CN103356484B

CN103356484B - 磁性固态“右旋糖酐-mldh-氟尿嘧啶”脂质体

Info

Publication number: CN103356484B
Application number: CN201310319577.4A
Authority: CN
Inventors: 苟国敬; 黄洁; 董丽娥
Original assignee: Ningxia Medical University
Current assignee: Ningxia Medical University
Priority date: 2013-07-26
Filing date: 2013-07-26
Publication date: 2015-09-30
Anticipated expiration: 2033-07-26
Also published as: CN103356484A

Abstract

本发明涉及一种磁性固态“右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶”脂质体，其特征在于该脂质体是以右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶为载药体，以大豆卵磷脂、胆固醇为原料，用薄膜分散法、逆向蒸发法或乙醇注入法合成右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶液相脂质体，然后加甘露醇冷冻升华制备而成。本发明的脂质体完整保持了DMF的晶相结构与形貌特征，“磷脂双分子层-DMF”核壳型构造特征明显、性质稳定；产品为水溶性固态磁性脂质体，具有典型的体外控释性能、灵敏的磁响应性、优异的癌细胞增殖抑制活性及特殊持久的体内药物过程。本发明提供了一种有效保存DMF脂质体的方法，适合以磁性层状复合氢氧化物MLDH为载体的磁性药物脂质体制备、固化保存，具有成本低廉、制作简单的加工优势，以及磁靶向–缓控释兼融、作用持久、疗效稳定、便于贮存运输的产品特点。

Description

磁性固态“右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶”脂质体

技术领域

本发明属于现代给药系统及其制剂开发领域，具体涉及一种以“右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶”超分子给药系统DMF为核心骨架的磁性固态脂质体，适宜磁靶向化疗所需磁性脂质体的加工与固化保存。

背景技术

氟尿嘧啶是一种广谱抗肿瘤药物，常用于消化道肿瘤、乳腺癌、卵巢癌等疾病的治疗，但氟尿嘧啶原药及普通注射剂的生物半衰期短、消除快，并存在强烈的胃肠道反应与骨髓抑制等副作用。

脂质体具有缓释、低毒、生物相容、药物可溶性好等优点，有天然靶向性，能将药物运送至网状内皮系统的细胞中释放，治疗如疟疾等网状内皮系统疾病。基于脂质体的被动靶向，可提高药物的生物利用度，减少用量、降低毒副作用，因此，成为近年新型给药系统的研究热点。传统靶向脂质体可经单核巨噬细胞系统摄取，通过生理过程优势转运至肝、脾等器官，但对其他组织器官的靶向难度大、效率低。磁性脂质体能借助外磁场牵引将药物转运至磁靶向组织，提高疗效；但传统的磁性脂质体主要用类脂材料包裹药物及Fe₃O₄纳米粒的方法制成，Fe₃O₄、药物与类脂分子间缺乏内部结合及理想的囊内空间分布，相界面处于亚稳定态，受磁场干预时囊内Fe₃O₄纳米粒的磁响应容易撕裂类脂囊壁，导致药物泄露、Fe₃O₄沉积等问题。目前所开发的磁性脂质体多为介稳态悬乳液，长期贮存过程易发生聚集、融合及药物渗漏，磷脂膜的氧化、水解也会降低药物制剂的稳定性，这在一定程度上限制了此类脂质体的大量生产、储运。

发明内容

本发明旨在解决DMF脂质体的固化与有效保存问题，通过向液态脂质体中加甘露醇作保护剂、冷冻升华除去水分，制得结构和性能稳定的磁性固态DMF脂质体，达到对DMF磁靶向缓控释系统的保护与双相分散目的。该磁性固态脂质体可溶于水制成注射剂或加工成其他磁靶向控释制剂，具有DMF磁靶向-缓控释作用与脂质结构的双重优势，对恶性肿瘤的磁靶向治疗有重要的临床应用价值。

本发明磁性固态DMF脂质体制备的技术方案如下：

一种磁性固态“右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶”脂质体，其特征在于该脂质体是以右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶为载药体，以大豆卵磷脂、胆固醇为原料，用薄膜分散法、逆向蒸发法或乙醇注入法合成右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶液相脂质体，然后加甘露醇冷冻升华制备而成：

