CN103341211A - 一种制备ⅰ/ⅱ胶原双层复合胶原膜的方法 - Google Patents
一种制备ⅰ/ⅱ胶原双层复合胶原膜的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103341211A CN103341211A CN201310234061XA CN201310234061A CN103341211A CN 103341211 A CN103341211 A CN 103341211A CN 201310234061X A CN201310234061X A CN 201310234061XA CN 201310234061 A CN201310234061 A CN 201310234061A CN 103341211 A CN103341211 A CN 103341211A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- collagen
- type
- ultra
- film
- pure water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Prostheses (AREA)
Abstract
本发明涉及一种I/II型双层复合胶原膜的制备方法，以及利用该方法制备的I/II型双层复合胶原膜。第一步：提取I型胶原蛋白，制备I型胶原膜；第二步：提取II型胶原蛋白，制备II型胶原膜；第三步：将I型胶原膜作为底层，II型胶原膜作为顶层，通过交联形成I/II型双层复合胶原膜。本发明的I/II型双层复合胶原膜为软骨细胞提供良好的生长环境，具有良好的软骨修复效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种I/II型双层复合胶原膜的制备方法，以及利用该方法制备的I/II型双层复合胶原膜。
背景技术
骨关节炎、运动损伤、剥脱性骨软骨炎等多种原因可导致关节软骨损伤。关节软骨自身没有血供、淋巴引流、神经分布，是高度分化的组织，成熟的软骨组织分裂能力非常有限，一旦损伤很难修复。因此如何解决关节软骨修复问题变得日益重要。目前常用的治疗方法有关节镜清理术、关节软骨钻孔折及自体或异体骨一软骨移植，但临床效果不够理想，均不能实现透明软骨修复。随着组织工程技术和材料与分子生物学的发展及应用于临床，人们在关节软骨损伤修复的实验研究方面取得了许多重大进步，尤其是基于细胞和材料组织工程技术的发展，为损伤关节软骨的修复重建提供了新的治疗方法。
在软骨修复组织工程技术领域，目前以生物支架为支持材料、自体或异体软骨细胞提供缺损的软骨细胞修复细胞基础。生物材料中提供细胞生长的胶原膜或支架需要具备三维孔洞结构和良好的机械性能，将有利于细胞进行必要的物质代谢。目前胶原膜的制备过程中，胶原膜的孔径和孔隙率是关键。研究显示软骨组织工程支架材料的孔径大小在90～120μm范围内，最适合于诱导软骨细胞生长。作为移植物除了要求应具备良好的组织相容性，还应该具有高度的多孔性，孔径至少应在50μm以上，孔隙率在70～90％[1]，特别是广泛存在的大的交通孔有利于骨、软骨细胞和基质形成[2]。
基质诱导的自体软骨细胞移植术(MACI Matrix-induced AutologolusChondrocytes Implantation)，是用于修复由外伤或运动损伤等因素导致的关节软骨缺损。MACI技术是一种将自体软骨细胞扩增培养后，种植于纯化的、可吸收的I/III型猪衍生胶原膜上。该方法是目前国内、外报道的最先进的技术，并已经应用于临床治疗关节软骨损伤。该技术所用的复合胶原膜是基于I/III型胶原基础。
