CN103361333B - 一种菠萝蛋白酶浸提液的制备方法及其所用的稳定保护剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种菠萝蛋白酶浸提液的制备方法及所用的稳定保护剂。该制备方法包括：在原料中加入水和菠萝蛋白酶活性稳定保护剂，混合，破碎，压榨取汁液，将所得汁液的pH值调整为3.0～6.5，4～30℃持续的时间为5～40分钟，过滤，即得菠萝蛋白酶浸提液。该制备方法能够充分发挥菠萝蛋白酶活性稳定保护剂的作用，减少在后续的分离提纯操作中菠萝蛋白酶的失活，保持菠萝蛋白酶的活性稳定，有效提高浸提液中菠萝蛋白酶的酶活回收比率。本发明所述的菠萝蛋白酶活性稳定保护剂能够有效保护菠萝蛋白酶的活性，使菠萝蛋白酶浸提液中的菠萝蛋白酶的酶活回收比率大大增强。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种菠萝蛋白酶浸提液的制备方法及其所用的菠萝蛋白酶活性稳定保护剂。
背景技术
菠萝蛋白酶是一种活性较好的蛋白水解酶，用途非常广泛。菠萝蛋白酶可由菠萝果，菠萝果芯、菠萝皮和菠萝茎等部位提取。菠萝是一种营养价值很高的热带水果，目前菠萝主要的加工产品为菠萝罐头及果汁，加工企业产生的大量皮渣，除部分用作肥料或饲料，大部分没有进行深加工利用和综合利用。利用菠萝加工废弃物提取菠萝蛋白酶，不仅可充分利用资源，还可减少菠萝加工企业废弃物对环境的污染。目前，菠萝蛋白酶的生产方法主要有高岭土吸附法、单宁沉淀法和超滤有机溶剂提取法。但是不论采用何种菠萝蛋白酶生产工艺，首先均需将原料中的菠萝蛋白酶通过浸提进入液相，然后再对浸提液进行加工，最后获得菠萝蛋白酶产品，因此浸提过程工艺条件的控制对菠萝蛋白酶产品的收率和质量影响较大。目前，菠萝蛋白酶生产中较少在菠萝蛋白酶浸提工序考虑如何保持和稳定菠萝蛋白酶的酶活性。
发明内容
本发明要解决的技术问题就是针对现有菠萝蛋白酶浸提液的制备方法所得产物中菠萝蛋白酶的酶活回收比率较低的技术问题，提供一种菠萝蛋白酶浸提液的制备方法以及菠萝蛋白酶活性稳定保护剂。
本发明所述菠萝蛋白酶浸提液的制备方法能够有效保护菠萝蛋白酶的活性，使浸提液中菠萝蛋白酶的活性大大增强。结合本发明所述菠萝蛋白酶活性稳定保护剂的菠萝蛋白酶浸提液制备方法能够有效减少在后续分离提纯操作中菠萝蛋白酶的失活，有效保持菠萝蛋白酶活性稳定，并大幅提高了浸提液中菠萝蛋白酶的酶活回收比率。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一为：一种菠萝蛋白酶浸提液的制备方法，其中所述制备方法包括以下步骤：在原料中加入水和菠萝蛋白酶活性稳定保护剂，将原料混合，破碎，压榨取汁液，将所得汁液的pH值调整为3.0～6.5，保温温度为4～30℃，持续的时间为5～40分钟，过滤即得；所述菠萝蛋白酶活性稳定保护剂包括以下组分：异麦芽酮糖醇或甘露醇0.5%～10%，聚乙二醇200～1500 0.5%～10%，可溶性淀粉、羧甲基纤维素钠或聚乙烯吡咯烷酮或0.1%～10%，氯化钙或氯化钠0.1%～8%，所述百分比均为质量百分比，余量为水，该菠萝蛋白酶活性稳定保护剂的质量百分比添加量为原料湿重的0.5%～10%，所述原料包括菠萝皮渣、菠萝芯和/或菠萝茎中的一种或几种。
其中所述的原料为本领域常规原料。所述原料较佳地为菠萝加工废弃物。所述菠萝加工废弃物较佳地包括菠萝加工过程产生的皮渣、菠萝芯和/或菠萝茎中的一种或几种，最佳地为菠萝加工产生的菠萝皮渣和/或菠萝茎。
其中所述的水较佳地为软化水或去离子水，最佳地为去离子水。所述水的加入量较佳地为原料湿重的0～10倍，最佳地为原料湿重的8倍。
其中所述破碎的方法为本领域常规破碎方法。所述破碎方法较佳地为利用破碎机对原料混合物进行破碎。其中所述压榨取汁液的方法为本领域常规的压榨取汁液的方法，较佳地为利用压榨机进行压榨取汁。
其中所述的过滤为本领域常规过滤技术。所述过滤的方法较佳地包括：离心或滤布过滤。本发明所述过滤的方法更佳地为滤布过滤，所述滤布较佳地为40目～300目的滤布，最佳地为200目滤布。
所得汁液的pH值较佳地为3.6～6.5，保温的温度更佳地为20℃～30℃，最佳地为20℃，所述持续的时间较佳地为：25～35分钟，最佳地为25分钟。
其中所述菠萝蛋白酶活性稳定保护剂的质量百分比添加量较佳地为原料湿重的0～10%，更佳地为原料湿重的2.5～10%，最佳地为3.5%。
针对不同的原料，所得汁液的pH值也相应进行调整，当原料为菠萝皮渣时较佳地为pH3.5～4.5，最佳地为pH4.0，当原料为菠萝芯时较佳地为pH5.5～6.5，最佳地为pH6.0，当原料为菠萝茎时较佳地为pH4.5～5.5，最佳地为pH4.9。
较佳地，本发明还包括将所得菠萝蛋白酶浸提液进行精制、干燥制备菠萝蛋白酶纯品的步骤。其中所述精制为本领域常规精制步骤，所述精制步骤包括：添加重金属螯合剂，利用离心机进行离心分离，取上清液，达到精制菠萝蛋白酶的目的。
其中所述干燥的方法为本领域常规的干燥方法，所述干燥的方法较佳地包括：喷雾干燥，热泵干燥或者真空冷冻干燥技术。本发明所述干燥的方法更佳地为真空冷冻干燥技术，通过将物料中的水分变成冰时直接升华被排走，减少了烘干过程中菠萝蛋白酶质量的损失和酶活力的降低，通过上述精制和干燥步骤即得菠萝蛋白酶纯品。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之二为：一种菠萝蛋白酶活性稳定保护剂，所述菠萝蛋白酶活性稳定保护剂包括以下组分：异麦芽酮糖醇或甘露醇0.5%～10%，聚乙二醇200～1500 0.5%～10%，可溶性淀粉、羧甲基纤维素钠或聚乙烯吡咯烷酮中或0.1%～10%，氯化钙或氯化钠0.1%～8%，其余为水，所述百分比均为质量百分比。
其中所述菠萝蛋白酶活性稳定保护剂包括以下组分：异麦芽酮糖醇或甘露醇的含量更佳地为3%～3.5%，最佳地为3.3%，聚乙二醇200～1500的含量更佳地为1%～1.5%，最佳地为1.2%，可溶性淀粉、羧甲基纤维素钠或聚乙烯吡咯烷酮的含量更佳地为2%～3.5%，最佳地为2.5%，氯化钙或氯化钠的含量更佳地为1.5%～2.5%，最佳地为2%，其余为水，所述百分比均为质量百分比。
其中所述的水更佳地为去离子水或软化水，最佳地为去离子水。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之三为：一种如上所述菠萝蛋白酶浸提液的制备方法所得的菠萝蛋白酶浸提液。
本发明所得菠萝蛋白酶浸提液中所含的菠萝蛋白酶活性高，在后续的分离提纯操作中，该菠萝蛋白酶浸提液中所含的菠萝蛋白酶不易失活，菠萝蛋白酶活性回收比率高。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之四为：如上所述的菠萝蛋白酶活性稳定保护剂在制备菠萝蛋白酶中的用途。
