CN103323313B - 瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法 - Google Patents

瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103323313B
CN103323313B CN201210095950.8A CN201210095950A CN103323313B CN 103323313 B CN103323313 B CN 103323313B CN 201210095950 A CN201210095950 A CN 201210095950A CN 103323313 B CN103323313 B CN 103323313B
Authority
CN
China
Prior art keywords
dye liquor
buffer
dyeing
basal cell
shi
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201210095950.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103323313A (zh
Inventor
黄伏生
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhan University WHU
Original Assignee
黄伏生
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 黄伏生 filed Critical 黄伏生
Priority to CN201210095950.8A priority Critical patent/CN103323313B/zh
Publication of CN103323313A publication Critical patent/CN103323313A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103323313B publication Critical patent/CN103323313B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法，涉及液基细胞浆膜腔脱落细胞染色方法。其步骤是：(一)配制不同系统染液，配制缓冲液为pH梯度；(二)模拟上机程序在机外进行不同浓度的配套实验，在显微镜下观察各过程的效果，用优选法选择出各试剂的最适染色浓度，再上机测试，直至达到与传统效果一致；(三)优选出最佳染色系统为瑞姬氏染液，在液基细胞仪上制片染色的操作指标；(四)制片沉降时间8-12分钟，缓冲液吸排3次，瑞姬氏染液加缓冲液染色8-12分钟，缓冲液清洗2-4次。本发明具有成本低，其细胞着色效果好，细胞体积基本保持不变，细胞浆和细胞核所着颜色有明显区别，可克服原仪器染色中存在的问题，提高诊断阳性率等优点。

