CN103333152A

CN103333152A - 抗菌新化合物荆三棱酚ⅰ及其制备方法

Info

Publication number: CN103333152A
Application number: CN2012102342447A
Authority: CN
Inventors: 梁侨丽; 雷玲玲; 崔晓东; 邹娜姝; 吴启南
Original assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Current assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Priority date: 2012-07-09
Filing date: 2012-07-09
Publication date: 2013-10-02
Anticipated expiration: 2032-07-09
Also published as: CN103333152B

Abstract

本发明涉及抗菌新化合物荆三棱酚I(sciryagarrolI)及其制备方法，属医药技术领域。荆三棱酚I为新顺式茋类化合物，结构如下式。它可以从莎草科藨草属植物荆三棱(Scirpus yagara)的干燥块茎中提取制备，即用80％乙醇提取，减压浓缩，再分别以石油醚，乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取部分反复用硅胶柱层析纯化，石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱得到纯品。荆三棱酚I对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌具有一定的抗菌作用。

Description

抗菌新化合物荆三棱酚Ⅰ及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说是涉及一种从荆三棱中分离到的具有抗菌活性的茋类新化合物荆三棱酚I(sparstolenin I)以及该化合物的制备方法。

背景技术

荆三棱(Scirpus yagara Ohwi＝S.maritimus或S.fluviatilis)为莎草科藨草属植物，其多生于池沼及水沟中，主要产于我国东北各省、江苏、浙江、贵州、台湾，另外朝鲜、日本也有分布。荆三棱作为三棱品种使用一千多年，其干燥块茎在唐代就作为中药三棱使用，是三棱最早使用的品种。三棱性平、味苦，入肝、脾经，具有破血行气、消积止痛功能，多用于月经不调，积聚结块等病症，是临床常用的活血化瘀中药。荆三棱的化学成分已知有茋类、黄酮类、三萜类等[张铁军等.荆三棱化学成分研究(I).现代药物与临床，2009，24(1)：36-37；康昆等.荆三棱化学成分的研究.天然产物研究与开发，2008，20：639-649.]。茋类化合物是一类以二苯乙烯为结构母核的化合物总称，根据乙烯基的顺反结构不同可以分为顺式茋类和反式茋类。目前从荆三棱中分离到的茋类都属反式茋类化合物，有白藜芦醇(resveratrol)、白皮杉醇(piceatannol)、荆三棱素A(scirpusinA)、荆三棱素B(scirpusinB)和ε-葡萄素(ε-viniferin)，但顺式茋类化合物未见报道。杨国勋等从荆三棱提取物中得到含scirpusin A和B的活性部位，该活性部位对病毒尤其是HIV病毒具有明显的抑制作用，起效浓度为0.82ug/ml，是单体化合物scirpusinA和B的十倍[杨国勋等。荆三棱在制备治疗艾滋病药物中的用途，专利号：200710038592]。Run Li等发现荆三棱提取物具有抗纤维化作用[Run Li，et al.Therapeutic effectfor anti-fibrosis of the extract from Scirpus yagaraOhwi in hepatic fibrosis rats.ActaPharmacologica Sinica，2006，27增刊，446]。Benu Bajaj等从荆三棱乙醇提取物中分离出白藜芦醇(1)、白皮杉醇(2)、ε-葡萄素(3)、荆三棱素A(4)、荆三棱素B(5)，用不同模型筛选抗肿瘤和昆虫拒食等活性，发现化合物1、2、4、5都具有一定的活性，但2和5的效果更显著。[Benu Bajaj，Jerry L.Mclaughlin.Bioactive stilbenes of Scirpus maritimus[J].Journal of Natural Products，1987，50：293-296]。

茋类化合物具有广泛的药理活性，目前已报道的有抗微生物、抗氧化、降脂、保肝、扩张毛细血管、改善微循环、扩张冠状血管及降压、抗变态反应、抑制血小板凝集和抗肿瘤等作用[王世盛等。天然多羟基茋类化合物的生物活性，国外医药·植物药分册，2001，16(1)，9-11.陈莉等.茋类化合物的药理研究综述。广东药学，2005，15(3)：84-87]。

发明内容

1本发明公开一种从荆三棱块茎中提取分离到新的顺式茋类活性成分荆三棱酚I(sciryagarolI)，其特征在于该成分的化学结构式如下：

荆三棱酚I(sciryagarol I)为淡黄色针晶(石油醚-乙酸乙酯)，熔点135～136℃，分子式为C₁₆H₁₂O₄；UVλ_max(MeOH)：218.6，237.2，287.6，331.2nm；EI-MS(m/z)：268，236，208，180，152，104，7；高分辨电喷雾离子质谱(HRESI-MS)：268.0749[M+H]⁺(cal.268.0735)；IR(KBr)cm^-1：3066，1665(C＝O)，1624(双键)，1591，1492(苯环)，1449，1344，1205，802，756；¹HNMR(500Hz，DMSO-d₆，ppm，J in Hz)δ：9.93(1H，s，2-OH)，6.89(1H，d，J＝9.0Hz，3-H)，7.19(1H，d，J＝9.0Hz，4-H)，6.59(1H，d，J＝11.4Hz，7-H)，6.90(1H，d，J＝11.4Hz，8-H)，7.31(1H，dd，J＝7.5，1.5Hz，13-H)，7.37(1H，td，J＝7.5，1.2Hz，12-H)，7.22(1H，d，J＝7.5，1.2Hz，10-H)，7.17(1H，td，J＝7.5，1.5Hz，11-H)，3.35(3H，s，OCH3)；¹³CNMR(125MHz，DMSO-d₆，ppm)δ：151.3(C-1)，149.4(C-2)，117.1(C-3)，123.1(C-4)，127.4(C-5)，120.1(C-6)，126.2(C-7)，131.6(C-8)，129.8(C-9)，120.8(C-10)，125.1(C-11)，130.4(C-12)，129.3(C-13)，157.1(C-14)，167.1(C-15)，52.2(OCH₃)。进一步通过二维核磁共振技术确证了该化合物的结构及归属其波谱数据。该化合物为顺式茋类结构，Scifinder数据库检索确定其为一个新化合物。

