CN103373994A - 治疗性化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物，其中R1是NH2或NHMe；R2是卤素；且R3或R4之一是氢且另一个选自-SO2NH2、-SO2NHMe或-SO2NMe2、-SO2NHEt或-SO2NEt2。式I化合物是蛋白激酶、尤其是细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)如CDK9的抑制剂。本发明还涉及制备这些化合物的方法、包含它们的药物组合物以及它们在治疗增殖性紊乱如癌症以及其中牵涉蛋白激酶/CDK活性的其它疾病或病症中的用途。

Description

治疗性化合物
技术领域
本发明涉及治疗性化合物。更具体而言，本发明涉及作为蛋白激酶、尤其是细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)如CDK-9的抑制剂的化合物。本发明还涉及这些化合物的制备方法、包含它们的药物组合物以及它们在治疗增殖性紊乱如癌症以及其中牵涉蛋白激酶/CDK活性的其它疾病或病症中的用途。
背景技术
增殖性疾病如癌症的特征是不受控的和失调的细胞增殖。近数十年来，到底是什么使细胞以不受控的和失调的方式进行增殖已经成为深入研究的焦点。
已经成为在此方面的广泛研究的主题的一类重要的酶是蛋白激酶家族。蛋白激酶家族是人类基因组(包含500个基因)中最大的家族之一。大多数激酶含有具有保守核心结构的250-300个氨基酸残基的催化结构域。该结构域包含ATP的结合袋，所述ATP的末端磷酸基以共价方式转移至其大分子底物。蛋白激酶可通过它们进行磷酸化的底物而分类，例如蛋白-丝氨酸/苏氨酸、蛋白-酪氨酸。
蛋白激酶通过使磷酰基从三磷酸核苷转移至牵涉在信号通路中的蛋白质受体而介导细胞内信号发放。这些磷酸化事件响应于多种细胞外刺激和其它刺激而触发，作为可调整或调节靶蛋白质生物学功能的分子开关起作用。细胞外刺激可影响一种或多种与细胞生长、迁移、分化、激素分泌、转录因子活化、肌肉收缩、葡萄糖代谢、蛋白质合成控制和细胞周期调节有关的细胞应答。
多种疾病与由蛋白激酶介导事件触发的异常细胞应答相关。这些疾病包括但不限于变态反应和哮喘、阿尔茨海默病、自身免疫疾病、骨疾病、癌症、心血管疾病、炎性疾病、激素相关性疾病、代谢疾病、神经学疾病和神经变性疾病。因此，在药物化学领域为寻找有效作为治疗剂的蛋白激酶抑制剂已经做出了大量努力。
现有技术中已知众多能够通过对抗ATP结合来抑制蛋白激酶功能的分子。具体而言，已经公开2-苯胺基-4-杂芳基-嘧啶化合物(Wang，S.；等人WO2003029248，Cyclacel Limited，UK.Fischer，P.M.，WO2002079193，Cyclacel Limited，UK.Wang，S.；Fischer，P.M.US2002019404，CyclacelLimited，UK.；Fischer，P.M.；Wang，S.WO2001072745，Cyclacel Limited，UK)和2-苯胺基-4-苯基-嘧啶化合物(Wang S.，等人WO2005012262，Cyclacel Limited，UK)具有激酶抑制性质，特别是针对细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)而言。
细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)是与多种细胞周期蛋白亚单位相关的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在调节细胞周期过程和转录周期中起关键作用。在真核细胞中的多种重要调节途径、包括细胞周期控制、细胞凋亡、神经元生理学、分化和转录中牵涉10种不同的CDK(CDK1-9和11)。
CDK可被分为两个反映它们功能的主要类别。主要由CDK1、CDK2、CDK3、CDK4和CDK6组成的细胞周期调节物CDK与它们的细胞周期蛋白伴侣(包括细胞周期蛋白A、B、D1、D2、D3、E和F)一起作用以调节细胞周期的增进。包括CDK7、CDK8、CDK9和CDK11在内的转录调节物CDK与细胞周期蛋白C、H、K、L1、L2、T1和T2一起工作，倾向于在转录调节中起作用。
CDK已经牵连在细胞增殖性紊乱、特别是癌症中。细胞增殖是细胞分裂周期直接或间接失控的结果，CDK在该周期的多个阶段的调节中起关键作用。因此，CDK及其相关细胞周期蛋白的抑制剂是癌症治疗的有用靶标。
CDK还在细胞凋亡和T-细胞发育中起作用，这主要是由于CDK在转录调节中的功能。例如，最近使用CDK抑制剂黄酮吡多(flavopiridol)在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中已经获得了明确的临床活性。CLL的特征是对经由抗细胞凋亡蛋白质的增量调节进行的细胞凋亡的细胞抗性。在CDK9水平上的转录的抑制(是mRNA延伸所需的)在CLL细胞中选择性地恢复细胞凋亡。然而，仍然需要有在药理学和药学方面较优的CDK抑制剂，它具有界限清楚的激酶选择性和细胞特异性性质以及抗-CLL功效以及对抗其它CDK介导的疾病的功效。
而且，众多病毒的复制过程需要CDK、特别是CDK2、CDK7和CDK9。已经报道了限制病毒复制的CDK抑制剂，所述病毒包括人免疫缺陷病毒、人巨细胞病毒、疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒。
CDK、特别是CDK9的抑制是心血管疾病、包括心脏肥大的潜在治疗的新策略。心脏肥大的特征是mRNA和蛋白质合成的总体增加。CDK7和CDK9与心脏肥大密切相关，这是因为它们是转录的主要驱动物。因此，CDK9及其相关细胞周期蛋白的抑制是心血管疾病的相关的药物靶标。
CDK的抑制还可用于治疗神经变性紊乱如阿尔茨海默病。与阿尔茨海默病有关的双股螺旋形细丝(Paired Helical Filaments)的出现是由于CDK5/p25使Tau蛋白高度磷酸化而引起的。
国际专利公开WO2009/118567(Cancer Research Technology Limited)公开了一系列作为蛋白激酶抑制剂具有广泛治疗应用的被取代的-2-苯胺基-4-芳基嘧啶化合物和被取代的-4-芳基-[1，3，5]三嗪-2-基苯基胺化合物。WO2009/118567中所述的化合物均为潜在地可用于治疗其中涉及蛋白激酶活动过度(和特别是CDK活动过度)的疾病或病症的治疗剂。
然而，仍然需要识别可用于治疗此类病症的新治疗剂。特别是需要识别作为蛋白激酶(和尤其是CDK)活性抑制剂起作用并且还具有一个或多个有利的药物性质的其它化合物。所述的一个或多个有利的药物性质可以选自：效能/靶标活性增加(例如抗增殖活性增加)；治疗功效增加(例如对抗某些癌细胞系的活性增加和/或针对癌细胞的选择性改善)；和/或生物利用度(例如口服生物利用度)改善。
发明内容
发明简述
在一个方面，本发明提供了如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一个方面，本发明提供了包含如本文所定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物以及包含一种或多种可药用赋形剂的药物组合物。
在另一个方面，本发明涉及用于治疗的如本文所定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物或如本文所定义的药物组合物。
在另一个方面，本发明涉及用于治疗其中涉及蛋白激酶活性的疾病或病症的如本文所定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物或如本文所定义的药物组合物。
在另一个方面，本发明涉及如本文所定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗其中涉及蛋白激酶活性的疾病或病症。
在另一个方面，本发明涉及治疗其中涉及蛋白激酶活性的疾病或病症的方法，所述方法包括向需要该治疗的个体施用治疗有效量的如本文所定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物或如本文所定义的药物组合物。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗增殖性紊乱如癌症的如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物或药物组合物。在一项特定的实施方案中，癌症是人类癌症。
在另一个方面，本发明提供了化合物或其可药用的盐或溶剂合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗增殖性紊乱如癌症。在一项特定的实施方案中，癌症是人类癌症。
在另一个方面，本发明提供了治疗增殖性紊乱如癌症的方法，所述方法包括向需要该治疗的个体施用治疗有效量的如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物或药物组合物。在一项特定的实施方案中，癌症是人类癌症。
在另一个方面，本发明提供了用于产生蛋白激酶抑制作用的如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物或药物组合物。
在另一个方面，本发明提供了化合物或其可药用的盐或溶剂合物在制备药物中的用途，所述药物用于产生蛋白激酶抑制作用。
在另一个方面，本发明提供了在体外产生蛋白激酶抑制作用的方法，所述方法包括施用有效量的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一个方面，本发明提供了在体内产生蛋白激酶抑制作用的方法，所述方法包括施用有效量的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一个方面，本发明提供了用于产生CDK抑制作用的如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物或药物组合物。