正常关节软骨细胞包绕在以II型胶原蛋白为主要成分的细胞外基质中，该细胞外基质中不含III型胶原。基于这一点考虑，本发明用II型胶原替代III型胶原。设计的复合双层胶原膜不仅包括了一般胶原膜的优点，同时也具有自身的特点：复合双层结构中，底层为高度致密、光滑、均匀的I型胶原膜，该层经过脱水后完全失去水分，镜下无孔径存在，起到防止细胞流失，为细胞在II型胶原膜中生长提供良好的环境，减少外界的干扰，缓解II型胶原膜降解时间；顶层为高浓度II型胶原膜层，表面呈白色、粗糙、海绵样结构，镜下孔径致密，分布较均匀，为软骨细胞提供良好的生长环境；I型、II型双层胶原膜之间经过化学交联，使它们结合紧密，坚固牢靠无空隙；双层复合的胶原膜延缓了降解时间，尤其是I型胶原膜层高度致密，本身具有较强抵抗胶原酶酶解作用。
发明内容
本发明目的在于利用高浓度的I型、II型胶原蛋白，制备I/II型双层复合胶原膜，使其在冻干后形成的三维孔径小、致密，更有利于软骨细胞的生长，为其提供更好的生长空间，促进细胞增殖传代。
本发明提供一种制备I/II胶原双层复合胶原膜的方法，包括：
(一)I型胶原膜的制备：
(1)将牛跟腱用超纯水清洗3次，修剪去除杂质，清洗，95％的乙醇浸泡组织10min，超纯水清洗5次；
(2)将步骤(1)的牛跟腱用组织剪捣碎，浸泡在0.05mol/L乙酸中10min；
(3)牛跟腱在乙酸中溶胀，成透明果冻状，匀浆，4℃操作；
(4)将步骤(3)的牛跟腱放入烧杯中，加入0.05mol/L乙酸和胃蛋白酶，4℃搅拌72h进行酶解；
(5)将步骤(4)的酶解液于15000r/m，30min离心，收集上清液，调整pH值至中性，4℃操作；
(6)将步骤(5)的溶液于12000r/m，30min离心，收集沉淀的胶原，超纯水透析，4h更换一次超纯水，透析36h，然后冻干形成I型胶原，4℃冷藏备用；
(7)称取步骤(6)的I型胶原，溶于0.05mol/L乙酸，4℃搅拌24h，过滤胶原溶液，放入4℃医用冰箱静止24h，等待大量气泡挥发；
(8)将I型胶原溶液倒入培养皿中，放入超净台中脱水，形成I型胶原膜；
(二)II型胶原膜的制备：
(1)超净台中用手术刀剔取猪膝关节中透明的关节软骨，超纯水冲洗5次，95％的乙醇浸泡组织脱脂10min，超纯水冲洗5次；
(2)称取步骤(1)的关节软骨，粉碎组织放入10倍体积4M的盐酸胍(pH7.5)，搅拌24h，4℃操作；
(3)将步骤(2)的溶液搅拌过滤，留取滤液，15000r/m，30min离心，留取上清液，NaOH调整pH值至中性，4℃操作；
(4)将步骤(3)的上清液于12000r/m，30min离心，收集沉淀组织，用超纯水透析，4h更换一次超纯水，透析36h；
(5)向透析后的沉淀组织加入10倍体积的0.05mol/L乙酸和胃蛋白酶进行酶解，4℃搅拌72h；
(6)将步骤(5)的溶液过滤，收集滤液，15000r/m，30min离心，留取上清液用NaOH溶液调整pH值至中性，4℃静置24h；
(7)将步骤(6)的上清液于12000r/m，30min离心，收集胶原沉淀，用超纯水透析，4h更换一次超纯水，透析36h，冻干形成II型胶原，干燥4℃冷藏备用；
(8)称取制备好的II型胶原膜1000mg，溶于0.05mol/L乙酸，4℃搅拌24h，待胶原溶液完全溶解后，用100目滤网过滤胶原溶液；
(9)用NaOH溶液调整胶原溶液pH值至中性，13000r/m，10min离心，倒出上清液继续低温高速离心，14000r/m，10min，然后倒出上清液，继续低温高速离心，15000r/m，10min，收集三次离心的上清液，计算II型胶原浓度，取出胶原沉淀平铺在培养皿中，冻干形成II型胶原膜，干燥4℃冷藏备用；
(三)I/II型双层复合胶原膜的制备：
(1)将上述制备的II型胶原膜平铺在培养皿中的I型胶原膜上，厚度约为2mm，放入冰箱-20℃预冻4h，-80℃再次冷冻24h，冻干机冻干；
