CN103356861A - 一种治疗缺血性脑血管疾病的中药提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗缺血性脑血管疾病的中药提取物及其制备方法，该中药提取物来源于油点草属植物黄花油点草和油点草，其主要成分是总黄酮，由药材提取后以大孔吸附树脂柱纯化后制得，总含量达50％以上。该中药注射剂对缺血性脑血管疾病具有良好的抗血栓形成、改善脑梗阻后肢体行为及有效降低脑梗死面积比作用，并能显著改善微循环、延长出、凝血时间，副作用较少。

Description

一种治疗缺血性脑血管疾病的中药提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗急性缺血性脑血管疾病的中药提取物，该中药提取物的来源于百合科油点草属植物，其主要成分类型为总黄酮，且含量占总提取物不低于50％。 

背景技术

油点草属植物黄花油点草、油点草具有理气活血之功效，在民间多用于治疗痨伤、痞症。临床大夫也有用它治疗脑病和骨伤诸症，中医认为脑病是由于气滞、气虚、外伤、热结等多种原因导致血液瘀积不行，凝结不散，阻于脑络，致清窍闭塞而发。治疗时从瘀血入手，均能取得一定的临床疗效。临床上应用活血化瘀药，在治疗缺血性脑梗阻管疾病、颅脑损伤综合征、缺血性脑中风及新生儿脑缺氧缺血性等疾病时疗效显著，在脑病治疗中发挥了举足轻重的作用。 

然而活血化瘀法是中医学中的治疗大法之一，其立法依据是“坚而消之，结儿散之”。狭义的讲是血脉畅通、瘀滞消结的一种治法，广义的则可以说是调和阴阳、平衡气血、扶正祛邪之功。因此“理气”与“活血”又是协调统一的，均属活血化瘀大法的内容。在前期的预试验中对药材药效学研究进行了初步的探索，结果显示该药材提取物具有极其显著的改善小鼠耳廓微循环、抗血栓形成作用，且对急性缺血性脑血管疾病大鼠具有极其显著的改善作用。 

发明内容

本发明要解决的技术问题制备一种治疗急性缺血性脑血管疾病的中药提取物，该提取物主要成分类型为总黄酮，且含量占总提取物的50％以上。 

本发明采用水为提取溶剂，以大孔吸附树脂柱为分离柱，采用一定比例的水和乙醇等度洗脱，不仅提取效率高，简化了步骤，还进一步提高了上总黄酮含量，可以达到50％水平以上。 

本发明提供的一种治疗急性缺血性脑血管疾病的中药提取物的制备方法，其包括下列步骤： 

(1)取油点草属植物适量，浸泡15min，采用水煎煮或低浓度乙醇回流提取，提取液合并浓缩成浓缩液； 

(2)将上述浓缩液加入一定量95％乙醇沉淀，将上清液浓缩成1.2g/ml的清膏，采用AB-8型大孔吸附树脂纯化，其主要参数径高比为1∶5，上样速度为1BV/h，洗脱速度为1BV/h，采用梯度洗脱，洗脱液浓度为40％、60％乙醇，每个梯度洗脱体积为2BV，收集洗脱液，蒸干，即得本发明的提取物，该提取物总黄酮部位含量不低于50％。 

本发明的中药提取物是以油点草属植物为原料药材，主要成分为总黄酮，是一种治疗急性缺血性脑血管疾病有效的中药提取物。经动物试验表明，对缺血性脑病具有良好的治疗作用，对急性缺血性脑血管疾病的疗效优于银杏叶片。 

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。 

实施例1 

称取药材5g，浸泡15min，分别加入45、40、40倍水，煎煮1h、30min、30min，合并提取液，浓缩至1.2～1.4g/ml。加入95％乙醇醇沉后，上清液回收乙醇，浓缩至1.2g/ml。选择AB-8型大孔吸附树脂15g，在药液pH＝6.47，径高比为1∶5，上样速度为1BV/h，洗脱速度为1BV/h，洗脱液分别选择浓度为40％、60％乙醇进行洗脱，每个梯度洗脱体积为2BV，合并洗脱液，回收乙醇浓缩干燥后，即得本品。 