在另一个方面，本发明提供了化合物或其可药用的盐或溶剂合物在制备药物中的用途，所述药物用于产生CDK抑制作用。
在另一个方面，本发明提供了在体外产生CDK抑制作用的方法，所述方法包括施用有效量的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一个方面，本发明提供了在体内产生CDK抑制作用的方法，所述方法包括施用有效量的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一个方面，本发明提供了在体外或在体内抑制CDK的方法，所述方法包括将细胞与有效量的如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物接触。
在另一个方面，本发明提供了在体外或在体内抑制细胞增殖的方法，所述方法包括将细胞与有效量的如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物接触。
本发明还提供了合成如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物的方法。
在另一个方面，本发明提供了可通过或者通过或者直接通过如本文所定义的合成方法获得的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一个方面，本发明提供了适宜在本文所述的任意一种合成方法中使用的如本文所定义的新中间体。
本发明的任意一个特定方面的优选的、适宜的和任选的特征也是任意其它方面的优选的、适宜的和任选的特征。
发明详述
定义
除非另外说明，否则说明书和权利要求书中所用的以下术语具有下文所述的以下含义。
应理解，称谓“治疗”包括预防以及缓解病症的已确立的症状。因此，状况、紊乱或病症的“治疗”包括：(1)预防在可能患有或易患有所述状况、紊乱或病症、但是还没有经历或呈现出所述状况、紊乱或病症的临床或亚临床症状的人中发展的所述状况、紊乱或病症的临床症状或延缓其出现，(2)抑制所述状况、紊乱或病症，即，阻止、减少或延缓疾病的发展或其复发(在维持治疗的情况下)或者它的至少一种临床或亚临床症状，或者(3)减轻或减缓疾病，即，引起所述状况、紊乱或病症或者它的至少一种临床或亚临床症状的消退。
“治疗有效量”指当施用于哺乳动物来治疗疾病时足以实现疾病的这类治疗的化合物量。“治疗有效量”将根据化合物、疾病及其严重性和待治疗哺乳动物的年龄、体重等而改变。
术语“卤素”指氟、氯、溴和碘。
短语“本发明的化合物”指本文中概括地和具体地公开的那些化合物。
本发明的化合物
如上文所述，国际专利公开WO2009/118567(Cancer ResearchTechnology Limited)公开了一系列作为蛋白激酶抑制剂具有广泛治疗应用的被取代的-2-苯胺基-4-芳基嘧啶化合物和被取代的-4-芳基-[1，3，5]三嗪-2-基苯基胺化合物。
WO2009/118567中公开的一种具体化合物是3-(5-氰基-4-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰胺(WO2009/118567中的化合物1.9)。该化合物的结构如下所示：
Figure BDA00003066660500061
在第一个方面，本发明提供了下文所示的式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物：
Figure BDA00003066660500071
其中：
R1是NH2或NHMe；
R2是卤素；且
R3或R4之一是氢且另一个选自-SO2NH2、-SO2NHMe、-SO2NMe2、SO2NHEt或SO2NEt2。
本发明的化合物相对于3-(5-氰基-4-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰胺(WO2009/118567中的化合物1.9)而言显示出一个或多个有利的药物性质。具体而言，本发明的化合物相对于该化合物而言具有改善的效能(通过与某些特定酶靶标有关的/或就在某些细胞系中的抗增殖活性而言的活性增加得以证实)。一些本发明的化合物相对于该现有技术的化合物而言还显示出改善的口服生物利用度。
特定的本发明的化合物包括例如如下定义的式I化合物或其可药用盐：其中，除非另有说明，否则R1、R2、R3或R4各自具有上文或下文第(1)至(13)段中任意一段中所定义的任意含义：
(1)R1是NH2；
(2)R1是NHMe；
(3)R2是氟、氯或溴；
(4)R2是氟或氯；
(5)R2是氟；
(6)R3或R4之一是氢且另一个是-SO2NH2、SO2NHMe或-SO2NMe2；
(7)R3或R4之一是氢且另一个是-SO2NH2；
(8)R4是氢，且R3选自-SO2NH2、-SO2NHMe或-SO2NMe2；
(9)R3是氢，且R4选自-SO2NH2、-SO2NHMe或-SO2NMe2；
(10)R3是氢，且R4选自-SO2NH2或-SO2NHMe；
(11)R3是氢，且R4是-SO2NH2；
适宜地，R2是氟或氯，尤其是氟。
适宜地，R3或R4之一是氢且另一个是-SO2NH2。在一项特定的实施方案中，R3是氢，且R4是-SO2NH2。
在一组特定的本发明的化合物中，R1是-NHMe，即所述化合物具有下文所示的结构式Ia：
Figure BDA00003066660500081
其中R2、R3和R4具有任意一种本文定义的含义，或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一组本发明的化合物中，R2是氟，即所述化合物具有下文所示的结构式Ib：
Figure BDA00003066660500082
其中R1、R3和R4具有任意一种本文定义的含义，或其可药用的盐或溶剂合物。
在一组特定的本发明的化合物中，R1是-NHMe且R2是氟，即所述化合物具有下文所示的结构式Ic：
Figure BDA00003066660500083
其中R3和R4具有任意一种本文定义的含义，或其可药用的盐或溶剂合物。
本发明的特定化合物包括以下化合物中的任一个：
3-(5-氟-4-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰胺；
3-(5-氟-4-(4-甲基-2-氨基噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰胺；
3-(5-氯-4-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰胺；
或其可药用的盐或溶剂合物。
本发明的化合物的适宜的可药用盐是例如呈足够碱性的本发明的化合物的酸加成盐，例如与例如无机酸或有机酸的酸加成盐，所述酸例如是盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、甲酸、柠檬酸或马来酸。
本发明还包括具有一个或多个同位素取代的如本文所定义的本发明的化合物。例如，H可以是任意同位素形式，包括1H、2H(D)和3H(T)；C可以是任意同位素形式，包括12C、13C和14C；O可以是任意同位素形式，包括16O和18O；等。
还应理解，一些本发明的化合物可以以溶剂化形式以及未溶剂化形式如水合形式存在。应理解，本发明包括所有的具有蛋白激酶抑制活性的此类溶剂化形式。
还应理解，一些本发明的化合物可表现出多晶现象，本发明包括所有的具有蛋白激酶抑制活性的此类形式。
含有胺官能团的本发明的化合物还可形成N-氧化物。本文提及的含有胺官能团的式I化合物还包括N-氧化物。当化合物含有数个胺官能团时，一个或一个以上的氮原子可以被氧化形成N-氧化物。N-氧化物的特定实例有叔胺或含氮杂环的氮原子的N-氧化物。可以通过用氧化剂如过氧化氢或过酸(例如过氧羧酸)处理相应的胺而形成N-氧化物，参见例如AdvancedOrganic Chemistry，Jerry March，第4版，Wiley Interscience，页。更特别地，N-氧化物可通过L.W.Deady(Syn.Comm.1977，7，509-514)所述的方法制备，其中胺化合物与间氯过苯甲酸(MCPBA)反应、例如在惰性溶剂如二氯甲烷中反应。
本发明的化合物可以以前药的形式施用，所述前药在人或动物体内分解释放出本发明的化合物。前药可用于改变本发明的化合物的物理性质和/或药物动力学性质。当本发明的化合物含有可与改变性质的基团连接的适宜基团或取代基时，可以形成前药。前药的实例包括在体内可裂解的酰胺衍生物，其可在本发明的化合物中的氨基上形成。
因此，本发明包括当可通过有机合成获得的和当可在人或动物体内通过其前药裂解的方式获得的如上文定义的那些式I化合物。因此，本发明包括通过有机合成方式制备的那些式I化合物，还包括在人或动物体内通过前体化合物代谢的方式产生的此类化合物，即，式I化合物可以是合成制备的化合物或代谢产生的化合物。
式I化合物的适宜的可药用前药是基于合理的医学判断适于施用于人或动物体而没有不希望的药理学活性和没有过度毒性的那些。
例如，在以下文献中已经描述了多种形式的前药：
a)Methods in Enzymology，第42卷，第309-396页，K.Widder等人编撰(Academic Press，1985)；
b)Design of Pro-drugs，H.Bundgaard编撰，(Elsevier，1985)；
c)A Textbook of Drug Design and Development，Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard编撰，第5章“Design and Application of Pro-drugs”，H.Bundgaard第113-191页(1991)；