(2)将0.05mol/L MES、0.033mol/L EDC和0.02mol/L NHS溶于95％乙醇溶液，配制交联剂，用交联剂浸泡I/II型双层复合胶原膜，放入立式恒温振荡器于室温下交联24h；
(3)取出步骤(2)的胶原膜，室温下继续交联24h，超纯水冲洗；
(4)-20℃预冻4h，-80℃再次冷冻24h，冻干机冻干，形成I/II型双层复合胶原膜。
本发明还提供利用上述方法制备的I/II型双层复合胶原膜。
相对于现有技术，本发明的优点在于：
(1)正常关节软骨细胞包绕在以II型胶原蛋白为主要成分的细胞外基质中，本发明的I/II型双层复合胶原膜更符合天然状态，修复效果更好。
(2)本发明的复合胶原膜顶层为高浓度的II型胶原膜层孔径致密，分布较均匀，为软骨细胞提供良好的生长环境。
附图说明
图1：I、II型胶原蛋白的最大紫外光吸收波长
图2：脱水后的I型胶原
图3：I/II型双层复合胶原膜成品
图4：双层复合胶原膜复合结构
图5：12周后双层复合胶原膜修复缺损大体效果
图6：12周后双层复合胶原膜修复缺损大体效果
图7：12周后双层复合胶原膜修复缺损的组织学
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明做进一步的详细说明，但本发明的实现方式并不局限于此。
实施例1
制备I/II胶原双层复合胶原膜的方法，包括：
(一)I型胶原膜的制备：
(1)将牛跟腱10g用超纯水清洗3次，修剪去除杂质，清洗，95％的乙醇浸泡组织10min，超纯水清洗5次；
(2)将步骤(1)的牛跟腱用组织剪捣碎，浸泡在0.05mol/L乙酸中10min；
(3)牛跟腱在乙酸中溶胀，成透明果冻状，匀浆，4℃操作；
(4)将步骤(3)的牛跟腱放入烧杯中，加入400ml 0.05mol/L乙酸和200mg胃蛋白酶，4℃搅拌72h进行酶解；
(5)将步骤(4)的酶解液于15000r/m，30min离心，收集上清液，调整pH值至中性，4℃操作；
(6)将步骤(5)的溶液于12000r/m，30min离心，收集沉淀的胶原，超纯水透析，4h更换一次超纯水，透析36h，然后冻干形成I型胶原，4℃冷藏备用；
(7)称取步骤(6)的I型胶原，溶于100ml 0.05mol/L乙酸，4℃搅拌24h，过滤胶原溶液，放入4℃医用冰箱静止24h，等待大量气泡挥发；
(8)将I型胶原溶液倒入培养皿中，放入超净台中脱水，形成I型胶原膜；
(二)II型胶原膜的制备：
(1)超净台中用手术刀剔取猪膝关节中透明的关节软骨，超纯水冲洗5次，95％的乙醇浸泡组织脱脂10min，超纯水冲洗5次；
(2)称取步骤(1)的关节软骨10g，粉碎组织放入10倍体积4M的盐酸胍(pH7.5)，磁力搅拌器搅拌24h，4℃操作；
(3)将步骤(2)的溶液搅拌过滤，留取滤液，15000r/m，30min离心，留取上清液，NaOH调整pH值至中性，4℃操作；
(4)将步骤(3)的上清液于12000r/m，30min离心，收集沉淀组织，用超纯水透析，4h更换一次超纯水，透析36h；
(5)向透析后的沉淀组织加入10倍体积的0.05mol/L乙酸和200mg胃蛋白酶进行酶解，磁力搅拌器4℃搅拌72h；
(6)将步骤(5)的溶液过滤，收集滤液，15000r/m，30min离心，留取上清液用NaOH调整pH值至中性，4℃静置24h；
(7)将步骤(6)的上清液于12000r/m，30min离心，收集胶原沉淀，用超纯水透析，4h更换一次超纯水，透析36h，将液态的胶原沉淀置于冻干机中，冻干形成II型胶原，干燥4℃冷藏备用；
(8)称取制备好的II型胶原膜1000mg，溶于100ml0.05mol/L乙酸，4℃搅拌24h，待胶原溶液完全溶解后，用100目滤网过滤胶原溶液；