Description

瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法
技术领域
本发明涉及液基细胞浆膜腔脱落细胞染色方法。
背景技术
上世纪初Papanicolaou(1883-1962)发明了巴氏染色，为脱落细胞的检测，临床各类肿瘤疾病早期诊断以及疗效的观察等发挥了不朽的作用。但随作科学技术的发展和人们对医疗需求的不断上升，上述传统脱落细胞的检测技术已经不能满足临床诊断的需要。如上世纪80年代，美国报道大量宫颈涂片诊断为假阴性(2％-5％)的病例，引起了人们的震惊。假阴性诊断使宫颈癌患者延误了最佳治疗时机，给患者造成不可挽回的损失。为此细胞工程专家们通过不断探索，终于在以液体为基础，利用现代薄层技术创立了液基薄层细胞制片技术，该技术被称之为液基细胞学技术，简称TCT(Thin-layercytologytest，Thinprepcytologytest)。1996年液基薄层细胞制片技术获美国食品与药品管理局FDA(FoodandAdministration)认证，主要用于妇科宫颈细胞学检测【123】。近年来人们又在此基础上将这一技术应用延伸到非妇科标本检测。液基细胞学非妇科标本主要有痰液、支气管灌洗液、胸水、腹水、心包液、尿液、各类穿刺液等标本。但根据现有的报道和作者的应用观察，发现这项技术在非妇科标本应用中，其痰液、支气管灌洗液尿液等标本效果较好。但在浆膜腔积液制片染色中与传统手工方法比较，存在细胞体积缩小、染色过深和着色偏碱等问题，使癌细胞与其它非肿瘤细胞难以区别，严重影响诊断结果。
发明内容
本发明提供一种瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法。
本发明解决的技术问题是：液基细胞系统对浆膜腔积液标本仍然采用的是妇科标本的制片染色系统，由于浆膜腔积液细胞与血液细胞类似，细胞结构较疏松，经液基细胞仪巴氏染色的酒精脱水、冲洗等作用，使细胞皱缩而体积缩小，同时液基细胞仪系统所采用的巴氏染色的缓冲液pH较高(8.0)，使浆膜腔积液细胞中显酸性基团增多，易与碱性染料着色，故整个细胞呈蓝紫色。要解决上述问题，必须在液基细胞仪上探索一套新的制片染色系统。
为解决上述问题，本发明采用如下技术方案：瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法，其步骤是：
(一)配制不同系统染液，所述染液为：猩红-固绿染液，甲酚基紫染液，油红染液，瑞氏染液， 姬姆萨染液、Diff快速染液；
配制缓冲液为pH梯度；
(二)模拟上机程序在机外进行不同浓度的配套实验，在显微镜下观察各过程的效果，用优选法选择出各试剂的最适染色浓度，再上机测试，直至达到与传统效果一致；
(三)优选出最佳染色系统为瑞姬氏染液，在液基细胞仪上制片染色的操作指标：离心后标本0.8-1.2ml；预置缓冲液0.8-1.2ml；吸排循环2-4次；
(四)制片沉降时间8-12分钟，瑞姬氏染液加缓冲液染色8-12分钟，缓冲液清洗2-4次。
进一步地，本发明的瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法，还具有如下特点：所述瑞姬氏染液系统成分为：①染液：瑞氏粉0.8-1.2g，姬姆萨粉0.2-0.4g，甘油8-12ml，加甲醇450-550ml；②缓冲液：磷酸二氢钾0.2-0.4g，磷酸氢二钠0.15-0.25g，蒸馏水加至1000ml。
本发明将瑞姬氏染液用于液基细胞仪的浆膜腔积液染色；建立瑞姬氏法在液基细胞仪上制片染色操作各项指标。本发明具有如下优点：采用该方法制片染色比原方法具有成本低，其细胞着色效果好，细胞体积基本保持不变，细胞浆和细胞核所着颜色有明显区别，可克服原仪器染色中存在的问题，提高诊断阳性率的优点。
附图说明
图1是本发明是采用巴氏染色效果比较图(放大1000倍图片)；
图2是本发明是采用瑞氏染色效果比较图(放大1000倍图片)。
具体实施方式
实施例一
本发明采用广州安必平公司生产的LBP液基细胞制片染色仪，该系统的制片染色由电脑全程控制，其参数可根据染色制片的需要进行设置。
瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法，其步骤是：
(一)配制不同系统染液，所述染液为：猩红-固绿染液，甲酚基紫染液，油红染液，瑞氏染液， 姬姆萨染液、Diff快速染液；
配制缓冲液为pH梯度；
(二)模拟上机程序在机外进行不同浓度的配套实验，在显微镜下观察各过程的效果，用优选法选择出各试剂的最适染色浓度，再上机测试，直至达到与传统效果一致；
(三)优选出最佳染色系统为瑞姬氏染液，在液基细胞仪上制片染色的操作指标：离心后标本1.0ml；预置缓冲液1.0ml；吸排循环3次；
(四)制片沉降时间10分钟，瑞姬氏染液加缓冲液染色10分钟，缓冲液清洗3次。
所述瑞姬氏染液系统成分为：①染液：瑞氏粉1.0g，姬姆萨粉0.3g，甘油10ml，加甲醇500ml；②缓冲液：磷酸二氢钾0.3g，磷酸氢二钠0.2g，蒸馏水加至1000ml。
实施例二
方法步骤：
1.取浆膜腔积液50ml离心2000r/5min后，去上清液留沉渣1ml混匀并转入加样管上机备用；
2.仪器设置：加样1.0ml，沉降10min，缓冲液吸排3次，加瑞姬氏染液0.5ml和缓冲液1.0ml，染色10min，缓冲液吸排3次；
3.将载玻片与染色与染色仓装好后启动仪器，仪器将按所设置的程序自动完成制片染色。
实施例三
方法步骤：
1.标本混有血液或血性标本，可在标本离心去上清液后加细胞溶解液3～5ml混匀离心2000r/5min，去上清液留沉渣1ML混匀并转入加样管上机备用；
2.仪器设置：加样1.0ml，沉降10min，缓冲液吸排3次，加瑞姬氏染液0.5ml和缓冲液1.0ml，染色10min，缓冲液吸排3次；
3.将染液、载玻片与染色仓装好后启动仪器，仪器将按所设置的程序自动完成制片染色。
本发明的效果图可参见图1和图2。
本发明参考文献：
1.何梅熊锦梅黄传胜等，沉降式液基细胞学应用于宫颈癌筛查的临床研究，检验与临床2008年8月第46卷第22期。
2.刘建彬邱森灵钟伟娇等，液基细胞学检测在宫颈癌筛查中的应用，实验与检验医学2009年12月27卷第6期。
3.吕军赵世鹏，一种液基细胞学诊断用的细胞处理液，中国专利文献，公开号CN101955982A。
最后应说明的是：显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