实施例2 

将50只体重在18～22g的SPF级小鼠，随机分为4组，即空白组、黄酮部位组、其他部位组、阳性对照组，每组10～12只，雌雄各半。适应性喂养3日后，除空白组外，按照生药量2.5g/kg给药，第三日给药后对小鼠进行血瘀模型造模，随后继续给药两日，第五日给药结束25min后，采用10％乌拉坦0.175mg/10g腹腔注射麻醉小鼠，将小鼠腹部向下固定在观察台上，使耳托平展于玻片上，滴加少许香柏油后，置于XSZ-H型生物显微镜50倍镜下观察。 

启动微循环软件、调整镜下视野，使由JVC视频摄像机传输到电脑屏幕上的图像清晰，通过观察耳廓边界血管情况，选定某处用荧光笔标记后，测量其动脉管径(微米)及静脉管径(微米)，同时使显示窗的光点速度与显微镜下的血流速度一致，读取动脉血流速度值(微米/秒)、静脉血流速度值(微米/秒)。即得30min时微循环数据，半小时后继续观察荧光笔标记处的血管管径及血流速度，即得给药60min后的相应数据，分别减去给药前的相应值即为动、静脉血管管径变化值、动、静脉血流速度变化值。 

结果：通过对小鼠耳廓微循环试验，显示总黄酮部位具有极为显著地扩张动静脉管径既改变血流速度的作用，而其他部位无显著性作用，结果见表1。 

表1微循环测量结果 

与空白组比较*表示P＜0.05，**表示P＜0.01 

实施例3 

出血时间：采用小鼠断尾法测定出血时间。小鼠分组、给药同实施例2内容，末次给药1h后，将小鼠尾尖3mm处用利剪横向剪断，开始计时，每隔30s用滤纸轻轻吸取断面血液 一次，直至血液自然停止(滤纸吸时无血)，计时停止，即得小鼠出血时间。 

凝血时间：采用玻片法测定凝血时间。小鼠分组、给药同实施例2内容，末次给药1h后，摘取小鼠眼球，使血液自行流出，用干净干燥的载玻片两端分别收集血滴(直径不超过1cm)，同时开始计时，此后每隔15～20s用干燥针头挑动血液一次，至针头能挑起纤维蛋白丝为止，停止计时，即得凝血时间，两滴血液凝血时间平均值即为该小鼠凝血时间。 

结果显示对合并部位进行小鼠出、凝血试验，结果总黄酮部位作用极为显著，结果见表2 

表2 小鼠出、凝血时间测定结果 

与空白组比较*表示P＜0.05，**表示P＜0.01 

实施例4 

将40只体重在180～220g的SPF级SD雄性大鼠，随机分为9组，每组10～12只。适应性喂养5日后，连续给药7日，除空白组外，其余各组进行血瘀模型造模。随后颈总动脉取血，用人造血管收集血液3ml，将人造血管两头插紧，置于仪器上，启动开关，在37℃条件下转动10min，待仪器报警后，倒出血液置于滤纸上，吸去多余血液后，置于干燥的玻璃器皿上，测量血栓长度，并称量血栓湿重，待干燥后，称其干重。 

结果显示抗血栓形成试验过程中，总黄酮部位效果极为显著，结果详见表3。 

表3 大鼠抗血栓形成作用试验结果 

与空白组比较*表示P＜0.05，**表示P＜0.01 

实施例5 

购SD大鼠80只，雄性，正常饲养至体重250-350g。除随机取10只作为假手术组外，其余根据随机性原则将大鼠分为受试药物组、阳性药物组、模型组、假手术组，每组10只。同时给予相应的药物和同积蒸馏水。第三日给完药物后立即进行造模，待麻醉苏醒后，对造模成功的大鼠进行神经行为学评分，继续给药四日，再次进行各种指标的检测。 