(9)观察胶原溶液为均一、透明胶状的粘稠液体，NaOH调整胶原溶液pH值至中性，13000r/m，10min离心，倒出上清液继续低温高速离心机离心，14000r/m，10min，倒出上清液低温高速离心机离心，15000r/m，10min，收集三次离心的上清液，约为70ml，计算得出II型胶原浓度为33mg/mL，取出胶原沉淀平铺在培养皿中，放入冻干机，冻干形成II型胶原膜，干燥4℃冷藏备用；
(三)I/II型双层复合胶原膜的制备：
(1)将上述制备的II型胶原膜平铺在培养皿中的I型胶原膜上，厚度约为2mm，放入冰箱-20℃预冻4h，-80℃再次冷冻24h，冻干机冻干；
(2)将0.05mol/L MES、0.033mol/LEDC和0.02mol/L NHS溶于95％乙醇溶液，配制交联剂，用交联剂浸泡I/II型双层复合胶原膜，放入立式恒温振荡器于室温下交联24h；
(3)取出步骤(2)的胶原膜，室温下继续交联24h，超纯水冲洗；
(4)-20℃预冻4h，-80℃再次冷冻24h，冻干机冻干，形成I/II型双层复合胶原膜。
实验结果分析
1、I/II型双层复合胶原膜结构中，底层为高度致密、光滑、均匀的I型胶原膜，镜下无孔径存在；顶层为高浓度II型胶原膜层，表面呈白色、粗糙、海绵样结构，镜下孔径致密，分布较均匀，为软骨细胞提供良好的生长环境；I型、II型双层胶原膜之间经过化学交联，使它们结合紧密，坚固牢靠无空隙；双层复合的胶原膜延缓了降解时间，尤其是I型胶原膜层高度致密，本身具有较强抵抗胶原酶酶解作用。
2、复合胶原膜已经做了初步的理化性质的检测和修复动物软骨缺损实验
(1)、复合胶原膜抗拉强度可达到5.25×106帕斯卡。复合胶原蛋白生物支架这种材料可以满足引导组织再生支架作用的要求。(表1)
表1抗拉强度检测
n＝12，v≈14，t＝2.893，0.01＜P＜0.02，可初步判断两种胶原膜抗拉强度的影响有差异，I/II型复合胶原膜抵抗力强于I型胶原膜。
(2)、酸碱度检测符合体内植入物酸碱度要求。(表2)
表2材料pH值
差值小于1.5，符合体内植入物酸碱度要求，n＝6
(3)、平均溶胀率＝94.8％。(表3)
表3材料溶胀率
(4)、复合材料在20周时仍可以保持完整的膜状结构。
(5)、经过超微量分光光度计(Picdrop Application系统软件)测定I型胶原蛋白的最大紫外光吸收波长在226.5nm左右，形成一个波峰；II型胶原蛋白紫外最大吸收峰在233.8nm，左右形成一个较高的波峰，与文献报道的II型胶原蛋白紫外最大吸收峰值相符(见图1)。
(6)细胞毒性
参照细胞培养手册培养软骨细胞，并按照MTT操作方法按1x104细胞铺在96孔板内培养过夜，次日，吸净培养基后，加入100ul如上试验样品，设置实验组、阳性对照组，阴性对照组，孵育48小时测定细胞数，按照细胞毒性＝(实验组-阴性组)/(阳性组-阴性组)×100％，对照组采用DMEM/F12培养基，试验结果如下：
表4细胞毒性试验结果(100％)
由表4可以看出，实验组1，2，3细胞毒性均在0级(≥80％)，表明本发明胶原蛋白膜无细胞毒性。
3、我们已经通过这种胶原膜进行了兔膝关节的软骨修复并获得了非常好的修复疗效(见图2-7)。
参考文献：
1 Melton JT，Wilson AJ，Chapman-Sheath P，et al.TruFit CB boneplug：chondral repair，scaffold design，surgical technique and earlyexperiences.Expert Rev Med Devices.2010；7(3)：333-341.
2 Verma D，Katti KS，Katti DR.Osteoblast adhesion，proliferationand growth on polyelectrolyte complex-hydroxyapatitenanocomposites.Philos Transact A Math Phys Eng Sci.2010；368(1917)：2083-2097.