右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶载药体 3–60mg，

大豆卵磷脂 30–420mg，

胆固醇 10–140mg，

氯仿或乙醇 10mL–30mL，

双蒸水 10mL–30mL。

所述脂质体加工原料的理想配比为：

右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶载药体 6–60mg，

大豆卵磷脂 30–300mg，

胆固醇 10–100mg，

氯仿或乙醇 15mL，

双蒸水 30mL。

所述右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶载药体为氟尿嘧啶含量在20 - 40%之间的磁性粉末，采用共沉淀插层-原位复合-溶剂转换法合成。

所述薄膜分散法结合甘露醇冷冻升华的工艺步骤为：

1）首先将右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶载药体研磨成粉，过120目筛网，加入双蒸水，后置于超声水浴上超声分散10–20min，制成均匀的水悬液；

2）将卵磷脂和胆固醇加入到氯仿中溶解均匀，后转移至旋转蒸发仪，在30–60℃水浴条件下减压旋转蒸发1h，挥干氯仿，制成干燥的磷脂薄膜；

3）先用少量氯仿溶解磷脂薄膜，再用右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶水悬液加以分散，然后转移到旋转蒸发仪上，在40–60℃水浴条件下旋转蒸发2h，除去氯仿，得到右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶脂质体水浊液；

4）采用超声细胞粉碎仪对右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶脂质体水浊液进行整粒、匀化；

5）按照1%-5%的比例加入甘露醇，混合均匀后冷冻升华即可。

所述逆向蒸发法结合甘露醇冷冻升华的工艺步骤为：

2）将卵磷脂和胆固醇加入到氯仿中溶解均匀，后转移至旋转蒸发仪，在30–60℃水浴条件下旋转蒸发1h，挥干氯仿，制成干燥的磷脂薄膜；

3）用少量氯仿溶解薄膜，转至超声水浴上分散20–30min，然后将右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶水悬液逐滴加入到磷脂薄膜溶液中，封闭瓶口、超声乳化10–20min，制成均匀乳剂，再将乳剂转移到旋转蒸发仪上，在30–60℃水浴条件下旋转蒸发2h，除去氯仿，得到右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶脂质体溶液；

4）采用超声细胞粉碎仪对右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶脂质体溶液进行整粒、匀化；

5）按照1%-5%的比例加入甘露醇，混合均匀后冷冻升华即可。

所述乙醇注入法结合甘露醇冷冻升华的工艺步骤为：

2）将卵磷脂和胆固醇加入到乙醇中溶解均匀，得到脂醇溶液；

3）将右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶水悬液转移至30–60℃恒温水浴中加热，在磁搅拌状态下，用注射器将磷脂醇溶液注入右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶水悬液中，然后在搅拌状态下原位蒸发2–3h，当蒸发量略大于乙醇加入量时，停止蒸发，制得右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶脂质体的水溶液；

5）按照1%-5%的比例加入甘露醇，混合均匀后冷冻升华即可。

所述超声功率80-90W。

所述超声细胞粉碎仪处理时，设置间歇7s、工作5s，处理时长5min。

本发明中，右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶载药体用“MLDH-FU共沉淀插层–DET原位复合–溶剂转换”法合成（参见文献：苟国敬，鲍凤娟，蒋袁絮。“右旋糖酐-磁性LDH-氟尿嘧啶”磁靶向缓控释三聚体的合成方法[P]，ZL2009101173717，2009.7.24。苟国敬，刘彦红，孙岳，黄洁，薛冰，董丽娥。“右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶”给药系统的超分子组装与磁靶向缓释作用。药学学报，2011，46（11）：1390-1398）。具体操作如下：按摩尔比Fe²⁺/Fe³⁺=2:1～3：1配制FeCl₂·4H₂O、FeCl₃·6H₂O的水溶液；按摩尔比Fe³⁺/Fu=1:2～1:4配比，称取一定质量的氟尿嘧啶原药，用2M NaOH溶液超声溶解配制0.145mol·L^-1Fu溶液，加到混合盐溶液中、磁搅拌混匀。用一元强碱溶液作沉淀剂，将共沉淀终点的pH控制在6.5～10.0之间；在N₂、H₂或Ar保护，0～80℃恒温及300rpm磁搅拌条件下完成共沉淀沉淀和晶化反应30～45min。按质量比Fe³⁺/DET=2:1～1:2称取一定量的右旋糖酐，用3～4倍质量的双蒸水溶解后，加到反应器中，保持条件不变、原位反应30～90min。用-80～0℃低温冷冻过的乙醇行溶剂转换，完成固相沉降，并在N₂或Ar保护及-4～+4℃恒温条件下完成样品洗涤，在-20℃、5000rpm条件下冷冻离心10min，将所得固相转入真空干燥箱，在60～85℃、0.10～0.08Mpa条件下干燥24～48h。