d)H.Bundgaard，Advanced DrugDelivery Reviews，8，1-38(1992)；
e)H.Rundgaard，等人，Journal of Pharmaceutical Sciences，77，285(1988)；
f)N.Kakeya，等人，Chem.Pharm.Bull.，32，692(1984)；
g)T.Higuchi和V.Stella，“Pro-Drugs as Novel Delivery Systems”，A.C.S.Symposium Series，第14卷；和
h)E.Roche(编辑)，“Bioreversible Carriers in Drug Design”，PergamonPress，1987。
具有氨基的式I化合物的适宜的可药用前药是例如其在体内可裂解的酰胺衍生物。来自氨基的适宜的可药用酰胺包括例如与C1-10烷酰基如乙酰基、苯甲酰基、苯基乙酰基和被取代的苯甲酰基和苯基乙酰基形成的酰胺。苯基乙酰基和苯甲酰基上的环取代基的实例包括氨基甲基、N-烷基氨基甲基、N，N-二烷基氨基甲基、吗啉代基甲基、哌嗪-1-基甲基和4-(C1-4烷基)哌嗪-1-基甲基。
式I化合物的体内效果可部分地通过在施用式I化合物后在人或动物体内形成的一种或多种代谢物来产生。如上所述，式I化合物的体内效果还可通过前体化合物(前药)代谢的方式来产生。
还应理解：式I化合物还可以与其它基团经共价连接(在任意适宜的位置上)，所述其它基团例如是增溶部分(例如PEG聚合物)、使它们与固体载体连接的部分(例如含生物素的部分)和靶向配体(例如抗体或抗体片段)。
合成
在下文所述的合成方法的描述中以及在用于制备原料的参考合成方法中，应理解：所有所建议的反应条件、包括溶剂选择、反应气氛、反应温度、实验持续时间和后处理操作都可以由本领域技术人员进行选择。
有机合成领域的技术人员理解：在分子各部分上存在的官能团必须与所用的试剂和反应条件相容。
必需的原料可通过标准的有机化学方法获得。结合以下代表性方法的变通方案在所附实施例中描述了这类原料的制备。或者，必需的原料可通过与所说明的方法相类似的方法获得，这属于有机化学家的普通技术范围。
将理解的是，在下文定义的方法中的本发明的化合物的合成期间或者在某些原料的合成期间，可能需要保护某些取代基团以防止它们发生不希望的反应。熟练化学家将理解何时需要进行这类保护以及可以如何引入这类保护基和随后将其除去。
保护基的实例参见有关该主题的众多通用书籍之一，例如，‘ProtectiveGroups in Organic Synthesis’，Theodora Green(出版商：John Wiley &Sons)。保护基可通过文献中描述的或熟练化学家已知的适于除去所述保护基的任意便利方法除去，可以对这类方法进行选择以便在对分子中其它基团的干扰最小的情况下除去保护基。
因此，如果反应物包括诸如氨基、羧基或羟基的基团，则可能需要在本文提及的一些反应中对所述基团进行保护。
作为举例，氨基或烷基氨基的适宜保护基有例如酰基，例如烷酰基如乙酰基，烷氧羰基如甲氧羰基、乙氧羰基或叔丁氧羰基，芳基甲氧羰基如苄氧羰基，或者芳酰基如苯甲酰基。上述保护基的脱保护条件必须根据保护基的选择而变化。因此，例如，酰基如烷酰基或烷氧羰基或芳酰基可以通过例如用适宜的碱、例如碱金属氢氧化物、例如氢氧化锂或氢氧化钠进行水解而除去。或者，酰基如叔丁氧羰基可以例如通过用适宜的酸如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸进行处理而除去，芳基甲氧羰基如苄氧羰基可以例如通过经催化剂如披钯炭进行氢化而除去，或者通过用路易斯酸如BF3.OEt2处理而除去。适于伯氨基的供选保护基有例如邻苯二甲酰基，其可通过用烷基胺如二甲基氨基丙胺或用肼进行处理而除去。
本发明的化合物可通过使用WO2009/118567中描述的通用合成技术进行制备，该文献的全部内容引入本文作为参考。
在一个特定方面，本发明提供了合成式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物的方法，所述方法包括：
a)使式A化合物与式B化合物反应，
Figure BDA00003066660500121
其中R1和R2各自具有任意一种上文所述的含义；
Figure BDA00003066660500122
其中R3和R4具有任意一种上文所述的含义；和
b)然后任选地和如果需要的话：
i)除去存在的任意保护基；
ii)将式I化合物转化为另一种式I化合物；和/或
iii)形成其可药用的盐或溶剂合物。
式A化合物与式B化合物之间的偶联反应可以适宜地在适宜溶剂的存在下发生。任意适宜的溶剂或溶剂混合物可用于该反应。本领域技术人员将知道如何选择适用于这些反应的溶剂或溶剂混合物。适宜溶剂的实例包括醇、乙腈、卤化溶剂等。
本领域技术人员将能够选择使用适当的反应条件以促进该反应。该反应适宜地在无水条件下和在惰性气氛如氩气或氮气的存在下进行。该反应还可以在升高的温度下、例如在80至180℃的范围内或者更适宜地在100至160℃的范围内进行适宜的时间、例如20分钟至48小时。该反应适宜地在微波加热下、例如在约140℃下进行约45分钟。
所得的式I化合物可以使用本领域熟知的技术进行分离和纯化。
本文定义的方法可以进一步包括使式I化合物进行盐交换的步骤，特别是在其中式I化合物作为不同盐形式的混合物而形成的情况下。盐交换适宜地包括将式I化合物固定于适宜的固体载体或树脂上和用适当的酸洗脱化合物以得到式I化合物的单一的盐。
式A化合物可以通过本领域已知的方法制备。适于制备式A化合物的方法的实例在以下流程1中给出。
Figure BDA00003066660500131
(a)3-氯戊烷-2，4-二酮、吡啶、EtOH，室温，4小时；(b)NCS或NBS或Br2(在HBr中)，1-3小时；(c)1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺，微波，140℃，30-45分钟；(d)
Figure BDA00003066660500132
MeCN，0-5℃，1小时。
流程1
式B化合物也可以通过本领域已知的方法制备。
药物组合物
根据本发明的另一个方面，提供了包含与可药用稀释剂或载体联合的如上文定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物的药物组合物。
本发明的组合物可以是适于口服应用的形式(例如作为片剂、锭剂、硬或软胶囊、水性或油性混悬剂、乳剂、可分散粉末或颗粒、糖浆剂或酏剂)、适于局部应用的形式(例如作为霜剂、软膏剂、凝胶剂或者水性或油性溶液剂或混悬剂)、适于吸入施用的形式(例如作为细分散的粉末或液体气雾剂)、适于吹入施用的形式(例如作为细分散的粉末)或适于胃肠道外施用的形式(例如作为用于静脉内、皮下、肌内、腹膜内或肌内给药的无菌水性或油性溶液剂或者作为用于直肠给药的栓剂)。
本发明的组合物可通过本领域熟知的常规方法、使用本领域熟知的常规药用赋形剂来获得。因此，旨在用于口服应用的组合物可以含有例如一种或多种着色剂、甜味剂、矫味剂和/或防腐剂。
本发明的化合物的用于治疗增殖性疾病的有效量是足以在温血动物、特别是人中症状性地缓解感染症状、减缓感染的发展或在有感染症状的患者中降低恶化风险的量。
与一种或多种赋形剂组合制备单一剂量形式的活性成分的量将必然地根据所治疗的宿主和具体施用途径而变化。例如，旨在口服施用于人的制剂通常含有例如0.5mg至0.5g的活性剂(更适宜地为0.5至100mg，例如1至30mg)，所述活性剂与适当和方便量的赋形剂复合，赋形剂的量可以在总组合物重量的约5％至约98％的范围变化。
用于治疗或预防目的的式I化合物的剂量大小当然将根据病症的性质和严重性、动物或患者的年龄和性别以及施用途径、根据医学中熟知的原则而变化。
在使用本发明的化合物用于治疗或预防目的时，通常施用本发明的化合物以使得接受到例如0.1mg/kg至75mg/kg体重的日剂量，如果需要的话，日剂量被分成多次剂量给予。通常，当采用胃肠道外途径时将施用较低剂量。因此，例如，对于静脉内或腹膜内施用，通常将使用例如0.1mg/kg至30mg/kg体重的剂量。类似地，对于吸入施用，将使用例如0.05mg/kg至25mg/kg体重的剂量。口服施用也可以是适宜的，特别是片剂形式。通常，单位剂量形式将含有约0.5mg至0.5g本发明的化合物。
治疗用途和应用
本发明的化合物为蛋白激酶活性的抑制剂。
因此，在另一方面，本发明提供了抑制细胞中蛋白激酶活性的方法，所述方法包括向所述细胞施用如本文所定义的式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一方面，本发明提供了在体外或在体内抑制蛋白激酶的方法，所述方法包括将细胞与有效量的如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物接触。
在另一方面，本发明提供了在需要所述抑制的人或动物个体中抑制蛋白激酶活性的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的如本文所定义的式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
适宜地，蛋白激酶选自以下激酶中的一种或多种：CDK、极光激酶(aurora kinase)、GSK和/或酪氨酸激酶。
本发明的化合物显示出对抗CDK9T1、CDK1B、CDK2A、CDK5p35、CDK6D3、CDK7H、Aurora A、Aurora B和GSK3B的特定抑制活性。
本发明的化合物适于治疗其中涉及一种或多种上文所述的蛋白激酶靶标的任意疾病或病症。
在一项实施方案中，化合物适于抑制由以上提及的蛋白激酶靶标之一所介导的增殖性紊乱。
