CN103316022A

CN103316022A - 一种由阿司匹林与维生素c组成的防治吸烟导致肺损伤的药物组合物

Info

Publication number: CN103316022A
Application number: CN2013102502474A
Authority: CN
Inventors: 吴铁; 郑志明; 崔燎; 孙金影; 司徒永立; 钟月春; 吕思敏
Original assignee: Guangdong Medical University
Current assignee: Guangdong Medical University
Priority date: 2013-06-09
Filing date: 2013-06-09
Publication date: 2013-09-25

Abstract

本发明涉及用阿司匹林与维生素C组成的药物组合物，该药物组合物制备的复方制剂，对长期吸烟人群造成的肺损伤有较好的预防及治疗作用。研究结果证明，阿司匹林和维生素C以最佳组成比例为1∶2组成的A-C合剂，对长期吸烟导致的小鼠肺组织的病理组织改变有明显的保护作用，肺组织没有炎症细胞的浸润，没有明显的充血和肺泡出血，肺泡形态与正常组接近，SOD活性明显增高，MDA和HYP的含量也明显下降。A-C合剂组的效果比单一用同剂量的阿司匹林或维生素C的对照药组作用更好。本发明提出阿司匹林与维生素C以1∶2的配比组成，可制成多种不同规格的药物片剂，肠溶片剂，胶囊，颗粒剂，冲剂，口服液等，供吸烟者根据吸烟史及肺部损伤程度来选用。

Description

一种由阿司匹林与维生素C组成的防治吸烟导致肺损伤的药物组合物

技术领域本发明涉及用阿司匹林与维生素C组成的药物组合物，该药物组合物制备的复方制剂，对长期吸烟人群造成的肺损伤有较好的预防及治疗作用。

背景技术中国是世界上烟草生产和消费第一大国，目前约有3.5亿吸烟者，并且还在以每年300万人的速度增长，每年都有近百万人死于吸烟相关疾病。香烟中含有有害物质3000多种，致癌物质30余种，公认的癌症尤其是肺癌与香烟毒性密切相关，烟毒从口腔吸入，其中的化学物质滞留在口中，形成异味，同时会刺激口腔粘膜而发生溃疡，甚至癌变；香烟燃烧产生800℃高温，也会烧伤口腔粘膜，并带走口腔中的水份，造成口干、舌燥的感觉。烟焦油沉积于牙龈，刺激牙龈红肿、充血、溃疡。香烟中的化学物质沉积于口腔内，以及由吸烟引起的口腔溃疡，都使得吸烟者口腔形成一种特殊的臭味。烟雾刺激咽喉，发生咽喉肿胀、溃疡，造成咽喉炎；进一步刺激气管、支气管，造成气管炎、支气管炎。香烟中的有毒有害气体及烟尘颗粒沉积于呼吸道，形成痰液，使呼吸道阻塞，造成呼吸困难。痰液中大量的有毒有害物质继续渗透，进入血液，影响人体各器官功能。烟雾中的一氧化碳进入肺泡，会影响肺的运氧功能，进入血液与血红蛋白结合，造成组织和器官缺氧，诱发大脑和心脏等多种器官出现损伤。烟雾中的放射性元素会导致肺泡出现损伤，诱发癌变；此外，苯并蓖是一种强致癌物质，使肺癌的发病率提高。烟焦油中的重金属会使多种酶失活，导致人体机能下降。吸烟产生大量的自由基会破坏细胞功能，并引起DNA损伤、染色体畸变，诱发细胞突变而致癌。吸烟越多，时间越长，毒性对机体危害越大，吸烟患肺癌风险比不吸烟者高7～20倍，香烟对人体神经系统、运动系统和生殖系统的毒害病例屡见不鲜。

有研究表明，吸烟时摄入体内的大量NO和自由基，促使吸烟者体内的NO浓度急剧升高，同时，由于尼古丁可抑制肠道对维生家C的吸收，加速维生家C的排泄，使吸烟者血清和白细胞中维生家C的浓度异常下降，严重破坏了体内的氧化和抗氧化平衡，加速了体内的氧化和过氧化损伤进程，这是吸烟者造成肺部损伤的主要原因。维生素C对肺组织的保护和肺泡的生长修复具有重要的意义，维生素C是通过快速的电子转移而清除水溶性的自由基，从而阻止了脂质氧化反应的发生。阿司匹林是世界范围内广泛使用的和最常用的药物，由于其安全和明确的副作用而被人们用于许多的炎症治疗。在肺组织中，已经有研究报告阿司匹林能抑制由不同的原因引起的急性或慢性肺部炎症，减轻炎症细胞的浸润和氧化应激反应。目前的研究中，维生素C和阿司匹林的单药治疗吸烟导致的肺损伤的研究很多，但是两者联合用药的治疗效果至今没有报道。