本发明首先建立了“右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶”（Dextan-magnetic layered double hydroxide-fluorouracil,DMF）超分子组装型FU给药系统，通过将氟尿嘧啶插入磁性层状复合氢氧化物（magneticlayered double hydroxide,MLDH）层间，实现了对FU的磁靶向–缓控释给药，显著降低了原药的急毒性水平及血浆蛋白结合率，延长体内半衰期，提高了生物利用度。然后基于DMF粒子尺寸大、缓释作用持久、稳定的特点，在尝试多种制备方法的基础上，确定了用薄膜分散法、逆相蒸发法或乙醇注入法合成DMF液相脂质体的技术路线，并通过冷冻干燥除去液相脂质体中的水分、建立了获得磁性固态DMF脂质体的技术方法。为理想地保护DMF的结构及其优异的缓控释性能，在常温、敞开环境下存放DMF脂质体，本发明在冷冻升华过程使用了冻干保护剂。

本发明所制备的磁性固态DMF脂质体，完整保持了DMF的晶相结构与形貌特征，为“DMF–磷脂双分子层”核壳式构造，储存稳定性高，水溶性好，具有典型的体外控释特征、灵敏的磁响应性、优异的癌细胞增殖抑制活性及特殊持久的体内药物过程。脂质体形成、固化过程，DMF保持MLDH型层状结构及六边形外貌特征不变，被磷脂双分子层包裹成为核心骨架，赋予脂质体磁靶向性、药物稳定性及特殊的控释性能；胆固醇对磷脂双分子层结构起稳定作用；冻干剂有效保护DMF脂质体及其核心构架，制成适宜长久储存、方便再加工的固态DMF磁性脂质体。

本发明适合以磁性层状复合氢氧化物MLDH为载体的磁性药物脂质体制备、固化保存，具有成本低廉、制作简单的加工优势，以及磁靶向–缓控释兼融、作用持久、疗效稳定、便于储运的产品特色。

附图说明

图1为DMF给药系统（A）、DMF脂质体无糖冻干粉（B）及DMF脂质体加糖冻干粉（C）的XRD模型；

图2为DMF脂质体及其相关组分的IR图谱；

图3为DMF脂质体的粒子形貌；

图4为DMF脂质体的体内磁靶向分布；

图5为DMF脂质体及商用FU注射剂的家免静注药动学曲线。

具体实施方式

本发明化学合成所用试剂均为常规商品试剂，生物及动物实验所用材料均为商业产品。以下实施例旨在作进一步说明，不用于限制本发明要求保护的范围。本发明所述的磁性固态DMF脂质体，可通过以下技术方案实现：

右旋糖酐-MLDH-氟尿嘧啶载药体的获得：称取39.76g氯化亚铁和27.03g氯化铁盛于硫酸纸袋中备用；称右旋糖酐（DET）84g用200mL水溶解；量取69mL0.145mol·L^-1Fu溶液备用。用pH计、搅拌磁子、沉淀剂滴注驱动系统及1000mL三颈瓶组装氮保护反应系统，加300mL双蒸水，在通N₂、磁搅拌条件下加入两种铁盐，再加Fu溶液、搅拌混匀，在45℃恒温及N₂保护条件下滴加2mol·L^-1NaOH，控制共沉淀终点pH至10.0。关闭加碱系统，保持恒温、磁搅拌及N₂保护条件不变，原位晶化浆料30min。将MLDH-FU浆料升温至53℃恒温，加DET溶液，在原位、通N₂保护及磁搅拌条件下反应40min。关闭加热与搅拌系统，在N₂流通条件下将生成的DMF浆料快速转移至1000mL，-20℃冷冻4h的无水乙醇中行溶剂转换，然后，5000rpm离心15min分离出固相，放进真空干燥箱，干燥96h，即得DMF固相。

实施例1用乙醇注入法合成DMF脂质水溶液、冷冻干燥制成固化脂质体

（1）将干燥的DMF碎块研磨成粉，过120目筛网，用塑封袋收集于干燥器中备用。称取DMF粉末60mg盛于50mL烧杯中，加30mL双蒸水，置于超声水浴中以80–90W功率超声20min，制成均匀的DMF水悬液。