术语“增殖性紊乱”在本文中以其广义使用，包括需要控制细胞周期的任意紊乱如癌症和与失控的细胞增殖相关的其它紊乱如皮肤病学紊乱如银屑病、一些病毒性疾病、一些心血管疾病如再狭窄和心肌病、一些CNS紊乱、自身免疫紊乱如肾小球肾炎和类风湿性关节炎、激素相关性疾病、代谢紊乱、中风、秃发、气肿、炎性疾病或感染性疾病如真菌性疾病或寄生虫性疾病如疟疾。在这些紊乱中，本发明的化合物可以如所要求的那样在预期细胞中诱导细胞凋亡或维持停滞。
优选地，式I化合物能够抑制一种或多种在细胞增殖、病毒复制、心血管紊乱、神经变性、自身免疫、代谢紊乱、中风、秃发、炎性疾病或感染性疾病中有牵涉的宿主细胞激酶。
在一项实施方案中，增殖性紊乱是癌症。癌症可以选自慢性淋巴细胞白血病(CLL)、淋巴瘤、白血病、乳癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌、黑素瘤、胰腺癌、卵巢癌、鳞状细胞癌、头颈癌、子宫内膜癌和食管癌。
优选地，增殖性紊乱是癌症，例如白血病。
在一项特定的实施方案中，本发明的化合物可用于治疗白血病，尤其是慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
如本文所定义，对抗由本发明范围内的激酶所介导的增殖性紊乱的作用可以通过在体外全细胞分析中(例如采用包括但不限于A549、A2780、HT29、Saos-2、HCT-116、HeLa、MCF-7、NCI-H460的细胞系中的任意一种)抑制细胞增殖的能力或者通过在适当的分析中显示出抑制CDK酶如CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK11或其它蛋白激酶而得以证实。这些分析、包括其操作方法在所附实施例中有更详细的描述。另外的实施方案涉及本发明的化合物或其可药用盐在制备药物中的用途，所述药物能够治疗由在病毒复制中牵涉的一种或多种宿主细胞CDK、即如上文定义的CDK1、CDK2、CDK4、CDK7、CDK8、CDK9或CDK11所介导的病毒性疾病。优选地，该药物可用于治疗病毒性疾病。
用于测定CDK活性的分析在所附实施例中有更详细的描述。采用此类酶分析，可以在本发明中测定化合物是否是抗病毒的。
优选地，该药物可用于治疗病毒性疾病如人巨细胞病毒(HCMV)、1-型单纯疱疹病毒(HSV-1)、1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)和水痘带状疱疹病毒(VZV)。
通常，这类疾病是CDK依赖性的或敏感性的。CDK依赖性疾病与一种或多种CDK酶的超出正常水平的活性相关。这类疾病通常与CDK1、CDK2、CDK4、CDK7、CDK8、CDK9和/或CDK11的异常水平的活性相关。CDK敏感性疾病是这样的疾病：其中，CDK水平的异常不是主要原因，但是是初级代谢异常的下游表现。在此类情况中，CDK1、CDK2、CDK4、CDK7、CDK8、CDK9和/或CDK11可以称为是该敏感性代谢途径的一部分，因此，这些CDK的抑制剂可在此类疾病的治疗中具有活性。
对于用于治疗病毒性疾病，本发明的药物优选能够抑制CDK2、CDK7和/或CDK9。
另一项实施方案涉及本发明的化合物或其可药用盐在制备药物中的用途，所述药物能够治疗由一种或多种CDK介导的心血管疾病。优选地，该药物可用于治疗心血管疾病。
心血管疾病可以选自缺血性心脏病(也称为心肌梗塞或心绞痛)、高血压、心力衰竭、再狭窄和心肌病。
心脏肥大的特征是mRNA和蛋白质合成的总体增加。已证实CDK9活性是心肌细胞的肥大所必需的。经由细胞周期蛋白T1的CDK9心脏特异性活化被发现引起肥大。本发明的化合物被相信抑制CDK9，因而被相信可用于预防和治疗心脏肥大。
另一项实施方案涉及本发明的化合物在制备药物中的用途，所述药物能够治疗由一种或多种GSK或CDK介导的神经变性疾病。优选地，该药物可用于治疗神经变性疾病如阿尔茨海默病。
Tau是已经牵涉在阿尔茨海默病的病因学中的GSK-3底物。在健康的神经细胞中，Tau与微管蛋白共聚成微管。但是，在阿尔茨海默病中，tau形成了大团的纤丝，这破坏了神经细胞中的微管结构，由此损害了营养物的传输以及神经元信息的传递。据信GSK3抑制剂能预防和/或逆转微管相关蛋白tau的异常高磷酸化，所述异常高磷酸化是阿尔茨海默病以及许多其它神经变性疾病如进行性核上麻痹、皮质基底节变性和皮克病(Pick’sdisease)的恒定特征。tau基因中的突变引起额颞叶痴呆(frontotemporaldementia)的遗传形式，这进一步支持了tau蛋白功能障碍与神经变性过程之间的关联。
与阿尔茨海默病有关的双股螺旋形细丝的出现是由于CDK5/p25使Tau蛋白高度磷酸化而引起的。本发明的化合物被相信抑制CDK5，因此被相信可用于预防和治疗神经变性疾病。
另一项实施方案涉及本发明的化合物或其可药用盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗由一种或多种GSK介导的代谢紊乱。优选地，该药物可用于治疗代谢紊乱。
代谢紊乱包括II型糖尿病(非胰岛素依赖性糖尿病)和糖尿病性神经病。本发明的化合物被相信抑制GSK-3，GSK-3在II型糖尿病中有牵涉。
GSK3是使糖原合酶(GS)磷酸化的数种蛋白激酶中的一种，它在骨骼肌中通过胰岛素进行的糖原合成的刺激中有牵涉。因此，GSK3对GS的作用导致后者的失活并因此抑制肌肉中葡萄糖向糖原的转化。II型糖尿病(非胰岛素依赖性糖尿病)是一种多因素疾病。高血糖症归因于肝脏、肌肉以及其它组织中的胰岛素抗性联合胰岛素分泌受损。骨骼肌是胰岛素刺激的葡萄糖摄取的主要部位，在那里其离开循环或转化成糖原。肌肉糖原沉积是葡萄糖内稳态的主要决定因素，II型糖尿病具有有缺陷的肌肉糖原贮存。有证据表明GSK3活性增加在II型糖尿病中是重要的。
另一项实施方案涉及本发明的化合物或其可药用盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗由一种或多种激酶介导的双相性精神障碍。优选地，该药物可用于治疗双相性精神障碍。
另一项实施方案涉及本发明的化合物或其可药用盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗由一种或多种GSK介导的中风。优选地，该药物可用于治疗中风。
减少神经元细胞凋亡是头创伤、中风、癫痫和运动神经元疾病中的重要治疗目标。作为神经元细胞中的细胞凋亡前因子，GSK3使该蛋白激酶成为对于设计用于治疗这些疾病的抑制性药物而言有吸引力的治疗靶标。
另一项实施方案涉及本发明的化合物或其可药用盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗由一种或多种GSK介导的秃发。优选地，该药物可用于治疗秃发。
GSK3抑制剂的异位应用(ectopic application)在治疗上可用于治疗脱发和用于在化学治疗引起秃发后恢复头发生长。
本发明的另一方面涉及治疗由一种或多种选自CDK、极光激酶、GSK或酪氨酸激酶的酶介导的病症的方法，如上文定义。
在一项优选的实施方案中，这类病症是GSK3-依赖性紊乱，所述方法包括以足以抑制GSK3的量向需要其的个体施用如上文定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
优选地，本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物以足以抑制GSK3β的量施用。
在另一项优选的实施方案中，本发明涉及治疗极光激酶依赖性紊乱的方法，所述方法包括以足以抑制极光激酶的量向需要其的个体施用如上文定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
优选地，本发明的化合物以足以抑制极光激酶A、极光激酶B或极光激酶C的量施用。
在另一项优选的实施方案中，本发明涉及治疗酪氨酸激酶依赖性紊乱的方法，所述方法包括以足以抑制酪氨酸激酶的量向需要其的个体施用如上文定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一项优选的实施方案中，本发明涉及选择性地治疗蛋白激酶依赖性紊乱的方法，所述方法包括以足以抑制所选择的蛋白激酶的量向需要其的个体施用如上文定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。优选地，所述方法包括将所述蛋白激酶与本发明的化合物接触。
优选地，本发明的化合物以足以抑制至少一种蛋白激酶如CDK、GSK、极光激酶、BCR-ABL、IKK、FLT3或MNK或其它酪氨酸激酶的量施用。
在该方面的一项优选的实施方案中，蛋白激酶是CDK。优选地，蛋白激酶是CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9和CDK11，更优选地是CDK1、CDK2、CDK5或CDK9。
处于研发中的已知CDK抑制剂遇到了许多问题，包括混杂的激酶抑制剂性质，它除了抑制多种CDK外还有力地抑制其它激酶，导致观察到毒性。处于临床前研究和后期临床前研究中的其它CDK抑制剂是泛特异性的(pan-specific)(属于寡特异性(oligo-specific)CDK2-CDK7-CDK9类别)，或者是CDK4/6特异性的。虽然已经报道了处于研发阶段的具有适度CDK9选择性(相对于CDK2和/或CDK7而言＞10倍)的化合物，但是目前在已公开的技术中目前尚未明确CDK9选择性的决定因素。
在一项特定的实施方案中，本发明的化合物可用于治疗白血病，尤其是慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
我们的研究源自以下考虑：CLL和其它肿瘤细胞中的细胞凋亡能力可通过在转录水平经由RNAPII干扰抗细胞凋亡蛋白的表达而恢复，并且应当提供CLL细胞消除的治疗边界而免于损伤未转化的静止和增殖细胞。虽然在转录的调节中已经牵涉其它CDK(包括CDK1、CDK2、CDK8和CDK11)，但是CDK7和CDK9的作用在此方面显得最重要。CDK7与CDK9之间的重要区别是如下事实：CDK7具有作为一般的CDK活化激酶(CAK)的另外作用，而CDK9显示在转录的调节中是排他性地起作用的。除调节转录起始和延伸外，CDK9还在mRNA前体剪接中起作用。
