CN102846562B - 一种半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒，由原料和辅料制成，原料为冬凌草甲素，辅料为半乳糖基化白蛋白、交联剂、冻干保护剂和水，其中，原料与辅料的用量配比如下：以10ml纳米粒制剂计，冬凌草甲素2.0mg～40.0mg，半乳糖基化白蛋白50.0～400.0mg，交联剂0.4～8.4mg，冻干保护剂0或0.1～0.5g，余量为水。本发明的半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒，生物相容性好，做成注射用纳米粒溶液有利于增加药物的生物利用度，减小给药剂量，降低毒副作用，可以达到改变药物体内分布、延长药物作用时间、提高生物利用度等目的。制备方法简单易行，适于大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒及其制备方法。
背景技术
肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，发病率和病死率有上升趋势。据统计，全球每年新发病的恶性肿瘤约635万，其中原发性肝癌30万，占4.7％。我国大陆和台湾都是肝癌的高发地区，肝癌年发病人数逾13万人，占全世界肝癌年死亡人数的43.7％。因此寻求高效的方法治疗肝癌变得更加急迫。目前临床上的治疗一般是手术、放疗、化疗，但由于肝癌起病隐匿，恶性程度高，发展变化快，患者在患病初期往往觉察不到，等到就诊时往往已进入中晚期，失去了最佳手术时机。因此，在肝癌的临床治疗中广泛应用的是化学药物疗法，大多数化疗药物虽可抑制肿瘤细胞过度增生，但其毒副作用大，对正常细胞组织也有很强的杀伤作用。为此，需要寻求有效的方法将治疗药物分子直接输送到肿瘤细胞内，提高药物靶向性，大幅度提高药物对局部肿瘤脏器的治疗效果。
纳米给药系统作为一种新型的抗肿瘤药物输送系统，已成为当今药剂学的热点研究领域，抗癌药物可通过吸附、溶解、键合等作用包裹于天然或合成的载体材料中，形成粒度在纳米数量级的固态胶体微粒。由于恶性肿瘤细胞具有较强的吞噬能力，肿瘤组织的血管通透性也较大，且肿瘤的血管壁对纳米粒具有一定生物粘附性，因此静脉途径给予的纳米粒易在肿瘤组织聚集，从而表现出对肿瘤细胞很强的杀伤作用。研究己证实，纳米粒可通过被动扩散和弥散作用渗透进入肿瘤的脉管系统，并最终浓集于肿瘤细胞内。此外，纳米粒注射进入血循环后，往往会与血浆蛋白或糖蛋白等多种成分结合，进而作为异物被网状内皮系统(MPS)吞噬，从而靶向分布于吞噬细胞丰富的肝、脾、肺和淋巴等组织中，有助于药物对这些组织内肿瘤疾病的治疗。另外由于其自身具有很高的表面积和体积比例，纳米粒可以被修饰配体分子用于主动靶向。提高制备纳米粒的载体材料有很多，其中白蛋白以无毒、无抗原性、可生物降解等优点引起了很多学者的注意。白蛋白纳米粒载药系统可以通过控制粒径靶向于肝和肺，也可以通过表面修饰或加入磁性物质靶向于其他的病变器官，或达到缓控释的效果。由美国Abraxis BioScience Inc.开发的紫杉醇人血清白蛋白纳米粒注射剂获得FDA批准上市，成为首个白蛋白纳米粒给药系统的成功案例。
随着中药现代研究的不断深入，中药在治疗肝癌方面因其独特的优势而被临床广泛采纳，其在治疗局部的同时，重视全身治疗，能够改善和提高病人的生活质量，延长生命周期，并且副作用小。冬凌草甲素就是其中的一个典型药物。
冬凌草甲素（Oridonin，ORI）为唇形科香茶菜属植物冬凌草（Rabdosia rubescens）的主要抗癌有效成分，分子中与环外亚甲基共轭的环戊酮结构是其抗癌活性中心，结构式如下：
冬凌草甲素属四环二萜类化合物，分子式C20H28O6，分子量364，为无色棱柱状结晶，熔点248-250℃，味道极苦，不溶于水，溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、醋酸乙酯、1,2丙二醇和二甲基亚砜等有机溶剂。冬凌草甲素属于贝壳杉烯型二萜,它具有与肉瘤毒素相类似的抗癌活性中心α-亚甲基环戊酮。如果环外双键变成饱和键或裂环,则抗癌活性消失,因此也认为具有双功能,烷化烯酮O=C-C=CH2系统则有抗癌活性。