发明内容本发明提出用具有强效抗氧化剂维生素C和公认的抗炎药物阿司匹林联合应用，组成减轻烟毒性保护肺功能的药物组合物，这种组合物的特征是由阿司匹林与维生素C的组成比例为1∶0.5～2.5较好，最佳组成比例为1∶2，加上药剂学方面的辅料，制成供临床应用的药物组合物。研究结果证明，阿司匹林和维生素C以最佳组成比例为1∶2组成的“A-C合剂”，对长期吸烟导致的肺组织的病理组织改变有明显的保护作用，病理组织学观察证明，与长期吸烟小鼠对照组比较，服用A-C合剂组的小鼠肺组织没有炎症细胞的浸润，没有明显的充血和肺泡出血。肺泡结构完整，间隔薄而清晰，形态与正常组接近，并且A-C合剂组小鼠的生化指标SOD活性明显要高于模型组，MDA和HYP的含量也明显低于模型组。实验结果也证明，A-C合剂组的效果比单一用同剂量的阿司匹林，或维生素药组的小鼠肺的保护作用更好。

本发明提出的减轻烟毒性保护肺功能的药物组合物，阿司匹林的临床每天的用量是50mg～1000mg之间较好，根据病人吸烟史及肺部损伤程度来定，最佳的用量是100mg～500mg。维生素C的配合，是根据阿司匹林的用量，以1∶2的配比组成，即是阿司匹林的2倍即可。在药品生产时，可制成阿司匹林100mg+维生素C200mg；阿司匹林150mg+维生素C300mg；阿司匹林200mg+维生素C400mg；阿司匹林250mg+维生素C500mg；阿司匹林300mg+维生素C600mg；阿司匹林500mg+维生素C1000mg等多种不同规格的药物片剂，肠溶片剂，胶囊，颗粒剂，冲剂，口服液等，供吸烟者根据吸烟史及肺部损伤程度来选用。

具体实施方式：实施例一

为证实阿司匹林和维生素C组成复方制剂(简称A-C合剂)，具有减轻烟毒性保护肺功能的作用，本实验以小鼠吸烟动物模型，通过血液生化、肺组织形态病理学等研究方法，观察该复方制剂A-C合剂是否可对吸烟小鼠肺组织是否有保护作用，现报告如下：

1材料和方法

1.1动物模型与给药方法

雄性A/J小鼠18～22g(由广东医学院实验动物中心繁殖)，A/J小鼠每天吸烟4次(每次燃烧1g烟丝)，每次10分钟，中途停止10分钟，连续吸烟20次。正常对照组暴露于正常的空气。实验组在暴露于香烟之前，小鼠分别灌胃给予200mg/kg维生素C、100mg/kg阿司匹林和100mg/kg阿司匹林+200mg/kg维生素C联合用药(A-C合剂)。小鼠在吸烟20天后的取材。右肺加入10％生理盐水匀浆，然后3000/g离心10分钟。上清液冻结保存用于超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸的检测。左肺保存于10％的中性福尔马林。

1.2超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸的检测

取出右肺组织，放入冷生理盐水中漂洗除血，滤纸吸干后，在冰浴上剪成碎片，称取适量的组织，加入9倍预冷的生理盐水，冰浴中快速研磨制成5％组织匀浆，4摄氏度3000r.min离心，取上清液进行肺组织匀浆SOD[9]、MDA[10]和HYP[11]的测定，操作步骤按试剂(南京建成)盒说明书进行。

1.3组织形态评估

10％中性福尔马林固定小鼠肺组织进行病理学评估。将5um的组织切片进行苏木素和伊红染色，在光学显微镜下评估形态和炎症细胞浸润情况。

1.4肺组织的损伤评分

每张切片采用盲法评估。通过400倍的显微镜下观察300个肺泡进行评分，每一个视野按照表1的标准进行评分。所有的得分累加并根据重要性进行加权计算，最终得分按照以下公式进行：肺损伤分数＝[肺泡出血得分/视野数+2X(肺泡浸润得分/视野数)+3X(纤维沉积得分/视野数)+(肺泡壁充血/视野数)]/总肺泡数。肺组织的损伤评分见表1：

