CN103374528B - 一株黑曲霉及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株黑曲霉及其应用。该菌株为黑曲霉（Aspergillus niger）pf1，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.7600。本发明还公开了含有该菌株的微生物菌剂及制备方法。本发明黑曲霉（Aspergillus niger）pf1原菌粉中含有大量解磷菌，对土壤改良有一定的积极作用，其所具有的溶磷功能，在提高磷肥的利用率，提高作物的产量及品质方面具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明属于解磷微生物肥料领域。具体而言，本发明涉及一株能够高效解磷真菌黑曲霉及其应用，以及采用该黑曲霉制备的解磷微生物菌剂。
背景技术
磷是植物生长发育所必需的三大营养元素之一，磷既是是植物细胞中遗传物质DNA和能量物质ATP等众多有机化合物的基本构成元素，同时植物的光合作用和体内的生化代谢过程都必须有磷参加，磷在植物的整个生命过程中起着不可替代的作用。磷既是农业生产的重要物质保证，又是不可再生的矿质资源。我国有74%的耕地土壤缺磷，作物对施入的磷肥的当季利用率只有5%～10%，土壤中95%以上的磷与Ca2+、Fe2+、Fe3+、A13+结合形成难溶性磷酸盐而难以被作物吸收利用，磷是限制植物生长的主要因素之一，因此利用解磷微生物分解土壤中被固定的磷和提高磷肥利用率是达到作物高产、品质优良的重要途径之一。
黑曲霉（Aspergillus niger）属半知菌亚门丝孢纲丛梗孢目丛梗孢科曲霉属，黑曲霉是广泛存在于自然界中的一种腐生真菌，也是重要的工业发酵菌种之一，在工业酶制剂、柠檬酸发酵方面有着广泛的应用。黑曲霉对难溶性磷酸盐具有较强的转化能力，并能将含磷的有机化合物（如植素等）分解成能被植物吸收利用的可溶性磷。真菌溶磷机理非常复杂，主要是有机酸起作用，还有些菌株由于生长过程中产生其它的螯合物质，从而导致磷矿粉的溶解。充分利用解磷微生物这一特性，不仅可以利用固定态、吸附态的磷，有效缓解土壤中缺磷的现状，而且对提高磷肥利用率，减少磷肥的使用所造成的环境污染，甚至对提高作物产量及其品质，都具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于高效解磷真菌——黑曲霉（Aspergillus niger）菌株pf1。本发明的黑曲霉菌株具有生长速度快、解磷能力强、抗逆性强，在植物根际能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。
本发明的另一个目是提供一种采用该新的黑曲霉制备的能够高效解磷的微生物菌剂。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：本发明所提供的菌株为黑曲霉（Aspergillus niger）pf1，是从湖北省洪湖市土壤中分离获得的，已于2013年5月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），保藏号为CGMCC No.7600。其具有以下生物学特性：在PDA培养基上，在30℃培养时，黑曲霉菌落初为白色，迅速蔓延，后变成鲜黄色直至呈黑色厚绒状，边缘不规则，背面无色或中央略带黄褐色。菌丝有隔膜和分枝，为多细胞菌丝体，有色或无色，有足细胞，顶囊生成一层或两层小梗，小梗的顶端生一串串的分生孢子，分生孢子头呈褐黑色、放射状，分生孢子梗长短不一，顶囊球形，双层小梗，分生孢子为褐色、球形。
本发明黑曲霉（Aspergillus niger）菌株pf1的培养方法或繁殖方法包括：
（1）普通培养保存采用PDA培养基，配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂12g，蒸馏水1000mL。
（2）实验室液体培养采用PDB培养基，配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL。
（3）固体培养基配方：固料和无机盐溶液，按质量比1：1.8的比例配制。其中所述固料由质量比为90：10的稻壳粉和菜籽饼粉组成；按质量百分比计，所述无机盐溶液包括3.5%磷酸二氢钾，0.04%硫酸镁，4%硫酸铵，剩余为水。
（4）大量发酵培养配方：同（3）中固体培养基配方。
本发明还提供一种能够高效解磷的微生物菌剂，所述微生物菌剂含有所述的黑曲霉（Aspergillus niger）菌株pf1。
本发明还提供了上述黑曲霉（Aspergillus niger）菌株pf1或者微生物菌剂在提高磷肥的利用率，改善土壤结构，提高作物的产量及品质方面的应用。
上述微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备所述黑曲霉菌株pf1的种子液；
（2）将步骤（1）制备的种子液接种到固体培养基中，28℃下恒温培养；
（3）将步骤（2）培养的培养物加入无菌水混合，过滤，将滤液接种至大量发酵培养基，在室温28℃、相对湿度85%以上的发酵室中进行发酵培养。
具体步骤为：
（1）将活化好的黑曲霉菌株pf1接种到PDB液体培养基中，28℃摇床振荡培养3～5d，得到种子液；