本发明所述菠萝蛋白酶活性稳定保护剂可以广泛应用于菠萝蛋白酶的制备工艺中。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明所述菠萝蛋白酶浸提液的制备方法在菠萝蛋白酶生产的浸提步骤中，通过控制浸提的温度、持续的时间和浸提的pH值，能够充分发挥菠萝蛋白酶的酶活性稳定保护剂的作用，有效减少在菠萝蛋白酶在后续分离提纯过程中导致该酶的酶活性降低，有效保持了菠萝蛋白酶的酶活性稳定，并提高了浸提液中菠萝蛋白酶的酶活回收比率。本发明所述的菠萝蛋白酶活性稳定保护剂能够有效保护菠萝蛋白酶提取物中菠萝蛋白酶的活性，使提取物中菠萝蛋白酶的活性大大增强。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1
菠萝加工废弃物皮渣，加入原料湿重1倍的去离子水，添加原料湿重1%的菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇3.3%，聚乙二醇600 1.2%，可溶性淀粉2.5%和氯化钙2%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在15℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH4.0，持续的时间为30min，所得榨汁用200目滤布过，即得滤菠萝蛋白酶浸提液。菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率为108.7%。
浸提液中菠萝蛋白酶酶活测定采用F.I.P法，浸提液中酶活回收比率按下式计算：
所述F.I.P检测方法请参考文献：B.施特尔马赫著,钱嘉渊,译.酶的测定方法[M].北京:中国轻工业出版社,1992。
实施例2
菠萝加工废弃物皮渣，加入原料湿重7倍的去离子水，添加原料湿重3%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇3.3%，聚乙二醇600 1.2%，可溶性淀粉2.5%和氯化钙2%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在20℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH4.0，持续的时间为30min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。所得菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为125.3%，检测方法如实施例1所述。
实施例3
菠萝加工废弃物皮渣，加入原料湿重4倍的去离子水，添加原料湿重1.5%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇0.5%，聚乙二醇600 0.5%，可溶性淀粉0.1%和氯化钙0.1%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在30℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH3.0，持续的时间为20min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。该菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为105.2%，检测方法如实施例1所述。
实施例4
菠萝加工废弃物菠萝芯，加入原料湿重10倍的去离子水，添加原料湿重5%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇10%，聚乙二醇600 5%，可溶性淀粉0.1%和氯化钙4.5%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在25℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH6.0，持续的时间为35min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。该菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为108.5%，检测方法如实施例1所述。
实施例5
菠萝加工废弃物菠萝茎，加入原料湿重3.5倍的去离子水，添加原料湿重2.5%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇3.3%，聚乙二醇6001.2%，可溶性淀粉2.5%和氯化钙2%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比、用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁将所得榨汁在25℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH4.5，持续的时间为25min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。该菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为119.5%，检测方法如实施例1所述。
实施例6
菠萝加工废弃物菠萝茎，加入原料湿重5倍的去离子水，添加原料湿重4%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇5%，聚乙二醇600 10%，可溶性淀粉10%和氯化钙8%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比，用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在4℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH4.9，持续的时间为40min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。该菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为107.0%，检测方法如实施例1所述。
实施例7