Claims (2)
1.一种制备I/II胶原双层复合胶原膜的方法，包括：
(一)I型胶原膜的制备：
(1)将牛跟腱用超纯水清洗3次，修剪去除杂质，清洗，95％的乙醇浸泡组织10min，超纯水清洗5次；
(2)将步骤(1)的牛跟腱用组织剪捣碎，浸泡在0.05mol/L乙酸中10min；
(3)牛跟腱在乙酸中溶胀，成透明果冻状，匀浆，4℃操作；
(4)将步骤(3)的牛跟腱放入烧杯中，加入0.05mol/L乙酸和胃蛋白酶，4℃搅拌72h进行酶解；
(5)将步骤(4)的酶解液于15000r/m，30min离心，收集上清液，调整pH值至中性，4℃操作；
(6)将步骤(5)的溶液于12000r/m，30min离心，收集沉淀的胶原，超纯水透析，4h更换一次超纯水，透析36h，然后冻干形成I型胶原，4℃冷藏备用；
(7)称取步骤(6)的I型胶原，溶于0.05mol/L乙酸，4℃搅拌24h，过滤胶原溶液，放入4℃医用冰箱静止24h，等待大量气泡挥发；
(8)将I型胶原溶液倒入培养皿中，放入超净台中脱水，形成I型胶原膜；
(二)II型胶原膜的制备：
(1)超净台中用手术刀剔取猪膝关节中透明的关节软骨，超纯水冲洗5次，95％的乙醇浸泡组织脱脂10min，超纯水冲洗5次；
(2)称取步骤(1)的关节软骨，粉碎组织放入10倍体积4M的盐酸胍(pH7.5)，搅拌24h，4℃操作；
(3)将步骤(2)的溶液搅拌过滤，留取滤液，15000r/m，30min离心，留取上清液，NaOH调整pH值至中性，4℃操作；
(4)将步骤(3)的上清液于12000r/m，30min离心，收集沉淀组织，用超纯水透析，4h更换一次超纯水，透析36h；
(5)向透析后的沉淀组织加入10倍体积的0.05mol/L乙酸和胃蛋白酶进行酶解，4℃搅拌72h；
(6)将步骤(5)的溶液过滤，收集滤液，15000r/m，30min离心，留取上清液用NaOH溶液调整pH值至中性，4℃静置24h；
(7)将步骤(6)的上清液于12000r/m，30min离心，收集胶原沉淀，用超纯水透析，4h更换一次超纯水，透析36h，冻干形成II型胶原，干燥4℃冷藏备用；
(8)称取制备好的II型胶原膜1000mg，溶于0.05mol/L乙酸，4℃搅拌24h，待胶原溶液完全溶解后，用100目滤网过滤胶原溶液；
(9)用NaOH溶液调整胶原溶液pH值至中性，13000r/m，10min离心，倒出上清液继续低温高速离心，14000r/m，10min，然后倒出上清液，继续低温高速离心，15000r/m，10min，收集三次离心的上清液，计算II型胶原浓度，取出胶原沉淀平铺在培养皿中，冻干形成II型胶原膜，干燥4℃冷藏备用；
(三)I/II型双层复合胶原膜的制备：
(1)将上述制备的II型胶原膜平铺在培养皿中的I型胶原膜上，厚度约为2mm，放入冰箱-20℃预冻4h，一80℃再次冷冻24h，冻干机冻干；
(2)将0.05mol/L MES、0.033mol/L EDC和0.02mol/L NHS溶于95％乙醇溶液，配制交联剂，用交联剂浸泡I/II型双层复合胶原膜，放入立式恒温振荡器于室温下交联24h；
(3)取出步骤(2)的胶原膜，室温下继续交联24h，超纯水冲洗；
(4)-20℃预冻4h，-80℃再次冷冻24h，冻干机冻干，形成I/II型双层复合胶原膜。
2.根据权利要求1的方法制备的I/II型双层复合胶原膜。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310234061.XA CN103341211B (zh) | 2013-06-14 | 2013-06-14 | 一种制备ⅰ/ⅱ胶原双层复合胶原膜的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310234061.XA CN103341211B (zh) | 2013-06-14 | 2013-06-14 | 一种制备ⅰ/ⅱ胶原双层复合胶原膜的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103341211A true CN103341211A (zh) | 2013-10-09 |
| CN103341211B CN103341211B (zh) | 2014-10-29 |
Family
ID=49276069
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310234061.XA Active CN103341211B (zh) | 2013-06-14 | 2013-06-14 | 一种制备ⅰ/ⅱ胶原双层复合胶原膜的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103341211B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104490760A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-04-08 | 广东医学院 | 辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法及其应用 |
| CN105255983A (zh) * | 2015-11-30 | 2016-01-20 | 江南大学 | 一种胶原蛋白的提取工艺 |
| CN105381504A (zh) * | 2015-11-17 | 2016-03-09 | 浙江星月生物科技股份有限公司 | 一种胶原基软骨支架 |
| CN109289088A (zh) * | 2018-10-26 | 2019-02-01 | 福州大学 | 一种负载鸡血藤的ⅰ型/ⅲ型胶原复合支架 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1280509A (zh) * | 1997-10-10 | 2001-01-17 | 埃德盖斯特利希索恩化学工业股份公司 | 导引组织再生的薄膜 |
| CN1795933A (zh) * | 2004-12-24 | 2006-07-05 | 于海鹰 | 肌腱、韧带防粘连生物膜的制备及应用 |
| EP1709981A1 (en) * | 2001-04-27 | 2006-10-11 | Ed. Geistlich Söhne Ag Für Chemische Industrie | Collagen containing membranes for use in mucosa regeneration |
