经过统计分析，穿心莲70%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌和杀菌试验的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表15。
经过统计分析，四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌试验的MIC50、MIC90见表16：
表13 穿心莲70%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验结果
表14 穿心莲70%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外杀菌试验结果
表15 穿心莲70%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外抑菌和杀菌试验的统计结果
表16 四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验的统计结果
实验结果表明，穿心莲70%乙醇提取物及其乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、 水层具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作用。其中70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗MRSA的活性最强。
实施例9
制备穿心莲95%乙醇提取物及其萃取物
穿心莲(Andrographis paniculata(Burm. f.)Nees)由广东罗浮山国药股份有限公司提供。穿心莲300g，用95%乙醇3000ml回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩得浸膏(95%乙醇提取物)77.1g。取浸膏51.4g，用水200ml混悬后，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每种溶剂萃取三次，每次200ml，分别合并各萃取液，浓缩得石油醚萃取物9.7g、乙酸乙酯萃取物19.3g、正丁醇萃取物12.5g、水层萃取物9.9g。
实施例10
穿心莲95%乙醇提取物及其萃取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用的筛选
1实验方法
9)最低抑菌浓度(MIC)的测定：
穿心莲95%乙醇提取物及其萃取物、红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，调节接种菌为1.0×105CFU/ml。35℃培养24小时，无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。
10)最低杀菌浓度(MBC)的测定：
从1)项无菌生长的孔中移取50μl至血平板上，均匀涂布，35℃培养24小时，菌落计数，使最初的实验活菌数减少99.9％或以上所需要的最低抗菌药物 的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。
通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90，来评价药物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用。
2实验结果
穿心莲95%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验结果见表17。
穿心莲95%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外杀菌试验结果见表18。
经过统计分析，穿心莲95%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌和杀菌试验的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表19。
经过统计分析，四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌试验的MIC50、MIC90见表20：
表17 穿心莲95%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验结果
表18 穿心莲95%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外杀菌试验结果
表19 穿心莲95%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外抑菌和杀菌试验的统计结果
表20 四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验的统计结果
实验结果表明，穿心莲95%乙醇提取物及其乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水层具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作用。其中95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗MRSA的活性最强。
Claims (2)
1.一种抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌穿心莲提取物的制备方法,包括以下步骤：取穿心莲药材，加水或乙醇或乙醇水溶液提取，回收溶剂制浸膏，浸膏加水稀释，加乙酸乙酯萃取，浓缩得所述穿心莲提取物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的制备方法具体为：取穿心莲药材，用70%的乙醇水溶液提取，按药材重量与溶剂体积比为1:10的比例用70%乙醇水溶液提取三次，回收溶剂得浸膏，浸膏加水稀释后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液浓缩得所述穿心莲提取物。
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|---|---|---|---|---|
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101028262A (zh) * | 2006-03-02 | 2007-09-05 | 海南盛科天然药物研究院有限公司 | 一种具有抗炎和抗感染作用的药物组合物 |
| CN103006724A (zh) * | 2012-11-28 | 2013-04-03 | 广东药学院 | 一种穿心莲提取物及其制备方法 |
-
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101028262A (zh) * | 2006-03-02 | 2007-09-05 | 海南盛科天然药物研究院有限公司 | 一种具有抗炎和抗感染作用的药物组合物 |
| CN103006724A (zh) * | 2012-11-28 | 2013-04-03 | 广东药学院 | 一种穿心莲提取物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| MUTHUBALAJI ET AL: "Phytochemical, antibacterial and in vitro alpha-amylase inhibitory assay of polyherbal formulati", 《PHARMACIA LETTRE》, vol. 5, no. 4, 31 May 2013 (2013-05-31), pages 241 - 246 * |
| 何志霞等: "穿心莲的药理作用研究进展", 《现代农业科技》, no. 3, 31 December 2009 (2009-12-31) * |
| 唐睿等: "穿心莲内酯的溶剂浮选", 《分析化学研究简报》, vol. 37, no. 4, 30 April 2009 (2009-04-30), pages 593 - 596 * |
| 徐冲等: "穿心莲根的化学成分研究", 《药学学报》, vol. 46, no. 3, 31 December 2011 (2011-12-31), pages 317 - 321 * |
| 谢郁峰等: "不同来源的穿心莲药材HPLC指纹图谱研究", 《广东药学院学报》, vol. 28, no. 4, 31 August 2012 (2012-08-31), pages 410 - 414 * |
| 靳汝辉等: "中药及单体对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验研究进展", 《中医学报》, vol. 27, no. 173, 1 October 2012 (2012-10-01), pages 1303 - 1305 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113730641A (zh) * | 2021-09-28 | 2021-12-03 | 珠海金标生物科技有限公司 | 一种缓释抗菌的敷料及其制备方法 |
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