（2）称取300mg卵磷脂和100mg胆固醇，置于50mL烧杯中，用15mL乙醇溶解，制成脂醇溶液备用。

（3）将DMF水悬液转移至磁力搅拌器的水浴中（55℃恒温），以100rpm转速搅拌；用注射器吸取脂醇溶液，加注到DMF中。保持原位磁搅拌状态蒸发2h，至剩余液量略小于30mL时，停止蒸发，得到DMFL溶液。

（4）用细胞超声粉碎仪（间歇7s，工作5s，时长5min）处理DMFL液相，减小、匀化粒径；然后，收集到玻璃瓶中、置于4℃冰箱保存。

（5）合并用一处方制备的4批DMF脂质体样品（体积约120mL），按1%的浓度配比加1.2g甘露醇，用玻璃棒搅拌混匀，转到冷冻盛样盘上，在-80℃冰箱中速冻4h；然后，放进冷冻干燥机（制冷温度-50℃），封闭冷冻罩、开启真空泵，升华24h、挥干水分；最后，平衡气压、取出冻干粉，放进干燥器保存。

实施例2用薄膜分散法合成DMF脂质体水浊液、冷冻干燥得固化脂质体

（1）将干燥的DMF碎块研磨成粉，过120目筛网，用塑封袋收集于干燥器中备用。称取DMF粉末6mg盛于50mL烧杯中，加30mL双蒸水，置于超声水浴中以80–90W功率超声20min，制成均匀的DMF水悬液。

（2）称取30mg卵磷脂和10mg胆固醇，置于50mL烧杯中，用15mL氯仿溶解，制成脂醇溶液、转移至250mL的梨形瓶。用旋转蒸发仪在55℃水浴条件下，减压旋转蒸发1h，挥干氯仿，制成干燥的磷脂薄膜。

（3）取5mL氯仿，溶解薄膜制成磷脂膜溶液，然后，用DMF水悬液分散均匀；最后，在55℃水浴条件下旋转蒸发2h，除去氯仿，即得DMFL水浊液。

（5）合并用一处方制备的4批DMFL脂质体样品（体积约12mL），按3%的配比加入0.36g甘露醇，用玻璃棒搅拌混匀，转到冷冻盛样盘上，在-80℃冰箱中速冻4h；然后，放进冷冻干燥机（制冷温度-50℃），封闭冷冻罩、开启真空泵，升华24h、挥干水分；最后，平衡气压、取出冻干粉，放进干燥器保存。

实施例3用逆向蒸发法合成DMF脂质体水浊液、冷冻干燥得固化脂质体

（2）称取300mg卵磷脂和100mg胆固醇，置于50mL烧杯中，加15mL氯仿溶解，制成脂醇溶液、转移至250mL的梨形瓶中。用旋转蒸发仪在40℃水浴条件下，减压旋转蒸发1h，挥干氯仿，制成干燥的磷脂薄膜。

（3）取5mL氯仿，溶解薄膜制成磷脂膜溶液，置于超声水浴上（90W功率，30min），逐滴加入DMF水悬液、超声乳化20min，制成均匀乳剂。最后，用旋转蒸发仪在40℃水浴条件下旋转蒸发2h，去除溶膜所加氯仿，得DMF脂质体。

实施例4用乙醇注入法合成DMF脂质水溶液、冷冻干燥制成固化脂质体

（1）将干燥的DMF碎块研磨成粉，过120目筛网，用塑封袋收集于干燥器中备用。称取DMF粉末20mg盛于50mL烧杯中，加30mL双蒸水，置于超声水浴中以80–90W功率超声20min，制成均匀的DMF水悬液。

（2）称取200mg卵磷脂和60mg胆固醇，置于50mL烧杯中，用15mL乙醇溶解，制成脂醇溶液备用。

（5）合并用一处方制备的4批DMF脂质体样品（体积约120mL），按4%的浓度配比加4.8g甘露醇，用玻璃棒搅拌混匀，转到冷冻盛样盘上，在-80℃冰箱中速冻4h；然后，放进冷冻干燥机（制冷温度-50℃），封闭冷冻罩、开启真空泵，升华24h、挥干水分；最后，平衡气压、取出冻干粉，放进干燥器保存。