体外研究表明ORI抗癌谱较广，可通过多种途径诱导癌细胞凋亡，对人肝癌BEL-7402细胞，非小细胞肺癌组织NCI-H520、NCI-H460、NCI-H1299，人白血病HL-60细胞，食管癌CaES-17细胞及结肠癌HCT8细胞等均有明显细胞毒作用，临床上也显示了一定疗效。但由于冬凌草甲素水溶性差，体内生物半衰期短，单纯以有机溶剂和表面活性剂溶解冬凌草甲素的注射液长期静脉滴注宜引起血管发炎、疼痛等副作用，从而限制了冬凌草甲素注射液的应用。因此需要寻求新的制剂以克服这些问题。目前有关制剂的抗癌疗效尚不理想，因此需要寻求新的制剂以克服其水溶性差带来的制剂问题。
对肝癌患者而言，最理想的靶向制剂应使药物进入肝癌细胞，直接对癌细胞发挥作用，而对正常的肝组织无影响。白蛋白载药有被动靶向的作用，研究表明白蛋白易被网状内皮系统吞噬而被动靶向于肝、肾、骨髓等器官。对白蛋白表面具有活性的氨基进行化学修饰，再偶联特异性抗体或配体，可达到主动靶向的目的。
去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor ASGP-R)是哺乳动物肝实质细胞特有的一种高效内吞受体，专一性识别、结合并内吞循环血液中一些末端带有半乳糖基的糖蛋白，并使其在肝细胞内进行代谢。如将半乳糖残基偶联到白蛋白纳米粒的表面，形成半乳糖化的白蛋白纳米粒，可具有主动与被动双重靶向性，实现更高程度的药物靶向。
综上，将冬凌草甲素制成半乳糖介导的白蛋白纳米粒，预期可以达到毒副作用小、体系稳定、可增加药物的生物利用度、药物作用靶向性增强等目的。现有技术中并未见有关于将冬凌草甲素制成半乳糖介导的白蛋白纳米粒的报道。在现有技术中缺乏相关报道的情况下，研制出一种具有疗效好、生物相容性好、生物利用度高、体系稳定、适用于大规模工业生产、成本低等优点的冬凌草甲素半乳糖介导的白蛋白纳米粒及制备方法是很困难的，需要付出创造性劳动，需要进行大量的试验和条件筛选。
发明内容
针对上述现有技术，针对冬凌草甲素水溶性差、生物利用度低的临床应用局限性，本发明提供了一种冬凌草甲素的新剂型：半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒，该制剂可以增加冬凌草甲素的生物利用度，提高对肝癌的靶向治疗作用，毒副作用小、体系稳定。本发明还提供了该冬凌草甲素纳米粒的制备方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒，由原料和辅料制成，原料为冬凌草甲素，辅料为半乳糖基化白蛋白、交联剂、冻干保护剂和水，其中，原料与辅料的用量配比如下：以10ml纳米粒制剂计，冬凌草甲素2.0mg～40.0mg，半乳糖基化白蛋白50.0～400.0mg，交联剂0.4～8.4mg，冻干保护剂0或0.1～0.5g，余量为水。
优选的，所述原料与辅料的用量配比如下：以10ml纳米粒制剂计，冬凌草甲素4.0mg～20.0mg，半乳糖基化白蛋白50.0～300.0mg，交联剂0.6～6.3mg，冻干保护剂0.15～0.5g，余量为水。
所述半乳糖基化白蛋白是由乳糖酸（Lactobionic acid，LA）与牛血清白蛋白或人血清白蛋白在一定条件下反应而得，反应所需催化剂为EDAC（碳二亚胺盐酸盐）和NHS（N-羟基丁二酰胺），所需pH调节剂为TMEA（N,N,N’,N’-四甲基乙二胺）。
具体的，是通过以下方法制备得到的：将乳糖酸溶于含有EDAC和NHS的蒸馏水中，用TMEA调pH至4～5，活化0.5h后用NaOH溶液调pH至中性，然后加入牛血清白蛋白或人血清白蛋白，500r/min搅拌反应48h，得含半乳糖基化白蛋白的溶液，将该溶液在透析袋中透析2天，每天换三次水，透析后进行冷冻干燥，即得半乳糖基化白蛋白。
所述制备半乳糖基化白蛋白时，各组分的用量关系如下：乳糖酸：EDAC：NHS：牛血清白蛋白或人血清白蛋白=0.03～0.3g：0.03～0.3g：0.015～0.15g：0.02～0.2g。
所述冷冻干燥的具体步骤为：将透析后的溶液按照2mL/瓶分装至西林瓶，迅速放入超低温冰箱，在-80℃温度下冷冻24小时，再取出迅速放入温度已降至-50℃的冻干机搁板上，盖上真空罩，开启真空泵开关，冻干48小时后，取出，即得半乳糖基化白蛋白。