表1肺组织的损伤评分

1.5统计学处理

应用Graphpad prism V5.0统计软件，数据采用

表示.采用单因素方差方法进行统计学处理。p＜0.05有统计学意义。

2.结果：

2.1吸烟对小鼠肺组织中的SOD和MDA的影响及干扰药物的作用

吸烟对小鼠肺组织中的SOD和MDA的影响及干扰药物的作用见表2：

表2：吸烟对小鼠肺组织中的SOD和MDA的影响及干扰药物的作用

与正常对照组比较，^▲P＜0.05；吸烟模型组，^＊P＜0.05

由表2的结果可见，模型组小鼠肺组织中的SOD活性较正常组的低(P＜0.05)，与模型组比较，维生素C组、阿司匹林组和联合用药组小鼠肺组织中的SOD活性均升高(P＜0.05)。联合用药组高于阿司匹林和维生素C单独应用组(P＜0.05)，阿司匹林组高于维生素C组(P＜0.05)。与正常组比较，模型组小鼠肺组织中MDA含量升高(P＜0.05)。与模型组比较，维生素C与阿司匹林单独应用组小鼠肺组织中MDA含量均下降，而联合用药组小鼠肺组织中的MDA含量低于模型组、维生素C和阿司匹林单独应用组(P＜0.05)。

2.2吸烟对小鼠肺组织中的羟脯氨酸的影响及干扰药物的作用

吸烟对小鼠肺组织中的羟脯氨酸的影响及干扰药物的作用见表3：

表3：吸烟对小鼠肺组织中的羟脯氨酸的影响及干扰药物的作用

与正常对照组比较，^▲P＜0.05；吸烟模型组，^＊P＜0.05

由表3的结果可见，与正常组比较，模型组小鼠肺组织中的HYP含量明显升高(P＜0.05)。虽然维生素C组和阿司匹林组与对照组比较，小鼠肺组织中的HYP含量降低，但是没有统计学意义(P＞0.05)。而与模型组比较，联合用药组小鼠肺组织中HYP含量降低，而且低于维生素C和阿司匹林单独应用组(P＜0.05)。

2.3吸烟对细支气管及假复层纤毛柱状上皮的影响及干扰药物的作用

吸烟对细支气管及假复层纤毛柱状上皮的影响及干扰药物的作用见附图1；

附图1说明：图A1为正常对照组；B1为模型组，被动吸烟20天每天3次每次10分钟；C1为维生素C组，被动吸烟20天每天3次每次10分钟，灌胃200mg/kg维生素C；D1为阿司匹林组，被动吸烟20天每天3次每次10分钟，灌胃100mg/kg阿司匹林；E1为阿司匹林+维生素C组，被动吸烟20天每天3次每次10分钟，灌胃200mg/kg维生素C和100mg/kg阿司匹林。苏木精和伊红染色，×20。

从附图1的结果可见，与正常组比较，模型组小鼠肺细支气管内的假复层纤毛柱状上皮脱落、变短、倒伏，有复层鳞状上皮增生，管腔内有少量的炎症细胞，无红细胞的渗出。管壁外有大量炎症细胞浸润(见图B1)。维生素C组小鼠肺细支气管内的假复层纤毛柱状上皮与模型组比较，排列比较整齐、完整，纤毛脱落、变短、倒伏现象明显减轻，气管壁结构清楚，厚度均匀。管壁外仍有少量炎症细胞浸润(见图C1)。阿司匹林组小鼠肺部细支气管内的假复层纤毛柱状上皮与模型组比较，排列比较整齐、完整。纤毛脱落、变短、倒伏现象减轻，气管壁结构清楚，厚度均匀，管腔内无炎症细胞和红细胞的渗出。管壁外有少量炎症细胞浸润(见图D1)。与模型组比较，联合用药组细支气管内的假复层纤毛柱状上皮与排列比较整齐、完整，纤毛脱落、变短、倒伏现象明显减轻，气管壁结构清楚，厚度均匀，管腔内无炎症细胞和红细胞的渗出。相对于维生素C组和阿司匹林组，损伤程度以及炎症也有减轻(见图E1)。

2.4吸烟对终末细支气管的影响及干扰药物的作用

吸烟对终末细支气管的影响及干扰药物的作用见图2；

附图2说明：A2为正常对照组；B2为模型组终末细支气管；C2为维生素C组终末细支气管；D2为阿司匹林组终末细支气管；E2为阿司匹林+维生素C组终末细支气管。各图中箭头所指为终末细支气管，苏木精和伊红染色，×20。