（2）将步骤（1）制备的种子液按10%的质量比接种到固体培养基中，28℃恒温培养3～5d；
（3）大量固体发酵：将步骤（2）培养的培养物加入其质量15倍的无菌水混合，并用灭菌纱布过滤，除去粗渣，即为生产菌液；按质量比1：6（菌液：培养基=1：6）的接种量将此生产菌液接种于大量发酵培养基，于28℃发酵培养8～9d，即可得到黑曲霉菌原粉，其有效活菌数大于108cfu/g。
其中，步骤（2）中的固体培养基由固料和无机盐溶液组成，所述固料和无机盐溶液的比例为质量比1：1.8；所述固料由质量比为90：10的稻壳粉和菜籽饼粉组成；按质量百分比计，所述无机盐溶液包含3.5%磷酸二氢钾，0.04%硫酸镁，4%硫酸铵，剩余为水。
并且，步骤（3）中的大量发酵培养基同固体培养基。
实验表明：本发明解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1原菌粉中含有大量解磷菌，对土壤改良有一定的积极作用，其所具有的溶磷功能，在提高磷肥的利用率，提高作物的产量及品质方面具有重要的意义。
附图说明
图1为磷标准曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是示例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1高效解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1的筛选和分离
本发明的黑曲霉（Aspergillus niger）pf1是从土壤中采用稀释平板法和平板划线法分离获得的，分离方法为：采用蒙金娜无机磷固体培养基进行筛选。土样的采集，样品采集地点为湖北省洪湖市，采样时间为2013年2月13号，采用5点取样法，分别采集地块四周和中央深度在10-20cm范围内的土壤适量，等量混匀。标明采集地点、时间和采集人。称取1g土样于100mL无菌水中，置于30℃摇床中150r/m震荡10min，取100μL10-2、10-3、10-4稀释液涂布于无机磷固体培养基平板上，每个梯度涂布三个平行，在30℃培养7d后，观察有无溶磷圈，并根据溶磷圈直径(D)与菌落直径(d)比值的大小来初步确定解磷能力将有溶磷作用的菌株作好记录备用。
本发明人通过大量筛选工作得到一株能够高效解磷的黑曲霉（Aspergillus niger）pf1。实验证明，具有生长速度快、解磷能力强、抗逆性强，在植物根际能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。
解磷菌筛选采用蒙金娜无机磷固体培养基：葡萄糖10g，(NH4)2SO40.5g，NaCl0.3g，KCl0.3g，MgSO4.7H2O0.3g，FeSO4.7H2O0.03g，MnSO4.4H2O0.03g，Ca3(PO3)210g，酵母浸提物0.4g，琼脂20g，去离子水1000ml，pH调至7.0。
实施例2高效解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1的菌株鉴定
（1）微生物学特性：在PDA培养基上，在30℃培养时，黑曲霉菌落初为白色，迅速蔓延，后变成鲜黄色直至呈黑色厚绒状，边缘不规则，背面无色或中央略带黄褐色。菌丝有隔膜和分枝，为多细胞菌丝体，有色或无色，有足细胞，顶囊生成一层或两层小梗，小梗的顶端生一串串的分生孢子，分生孢子头呈褐黑色、放射状，分生孢子梗长短不一，顶囊球形，双层小梗，分生孢子为褐色、球形。
（2）分子生物学特性
该菌株的rRNA基因序列测定结果（ITS-5.8S-ITS2区）如下（SEQ No.1）：
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实施例3高效解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1解磷能力的测定
采用蒙金娜无机磷液体培养基测定解磷菌的解磷能力，先将斜面上保存的黑曲霉（Aspergillus niger）pf1接种到PDA液体培养基中作为种子，于30℃，180r/min恒温摇床中振荡培养12h，随后按1%的接种量（v/v）将培养好的菌液接种到250mL含100mL蒙金娜无机磷液体培养基三角瓶中，以接种1%的无菌PDA液体培养基到蒙金娜无机磷液体培养基作为空白对照，于30℃，180r/min恒温摇床中振荡培养7d。
采用钼锑抗比色法测定发酵液中的有效磷含量。将发酵液摇匀，取20mL到离心管中，8000r/min，离心10min；吸取2.5-10mL上清液到50mL的容量瓶中，加入蒸馏水至体积约为30mL，加入2滴2.6-二硝基酚指示剂，再加入1滴1mol/L的H2SO4至溶液黄色刚好退去，接着加入5mL的钼锑抗试剂，定容至刻度，在25℃下显色30min，然后在721型紫外可见分光光度计上测定吸光度值，波长设定为700nm。根据标准曲线计算出对应的有效磷含量。
磷标准曲线的绘制：将50mg/L的磷标液稀释10倍，为5mg/L，分别吸取5mg/L的磷标液0、2、4、6、8、10mL至50mL容量瓶中，加入蒸馏水至体积约为30mL，加入2滴2.6-二硝基酚指示剂，逐滴加入4mol/L的NaOH溶液至容量瓶中液体呈现微黄色，再逐滴加入1mol/L的H2SO4至黄色刚刚消去，接着加入5mL钼锑抗试剂，并用蒸馏水定容至刻度。在25℃下显色30min，然后与上述样品的显色液同在721型紫外可见分光光度计上测定吸光度值，波长设定为700nm。以磷浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制磷标准曲线，如图1所示。