所述交联剂选自甲醛、戊二醛、2，3-丁二酮或苯酰氯中的任一种或任意两种以上的组合，优选戊二醛。
所述冻干保护剂选自乳糖、葡萄糖、甘露醇、蔗糖、海藻糖、右旋糖苷、山梨醇中的任一种或任意两种以上的组合，优选甘露醇。
所述半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒的制备方法，步骤如下：
（1）将冬凌草甲素加入到乙醇中，在超声下使冬凌草甲素溶解，得到冬凌草甲素乙醇溶液；
（2）将半乳糖基化白蛋白溶于注射用水中，并用NaOH溶液调节pH至8～9，逐滴加入冬凌草甲素乙醇溶液，在磁力搅拌作用下，匀速滴加无水乙醇至出现纳米乳光，然后加入交联剂化学交联24h，在真空条件下旋转蒸发除去乙醇，得冬凌草甲素纳米粒胶体溶液；
（3）冬凌草甲素纳米粒胶体溶液于低温高速离心机离心，弃去上清（上清中含有未反应的交联剂、游离的冬凌草甲素和半乳糖基化白蛋白），得下层的纳米粒；
（4）纳米粒用蒸馏水重分散，加入冻干保护剂冻干，即得半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒。
所述步骤（1）中，每2.0mg～40.0mg冬凌草甲素溶于1.5～4.0ml乙醇中。
所述步骤（2）中，每50.0～400.0mg半乳糖基化白蛋白溶于10ml注射用水中。
所述步骤（2）中，匀速滴加无水乙醇的速度为0.75～1.25ml/min。
所述步骤（2）中，在真空条件下旋转蒸发是指：在35～50℃下真空旋转蒸发10～30min。
所述步骤（3）中，冬凌草甲素纳米粒胶体溶液于低温高速离心机离心的具体步骤是：在15℃、20000r/min的条件下离心15min，弃去上清再加蒸馏水洗涤离心两次，离心条件同上，弃去上清，得纳米粒。
本发明的半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒的制备方法，采用的是去溶剂化-化学交联法，它是先将药物溶于乙醇中，然后在磁力搅拌作用下将其滴入含有半乳糖基化白蛋白的水相中，使得半乳糖基化白蛋白脱水缩聚形成纳米粒，并采用化学交联法使纳米粒交联固化，最后在真空条件下蒸去有机溶剂，离心重分散得到纳米粒。
本发明所制备得到的半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒，在具体应用时，可以制成注射剂应用，毒副作用小，体系稳定。本发明为了提高冬凌草甲素的口服生物利用度以及制备注射用冬凌草甲素，以增加疗效和拓展临床应用，采用了去溶剂化-化学交联法制备了半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒。本发明所使用的白蛋白无毒、无抗原性、可生物降解，具备良好的生物相容性。本发明通过工艺优化和处方筛选，选择适当的搅拌速度，合适的pH值，调节适宜的滴加无水乙醇的速度，成功地制备出了粒径大小可以控制的半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒。本发明的方法制备得到的半乳糖介导的冬凌草甲素纳米粒溶液在透射电镜下观察为类球形的实体粒子，粒径在100～200nm之间。
本发明的半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒，生物相容性好，做成注射用纳米粒溶液有利于增加药物的生物利用度，减小给药剂量，降低毒副作用，可以达到改变药物体内分布、延长药物作用时间、提高生物利用度等目的。制备方法简单易行，适于大规模生产。
附图说明
图1：半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒的透射电镜照片。
图2：半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒的粒径分布图，横坐标：粒径（Diameter，单位nm），纵坐标：百分率（Cumulative Intensity，％）。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1：制备半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒
步骤如下：
将0.12g乳糖酸溶于含有0.12g EDAC和0.06g NHS的蒸馏水中，用TMEA调pH至4.5，活化0.5h后用NaOH溶液调pH至7，然后加入0.08g牛血清白蛋白，500r/min搅拌48h，所得溶液在透析袋中透析2天，每天换三次水，然后进行冷冻干燥（将透析后的溶液按照2mL/瓶分装至西林瓶，迅速放入超低温冰箱，在-80℃温度下冷冻24小时，再取出迅速放入温度已降至-50℃的冻干机搁板上，盖上真空罩，开启真空泵开关，冻干48小时后，取出），得半乳糖基化白蛋白。
称取6.0mg冬凌草甲素加入到1.5ml乙醇中，在超声下使冬凌草甲素溶解。将75.0mg半乳糖基化白蛋白溶于5ml注射用水中，并用NaOH溶液调节pH至9，逐滴加入冬凌草甲素乙醇溶液，在500rpm磁力搅拌作用下，以0.75ml/min的速度滴加无水乙醇至出现纳米乳光，然后加入戊二醛0.7mg化学交联24h；交联后，在40℃、真空条件下旋转蒸发20min，除去乙醇，得冬凌草甲素纳米粒胶体溶液。在转速为20000r/min（15℃）的条件下离心15min，弃去上清，并重复再用蒸馏水洗涤离心两次，弃去上清得纳米粒，纳米粒用5ml蒸馏水涡旋5min，得5ml半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒溶液，加入150mg甘露醇作为冻干保护剂冻干，即得半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒。
取冬凌草甲素白蛋白纳米粒，稀释到一定倍数，透射电镜下观察，如图1所示；粒径分布图如图2所示，从图中可以看出，粒径绝大多数在100～200nm之间，均一性好。
实施例2：制备半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒
步骤如下：
将0.15g乳糖酸溶于含有0.15g EDAC和0.75g NHS的蒸馏水中，用TMEA调pH至4，活化0.5h后用NaOH溶液调pH至7，然后加入0.1g牛血清白蛋白，500r/min搅拌48h，所得溶液在透析袋中透析2天，每天换三次水，然后进行冷冻干燥，得半乳糖基化白蛋白。
称取6.0mg冬凌草甲素加入到2.0ml乙醇中，在超声下使冬凌草甲素溶解。将100.0mg半乳糖基化白蛋白溶于10ml注射用水中，并用NaOH溶液调节pH至9，逐滴加入冬凌草甲素乙醇溶液，在600rpm磁力搅拌作用下，以0.75ml/min的速度滴加无水乙醇至出现纳米乳光，然后加入戊二醛1.2mg化学交联24h；交联后，在40℃、真空条件下旋转蒸发20min，除去乙醇，得冬凌草甲素纳米粒胶体溶液。在转速为20000r/min（15℃）的条件下离心15min，弃去上清，并重复再用蒸馏水洗涤离心两次，弃去上清，得纳米粒。将纳米粒用10ml蒸馏水涡旋5min，得10ml半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒溶液，加入300mg甘露醇作为冻干保护剂冻干，即得半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒。
实施例3：制备半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒
步骤如下：
将0.12g乳糖酸溶于含有0.12g EDAC和0.06g NHS的蒸馏水中，用TMEA调pH至5，活化0.5h后用NaOH溶液调pH至7，然后加入0.08g牛血清白蛋白，500r/min搅拌48h，所得溶液在透析袋中透析2天，每天换三次水，然后进行冷冻干燥，得半乳糖基化白蛋白。