实施例5用薄膜分散法合成DMF脂质体水浊液、冷冻干燥得固化脂质体

（1）将干燥的DMF碎块研磨成粉，过120目筛网，用塑封袋收集于干燥器中备用。称取DMF粉末30mg盛于50mL烧杯中，加30mL双蒸水，置于超声水浴中以80–90W功率超声20min，制成均匀的DMF水悬液。

（2）称取150mg卵磷脂和50mg胆固醇，置于150mL烧杯中，用15mL氯仿溶解，制成脂醇溶液、转移至250mL的梨形瓶。用旋转蒸发仪在55℃水浴条件下，减压旋转蒸发1h，挥干氯仿，制成干燥的磷脂薄膜。

（5）合并用一处方制备的4批DMFL脂质体样品，按5%的配比加入0.60g甘露醇，用玻璃棒搅拌混匀，转到冷冻盛样盘上，在-80℃冰箱中速冻4h；然后，放进冷冻干燥机（制冷温度-50℃），封闭冷冻罩、开启真空泵，升华24h、挥干水分；最后，平衡气压、取出冻干粉，放进干燥器保存。

实施例6用逆向蒸发法合成DMF脂质体水浊液、冷冻干燥得固化脂质体

（2）称取100mg卵磷脂和33mg胆固醇，置于50mL烧杯中，加15mL氯仿溶解，制成脂醇溶液、转移至250mL的梨形瓶中。用旋转蒸发仪在40℃水浴条件下，减压旋转蒸发1h，挥干氯仿，制成干燥的磷脂薄膜。

（5）合并用一处方制备的4批DMF脂质体样品（体积约120mL），按2%的浓度配比加2.4g甘露醇，用玻璃棒搅拌混匀，转到冷冻盛样盘上，在-80℃冰箱中速冻4h；然后，放进冷冻干燥机（制冷温度-50℃），封闭冷冻罩、开启真空泵，升华24h、挥干水分；最后，平衡气压、取出冻干粉，放进干燥器保存。

实施效果评价

I、对实施例所制磁性固态DMF脂质体样品进行物相鉴定，以验证本发明技术对DMF脂质体的固化保存效果。

首先，按实施例1-6提供的方法和流程制得8批液相DMF脂质体，然后，4批直接冷冻干燥、另4批加甘露醇作冻干保护剂再行冷冻干燥，制成两种DMF脂质体固相样品，进行物相表征分析，检查本发明所制磁性固态DMF脂质体的物相特征及本发明技术对DMF脂质体的固化效果。

1.1XRD表征用日本理学Rigaku D/max-rB XRD-6000型衍射仪测定样品的XRD衍射模型，实验条件40kV，30mA，Cu Kα（λ=0.15406nm），5～80°，扫描速度2°·s^-1。表征结果见图1。

1.2FT-IR表征用德国布鲁克公司TENEOR27型红外光谱仪，对DMF、DMF脂质体加糖冻干粉以及卵磷脂、胆固醇等原料进行FT-IR表征，KBr压片，4000～400cm^-1。表征结果见图2。

1.3TEM电镜表征用日立HITACHI H-7560B型透射电子显微镜表征DMF脂质体的粒子形貌。取少量固态DMF脂质体（加糖冻干粉）配成混悬液，滴于铜网，自然挥干，置于镜下观察、拍照。加速电压80Kv，放大1000–60000倍。表征结果见图3。