2本发明公开了荆三棱酚I的制备方法，其步骤如下：

取荆三棱(Scirpusyagara)的干燥块茎，粉碎，再用80％乙醇水溶液加热回流提取三次，合并三次提取液，减压浓缩至无醇味，浓缩液加水稀释成混悬液，再分别以石油醚，乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液合并浓缩后，用硅胶柱层析纯化，以石油醚∶乙酸乙酯＝100∶0～8梯度洗脱，薄层层析检查，收集含荆三棱酚A的流分；再经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯＝100∶0～5梯度洗脱，在石油醚-乙酸乙酯/100∶1～2流分中得到荆三棱酚I纯品。3本发明公开荆三棱酚I抗菌活性的研究结果：荆三棱酚I对革兰氏阳性菌：金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)和真菌：白色念珠菌(Canidia albicans)的最小抑菌浓度(MIG值)皆为152ug/ml；对革兰氏阴性菌：大肠杆菌(Escherichia coli)无抑制作用。

具体实施方式

实施例1荆三棱酚I的制备方法

取购自浙江的荆三棱(Scirpusyagara)干燥块茎20Kg，粉碎，用80％乙醇水溶液加热回流提取三次，合并三次提取液，减压浓缩至无醇味，浓缩液加水稀释成混悬液，再分别以石油醚，乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液合并浓缩得浸膏60.9克，将浸膏进行硅胶柱(200～300目)层析，以石油醚∶乙酸乙酯梯度(100∶0，100∶2，100∶4，……，100∶8)洗脱，GF254硅胶薄层层析，紫外检查，收集含荆三棱酚I的流分，合并浓缩后再经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度(100∶0，100∶1，100∶2，……，100∶5)洗脱，在石油醚-乙酸乙酯/100∶1～2流分中析出淡黄色针晶，抽滤，得到荆三棱酚I纯品。

实施例2荆三棱酚I对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的作用

取标准菌株：金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、大肠杆菌(441490)菌株少许，分别接种于营养肉汤培养基中，37℃培养18h。取18h培养的各菌株营养肉汤培养物，用营养肉汤作10^-3稀释用于实验。取白色念珠菌菌株少许，接种于改良马丁培养基中，35℃培养24h。取24h培养的白色念珠菌培养物，用改良马丁培养基10^-3稀释用于实验。用二倍稀释法(试管法)配制样品，即受试药荆三棱酚II配成初浓度为10mg/ml，取0.1ml加5.9ml营养肉汤稀释过滤备用，取灭菌试管8支，第1管加入受试药稀释液1ml，第2-8管各加1ml营养肉汤，分别取受试药稀释液1ml加入第2管中，混匀后取1ml至第3管，依次稀释，第7管吸出1ml弃去，第8管不加药液作为对照。每管加入稀释菌液0.1ml，37℃培养24h。取出观察细菌生长情况。如药液管混浊，即表示细菌生长，供试药物无抑菌作用；如药液管清亮则表示细菌生长受到抑制，其能抑制细菌生长的最大稀释度的药液，即为该药物的最小抑菌浓度(MIC)。取盐酸环丙沙星片(广州白云制药有限公司，规格：0.25g/片批号：1110021，配成0.05g/ml)、制霉素片(浙江震元制药有限公司，规格：50万单位/片批号：101115，配成20万单位/ml)，按上述方法，依次稀释，培养，作阳性对照。其结果为阳性对照药环丙沙星对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC值)分别为15.6和1.59ug/ml；制霉菌素A1对白色念珠菌的MIC值为78.1万单位/L。荆三棱酚I对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的MIC值皆为152ug/ml，对大肠杆菌无抑制作用。

Claims

1.具有如下的结构式化合物荆三棱酚I(sciryagarol I)：

2.一种制备权利要求1所述的化合物的方法，其特征在于取荆三棱(Scirpusyagara)的干燥块茎，粉碎，再用80％乙醇水溶液加热回流提取三次，合并三次提取液，减压浓缩至无醇味，浓缩液加水稀释成混悬液，再分别以石油醚，乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液合并浓缩后，用硅胶柱层析纯化，以石油醚∶乙酸乙酯＝100∶0～8梯度洗脱，薄层层析检查，收集含荆三棱酚I的流分；再经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯＝100∶0～5梯度洗脱，薄层层析检查，得到荆三棱酚I纯品。