菠萝加工废弃物皮渣和菠萝茎，加入原料湿重6倍的去离子水，原料湿重3.5%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇3.3%，聚乙二醇6001.2%，可溶性淀粉2.5%和氯化钙2%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在20℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH4.5，持续的时间为40min，所得榨汁用200目滤布过滤菠萝蛋白酶浸提液。菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为115.7%，检测方法如实施例1所述。
实施例8
菠萝加工废弃物皮渣和菠萝茎，加入原料湿重8倍的去离子水，添加原料湿重1%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇0.5%，聚乙二醇6000.5%，可溶性淀粉0.1%和氯化钙4.5%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在25℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH5.0，持续的时间为15min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率为112.3%，检测方法如实施例1所述。
实施例9
菠萝加工废弃物菠萝芯，加入原料湿重5倍的去离子水，添加原料湿重2.5%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇3.3%，聚乙二醇600 1.2%，可溶性淀粉2.5%和氯化钙2%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在30℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH6.5，持续的时间为30min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。该菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为117.4%，检测方法如实施例1所述。
实施例10
菠萝加工废弃物菠萝芯，直接添加原料湿重3.5%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇3.3%，聚乙二醇800 1%，羧甲基纤维素钠3.5%和氯化钙2.5%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在30℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH3.6，持续的时间为5min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。所得菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为103.8%，检测方法如实施例1所述。
实施例11
菠萝加工废弃物菠萝芯，加入原料湿重8倍的去离子水，添加原料湿重2.5%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇3.3%，聚乙二醇200 1.5%，聚乙烯吡咯烷酮3%和氯化钙2%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在28℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH3.0，持续的时间为25min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。所述菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为105.9%，检测方法如实施例1所述。
实施例12
菠萝加工废弃物菠萝茎，加入原料湿重6倍的去离子水，添加原料湿重2.5%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇的含量为3.3%，聚乙二醇1500的含量为1.5%，可溶性淀粉的含量为3%，氯化钠的含量为2%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在20℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH3.0，持续的时间为25min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。所述菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为102.6%，检测方法如实施例1所述。
实施例13
菠萝加工废弃物菠萝茎，加入原料湿重5倍的去离子水，添加原料湿重4.5%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（甘露醇的含量为3.5%，聚乙二醇200的含量为1.5%，聚乙烯吡咯烷酮的含量为3.5%，氯化钙的含量为2%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在25℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH3.0，持续的时间为35min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。所述菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为105.7%，检测方法如实施例1所述。
实施例14
菠萝加工废弃物菠萝茎，加入原料湿重5倍的去离子水，添加原料湿重8.5%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（甘露醇的含量为3.0%，聚乙二醇200的含量为1.5%，聚乙烯吡咯烷酮的含量为3.5%，氯化钙的含量为2%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在25℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH3.0，持续的时间为35min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。所述菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为102.1%，检测方法如实施例1所述。
