CN103333859A - 建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法，将小鼠自发乳腺癌瘤块分割成体积为0.7mm3—1.9mm3接种瘤块，瘤块接种于无肿瘤的小鼠前肢腋窝皮下，常规条件下饲养，正常繁殖9—21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。该模型将小鼠自发乳腺癌瘤块分割成体积较小的接种瘤块直接接种在实验小鼠的前肢腋窝皮下，整个模型建立工序简单，没有过高的实验环境要求，而且成瘤率高、成瘤时间短，可以满足对研究需求。
Description
技术领域
本发明涉及一种癌细胞原位模型建立的方法，特别涉及建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法。
背景技术
乳腺癌是女性排名第一的常见恶性肿瘤，由于该肿瘤疾病的研究不能直接在肿瘤患者体内进行，但可借助实验动物来完成，一般是通过C3H小鼠进行活体动物实验（C3H小鼠与免疫缺陷小鼠相比并不具有免疫缺陷）。
实验动物肿瘤模型是抗肿瘤药物实验必不可缺的一个工具。目前用于肿瘤研究的动物模型有三种：移植肿瘤原位模型、自发肿瘤模型和诱发肿瘤模型，后两种肿瘤模型成瘤速率慢，周期长，难于在短时间内获得大量肿瘤模型，故较少被用于抗肿瘤药物的筛选实验。
目前，移植肿瘤原位模型因易于定量、接种时间的限制很难有效控制实验所需要的肿瘤模型成瘤速率、周期和动物各种品系间难以克服的移植排斥反应、所以急需一种能满足大量可复制的移植肿瘤原位模型建立方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种成瘤率高、成瘤时间短、费用低的建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法。
为解决上述技术问题，本发明提供了建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法，包括以下步骤：
a）在无菌条件下切取小鼠自发乳腺癌瘤块，用无菌的缓冲液清洗3—4遍；
b）将瘤块分割成体积为0.7mm3—1.9mm3接种瘤块；
c）瘤块接种于无肿瘤的小鼠前肢腋窝皮下；
d）常规条件下饲养，正常繁殖9—21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。
此方法中的缓冲液为磷酸盐缓冲液，含磷酸二氢钾(KH2PO4）：0.24g/L，磷酸氢二钠(Na2HPO4）：1.440g/L，氯化钠(NaCl）：8.006g/L，氯化钾(KCl）：0.201g/L，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，定容到1L，最后高温高压灭菌后室温保存。
采用这种方法，该模型将小鼠自发乳腺癌瘤块分割成体积较小的接种瘤块直接接种在实验小鼠的前肢腋窝皮下，模拟了乳腺癌细胞在小鼠体内生长过程，整个模型建立工序简单，没有过高的实验环境要求，而且成瘤率发生率达85％—100％，成瘤时间短，因此可以广泛被采用在研究乳腺癌治疗的实验中。
具体实施方式
下面结合具体实施方式来介绍本发明的建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法。
首先选择近交系C3H小鼠，雌性，6周龄，重量16—22g，常规条件下饲养，包括通风、洁净、恒温、自由进食、饮水，并保证正常繁殖。
再C3H小鼠在饲养10个月后，有雌鼠前肢腋下出现肿块并逐渐增大，经病理学检查证实为自发性乳腺癌。将该小鼠自发乳腺癌瘤块作为瘤源进行同种属C3H移植接种。
配制磷酸盐缓冲液，含磷酸二氢钾(KH2PO4）：0.24g/L，磷酸氢二钠(Na2HPO4）：1.440g/L，氯化钠(NaCl）：8.006g/L，氯化钾(KCl）：0.201g/L，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，定容到1L，最后高温高压灭菌后室温保存。
将相同寿命在4—5周正常生长的140只C3H小鼠分为A、B、C、D、E、F、G七组，每组小鼠的数量为20只。
实施例一
按以下步骤建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型：
a）在无菌条件下切取小鼠自发乳腺癌瘤块，用无菌的磷酸盐缓冲液清洗3遍；
b）将瘤块分割成体积为0.7mm3接种瘤块；
c）选取A组的20只C3H小鼠，在小鼠前肢腋窝剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下，瘤块接种于小鼠前肢腋窝皮下；
d）常规条件下饲养，正常繁殖21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。
经过上述步骤A组的20只小鼠接种植后７—９天后，其中17只小鼠接种局部肿瘤结节形成，９—21天中其中17只小鼠瘤体生长速度较快，瘤体体积开始增大，小鼠的成瘤率为85%。
实施例二
按以下步骤建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型：
a）在无菌条件下切取小鼠自发乳腺癌瘤块，用无菌的磷酸盐缓冲液清洗4遍；
b）将瘤块分割成体积为0.9mm3接种瘤块；
c）选取B组的20只C3H小鼠，在小鼠前肢腋窝剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下，瘤块接种于小鼠前肢腋窝皮下；
d）常规条件下饲养，正常繁殖21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。
经过上述步骤B组的20只小鼠接种植后７—９天后，其中18只小鼠接种局部肿瘤结节形成，９—21天中其中18只小鼠瘤体生长速度较快，瘤体体积开始增大，小鼠的成瘤率为90%。
实施例三
按以下步骤建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型：
a）在无菌条件下切取小鼠自发乳腺癌瘤块，用无菌的磷酸盐缓冲液清洗3遍；
b）将瘤块分割成体积为1.1mm3接种瘤块；
c）选取C组的20只C3H小鼠，在小鼠前肢腋窝剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下，瘤块接种于小鼠前肢腋窝皮下；
d）常规条件下饲养，正常繁殖21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。