从附图2的结果可见，与正常组比较，模型组小鼠肺终末细支气管的单层柱状上皮已经有脱落、细胞排列模糊，有复层鳞状上皮增生，管腔内以及管壁周围有大量的炎症细胞浸润，有明显的呼吸性细支气管炎的病理特征。其周围的肺泡有大量的炎症细胞浸润，并且有纤维化的改变(见图B2)。与模型组比较，维生素C和阿司匹林组与正常组相似，单层柱状上皮排列比较整齐、完整，气管壁结构比较完整。管壁内外均无炎症细胞浸润，其周围的肺泡间隔的毛细血管有轻微的充血，但肺泡内无出血(见图C2，D2)。联合用药组也与正常组接近，而且炎症反应比维生素C组、阿司匹林组轻(见图E2)。

2.5吸烟对呼吸性细支气管和终末细支气管的影响及干扰药物的作用

吸烟对呼吸性细支气管和终末细支气管的影响及干扰药物的作用见附图3；

附图3说明：A3为正常对照组；B3为模型组呼吸性细支气管和终末细支气管；C3为维生素C组；D3为阿司匹林组；E3为阿司匹林+维生素C组。箭头所指为终末细支气管，星星为呼吸性细支气管，苏木精和伊红染色，×20。

从附图3的结果可见，与正常组比较，模型组小鼠肺终末细支气管的单层柱状上皮已经有脱落、细胞排列模糊，有复层鳞状上皮增生，呼吸性细支气管肺泡开口出的单层扁平细胞消失。管腔内以及管壁周围有炎症细胞浸润，有呼吸性细支气管炎的病理特征。其周围的肺泡有大量的炎症细胞浸润，并且有纤维化的改变(见图B3)。与模型组比较，维生素C、阿司匹林组和联合用药组小鼠肺终末细支气管的单层柱状上皮完整，排列整齐，没有脱落，呼吸性细支气管结构完整，轮廓清晰。管腔内无炎症细胞和红细胞的渗出。管壁外有少量炎症细胞的浸润，周围的肺泡腔内无细胞渗出，间隔毛细血管有轻度充血(见图C3，D3，E3)。

2.6吸烟对肺泡的影响及干扰药物的作用

吸烟对肺泡的影响及干扰药物的作用见附图4；

附图4说明：A4为正常组肺泡；B4-1、B4-2为模型组肺泡；C4为维生素C组肺泡；D4为阿司匹林组肺泡；E4为阿司匹林+维生素C组肺泡。苏木精和伊红染色，×20。

从附图4的结果可见，与正常组比较，模型组小鼠肺泡间隔增厚充血，有炎症细胞浸润，肺泡腔消失。病变呈块状或片状分布。间质有不同程度的炎症(见图B4-1)。合并有肺泡扩张，间隔变窄，肺泡空间扩大，部分肺泡间隔断裂，扩张的肺泡融合成大囊腔，肺毛细血管明显减少(见图B4-2)。与模型组比较，维生素C组和阿司匹林组的小鼠肺泡结构及肺泡间隔完整、轮廓清晰。肺泡腔内有少量炎症细胞浸润，但无出血。肺泡间隔毛细血管轻微充血。肺泡腔没扩大，肺泡间隔没变薄或增厚(见图C4，D4)。联合用药组与正常组接近，相比维生素C组和阿司匹林组的炎症反应和充血更轻(见图E4)。

2.6吸烟对肺组织病理学影响评分及干扰药物的作用

吸烟对肺组织病理学影响评分及干扰药物的作用见表4：

表4：吸烟对小鼠肺组织病理学影响评分的影响及干扰药物的作用

与正常对照组比较，^▲P＜0.05；吸烟模型组，^＊P＜0.05

从表4的结果可见，相比正常组，模型组的病理评分要高(P＜0.05)，评分的项目包括肺泡隔充血、，肺泡出血、肺泡间质化、内部肺泡浸润。维生素C组、阿司匹林组和联合用药组的病理评分都要比模型组的低。但是只有维生素C组和联合用药组具有统计学意义(P＜0.05)。