实施例15
菠萝加工废弃物菠萝茎，加入原料湿重5倍的去离子水，添加原料湿重4.5%菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（甘露醇的含量为3.3%，聚乙二醇200的含量为1.5%，羧甲基纤维素钠的含量为3%，氯化钠的含量为2%，其余为去离子水），所述百分比为质量百分比。用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在25℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH3.0，保温时间持续的时间为35min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。所述菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为103.5%，检测方法如实施例1所述。
对比实施例1
取菠萝加工废弃物皮渣，加入原料湿重10倍的去离子水，用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在25℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH3.0，持续的时间为35min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。所述菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为51.05%，检测方法如实施例1所述。
对比实施例2
取菠萝加工废弃物菠萝茎，加入原料湿重5倍的去离子水，添加原料湿重5%的菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇10%，聚乙二醇600 5%，可溶性淀粉0.1%和氯化钙4.5%，其余为去离子水），用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在40℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH3.0，持续的时间为35min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。所述菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为48.6%，检测方法如实施例1所述。
对比实施例3
取菠萝加工废弃物菠萝茎，加入原料湿重8倍的去离子水，添加原料湿重5%的菠萝蛋白酶活性稳定保护剂（异麦芽酮糖醇3.3%，聚乙二醇800 1%，羧甲基纤维素钠3.5%和氯化钙2.5%，其余为去离子水），用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在25℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH9.0，持续的时间为35min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。所述菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为50.2%，检测方法如实施例1所述。
对比实施例4
取菠萝加工废弃物菠萝茎，加入原料湿重6倍的去离子水，用捣碎机捣碎榨汁，将所得榨汁在25℃，加入1MHCl或NaOH，调节pH9.0，持续的时间为25min，所得榨汁用200目滤布过滤即得菠萝蛋白酶浸提液。所述菠萝蛋白酶浸提液酶活回收比率检测结果为45.8%，检测方法如实施例1所述。
应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (9)
1.一种菠萝蛋白酶浸提液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：在原料中加入水和菠萝蛋白酶活性稳定保护剂混合，破碎，压榨取汁液，将所得汁液的pH值调整为3.0～6.5，保温温度为4～30℃，持续的时间为5～40分钟，过滤即得；所述菠萝蛋白酶活性稳定保护剂包括以下组分：(1)异麦芽酮糖醇0.5％～10％或甘露醇3％～3.5％；(2)聚乙二醇6000.5％～10％或聚乙二醇800 1％或聚乙二醇200 1.5％或聚乙二醇1500 1.5％；(3)可溶性淀粉0.1％～10％或羧甲基纤维素钠3％～3.5％或聚乙烯吡咯烷酮3％～3.5％；(4)氯化钙0.1％～8％或氯化钠2％；和(5)余量为去离子水，所述百分比均为质量百分比，该菠萝蛋白酶活性稳定保护剂的质量百分比添加量为原料湿重的1％～8.5％，所述原料包括菠萝皮渣、菠萝芯和/或菠萝茎中的一种或几种。
2.如权利要求1所述菠萝蛋白酶浸提液的制备方法，其特征在于，所述去离子水的加入量为原料湿重的1～10倍。
3.如权利要求1所述菠萝蛋白酶浸提液的制备方法，其特征在于，所述过滤的方法为过200目滤布进行过滤。
4.如权利要求1所述菠萝蛋白酶浸提液的制备方法，其特征在于，所述pH值调整为3.5～6.5，保温温度为20～30℃，持续的时间为25～35分钟。
5.一种菠萝蛋白酶活性稳定保护剂，其特征在于，该菠萝蛋白酶活性稳定保护剂包括以下组分：(1)异麦芽酮糖醇0.5％～10％或甘露醇3％～3.5％；(2)聚乙二醇600 0.5％～10％或聚乙二醇800 1％或聚乙二醇200 1.5％或聚乙二醇1500 1.5％；(3)可溶性淀粉0.1％～10％或羧甲基纤维素钠3％～3.5％或聚乙烯吡咯烷酮3％～3.5％；(4)氯化钙0.1％～8％或氯化钠2％；和(5)其余为去离子水，所述百分比均为质量百分比。
6.如权利要求5所述菠萝蛋白酶活性稳定保护剂，其特征在于，该菠萝蛋白酶活性稳定保护剂包括以下组分：异麦芽酮糖醇3.3％，聚乙二醇6001.2％，可溶性淀粉2.5％，氯化钙2％，其余为去离子水，所述百分比均为质量百分比。
7.如权利要求6所述菠萝蛋白酶活性稳定保护剂，其特征在于，该菠萝蛋白酶活性稳定保护剂包括以下组分：甘露醇3.5％，聚乙二醇200 1.5％，聚乙烯吡咯烷酮3.5％，氯化钙2％，其余为去离子水，所述百分比均为质量百分比。
8.如权利要求1～4任一项所述菠萝蛋白酶浸提液的制备方法所得的菠萝蛋白酶浸提液。
9.如权利要求5～7任一项所述的菠萝蛋白酶活性稳定保护剂在制备菠萝蛋白酶中的用途。
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