不接菌的空白对照溶液中的有效磷浓度为83.6mg/L，解磷真菌黑曲霉（Aspergillusniger）pf1的发酵液中有效磷含量为1864.7mg/L，表明解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1是一株高效解磷真菌。
蒙金娜无机磷液体培养基：葡萄糖10g，(NH4)2SO40.5g，NaCl0.3g，KCl0.3g，MgSO4.7H2O0.3g，FeSO4.7H2O0.03g，MnSO4.4H2O0.03g，Ca3(PO3)210g，去离子水1000ml，pH调至7.0，用于定量测定解磷微生物的解磷能力。
实施例4高效解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1的发酵过程
PDA培养基，配方为马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂12g，蒸馏水1000mL。
PDB培养基，配方为马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL。
大量固体发酵培养基配方（质量百分含量）：
固料：稻壳粉90%，菜籽饼粉10%。
无机盐溶液：磷酸二氢钾3.5%，硫酸镁0.04%，硫酸铵4%，剩余为水。
固液比为1:1.8（质量比）
黑曲霉（Aspergillus niger）pf1大量固体发酵过程：
①斜面种子：解磷真菌菌种黑曲霉（Aspergillus niger）pf1保存在PDA培养基上，贮存在4℃恒温箱内，使用前取出在PDA培养基上活化两次。
②种子摇瓶：将活化好的解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1接种到装有200mLPDB液体培养基的500mL三角瓶中，28℃摇床振荡培养3～5d，此为种子液。
③固体生产菌种的培养：将种子液按10%的比例接种到固体培养基（500mL三角瓶）中，28℃恒温培养3～5d，中间多次振荡。
④大量固体发酵：将③中固体培养的培养物用无菌水按1:15比例稀释，并用灭菌纱布过滤，除去粗渣，即为生产菌液，接种比例按1:6接种于大量发酵培养基。将接种的原料置于发酵室（28℃和相对湿度85%以上）中发酵培养8～9d，即可得到黑曲霉菌原粉，其有效活菌数大于108cfu/g。
实施例5高效解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1小区试验
试验材料：高效解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1的发酵菌粉，具有溶磷的功效，有效活菌数大于108cfu/g。
试验时间：2011年10月～2012年5月
试验地点：山东省林业科学研究院中试基地
供试品种：小麦（山农21）
试验土壤：菜园土
试验设计：以清水拌种作为对照，以不同稀释度（稀释10倍、20倍、30倍）的菌粉液体拌种作为示范，每个处理三个平行，小区面积20m2，随机分布。
施肥量与施肥方法：播种前，采用不同稀释度（稀释10倍、20倍、30倍）的菌粉液体拌种，以清水拌种作为对照，其他措施同当地，统一浇水、除草等田间管理措施。
农艺性状及产质量调查：于收获前一天测量株高、分蘖数、有效穗、成穗率、穗粒数、千粒重。
表1小麦农艺性状调查表
注：pf1是指高效解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）
从表1数据可以看出，采用解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1原菌粉的稀释液拌种的小麦，其在农艺性状方面比用清水拌种的小麦有很明显的优势。
收获小麦后，测量各小区的产量，同时统统计不同处理方式，小麦产量的差异。如表2。
表2小麦产量调查表
从表2数据可以看出，采用解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1原菌粉的稀释液拌种的小麦，其产量比用清水拌种的对照高，其中解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1原菌粉10倍、20倍和30倍的稀释液拌种，小麦的产量分别比对照增加16.8%、13.1%和7.5%。用解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1原菌粉的10倍稀释液拌种的小麦，其产量极显著高于对照，增产效果十分明显。
因解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1原菌粉中含有大量解磷菌，对土壤改良有一定的积极作用，其所具有的溶磷功能，对改善土壤结构，增强作物对肥料的吸收率等有很大的积极影响。
施用解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）pf1原菌粉，对土壤的改良及作物的生长都具有非常大的积极作用。