迄今为止的结果有力地表明：CDK9的抑制对于有效地逆转CLL中的细胞凋亡抵抗是必要的和充分的。在所有的牵涉在RNAPII C-末端结构域(CTD)磷酸化中的CDK中，CDK9在明显缺乏细胞周期相关作用中是唯一的。然而，关于CDK1、CDK2、CDK7和CDK9耗竭对细胞凋亡的作用的研究表明：细胞周期CDK功能的抑制可能对CLL细胞的消除没有贡献，并且可能由于对一般的未转化细胞的抗增殖作用(这可以表现为毒性)而在实际上是不期望的。
我们的研究已经使得我们能够从表现型和生物化学方面区分抑制RNAP-II CDK的化合物和主要通过抑制细胞周期CDK(CDK1、CDK2、CDK4、CDK6)或密切相关的有丝分裂激酶而起作用的那些化合物。
在本发明的一项实施方案中，式I化合物能够抑制至少一种CDK酶，优选CDK1、CDK2、CDK5和CDK9中的至少一种。
在另外的优选的实施方案中，式I化合物能够在人细胞系中显示出抗增殖作用，如标准72小时MTT细胞毒性测定中所测得的那样。优选地，式I化合物显示出低于1微摩尔的IC50值。
在本发明的另外方面，提供了治疗增殖性疾病或紊乱、病毒性疾病、心血管疾病、CNS紊乱、自身免疫疾病、代谢紊乱、中风、脱发、炎性疾病或感染性疾病的方法，所述方法包括向需要其的个体施用有效量的如上文定义的式I化合物。
本发明的化合物在制备如上文定义的药物中的用途包括直接使用所述化合物，或在该药物制备的任意阶段使用所述化合物，或在识别用于预防或治疗如上文定义的疾病或病症的其它物质的筛选程序中体外使用所述化合物。
本发明的另一方面涉及式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物或生理学上可水解的、增溶的或固定的衍生物在分析中的用途，所述分析用于识别能够治疗一种或多种如上文定义的紊乱或疾病的候选化合物。优选地，化合物可用于识别能够抑制蛋白激酶、更优选抑制CDK、极光激酶、GSK或其它酪氨酸激酶中的一种或多种的候选化合物。
在一个方面，本发明提供了用于治疗的如本文所定义的式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物或药物组合物。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗与蛋白激酶活性相关的疾病或病症的如本文所定义的式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一个方面，本发明提供了如本文所定义的式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗与蛋白激酶活性相关的疾病或病症。
在另一个方面，本发明提供了在人或动物个体中治疗增殖性紊乱的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗可接受量的如本文所定义的式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗增殖性紊乱的如本文所定义的式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
在另一个方面，本发明提供了如本文所定义的式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗增殖性紊乱。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗癌症的如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物或药物组合物。
在另一个方面，本发明提供了如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗癌症。
在另一个方面，本发明提供了在需要所述治疗的患者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的如本文所定义的化合物或其可药用的盐或溶剂合物或药物组合物。
本发明还提供了治疗人或动物体的方法，所述方法包括向需要治疗的个体施用治疗有效量的活性化合物，优选为药物组合物的形式。
施用途径
本发明的化合物或者包含所述活性化合物的药物组合物可通过任意方便的施用途径、无论是全身/外周还是局部(即在预期的作用部位)的施用途径施用于个体。
施用途径包括但不限于口服(例如通过摄入)；经颊；舌下；透皮(包括例如通过贴剂、硬膏剂等)；透粘膜(包括例如通过贴剂、硬膏剂等)；鼻内(例如通过鼻喷雾)；眼(例如通过滴眼剂)；肺(例如通过吸入或吹入治疗，采用例如经气雾剂，例如经口或鼻)；直肠(例如通过栓剂或灌肠剂)；阴道(例如通过阴道栓)；胃肠道外，例如通过注射，包括皮下、皮内、肌内、静脉内、动脉内、心内、鞘内、脊髓内、囊内、囊下、眶内、腹膜内、气管内、表皮下、关节内、蛛网膜下和胸骨内注射；通过植入贮库制剂或贮库，例如经皮下或肌内植入。
组合治疗
本发明的化合物可作为单一疗法单独施用，或者可与一种或多种另外的治疗剂组合使用。一种或多种另外的治疗剂的选择当然将根据待治疗的疾病或病症及其严重性而变化。
使用组合疗法来治疗增殖性疾病如癌症是常见的。因此，上文定义的抗增殖治疗可作为单独疗法应用，或者除本发明的化合物之外可涉及常规的手术或放射疗法或化学疗法。这类化学疗法可包括以下抗肿瘤剂类型中的一种或多种：
(i)如医学肿瘤学中使用的其它抗增殖/抗肿瘤药物及其组合，例如烷化剂(例如顺铂、奥沙利铂、卡铂、环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、替莫唑胺和亚硝基脲)；抗代谢药(例如吉西他滨和抗叶酸剂如氟嘧啶如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、氟达拉滨和羟基脲)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环抗生素如亚德利亚霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、依达比星、丝裂霉素C、放线菌素D和光神霉素)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱，如长春花新碱、长春花碱、长春地辛和长春瑞滨，和紫杉烷(taxoids)如紫杉醇(taxol)和泰素帝，以及polokinase抑制剂)；和拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替康和喜树碱)；
(ii)细胞生长抑制剂，例如抗雌激素药(例如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和iodoxyfene)、抗雄激素药(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)和依西美坦)和5α-还原酶抑制剂如非那雄胺；
(iii)抗侵入剂[例如c-Src激酶家族抑制剂如4-(6-氯-2，3-亚甲二氧基苯胺基)-7-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]-5-四氢吡喃-4-基氧基喹唑啉(AZD0530；国际专利申请WO01/94341)、N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-{6-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲基嘧啶-4-基氨基}噻唑-5-甲酰胺(达沙替尼，BMS-354825；J.Med.Chem.，2004，47，6658-6661)和波舒替尼(SKI-606)，和金属蛋白酶抑制剂如马立马司他、尿激酶纤溶酶原激活物受体功能的抑制剂或类肝素酶(Heparanase)抗体]；
(iv)生长因子功能的抑制剂：例如，此类抑制剂包括生长因子抗体和生长因子受体抗体(例如抗-erbB2抗体曲妥单抗[HerceptinTM]、抗-EGFR抗体帕尼单抗、抗-erbB1抗体西妥昔单抗[Erbitux，C225]和Stern等人，Critical reviews in oncology/haematology，2005，第54卷，第11-29页公开的任意生长因子或生长因子受体抗体)；此类抑制剂还包括酪氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族的抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代基丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，ZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6，7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(厄洛替尼，OSI774)和6-丙烯酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代基丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI1033)、erbB2酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼)；肝细胞生长因子家族的抑制剂；胰岛素生长因子家族的抑制剂；血小板衍生生长因子家族的抑制剂如伊马替尼和/或尼洛替尼(AMN107)；丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂(例如Ras/Raf信号转导抑制剂，如法尼基转移酶抑制剂，例如索拉非尼(BAY 43-9006)、替匹法尼(R115777)和洛那法尼(lonafarnib)(SCH66336))、经由MEK和/或AKT激酶的细胞信号转导的抑制剂、c-kit抑制剂、abl激酶抑制剂、PI3激酶抑制剂、Plt3激酶抑制剂、CSF-1R激酶抑制剂、IGF受体(胰岛素样生长因子)激酶抑制剂；极光激酶抑制剂(例如AZD1152、PH739358、VX-680、MLN8054、R763、MP235、MP529、VX-528和AX39459)以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂如CDK2和/或CDK4抑制剂；