实验结果

图1为DMF（A）、DMF脂质体冻干粉（B、C）的XRD鉴定图谱。图A在（11.039°，0.8008nm）、（22.200°，0.4001nm）、（33.080°，0.2706nm）和（57.580°，0.1599nm）位置出现特征衍射峰，与R-六方晶相的（003）、（006）、（0012）和（110）晶面衍射吻合；在（35.391°，0.2634nm）位置有明显衍射，与磁性氧化铁的（311）对应，表明DMF样品部分氧化生成微量Fe₃O₄，但氧化铁含量仅0.10，非主要晶相。图B中，11.012°处DMF特征强度降低，在18.019°、24.231°处出现较强的有机无定形相衍射，表明直接冷冻干燥对脂质体核心的DMF晶相保护效果不好，DMF的MLDH层相受损、氧化程度提高。相反，图C在11.038°、22.670°和32.998°处出现DMF的强衍射峰，证明DMF晶相得到完整保留，（311）处氧化峰强度与DMF相近，证明脂质体加糖冻干后，作为核心骨架的DMF晶相特征得到完整保留。图2为DMF、胆固醇、卵磷脂、甘露醇及脂质体冻干粉的IR图谱。图A给出DMF系统中载体MLDH的IR谱征、复合层DET的IR吸收、以及层间药物FU的IR吸收，证明DMF是DET、MLDH及层间客体FU三种组分的超分子复合物。图E是磁性固态DMF脂质体的IR图谱，B、C是原料胆固醇、卵磷脂，D是冻干剂甘露醇。DMF作为脂质体的核心骨架，3、α、5～8及γ等特征吸收在IR图E中都得到体现，证明DMF是固态脂质体的主晶相。卵磷脂的特征吸收酯羰基的伸缩振动ν_C=O出现在脂质体（E）1730cm^-1处的肩峰中，疏水链中亚甲基的剪式振动δ（CH₂）出现在图E的1458cm^-1位置，磷脂碳氧键的伸缩振动ν_C-O-C（1238cm^-1）合并到脂质体的1240-1213cm^-1波段，证明所制脂质体中存在磷脂结构；CH₂反对称伸缩振动蓝移，证明胆固醇对磷脂双层结构起到稳定和保护作用。IR光谱证明，本发明能成功合成由磷脂双分子层包封DMF作核心骨架的脂质体，加糖后冷冻干燥能有效保护DMF磁性固态脂质体。图3为本发明所制磁性固态DMF脂质体粒子的TEM形貌。脂质体粒子呈球形对称，脂层薄、成像暗淡，核心实体形象明显、六边形轮廓清晰；以DMF纳米粒为核心，卵磷脂和胆固醇的亲水基与DMF的表面DET及MLDH羟基直接亲和或通过水分子结合、形成类脂包封层，两种脂质分子通过自组装建立了双分子层网结构，借助外层亲油基团与介质的表面作用，自发形成球形胶束粒子、使系统的表面张力降至最低。DMF磁性骨架将使脂质体的药物传输获得磁靶向性；DMF在脂质核心的水相中控制药物释放，释出的游离药物向介质扩散时又将受到磷脂双分子层亲水基团的阻滞，因此，将使药物的稳定性及缓释性得到进一步加强。

上述表征结果证明，在脂质体加工过程，DMF保持MLDH型层状结构及六边形外貌特征不变，受磷脂双分子层包围成为核心骨架，赋予了脂质体磁靶向性、药物稳定性及特殊的缓控释性能；胆固醇对磷脂双分子层结构起到稳定作用，脂质体化改造提高了DMF粒子的分散性、液相流动性及磁响应灵敏性，可延长药物缓释过程，使DMF磁靶向缓释系统的血管内注射给药成为可能。加入甘露醇、冷冻干燥，有助于保护DMF骨架、制备适宜储存的固化DMF脂质体。

II、以天津金耀氨基酸有限公司生产的氟尿嘧啶注射液（批号1203151）为参比制剂，评价本发明的磁性固态DMF脂质体的血管注射给药药效学。

2.1DMF在家免体内的靶向分布实验将10只健康家兔随机分成4组，右肾加磁组、不加磁组、FU注射液组各3只，空白组1只，自然条件下正常饲养，给药前后不禁水、不禁食。将固态DMF脂质体用灭菌蒸馏水配成浓度3.5g·mL^-1的溶液，按9.2mgFu·kg^-1剂量经耳缘静脉注射给药。给药前在加磁组家兔的右肾外侧固定5片2000高斯的小磁铁作干预磁场。分别于首次给药后12h及24h时，再给相同剂量的药物。第三次给药2h后，注射空气处死家兔，解剖取心、肝、脾、肺、左肾、右肾等六种组织样本，用0.9%生理盐水冲洗，用滤纸吸干水分后，准确称取各组织1.0g，加3mL生理盐水匀浆，取上清液，-20℃储存。按HPLC内标法处理，测定各组织的FU含量。结果见图4。

2.2DMF脂质体家免注射给药的药动学实验将10只健康家免随机分成DMF脂质体组、加磁干预DMF脂质体组、商用FU注射液组及空白组，自然条件下饲养（抽血前禁食8－12h）。用灭菌蒸馏水将固态DMF脂质体配成浓度2.3g·mL^-1的溶液，按9.2mgFu·kg^-1剂量经耳缘静脉注射给药。加磁组给药前在家兔的心脏外侧固定5片2000高斯的小磁铁作干预磁场。从耳缘静脉注射、单次给药，给药剂量9.2mgFu·kg^-1。DMF脂质体各组在注射给药后0.1、0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12、16、20、24、28、32、36、42、48、54h等时间点采集血样，FU注射液组按0.1、0.25、0.5、1、2、4、6、8时间点采样。血样经3000rpm离心10min后，收取上清，-20℃保存待用。按HPLC内标法制样、测定，计算各时间点的血浆药物浓度，用DAS2.0软件对经时过程进行统计学分析。药时曲线及药动学参数分别由附图5及表1给出。