| CN101264337A (zh) * | 2008-05-15 | 2008-09-17 | 四川大学 | 一种胶原基生物医用材料的制备方法 |
-
2013
- 2013-06-14 CN CN201310234061.XA patent/CN103341211B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1280509A (zh) * | 1997-10-10 | 2001-01-17 | 埃德盖斯特利希索恩化学工业股份公司 | 导引组织再生的薄膜 |
| EP1709981A1 (en) * | 2001-04-27 | 2006-10-11 | Ed. Geistlich Söhne Ag Für Chemische Industrie | Collagen containing membranes for use in mucosa regeneration |
| CN1795933A (zh) * | 2004-12-24 | 2006-07-05 | 于海鹰 | 肌腱、韧带防粘连生物膜的制备及应用 |
| CN101264337A (zh) * | 2008-05-15 | 2008-09-17 | 四川大学 | 一种胶原基生物医用材料的制备方法 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104490760A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-04-08 | 广东医学院 | 辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法及其应用 |
| CN105381504A (zh) * | 2015-11-17 | 2016-03-09 | 浙江星月生物科技股份有限公司 | 一种胶原基软骨支架 |
| CN105255983A (zh) * | 2015-11-30 | 2016-01-20 | 江南大学 | 一种胶原蛋白的提取工艺 |
| CN109289088A (zh) * | 2018-10-26 | 2019-02-01 | 福州大学 | 一种负载鸡血藤的ⅰ型/ⅲ型胶原复合支架 |
| CN109289088B (zh) * | 2018-10-26 | 2021-04-27 | 福州大学 | 一种负载鸡血藤的ⅰ型/ⅲ型胶原复合支架 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103341211B (zh) | 2014-10-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101816806B (zh) | 一种组织工程骨软骨复合体及其制备方法 | |
| CN102238970B (zh) | 利用动物组织粉末制造多孔立体支架的方法及其多孔立体支架 | |
| US6933326B1 (en) | Particulate acellular tissue matrix | |
| Sharma et al. | Efficacy of supermacroporous poly (ethylene glycol)–gelatin cryogel matrix for soft tissue engineering applications | |
| CN113398332B (zh) | 一种含干细胞外泌体的3d仿生生物支架及应用 | |
| CN103341211B (zh) | 一种制备ⅰ/ⅱ胶原双层复合胶原膜的方法 | |
| CN101890184B (zh) | 一种软骨源性胶原海绵支架及其制备方法 | |
| CN101385870B (zh) | 一种改良去细胞组织工程瓣膜/血管支架的方法 | |
| CN102552981A (zh) | 一种组织工程骨/软骨一体支架的制备方法 | |
| CN101979105A (zh) | 一种用于软骨缺损修复的组织工程支架材料及其制备方法 | |
| CN101862475A (zh) | 一种ⅱ型胶原透明质酸复合海绵支架及其用途 | |
| CN102293688B (zh) | 一种蚕丝支架及其制备与应用 | |
| CN104056304B (zh) | 负载生长因子壳聚糖微球的dbm支架修复关节软骨材料 | |
| CN102631706B (zh) | 低免疫原性猪真皮支架的制备方法 | |
| CN106668950A (zh) | 一种可用于中枢神经修复的丝素三维支架 | |
| ITMI20092073A1 (it) | Materiali bio-mimetici compositi, relativo processo di preparazione e loro uso per la realizzazione di strutture mono-, bi- o multi-strato per la rigenerazione di tessuto osseo, cartilagineo o osteocartilagineo | |
| CN110237301A (zh) | 一种海藻酸钠基可诱导骨修复凝胶及其制备方法和应用 | |
| CN108245708A (zh) | 一种诱导肌腱组织再生的生物活性支架及其制备方法和用途 | |
| CN112870445A (zh) | 一种软组织修复材料的制备方法及应用 | |
| CN106178107A (zh) | 一种蚕丝/胶原复合支架及其制备与应用 | |
| CN101822851B (zh) | 一种制备组织工程骨软骨支架的方法 | |
| CN114984320B (zh) | 一种脱细胞基质组织纸的制备方法及应用 | |
| CN106924814A (zh) | 一种猪源胶原膜‑自体软骨细胞复合支架的构建方法 | |
| CN106075594A (zh) | 一种热致相分离纳米纤维管状支架及其制备方法 | |
| CN108144122A (zh) | 一种基于豆腐的组织工程3d支架及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Liu Aibing Document name: Notification to Pay the Fees |