(v)抗血管生成剂，例如抑制血管内皮生长因子的作用的那些[例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(AvastinTM)和例如VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂如凡德他尼(ZD6474)、伐他拉尼(PTK787)、舒尼替尼(SU11248)、阿昔替尼(AG-013736)、帕唑帕尼(GW786034)和4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹唑啉(AZD2171；WO00/47212中的实施例240)、诸如国际专利申请WO97/22596、WO97/30035、WO97/32856和WO98/13354中公开的那些的化合物以及通过其它机制起作用的化合物(例如利诺胺、整联蛋白αvβ3功能的抑制剂和血管抑素(angiostatin))]；
(vi)血管破坏剂，例如考布他汀A4和国际专利申请WO99/02166、WO00/40529、WO00/41669、WO01/92224、WO02/04434和WO02/08213中公开的化合物；
(vii)内皮素受体拮抗剂，例如齐泊腾坦(ZD4054)或阿曲生坦；
(viii)反义疗法，例如定向于上述靶标的那些，例如抗ras反义化合物ISIS2503；
(ix)基因治疗方法，包括例如置换异常基因如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的方法，GDEPT方法(基因导向性酶前药疗法)如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些，以及增加患者对化学治疗或放射治疗的耐受性的方法如多药抗性基因疗法；和
(x)免疫方法，包括例如增加患者肿瘤细胞的免疫原性的离体和体内方法，例如用细胞因子如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子进行转染，降低T细胞无反应性的方法，使用转染的免疫细胞如细胞因子转染的树突细胞的方法，使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法，和使用抗独特型抗体的方法。
所述联合/组合治疗可以通过同时、依次或分别给予治疗的个体组分来获得。该组合产品使用上文所述的剂量范围内的本发明的化合物和在其被批准的剂量范围内的其它药物活性剂。
根据本发明的一个特定方面，提供了适用于治疗如本文所定义的其中涉及蛋白激酶活性的疾病或病症(例如癌症)的组合，其包含如上文定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物以及包含其它治疗剂(例如抗肿瘤剂)。
根据本发明的该方面，提供了适用于治疗癌症(例如涉及实体瘤的癌症)的组合，其包含如上文定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物以及包含上文(i)-(ix)中列出的抗肿瘤剂中的任意一种。
在本发明的另一方面，提供了与抗肿瘤剂组合的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物，所述抗肿瘤剂选自上文(i)-(ix)中列出的抗肿瘤剂。
在本文中，当使用术语“组合”时，其理解为指同时、分别或依次施用。在本发明的一个方面，“组合”指同时施用。在本发明的另一方面，“组合”指分别施用。在本发明的另一方面，“组合”指依次施用。当施用是依次或分别施用时，施用第二种组分的延迟不应当损失组合的有益作用。
根据本发明的另一方面，提供了药物组合物，其包含本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物和一种或多种另外的治疗剂(例如抗肿瘤剂，其选自上文(i)-(ix)中列出的抗肿瘤剂)以及可药用稀释剂或载体。
根据本发明的一个特定方面，提供了适用于治疗癌症、特别是白血病如慢性淋巴细胞白血病(CLL)的组合，其包含如上文所定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物以及包含其它治疗剂(例如抗肿瘤剂)。
根据本发明的该方面，提供了适用于治疗癌症、特别是白血病如CLL的组合，其包含如上文所定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物以及包含上文(i)-(ix)中所列的抗肿瘤剂中的任一种。
在本发明的另一方面，提供了用于与抗肿瘤剂组合来治疗癌症、特别是白血病如CLL的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物，其中所述抗肿瘤剂选自上文(i)-(ix)中所列的抗肿瘤剂。
根据本发明的另一方面，提供了适用于治疗癌症、特别是白血病如CLL的组合，其包含如上文所定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物以及包含氟达拉滨或其可药用的盐或溶剂合物。
根据本发明的另一方面，提供了适用于治疗癌症、特别是白血病如CLL的组合，其包含如上文所定义的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物以及包含氟达拉滨或其可药用的盐或溶剂合物。
根据本发明的另一方面，提供了用于与氟达拉滨或其可药用的盐或溶剂合物组合来治疗癌症、特别是白血病如CLL的本发明的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
附图说明
图1(A)-显示了在48小时细胞毒性测定中氟达拉滨：CDKI-73的不同摩尔比对原代CLL细胞的作用。
图1(B)-显示了揭示所观察到的协同作用的潜在机制的基因表达图。
图1(C)-显示了所述组合在促存活、表达CD40L的共培养物条件下的作用。
图1(D)-显示了在各种药物条件下、在存在或不存在表达CD40L的小鼠成纤维细胞共培养物的情况下MCL1的相对表达(使用QRT-PCR评价)。
具体实施方式
实施例
化合物的合成
总述
使用Bruker400UltrashieldTM波谱仪分别在400MHz和100MHz得到1H-NMR和13C-NMR波谱。使用Bruker TOPSPIN2.1程序对它们进行分析。化学位移以相对于内标四甲基硅烷的百万分数报道。偶合常数(J)被引用到最近的0.1Hz。使用以下缩写：s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；qu，五重峰；m，多重峰，和br，宽峰。高分辨质谱使用Waters 2795单四级质谱仪/micromass LCT平台获得。TLC(薄层色谱法)使用铺有硅胶G60的氧化铝板进行。将显像的板风干，在紫外灯(254/365nm)下分析。使用硅胶(EM Kieselgel60，0.040-0.063mm，Merck)或ISOLUTE预填充柱进行快速色谱法。熔点(mp)使用电热熔点装置测定，未进行校正。
实施例1.3-(5-氟-4-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰 胺(CDKI-73)的制备
向(Z)-3-(二甲基氨基)-1-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(其可以使用以前在S.Wang等人，J Med Chem.2004，47，1662-1675中所述的方法制备)(5mmol)在MeOH中的处于冰浴中的充分搅拌的溶液中加入Selecfluor(5mmol)，使反应继续进行1小时。反应完成后，将混合物浓缩，经柱色谱法使用EtOAc纯化，得到(Z)-3-(二甲基氨基)-2-氟-1-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)丙-2-烯-1-酮。黄色固体(30％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ：2.40(s，3H，CH3)，2.83(d，3H，J＝4.8Hz，CH3)，3.04(d，6H，J＝1.6Hz，2×CH3)，6.88(d，1H，J＝30.4Hz，CH)，8.04(d，1H，J＝4.4Hz，NH)。HR-MS(m/z)：C10H14FN3OS，计算值243.0842；实测值244.0849[M+H]+。
将(Z)-3-(二甲基氨基)-2-氟-1-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(1mmol)和3-胍基苯磺酰胺(2mmol)在2.5mL2-甲氧基乙醇中的混合物在微波照射下在140℃加热45分钟。将混合物经柱色谱法使用EtOAc/PE或EtOAc/MeOH纯化，得到标题化合物，为黄色固体。