Claims (8)
1.黑曲霉（Aspergillus niger）菌株pf1，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.7600。
2.权利要求1所述的黑曲霉（Aspergillus niger）菌株pf1在提高磷肥的利用率、改善土壤结构方面的用途。
3.权利要求1所述的黑曲霉（Aspergillus niger）菌株pf1在提高作物的产量方面的用途。
4.一种微生物菌剂，含有权利要求1所述的黑曲霉（Aspergillus niger）菌株pf1。
5.一种制备权利要求4所述的微生物菌剂的方法，其特征是，包括以下步骤：
（1）制备所述黑曲霉菌株pf1的种子液；
（2）将步骤（1）制备的种子液接种到固体培养基中，28℃下恒温培养；
（3）将步骤（2）培养的培养物加入无菌水混合，过滤，将滤液接种至大量发酵培养基，在室温28℃、相对湿度85%以上的发酵室中进行发酵培养；
其中，步骤（2）中的固体培养基由固料和无机盐溶液组成，所述固料和无机盐溶液的比例为质量比1：1.8；所述固料由质量比为90：10的稻壳粉和菜籽饼粉组成；按质量百分比计，所述无机盐溶液包含3.5%磷酸二氢钾，0.04%硫酸镁，4%硫酸铵，剩余为水；所述步骤（3）中的大量发酵培养基同固体培养基。
6.如权利要求5所述的方法，其特征是，
（1）将活化好的黑曲霉菌株pf1接种到PDB液体培养基中，28℃摇床振荡培养3~5d，得到种子液；所述PDB液体培养基为：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000 mL；
（2）将步骤（1）制备的种子液按10%的质量比接种到固体培养基中，28℃恒温培养3~5d；
（3）大量固体发酵：将步骤（2）培养的培养物加入其质量15倍的无菌水混合，并用灭菌纱布过滤，除去粗渣，即为生产菌液；按质量比1：6的接种量将此生产菌液接种于大量发酵培养基，于28℃发酵培养8~9 d。
7.权利要求4所述的微生物菌剂在提高磷肥的利用率、改善土壤结构方面的用途。
8.权利要求4所述的微生物菌剂在提高作物的产量方面的用途。
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Citations (2)
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|---|---|---|---|---|
| KR20070036879A (ko) * | 2005-09-30 | 2007-04-04 | 이광훈 | 난용성 인산 분해능을 가지는 아스퍼질러스 나이저 및 이를함유하는 미생물제제 |
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|---|---|---|---|---|
| KR20070036879A (ko) * | 2005-09-30 | 2007-04-04 | 이광훈 | 난용성 인산 분해능을 가지는 아스퍼질러스 나이저 및 이를함유하는 미생물제제 |
| CN101003737A (zh) * | 2007-01-17 | 2007-07-25 | 吉林农业大学 | 土壤磷素活化剂 |
Non-Patent Citations (7)
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|---|
| Biotechnology》.1998,第14卷第212页右栏第2段、表2-表5. * |
| S.A. Omar.The role of rock-phosphate-solubilizing fungi and vesicular–arbusular-mycorrhiza (VAM) in growth of wheat plants fertilized with rock phosphate.《World Journal of Microbiology & Biotechnology》.1998,第14卷第212页右栏第2段、表2-表5. * |
| S.A. Omar.The role of rock-phosphate-solubilizing fungi and vesicular–arbusular-mycorrhiza (VAM) in growth of wheat plants fertilized with rock phosphate.《World Journal of Microbiology & * |
| 汤树德 等.高效溶磷黑曲霉菌株筛选、溶磷机制及其条件的研究.《微生物学通报》.1983,正文第一部分. * |
| 真菌As的溶磷作用;陕西省农科院土肥所微生物组;《土壤肥料》;19801231;第一至三部分 * |
| 陕西省农科院土肥所微生物组.真菌As的溶磷作用.《土壤肥料》.1980,第一至三部分. * |
| 高效溶磷黑曲霉菌株筛选、溶磷机制及其条件的研究;汤树德 等;《微生物学通报》;19831231;正文第一部分 * |
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