称取8.0mg冬凌草甲素加入到2.0ml乙醇中，在超声下使冬凌草甲素溶解。将75.0mg半乳糖基化白蛋白溶于5ml注射用水中，并用NaOH溶液调节pH至9，逐滴加入冬凌草甲素乙醇溶液，在500rpm磁力搅拌作用下，以0.75ml/min的速度滴加无水乙醇至出现纳米乳光，并加入戊二醛1.4mg化学交联24h；交联后，在40℃、真空条件下旋转蒸发20min，除去乙醇，得冬凌草甲素纳米粒胶体溶液。在转速为20000r/min（15℃）的条件下离心15min，弃去上清，并重复再用蒸馏水洗涤离心两次，弃去上清，得纳米粒。将离心所得纳米粒用5ml蒸馏水涡旋5min，得5ml半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒溶液，加入250mg甘露醇作为冻干保护剂冻干，即得半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒。
实施例4：制备半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒
步骤如下：
将0.22g乳糖酸溶于含有0.22g EDAC和0.11g NHS的蒸馏水中，用TMEA调pH至4.5，活化0.5h后用NaOH溶液调pH至7，然后加入0.15g牛血清白蛋白，500r/min搅拌48h，所得溶液在透析袋中透析2天，每天换三次水，然后进行冷冻干燥，得半乳糖基化白蛋白。
称取8.0mg冬凌草甲素加入到3.0ml乙醇中，在超声下使冬凌草甲素溶解。将150.0mg半乳糖基化白蛋白溶于10ml注射用水中，并用NaOH溶液调节pH至9，逐滴加入冬凌草甲素乙醇溶液，在600rpm磁力搅拌作用下，以1.25ml/min的速度滴加无水乙醇至出现纳米乳光，并加入戊二醛2.8mg化学交联24h。交联后，在40℃、真空条件下旋转蒸发20min，除去乙醇，得冬凌草甲素纳米粒胶体溶液。在转速为20000r/min（15℃）的条件下离心15min，弃去上清，并重复再用蒸馏水洗涤离心两次，弃去上清得纳米粒。将离心所得纳米粒用10ml蒸馏水涡旋5min，得10ml半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒溶液，加入300mg甘露醇作为冻干保护剂冻干，即得半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒。
实施例5：制备半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒
步骤如下：
将0.24g乳糖酸溶于含有0.24g EDAC和0.12g NHS的蒸馏水中，用TMEA调pH至4.5，活化0.5h后用NaOH溶液调pH至7，然后加入0.16g牛血清白蛋白，500r/min搅拌48h，所得溶液在透析袋中透析2天，每天换三次水，然后进行冷冻干燥，得半乳糖基化白蛋白。
称取10.0mg冬凌草甲素加入到4.0ml乙醇中，在超声下使冬凌草甲素溶解。将150.0mg半乳糖基化白蛋白溶于10ml注射用水中，并用NaOH溶液调节pH至9，逐滴加入冬凌草甲素乙醇溶液，在600rpm磁力搅拌作用下，以1.25ml/min的速度滴加无水乙醇至出现纳米乳光，并加入戊二醛3.2mg化学交联24h。交联后，在40℃、真空条件下旋转蒸发20min，除去乙醇，得冬凌草甲素纳米粒胶体溶液。在转速为20000r/min（15℃）的条件下离心15min，弃去上清，并重复再用蒸馏水洗涤离心两次，弃去上清，得纳米粒。将离心所得纳米粒用10ml蒸馏水涡旋5min，得10ml半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒溶液，加入500mg甘露醇作为冻干保护剂冻干，即得半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒。
实施例6：制备半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒
步骤如下：
将0.18g乳糖酸溶于含有0.18g EDAC和0.09g NHS的蒸馏水中，用TMEA调pH至4.5，活化0.5h后用NaOH溶液调pH至7，然后加入0.12g牛血清白蛋白，500r/min搅拌48h，所得溶液在透析袋中透析2天，每天换三次水，然后进行冷冻干燥，得半乳糖基化白蛋白。