mp268-270℃。分析型RP-HPLC：tR11.45min，纯度99％。1H-NMR(DMSO-d6)：δ2.48(s，3H，CH3)，2.88(d，3H，J＝4.8Hz，CH3)，7.29(s，2H，NH2)，7.40(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.47(t，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.89(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，8.13(br q，1H，J＝4.8Hz，NH)，8.25(s，1H，Ph-H)，8.47(d，1H，J＝3.2Hz，Py-H)，9.83(s，1H，NH).13C-NMR(DMSO-d6)：δ19.43(d，J＝5Hz)，31.33，109.97(d，J＝8Hz)，115.81，118.78，121.89，129.51，141.46，144.94，145.97(d，J＝25Hz)，147.63(d，J＝12Hz)，147.94(d，J＝248Hz)，155.66，156.04，171.34.HR-MS(ESI+)：m/z[M+H]+：C15H16FN6O2S2，计算值395.0760，实测值395.0641。
实施例2.3-(4-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)-5-氟嘧啶-2-基氨基)苯磺酰胺的制 备
向N′-(5-(3-(二甲基氨基)丙烯酰基)-4-甲基噻唑-2-基)-N，N-二甲基甲脒(甲脒＝formimid amide)(S.Wang等人J Med Chem.2004，47，1662-1675)(5mmol)在MeOH中的处于冰浴中的溶液中加入Selectfluor(5mmol)，使反应持续进行60分钟。反应完成后，将混合物浓缩，经柱色谱法使用EtOAc纯化，得到(5-((Z)-3-(二甲基氨基)-2-氟丙烯酰基)-4-甲基噻唑-2-基)-N，N-二甲基甲脒(甲脒＝formimidamide)。黄色固体(22％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ：2.41(s，3H，CH3)，2.98(s，3H，CH3)，3.06(d，6H，J＝1.6Hz，2×CH3)，3.18(s，3H，CH3)，6.95(d，1H，J＝29.6Hz，CH)，8.38(s，1H，NH)。HR-MS(m/z)：C12H17FN4OS，计算值284.1107；实测值285.1206[M+H]+。
将(5-((Z)-3-(二甲基氨基)-2-氟丙烯酰基)-4-甲基噻唑-2-基)-N，N-二甲基甲脒(甲脒＝formimidamide)(1mmol)和3-胍基苯磺酰胺(2mmol)在2.5mL2-甲氧基乙醇中的混合物在微波照射下在140℃加热45分钟。将混合物经柱色谱法使用EtOAc/PE或EtOAc/MeOH纯化，得到标题化合物，为黄色固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ：2.48(d，3H，J＝1.6Hz，CH3)，7.30(s，2H，NH2)，7.40(d，1H，J＝7.6Hz，Ph-H)，7.47(t，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.60(s，2H，NH2)，7.93(d，1H，J＝8.4Hz，Ph-H)，8.19(s，1H，Ph-H)，8.46(d，1H，J＝3.6Hz，Py-H)，9.81(s，1H，NH)。HR-MS(m/z)：C14H13FN6O2S2，计算值380.0525；实测值381.0475[M+H]+。
实施例3.3-(5-氯-4-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰 胺的制备
向(E)-3-(二甲基氨基)-1-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(2mmol)在50ml甲醇中的充分搅拌的溶液中加入N-氯琥珀酰亚胺(2.5mmol)。将反应混合物搅拌30分钟。将混合物蒸发至干，将残余物经柱色谱法使用EtoAc纯化，得到(Z)-2-氯-3-(二甲基氨基)-1-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)丙-2-烯-1-酮，为淡黄色固体(43％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ：2.37(s，3H，CH3)，2.98(s，3H，CH3)，3.25(s，6H，2×CH3)，6.43(s，1H，NH)，7.42(s，1H，CH)。HR-MS(m/z)：C10H14ClN3OS，计算值259.0546；实测值260.0541[M+H]+。
将以上化合物(1mmol)和3-胍基苯磺酰胺(2mmol)在2.5mL2-甲氧基乙醇中的混合物在微波照射下在140℃加热30分钟。将混合物经柱色谱法使用EtOAc纯化，得到3-(5-氯-4-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰胺，为黄色固体。1H-NMR(MeOH-d6)δ：2.44(s，3H，CH3)，2.99(s，3H，CH3)，7.46(t，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.54(m，1H，Ph-H)，7.84(m，1H，Ph-H)，8.41(t，1H，J＝1.2Hz，Ph-H)，8.42(s，1H，Py-H)。HR-MS(m/z)：C15H15ClN6O2S2，计算值410.0386；实测值411.0530[M+H]+。
比较实施例-3-(5-氰基-4-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基) 苯磺酰胺(对比物)的制备
如国际专利公开号WO2009/118567(化合物1.9)中所述制备了3-(5-氰基-4-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰胺，在以下生物学部分中将其用作对比物。
实施例5-生物学活性
B.1.激酶分析
采用Millipore KinaseProfiler服务、通过放射性分析测定了CDK和其它激酶的抑制。由10-点剂量-响应曲线计算了半数最大抑制(IC50)值，由IC50值和所讨论激酶的适当的Km(ATP)值计算了表观抑制常数(Ki)。
B.2.MTT增殖分析
采用以前在S.Wang等人，J Med Chem.2004，47，1662-1675中描述的方法对来自以上实施例的化合物进行标准细胞增殖分析。数据分析使用了程序Deltasoft3TM和Microsoft Excel以确定GI50值(50％抑制细胞生长的受试化合物浓度)。
B.3.离体CLL分析
患者细胞和临床细节。在签署知情同意书的情况下从CLL患者和年龄相匹配的正常对照者获取外周血样。CLL通过临床标准以及细胞形态学和在淋巴细胞中CD19和CD5的共表达和同时呈现轻链重排的限制来确定。
原代CLL细胞培养条件。将新分离的外周血淋巴细胞(1x106/ml)在补充有100单位/ml青霉素、100μg/ml链霉素、10％胎牛血清和5ng/ml IL-4的RPMI培养基(Invitrogen，Paisley，UK)中进行培养。将正常B-细胞采用CD3+ Dyanbeads通过阴性选择进行纯化，将正常T-细胞采用CD19+Dynabeads(Invitrogen，Paisley，UK)通过阴性选择进行纯化；通过流式细胞仪测定纯度，在随后的实验中仅使用具有＞95％靶细胞的样品。将淋巴细胞在37℃、在湿润的5％二氧化碳气氛中、在化合物(1x10-7-1x10-5M)的存在下温育一直到48小时。另外，建立对照培养物，其中没有向正常淋巴细胞和白血病淋巴细胞中添加药物。随后通过离心收集细胞，通过流式细胞仪使用下文所述的方法对其进行分析。实验一式两份或一式三份进行。
细胞凋亡的测定。收获细胞，将其用CD19-别藻蓝蛋白(APC)(Caltag，Buckingham，UK)进行标记，然后混悬于200μl结合缓冲液中，所述缓冲液含有4μl标记了异硫氰酸荧光素(FITC)的Annexin V(BenderMedsystems，Vienna，奥地利)。在CD19+CLL细胞中使用Accuri C6流式细胞仪(Becton Dickinson，CA，USA)对细胞凋亡进行定量。获得至少10,000次事件，随后用FlowJo7.6软件(Tree Star Inc.，OR，USA)分析数据。从剂量响应曲线得到了LD50值(杀死50％细胞所需的药物浓度)。
C.药物动力学测定
对于PK测定，将重25-30g的雄性成年CD1小鼠(Charles River)分为重量匹配的组，每组3只。抓住小鼠的颈背部，通过直接进入胃中的金属管饲口服给药。给药后立即将小鼠放回它们的笼中，笼子是有锯屑垫层并可获得食物和水的塑料箱笼。在0时和长达8小时的间隔，采用1mL注射器和25号针通过心脏穿刺从处于麻醉下的小鼠收集血样。将收集的血液以7000xG离心2分钟，抽吸出血浆，于-20℃冷冻直至进行分析。使用LC-MS/MS方法进行定量化合物水平分析。采用非房室分析PK Solutions2.0获得药物动力学数据。通过从口服对比胃肠道外给药获得剂量标准化的AUC值比例，计算出了口服生物利用度(％F)。
结果
实施例化合物的生物学活性概括在表1中。
表1
Figure BDA00003066660500311
表2.实施例1的化合物与对比化合物(WO/2009/118567A2中的化合物1.9)相比的生物学性质和药学性质
实施例6-实施例1的化合物(CDKI-73)和氟达拉滨的协同组合
方法
细胞分离和培养