Claims (2)

1.瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法，其特征在于，其步骤是：
(一)配制不同系统染液，所述染液为：猩红-固绿染液，甲酚基紫染液，油红染液，瑞氏染液，姬姆萨染液，Diff快速染液；
配制缓冲液为pH梯度；
(二)模拟上机程序在机外进行不同浓度的配套实验，在显微镜下观察各过程的效果，用优选法选择出各试剂的最适染色浓度，再上机测试，直至达到与传统效果一致；
(三)优选出最佳染色系统为瑞姬氏染液，在液基细胞仪上制片染色的操作指标：离心后标本0.8-1.2ml；预置缓冲液0.8-1.2ml；吸排循环2-4次；
(四)制片沉降时间8-12分钟，缓冲液吸排3次，瑞姬氏染液加缓冲液染色8-12分钟，缓冲液清洗2-4次。
2.如权利要求1所述瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法，其特征在于，所述瑞姬氏染液系统成分为：①染液：瑞氏粉0.8-1.2g，姬姆萨粉0.2-0.4g，甘油8-12ml，加甲醇450-550ml；②缓冲液：磷酸二氢钾0.2-0.4g，磷酸氢二钠0.15-0.25g，蒸馏水加至1000ml。
CN201210095950.8A 2012-03-23 2012-03-23 瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法 Expired - Fee Related CN103323313B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210095950.8A CN103323313B (zh) 2012-03-23 2012-03-23 瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210095950.8A CN103323313B (zh) 2012-03-23 2012-03-23 瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103323313A CN103323313A (zh) 2013-09-25
CN103323313B true CN103323313B (zh) 2016-06-29