称取10.0mg冬凌草甲素加入到2.0ml乙醇中，在超声下使冬凌草甲素溶解。将100.0mg半乳糖基化白蛋白溶于5ml注射用水中，并用NaOH溶液调节pH至9，逐滴加入冬凌草甲素乙醇溶液，在500rpm磁力搅拌作用下，以0.75ml/min的速度滴加无水乙醇至出现纳米乳光，并加入戊二醛2.1mg化学交联24h。交联后，在40℃、真空条件下旋转蒸发20min，除去乙醇，得冬凌草甲素纳米粒胶体溶液。在转速为20000r/min（15℃）的条件下离心15min，弃去上清，并重复再用蒸馏水洗涤离心两次，弃去上清，得纳米粒。将离心所得纳米粒用5ml蒸馏水涡旋5min，得5ml半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒溶液，加入250mg甘露醇作为冻干保护剂冻干，即得半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒。
Claims (2)
1.一种半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒，其特征在于：是通过以下方法制备得到的：
将0.12g乳糖酸溶于含有0.12g EDAC和0.06g NHS的蒸馏水中，用TMEA调pH至4.5，活化0.5h后用NaOH溶液调pH至7，然后加入0.08g牛血清白蛋白，500r/min搅拌48h，所得溶液在透析袋中透析2天，每天换三次水，然后进行冷冻干燥，得半乳糖基化白蛋白；
所述冷冻干燥具体为：将透析后的溶液按照2mL/瓶分装至西林瓶，迅速放入超低温冰箱，在-80℃温度下冷冻24小时，再取出迅速放入温度已降至-50℃的冻干机搁板上，盖上真空罩，开启真空泵开关，冻干48小时后，取出；
称取6.0mg冬凌草甲素加入到1.5ml乙醇中，在超声下使冬凌草甲素溶解；将75.0mg半乳糖基化白蛋白溶于5ml注射用水中，并用NaOH溶液调节pH至9，逐滴加入冬凌草甲素乙醇溶液，在500rpm磁力搅拌作用下，以0.75ml/min的速度滴加无水乙醇至出现纳米乳光，然后加入戊二醛0.7mg化学交联24h；交联后，在40℃、真空条件下旋转蒸发20min，除去乙醇，得冬凌草甲素纳米粒胶体溶液；在15℃、转速为20000r/min的条件下离心15min，弃去上清，并重复再用蒸馏水洗涤离心两次，弃去上清得纳米粒，纳米粒用5ml蒸馏水涡旋5min，得5ml半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒溶液，加入150mg甘露醇作为冻干保护剂冻干，即得半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒。
2.权利要求1所述的一种半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于：步骤如下：
将0.12g乳糖酸溶于含有0.12g EDAC和0.06g NHS的蒸馏水中，用TMEA调pH至4.5，活化0.5h后用NaOH溶液调pH至7，然后加入0.08g牛血清白蛋白，500r/min搅拌48h，所得溶液在透析袋中透析2天，每天换三次水，然后进行冷冻干燥，得半乳糖基化白蛋白；
称取6.0mg冬凌草甲素加入到1.5ml乙醇中，在超声下使冬凌草甲素溶解；将75.0mg半乳糖基化白蛋白溶于5ml注射用水中，并用NaOH溶液调节pH至9，逐滴加入冬凌草甲素乙醇溶液，在500rpm磁力搅拌作用下，以0.75ml/min的速度滴加无水乙醇至出现纳米乳光，然后加入戊二醛0.7mg化学交联24h；交联后，在40℃、真空条件下旋转蒸发20min，除去乙醇，得冬凌草甲素纳米粒胶体溶液；在转速为20000r/min的条件下离心15min，弃去上清，并重复再用蒸馏水洗涤离心两次，弃去上清得纳米粒，纳米粒用5ml蒸馏水涡旋5min，得5ml半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒溶液，加入150mg甘露醇作为冻干保护剂冻干，即得半乳糖介导的冬凌草甲素白蛋白纳米粒。
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