根据从South East Wales Research Ethics Committee得到的伦理批准(02/4806)从CLL患者获得外周血样。使用Ficoll-Hypaque(Sigma，Poole，UK)分离淋巴细胞，并收集自体血浆用于一些实验。将分离的淋巴细胞在补充有10％胎牛血清(FBS)、青霉素(50U/ml)、链霉素(50μg/ml)和重组人IL-4(R and D Systems，Abingdon，UK)(5ng/ml)的RPMI培养基中维持。使用小鼠胚胎成纤维细胞L-细胞(未转染的L-细胞(NTL)或表达CD40配体的L-细胞(CD40L))作为滋养层[Walsby等人(Oncotarget3，525-34(2012)]。CDK9抑制剂和氟达拉滨之间的协同的测定
根据基本上如Walsby等人(Oncotarget3，525-34(2012))所述的方法，将CDKI-73与氟达拉滨以经实验确定的固定摩尔比100∶1(氟达拉滨∶CDKI-73＝10μM∶0.1μM)组合。将CLL细胞用单独的CDKI-73和氟达拉滨及二者的组合进行处理，以确定这两种物质之间是否存在协同相互作用。根据Chou and Talalay方法(Chou等人，Adv Enzyme Regul 22，27-55(1984))计算了协同作用。
实时逆转录-PCR
未经处理的细胞和采用Walsby等人(Oncotarget3，525-34(2012))所述的方法用CDKI-73、氟达拉滨或它们的组合(氟达拉滨∶CDKI-73，100∶1)处理4小时的细胞。
微点阵方法
样品制备和微点阵方法的详细方案可从Affymetrix获得(http://www.affymetrix.com)。简言之，从用0.1μM CDKI-73、10μM氟达拉滨或这两种药物的组合处理了4小时的CLL细胞提取总RNA。采用T7-(dT)24引物(Genset Corp，San Diego，CA，USA)由5μg总RNA合成了第一链互补DNA(cDNA)，采用Superscript双链cDNA合成试剂盒(Invitrogen LifeTechnologies，San Diego，CA，USA)进行了逆转录。在第二链合成后，采用Bioarray试剂盒(Enzo Diagnostics，纽约，NY，USA)使所得cDNA进行体外转录反应，得到生物素化的cRNA。接着，将其切成片段，并杂交至Affymetrix U133 2.0基因芯片。在杂交后，将各微点阵洗涤，染色，用氩离子共聚焦激光(激发波长488nm，检测波长570nm)进行扫描。
统计分析
对于成对和不成对的观察结果，采用Student’s t检验确定了实验条件之间的差异显著性。为了评价药物之间的相互作用，采用CalcuSyn软件(CalcuSyn；Biosoft International，Ferguson，MO)进行了中效方法(medianeffect method)。对于两种药物的组合，采用经实验确定的固定浓度比计算了组合指数。组合指数值＜1.0表明存在协同相互作用。采用PartekGenomics Suite(Partek Inc.Saint Louis，USA)处理了Affymetrix基因表达数据。
结果
附图说明
图1.CDKI-73与氟达拉滨具有协同作用，甚至对促存活(pro-survival)CD40L共培养物具有协同作用
图1(A)-显示了在48小时细胞毒性测定中氟达拉滨∶CDKI-73的不同摩尔比对原代CLL细胞的作用。组合比例是以每种药物的LD50值和氟达拉滨在体内的最大耐受剂量为基础的。比例100∶1被证明在所有测试样品中显示出最强的协同作用。
图1(B)-显示了揭示所观察到的协同作用的潜在机制的基因表达图。CDKI-73抑制MCL1、BCL2、XIAP及CCND1和D2的转录。相反，氟达拉滨诱导MCL1、BCL2和XIAP转录，提供了耐药性(通常在用氟达拉滨再次治疗后发生)的原理。重要的是，CDKI-73和氟达拉滨的组合显示出显著抑制MCL1、BCL2、XIAP及CCND1和D2。
图1(C)-显示了所述组合在促存活、表达CD40L的共培养物条件下的作用。已知这些条件可引起显著的对氟达拉滨的耐药性，但是当与CDKI-73组合使用时协同作用被保持。
图1(D)-显示了在各种药物条件下、在存在或不存在表达CD40L的小鼠成纤维细胞共培养物的情况下MCL1的相对表达(使用QRT-PCR评价)。与基因表达图数据一致，在所有条件下，CDKI-73在单独和与氟达拉滨组合时均抑制MCL1。相反，氟达拉滨诱导MCL1，这在共培养条件下被保持。
CDKI-73与氟达拉滨协同作用
基于氟达拉滨的治疗选择目前是没有显著共存病的CLL患者的标准护理。在该实验中，评价了CDKI-73与氟达拉滨组合的体外作用。在该研究中所用的固定摩尔比是经实验确定的。测试比例受到氟达拉滨的最大临床可达剂量和各药物的相对效力的限制。采用固定摩尔比100∶1(氟达拉滨∶CDKI-73)获得了最佳的协同相互作用(图1A)。所有测试样品(n＝10)均显示出协同作用，中位组合指数为0.71。为了了解所观察到的协同作用的基础分子机制，对用10μM氟达拉滨、0.1μM CDKI-73和这两种药物的组合(100∶1)处理的CLL细胞制作了基因表达图。当与未经处理的对照相比，在所有药物处理条件下观察到基因表达变化。图1B显示了在已知对RNA聚合酶II抑制敏感的基因中的相对表达变化。作为单独药物的CDKI-73向下调节MCL1、BCL2、XIAP及CCND1和CCND2。相反，氟达拉滨诱导MCL1表达，但是CDKI-73和氟达拉滨的组合逆转了该诱导。显然，其它分子机制也可有助于在这些药物之间观察到的协同作用，但是MCL1、BCL2、XIAP及CCND1和CCND2的抑制显示可能是主要因素。
在促存活共培养物条件下CDKI-73保持与氟达拉滨的协同作用
之前已经证明：原代CLL细胞与表达CD40L的小鼠胚胎成纤维细胞的共培养物完全消除了氟达拉滨的细胞毒性作用(Walsby等人，Oncotarget3，525-34(2012))。在该实验中，我们研究了添加CDKI-73是否可逆转在这些条件下观察到的对氟达拉滨的耐药性。在这些促存活培养物条件下，尽管组合指数增加(中位值＝0.92)，但是8/10的测试样品显示出细胞毒性协同作用，其它两者显示出相加作用(图1C)。对MCL1转录在这些条件下的变化的分析证实：在未经处理的CLL细胞和接触氟达拉滨的细胞中，共培养显著诱导了MCL1。相反，CDKI-73作为单独药物和与氟达拉滨组合时均显著抑制了MCL1转录(图1D)。

Claims (17)

1.下文所示的式I化合物或其可药用的盐或溶剂合物：
其中：
R1是NH2或NHMe；
R2是卤素；且
R3或R4之一是氢且另一个选自-SO2NH2、-SO2NHMe、-SO2NMe2、SO2NHEt或SO2NEt2。
2.根据权利要求1的化合物，其中R1是NHMe。
3.根据权利要求1或权利要求2的化合物，其中R2是氟或氯。
4.根据前述权利要求任一项的化合物，其中R3或R4之一是氢且另一个是-SO2NH2。
5.根据权利要求4的化合物，其中R3是氢且R4选自-SO2NH2、-SO2NHMe或-SO2NMe2。
6.根据权利要求5的化合物，其中R3是氢且R4是-SO2NH2。
7.根据权利要求1的化合物或其可药用的盐或溶剂合物，其中所述化合物选自以下化合物中的任意一个：
3-(5-氟-4-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰胺；
3-(5-氟-4-(4-甲基-2-氨基噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰胺；
3-(5-氯-4-(4-甲基-2-(甲基氨基)噻唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯磺酰胺。
8.药物组合物，包含与可药用稀释剂或载体混合的权利要求1-7任一项的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
9.用于治疗的权利要求1-7任一项的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
10.用于治疗增殖性紊乱如癌症的1-7任一项的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
11.根据权利要求10的化合物，其中所述癌症是白血病如慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
12.在需要该治疗的患者中治疗增殖性紊乱的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的权利要求1-7任一项的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。
13.权利要求11的方法，其中增殖性病症为癌症。
14.根据权利要求13的方法，其中所述癌症是白血病如慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
15.在体外或体内抑制蛋白激酶的方法，所述方法包括将细胞与有效量的权利要求1-7任一项的化合物或其可药用的盐或溶剂合物接触。
16.用于治疗白血病(如CLL)的根据权利要求1-7任一项的化合物或其可药用的盐或溶剂合物，其中所述化合物与氟达拉滨或其可药用的盐或溶剂合物组合施用。
17.合成权利要求1的式I化合物的方法，所述方法包括：
a)使式A化合物与式B化合物反应，
Figure FDA00003066660400021
其中R1和R2各自具有任意一种上文所述的含义；
其中R3和R4具有任意一种上文所述的含义；和
b)然后任选地和如果需要的话：
i)除去存在的任意保护基；
ii)将式I化合物转化为另一种式I化合物；和/或
iii)形成其可药用的盐或溶剂合物。
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