讨论

研究显示吸烟是慢性阻塞性肺疾病的主要病因之一。香烟中含有超过4700中化合物，其中包括有大量的自由基和氧化剂，在慢性阻塞性肺疾病中，这些自由基和氧化剂会破坏氧化剂和抗氧化剂之间的平衡。我们的实验由吸烟引起的急性肺损伤不能完全模拟慢性阻塞性肺疾病的发病机制，但是两者都有某些共同的指标，包括大量的炎症细胞和肺组织的氧化应激反应。与正常组比较，模型组的肺部病理学组织切片可见明显的炎症细胞浸润，而且其生化指标与正常组比，超氧化物歧化酶(SOD)的活性降低，丙二醛(MDA)含量升高。SOD是体内重要的抗氧化酶，可以清除肺部的过多的氧化剂如活性氧(ROS)和活性氮(RNS)，对抗氧化应激，保护肺组织结构和功能完整。MDA作为脂质过氧化物的一种，是局部或全身系统氧化应激的标志物，被用作脂质氧化物和吸烟者组织氧化损伤的直接指标。因为香烟的烟雾中的自由基和浸润于肺组织的炎症细胞释放的氧化剂，导致内源性的抗氧化机制下降，所以相比正常组，模型组的SOD活性下降，MDA含量升高。同时，除了模型组病理组织切片发现肺泡腔消失，病变呈块状或片状分布的间质化病变之外，模型组的羟脯氨酸(HYP)含量较正常组高。HYP作为肺纤维化的一个重要的指标，研究发现肺纤维化病变都会伴随HYP含量的升高。实验结果说明模型组小鼠存在着肺纤维化的病变。

与模型组相比，维生素C组的病理组织切片的炎症有明显改善，仅有少量炎症细胞浸润和肺泡间隔的毛细血管轻微充血，但肺泡结构和间隔相对完整，维生素C组的SOD活性比模型组的高，MDA和HYP含量比模型组的低，但后两者的降低并不是很明显。虽然维生素C清除自由基的能力强，但是对炎症细胞的抑制作用有限。因此，可能是香烟中的自由基被清除了，而由炎症细胞释放的内源活性氧没有被清除，导致脂质过氧化反应仍在进行。

阿司匹林组的病理组织切片与模型组比较，其炎症细胞的浸润基本消失，仅有少量的肺泡壁充血，但是部分肺泡间隔变窄，肺泡腔有轻微的扩张和融合。有研究者用8mg/kg的阿司匹林治疗每天吸4支烟，持续4天的肺损伤小鼠，其病理组织切片也存在肺泡扩张和间隔变窄的现象。我们认为肺泡形态结构的改变和香烟中含有的大量自由基有关。阿司匹林对外源性自由基和活性氧的清除能力很弱，对内源性的活性氧才具有明显的清除作用，而且自由基在肺部的积累会直接破坏肺泡上皮细胞，促进氧化应激和脂质氧化反应。因此，阿司匹林组的MDA和HYP含量虽然比模型组的低，但下降不是很明显。

相对于模型组，维生素C和阿司匹林联合用药组(A-C合剂)的病理组织切片明显改善，没有炎症细胞的浸润，没有明显的充血和肺泡出血。肺泡结构完整，间隔薄而清晰，形态与正常组接近，并且联合用药组的生化指标SOD活性明显要高于模型组，MDA和HYP的含量也明显低于模型组。实验结果明显能发现联合用药组的效果比单一用药组的好，我们认为首先是维生素C抗氧化能力强，抗炎能力弱，阿司匹林抗炎能力强，抗氧化能力弱。联合应用让两者在抗炎抗氧化的能力上得到互补。其次是联合用药使得维生素C在抗氧化能力加强，而阿司匹林则在抗炎能力加强。最后，两药联合使用维生素C会减少阿司匹林的解离，加快了阿司匹林的吸收，提高了生物利用度，发挥联合用药的优势。通过病理观察和抗氧化指标的比较，证明了维生素C和阿司匹林联合用药对吸烟所致肺损伤的干预治疗作用比单一用药的效果更佳，为阿司匹林维生素C合剂防治吸烟致肺损伤提供了有力的证据。

Claims

1.一种减轻烟毒性保护肺功能的药物组合物，其特征是由阿司匹林与维生素C两种药物配伍组成，阿司匹林与维生素C的组成比例为1∶0.5～2.5，加上药剂学方面的辅料，制成供临床应用的药物组合物。

2.如权利要求1所述的一种减轻烟毒性保护肺功能的药物组合物，其特征是阿司匹林与维生素C的组成比例为1∶2。