Family

ID=49192201

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210095950.8A Expired - Fee Related CN103323313B (zh) 2012-03-23 2012-03-23 瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103323313B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103792126B (zh) * 2013-11-20 2016-06-15 重庆市农业科学院 茶尺蠖血细胞的染色液及其染色方法
CN105300772A (zh) * 2015-09-30 2016-02-03 成都华西海圻医药科技有限公司 一种瑞氏-吉姆萨复合染液及其制备方法
CN106053167A (zh) * 2016-05-19 2016-10-26 四川金域医学检验中心有限公司 一种骨髓液涂片的制备方法
CN107664595A (zh) * 2016-07-27 2018-02-06 石家庄晟科生物科技有限公司 高效染色体g显带染色试剂盒
CN107300495A (zh) * 2017-06-15 2017-10-27 托克逊县夏乡畜牧业服务中心 一种梨形虫血涂片复合染液及血涂片的染色方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4983375A (en) * 1989-10-23 1991-01-08 Cambridge Diagnostic Products, Inc. Hematological stain system
CN1987402A (zh) * 2006-09-09 2007-06-27 王晓银 胸腹水、妇科脱落细胞多功能快速染液配制及应用
CN101135616A (zh) * 2007-10-10 2008-03-05 王惠萱 体液生物细胞试管内染色方法
CN101464236A (zh) * 2009-01-09 2009-06-24 孙小蓉 细胞组织染色方法及其染色机
CN101852697A (zh) * 2010-05-26 2010-10-06 福州泰普生物科学有限公司 一种检测脱落细胞的靶向染色试剂盒及其使用方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4983375A (en) * 1989-10-23 1991-01-08 Cambridge Diagnostic Products, Inc. Hematological stain system
CN1987402A (zh) * 2006-09-09 2007-06-27 王晓银 胸腹水、妇科脱落细胞多功能快速染液配制及应用
CN101135616A (zh) * 2007-10-10 2008-03-05 王惠萱 体液生物细胞试管内染色方法
CN101464236A (zh) * 2009-01-09 2009-06-24 孙小蓉 细胞组织染色方法及其染色机
CN101852697A (zh) * 2010-05-26 2010-10-06 福州泰普生物科学有限公司 一种检测脱落细胞的靶向染色试剂盒及其使用方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
173例浆膜腔积液脱落细胞学检查分析;黄培忠;《河南肿瘤学杂志》;20050228;第18卷(第1期);第56-57页 *
胸、腹水脱落细胞病理学在恶性肿瘤诊断研究中的应用;佟凤芝等;《中国现代药物应用》;20081231;第2卷(第23期);第11页右栏第6段 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103323313A (zh) 2013-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103323313B (zh) 瑞氏法用于液基细胞仪的浆膜腔脱落细胞染色方法
Takao et al. Enumeration, characterization, and collection of intact circulating tumor cells by cross contamination‐free flow cytometry
CN107202888B (zh) 一种用于宫颈液基细胞的p16INK4a免疫标记显色试剂盒
CN103149358B (zh) 肺癌组织学分型免疫组化多重染色检测方法
CN106635995A (zh) 一种循环肿瘤细胞阴性富集方法
CN104698191B (zh) Sfta3在肺鳞癌和腺癌病理诊断鉴别中的应用
CN107402296A (zh) 一种循环肿瘤细胞的免疫荧光染色及判读方法
CN105842037B (zh) 一种同时显示肥大细胞与嗜酸性细胞的染色方法
CN105606823B (zh) 晚期乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞pr基因的检测方法
CN103033409B (zh) 改进的组织细胞染色方法及其应用
EP3954997A1 (en) Hexokinase 2 used for detection and test kit for scarce neoplastic cells in body fluid sample
CN103940997A (zh) 一种乳腺癌循环肿瘤细胞检测系统及试剂盒
CN106596938A (zh) 一种循环肿瘤细胞快速检测试剂盒
CN109187977A (zh) 一种检测her2抗原不同位点的免疫荧光试剂盒及应用
CN104745670A (zh) 一种细胞芯片的制备方法及其在肿瘤筛查领域的应用
Fortin et al. Optimizing urothelial cell preparation for the human urinary micronucleus assay
CN104359746A (zh) 细胞团块收集器及收集体液标本中细胞的方法
CN111521795A (zh) 一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1基因突变的试剂盒及检测方法
CN103583508A (zh) 一种液基细胞处理保存液的制备方法及其应用
CN102676456A (zh) 一种胸水分离肺癌细胞的方法
Vitiello et al. Reproducibility of urine sediment examination using different volumes of sample
CN105223058A (zh) 一种乳腺癌细胞的染色方法及其应用和染色试剂盒
CN111596058A (zh) 一种检测胆管癌患者外周血循环肿瘤细胞fgfr基因突变的试剂盒及检测方法
CN111638344A (zh) 检测小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin基因突变的试剂盒及方法
CN111638345A (zh) 检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin基因突变的试剂盒及方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20160802

Address after: 430072 Hubei Province, Wuhan city Wuchang District of Wuhan University Luojiashan

Patentee after: Wuhan University

Address before: 430071 room 4, gate 11, Zhongnan Hospital, Wuhan University, 169 East Lake Road, Wuhan, Hubei,, Wuchang, China

Patentee before: Huang Fusheng

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20160629

Termination date: 20170323