药效学实验结果

图4给出本发明所制磁性固态DMF脂质体水溶液与商用FU注射液静脉给药后，氟尿嘧啶在家免体内生物分布的对比情况。总体上看，FU注射液的药物总分布量小、生物利用度低，这与FU注射液的体内过程短、清除率高等特点吻合；药物主要分布于肝、脾等组织中，说明FU原药与大多数药物的体内吸收机制相似，即网状内皮系统吞噬对FU的组织摄取仍起主要作用。两组DMF脂质体注射剂的生物分布总量显著大于FU注射液，证明脂质体化改造提高了氟尿嘧啶的生物利用度；在无外磁场干预时，DMF脂质体在网状内皮系统丰富的肝、脾等器官的分布优势明显，显示了脂质体的被动靶向特性；但外加磁场（右肾外侧）干预，显著降低了肝中的药物蓄积，心、脾、肺的药物分布略有降低，但两肾的药物含量升高、而右肾明显高于左肾，证明磁场干预能降低DMF脂质体对网状内皮系统的被动靶向程度，增大了使药物逃逸肝脏网状内皮系统吞噬的能力，使药物的组织分布在趋向均衡的同时、富集至磁靶向部位。统计结果显示，脂质DMF无磁组、脂质DMF加磁组与FU注射液两两比较时，心、肺组织的药物含量无显著差异（P>0.05），DMF无磁组与FU注射液的肝、脾分布有显著差异（P<0.01）；DMF加磁与DMF无磁组的肝部分布有显著差异（P<0.01）；DMF无磁组与DMF加磁组左右肾中的药物含量均明显高于FU注射液，且存在显著差异（P<0.01），DMF无磁组与DMF加磁组右肾的药物分布也有显著差异（P<0.01），药物在右肾（磁靶向部位）的分布量高于左肾。上述实验证明，本发明所制备的DMF脂质体在外磁场干预下具有理想的磁靶向效果，能有效降低药物对非靶向组织的毒副作用；能延长DMF的体内滞留时间，提高生物利用度。

图5给出磁性固态DMF脂质体的水溶液经血管给药、在心脏部位加磁干预前后家免血浆浓度的变化及其与商用FU注射剂药动学曲线对比。结果显示，按相同的剂量静脉给药后，脂质DMF的血管内瞬时脉冲峰浓度在8.04～8.16μg.mL^-1之间，仅为商用FU注射剂的（65.28μg·mL^-1）1/8，1h后血药浓度回落至窗口浓度附近、并平稳维持至48h末，54h时降低至最低浓度0.86μg·mL^-1；相对普通注射剂而言，脂质DMF表现了非常理想的体内控释特性，能将血浆药物浓度长时间、平稳地维持在治疗窗口范围，瞬时脉冲引起的毒副作用微弱。从微观上看，DMF脂质体的药时曲线还反映了DMF给药系统特殊的多级释放特征——无磁场干预时，脂质DMF在0.5～54h区间出现两次药峰过程，瞬时脉冲后第一次药峰出现在3h时，峰浓度2.77μg·mL^-1，20h时出现第二次弱峰、峰浓度1.61μg·mL^-1。外磁场干预影响了DMF峰浓度出现的时间，加磁组中第一个药峰出现的时间推迟至6h（峰浓度4.42μg·mL^-1），第二次弱峰推迟至24h（峰浓度1.24μg·mL^-1）。外磁场干预能影响药物的生物分布，无磁组的DMF首先被各组织（尤其是肝、脾）的网状内皮系统吞噬，而加磁干预时DMF首先将药物富集、滞留至加磁部位（心脏），然后随血液持续流动、逐渐被各组织消除，导致药峰时间推迟。脂质DMF的药时曲线（双峰与峰时推迟现象）表明，DMF能在血液系统中维持较长时间的、平稳的、较高的药物浓度，消除过程缓慢，对维持药物疗效有积极意义。表1给出的药动学参数比较显示，脂质DMF（加磁组）、脂质DMF（无磁组）的AUC_0-t分别为76.81、70.27mg·L^-1·h^-1，分别是FU注射液的3.08和2.82倍，即DMF脂质体显著提高了氟尿嘧啶的生物利用度，而且加磁干预的效果更显著。从药物的体内滞留时间看，加磁组、无磁DMF脂质体与FU注射液的体内半衰期分别为21、52和9h，MRT分别为18.36、22.20和1.50h，体内清除率CL依次为0.12、0.07和0.23L·h^-1·kg^-1，DMF脂质体显著延长了氟尿嘧啶的体内过程、降低了清除速率；外磁场对心脏的干预，加快了DMF在心肌组织中的聚集速度，心脏泵血功能反过来加速了DMF的体内循环，相对无磁组而言也使药物代谢加快，因此，体内留滞时间变短、清除率增高。加磁、无磁DMF脂质体与FU注射液的表观分布容积V分别为2.88、4.5和2.87L·kg，均低于5L，表明药物大部分分布在血浆中，但相对而言，无磁干预时DMF脂质体与组织大分子的结合程度较高。以上实验结果证明，DMF脂质体能维持平稳、长期、接近治疗窗口的血药浓度水平，显著提高药物的生物利用度、延缓体内消除过程，对心脏加磁干预能提升药物的血浆分布比例、降低组织留滞、进一步提高利用度，并使后期的血药浓度更趋平稳，这对维持长时段的靶向化疗有重要意义。