造模方法如下：以10％水合氯醛钠0.4ml/100g分别腹腔注射麻醉，切开颈部皮肤，分离右侧颈动脉，结扎颈外动脉，打开仪器开关，将颈动脉埋于探头槽中，打开刺激开关，刺激电流1.1mA直流电刺激，刺激5分钟，显示形成100％血栓，停止刺激，将颈动脉血管从探头取下，用带橡皮的眼科镊将血栓活动，并向远心端(大脑方向)移动，血液将血拴推向大脑，缝合颈部(同时，注射青霉素8万单位/100g，连续3d，以防手术感染)。 

模型造完之后，进行神经行为学观察，各手术组动物苏醒后出现损伤侧Horner氏征的阳性体征，主要表现为眼睑下垂，同时出现左侧以前肢为重瘫痪，左前肢屈曲，内收，行走时向左侧旋转，严重者意识不清，昏迷或癫痫发作以致死亡，试验过程中手术失败，造模不成功及6小时内死亡的动物弃之不用。假手术组除不电刺激外，其余操作同上。 

神经行为学评分：造模后及给药结束后进行神经行为学观察。评分标准如下 

①0分：无神经功能缺损症状。 

②1分：轻度局灶性神经功能缺损(不能完全伸展左侧前肢)。 

③2分：中度局灶性神经功能缺损(行走向左侧旋转)。 

④3分：重度局灶性神经功能缺损(自主运动时向左侧倾倒)。 

⑤4分：不能自发行走，意识障碍。 

TTC染色法测定脑梗死面积 

处死大鼠，取出完整脑组织，去除嗅脑和小脑，于超低温冰箱中速冻(小于10min)，将大脑切成2mm厚度的冠状切片5片，将脑组织切片浸入含有2％TTC溶液的棕色小瓶中，37％恒温振荡器中孵育30min；其间，每隔10min将组织切片翻动一次，使染色均匀。将脑组织切片取出后平铺于培养皿中，数码相机拍照后，用lmagePro Plus 6.0图像分析软件侧冠状切片的总面积和梗死面积，计算梗死面积比＝梗死面积/总面积×100％。 

结果神经行为学评分结果：分别再造模结束后、给药结束后进行了大鼠神经行为学的评分，经过分析处理，结果显示给药三日后各组行为评分结果差异比较明显，总黄酮部位效果突出，具有显著地改善大鼠神经行为的作用，继续给药四日后，再次评分，各组无显著差异，详见表4。 

表4各组神经行为学分结果 

注：模型组与假手术组比较△△P＜0.01：给药组与模型对照组比较*P＜0.05 

给药结束后，对各组间大鼠脑梗死面积进行了分析统计，结果显示总黄酮部位具有及其显著作用，详见表5。 

表5各组脑梗死面积结果 

注：模型组与假手术组比较△△P＜0.01给药组与模型对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 。

Claims (5)

1.一种治疗急性缺血性脑血管疾病的中药提取物，其特征在于，这种中药提取物的来源于百合科油点草属植物，其主要成分类型为总黄酮。

2.根据权利要求1所述的治疗急性缺血性脑血管疾病的中药提取物，其特征在于总黄酮部位来源于油点草属植物油点草或黄花油点草。

3.根据权利要求1或2所述的急性缺血性脑血管疾病的中药提取物，其特征在于总黄酮部位占提取物的50％以上。

4.根据权利要求1～3所述的急性缺血性脑血管疾病的中药提取物，其特征在于这种提取物主要用于治疗缺血性脑梗阻管疾病、颅脑损伤综合征、缺血性卤中风及新生儿脑缺氧缺血性等脑病等。

5.根据权利要求1～3所述的治疗急性缺血性脑血管疾病的中药提取物，其原料药材为油点草属植物油点草或黄花油点草，其制备方法是：

(1)取油点草属植物适量，浸泡15min，采用水煎煮或低浓度乙醇回流提取，提取液合并浓缩成浓缩液；

(2)将上述浓缩液加入一定量95％乙醇沉淀，将上清液浓缩成1.2g/ml的清膏，采用AB-8型大孔吸附树脂纯化，其主要参数径高比为1∶5，上样速度为1BV/h，洗脱速度为1BV/h，梯度洗脱，洗脱液浓度为40％乙醇、60％乙醇，每个梯度洗脱2BV，收集洗脱液，蒸干，即得本发明的提取物，该提取物总黄酮部位含量不低于50％。