经过上述步骤C组的20只小鼠接种植后７—９天后，其中19只小鼠接种局部肿瘤结节形成，９—21天中其中19只小鼠瘤体生长速度较快，瘤体体积开始增大，小鼠的成瘤率为95%。
实施例四
按以下步骤建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型：
a）在无菌条件下切取小鼠自发乳腺癌瘤块，用无菌的磷酸盐缓冲液清洗4遍；
b）将瘤块分割成体积为1.5mm3接种瘤块；
c）选取D组的20只C3H小鼠，在小鼠前肢腋窝剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下，瘤块接种于小鼠前肢腋窝皮下；
d）常规条件下饲养，正常繁殖21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。
经过上述步骤D组的20只小鼠接种植后７—９天后，其中20只小鼠接种局部肿瘤结节形成，９—21天中其中20只小鼠瘤体生长速度较快，瘤体体积开始增大，小鼠的成瘤率为100%，上述1.5mm3接种瘤块大小成瘤为100%，而且瘤体在小鼠体内生长更为快速稳定。
实施例五
按以下步骤建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型：
a）在无菌条件下切取小鼠自发乳腺癌瘤块，用无菌的磷酸盐缓冲液清洗4遍；
b）将瘤块分割成体积为1.9mm3接种瘤块；
c）选取E组的20只C3H小鼠，在小鼠前肢腋窝剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下，瘤块接种于小鼠前肢腋窝皮下；
d）常规条件下饲养，正常繁殖21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。
经过上述步骤E组的20只小鼠接种植后７—９天后，其中19只小鼠接种局部肿瘤结节形成，余下的一只小鼠在12天时，形成肿瘤结节，９—21天中20只小鼠瘤体生长速度较快，瘤体体积开始增大，小鼠的成瘤率为100%。
实施例六
按以下步骤建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型：
a）在无菌条件下切取小鼠自发乳腺癌瘤块，用无菌的磷酸盐缓冲液清洗4遍；
b）将瘤块分割成体积为0.5mm3接种瘤块；
c）选取F组的20只C3H小鼠，在小鼠前肢腋窝剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下，瘤块接种于小鼠前肢腋窝皮下；
d）常规条件下饲养，正常繁殖21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。
经过上述步骤F组的20只小鼠接种植后７—９天后，其中10只小鼠接种局部肿瘤结节形成，９—21天中其中10只小鼠瘤体生长速度较快，瘤体体积开始增大，小鼠的成瘤率为50%，其接种成瘤率并没有预想的效果。
实施例七
按以下步骤建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型：
a）在无菌条件下切取小鼠自发乳腺癌瘤块，用无菌的磷酸盐缓冲液清洗4遍；
b）将瘤块分割成体积为0.8mm3接种瘤块；
c）选取G组的20只C3H小鼠，在小鼠前肢腋窝剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下，瘤块接种于小鼠前肢腋窝皮下；
d）常规条件下饲养，正常繁殖21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。
经过上述步骤G组的20只小鼠接种植后７—９天后，其中16只小鼠接种局部肿瘤结节形成，９—21天中其中16只小鼠瘤体生长速度较快，瘤体体积开始增大，小鼠的成瘤率为80%。
通过上述实验的结果，乳腺癌肿瘤组织块原位模型发生率达85％—100％，而且移植后的C3H小鼠的存活时间适宜，取肿瘤生长良好鼠，颈椎脱臼处死，局部检查见肿瘤表面有完整的包膜，瘤体呈黄白色，大体解剖检查见肿瘤与周围组织轻度粘连，无淋巴结及其他脏器转移，癌组织内间质少，实质多，可以满足实验需求。
建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型会满足研究乳腺癌原位模型的需求，加速对乳腺癌病灶的攻克。
Claims (2)
1.建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法，包括以下步骤：
a）在无菌条件下切取小鼠自发乳腺癌瘤块，用无菌的缓冲液清洗3—4遍；
b）将瘤块分割成体积为0.7mm3—1.9mm3接种瘤块；
c）瘤块接种于无肿瘤的小鼠前肢腋窝皮下；
d）常规条件下饲养，正常繁殖9—21天，完成建立小鼠可移植乳腺癌原位模型。
2.根据权利要求1所述的建立小鼠可移植乳腺癌肿瘤组织块原位模型的方法，其特殊在于：所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液，含磷酸二氢钾(KH2PO4）：0.24g/L，磷酸氢二钠(Na2HPO4）：1.440g/L，氯化钠(NaCl）：8.006g/L，氯化钾(KCl）：0.201g/L，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，定容到1L，最后高温高压灭菌后室温保存。
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| CN110680555A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-01-14 | 重庆医药高等专科学校 | 一种裸鼠皮下成瘤装置 |
| CN114403095A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-04-29 | 山西医科大学 | 一种小鼠乳腺癌自发性淋巴结转移模型的建模方法 |
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110680555A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-01-14 | 重庆医药高等专科学校 | 一种裸鼠皮下成瘤装置 |
| CN110680555B (zh) * | 2019-11-12 | 2021-06-01 | 重庆医药高等专科学校 | 一种裸鼠皮下成瘤装置 |
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