表1DMF脂质体及FU注射剂的药动学参数

Claims

1.一种磁性固态“右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶”脂质体，其特征在于该脂质体是以右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶为载药体，以大豆卵磷脂、胆固醇为原料，用薄膜分散法或乙醇注入法合成右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶液相脂质体，然后加入其体积的1%-5%甘露醇，混合均匀后冷冻升华所得，

上述各物质配比为：

右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶载药体 3 – 60 mg，

大豆卵磷脂 30 – 420 mg，

胆固醇 10 – 140 mg，

氯仿或乙醇 10 mL – 30 mL，

双蒸水 10 mL – 30 mL；

所述右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶载药体为氟尿嘧啶含量在20 - 40%之间的磁性粉末，采用共沉淀插层-原位复合-溶剂转换法合成。

2.按权利要求1所述的磁性固态“右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶”脂质体，其特征在于所述脂质体加工原料的理想配比为：

右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶载药体 6 – 60 mg，

大豆卵磷脂 30 – 300 mg，

胆固醇 10 – 100 mg，

氯仿或乙醇 15 mL，

双蒸水 30 mL。

3.按权利要求1所述磁性固态“右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶”脂质体，其特征在于所述薄膜分散法的工艺步骤为：

1）首先将右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶载药体研磨成粉，过120目筛网，加入双蒸水，后置于超声水浴上超声分散10 – 20 min，制成均匀的水悬液；

2）将大豆卵磷脂和胆固醇加入到氯仿中溶解均匀，后转移至旋转蒸发仪，在30 – 60℃水浴条件下减压旋转蒸发1h，挥干氯仿，制成干燥的磷脂薄膜；

3）先用少量氯仿溶解磷脂薄膜，再用右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶水悬液加以分散，然后转移到旋转蒸发仪上，在40 – 60℃水浴条件下旋转蒸发2 h，除去氯仿，得到右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶脂质体水浊液；

4）采用超声细胞粉碎仪对右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶脂质体水浊液进行整粒、匀化。

4.按权利要求1所述磁性固态“右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶”脂质体，其特征在于所述乙醇注入法结合甘露醇冷冻升华的工艺步骤为：

2）将大豆卵磷脂和胆固醇加入到乙醇中溶解均匀，得到脂醇溶液；

3）将右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶水悬液转移至30 – 60℃恒温水浴中加热，在磁搅拌状态下，用注射器将磷脂醇溶液注入右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶水悬液中，然后在搅拌状态下原位蒸发2 – 3 h，当蒸发量略大于乙醇加入量时，停止蒸发，制得右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶脂质体的水溶液；

4）采用超声细胞粉碎仪对右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶脂质体溶液进行整粒、匀化。

5.按照权利要求3或4所述的磁性固态“右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶”脂质体，其特征在于所述超声功率80-90W。

6.按照权利要求3或4所述的磁性固态“右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶”脂质体，其特征在于所述超声细胞粉碎仪处理时，设置间歇7s、工作5s，处理时长5 min。