CN103304645A - 重组链球菌溶血素o蛋白、核苷酸序列、制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种重组链球菌溶血素O蛋白及其核苷酸序列、并公开了该重组蛋白的制备方法及其应用。本发明采用现代基因工程技术，设计并合成出突变链球菌溶血素O蛋白的核苷酸序列，并将其连接到表达载体上再转化宿主菌，表达纯化重组链球菌溶血素O蛋白。本发明得到的重组链球菌溶血素O蛋白具有稳定性好，纯度高，活性高的特点，可广泛应用于链球菌检测等生物医药领域。同时，本发明提供的重组链球菌溶血素O蛋白的制备方法克服天然提取的天然链球菌溶血素O蛋白的缺点，便于工厂批量生产和批间差控制，有利于链球菌溶血素O蛋白的工业化应用。

Description

重组链球菌溶血素O蛋白、核苷酸序列、制备方法及应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种重组链球菌溶血素O蛋白、该重组蛋白的核苷酸序列、该重组蛋白的制备方法和应用。

背景技术

链球菌溶血素O(Streptolysin O，SLO)是由A群链球菌产生的一种外毒素，它是一种具有溶血活性的蛋白质，能溶解人及一些动物的红细胞。人体感染溶血性链球菌后，血清中可出现大量抗链球菌溶血素O抗体(Antibodies AgainstStreptolysin O，ASO)。

在临床检测中，ASO是诊断链球菌感染后变态反应性疾病(风湿热、肾小球肾炎)的重要指标之一。常用的ASO检测方法主要有自动化胶乳比浊法、乳胶凝集试验、和溶血抑制法。胶乳比浊法由于其敏感性好、结果重复性好、自动化程度高、受人为因素影响小等众多优点，而作为检测ASO的最佳方法。

胶乳比浊法检测ASO的原理是：样品中的ASO能够与试剂中的SLO抗原包被的胶乳复合物进行反应，形成抗原-抗体复合物，通过测定吸光度的变化并对照标准品的吸光度变化从而计算出样品中ASO的活性单位。

胶乳比浊法ASO检测试剂的生产瓶颈在于SLO抗原的获得，天然SLO抗原价格昂贵，难于获得，存在产率低、批间差大等问题，妨碍了ASO检测试剂的工业化生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种重组链球菌溶血素O(Streptolysin O，SLO)蛋白。

本发明的另一目的在于提供一种抗原，一种可编码表达上述SLO重组蛋白的核苷酸序列，以及包含所述核苷酸序列的载体、重组细胞。

本发明的再一目的在于提供及该重组SLO蛋白的制备方法，以及该重组SLO蛋白及其核苷酸序列在链球菌相关检测等领域的应用和用途。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明公开了一种重组链球菌溶血素O(SLO)蛋白，其在天然链球菌溶血素O蛋白的530位包含氨基酸缺失或改变，且缺失了天然链球菌溶血素O蛋白N端的77个氨基酸，其中，所述氨基酸的改变为将天然链球菌溶血素O第530位的半胱氨酸突变为Xaa，Xaa选自Ala、Arg、Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。

进一步的优选，突变为Ser、Thr、Ala中的任一种。

更进一步的优选，突变为Ala。

上述重组SLO蛋白可为SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的重组SLO蛋白。

本发明还公开了可编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列。

上述核苷酸序列可为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。

上述核苷酸序列还可为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列进行1个或几个核苷酸取代而得到的密码子同义突变的核苷酸序列。

同时，本发明还公开了一种抗原，该抗原的氨基酸序列包含上述重组SLO蛋白的核苷酸序列。

具体的，该抗原的氨基酸序列包含SEQ ID NO.2所示序列。

本发明进一步提供了一种载体，该载体包含可编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列。

具体的，上述载体包含SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。

该载体可进一步由可编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列与表达载体经重组得到。所述表达载体为含有转录和翻译插入的编码序列所需的元件的空载体。

上述表达载体可为pET21W7或pEGFP_BMP7等。

具体的，上述载体可由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列插入pET21W7或pEGFP_BMP7等表达载体经重组得到。

本发明还进一步提供了一种重组细胞，该重组细胞可包含编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列。

具体的，该重组细胞包含SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

该重组细胞可包含载体，该载体包含编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列。

具体的，该重组细胞包含载体，该载体包含SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

该重组细胞可包含载体，该载体可由编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列与表达载体经重组得到。

具体的，该重组细胞可包含载体，该载体可由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列与表达载体经重组得到。

具体的，所述表达载体可为pET21W7或pEGFP_BMP7等。

进一步具体的，该重组细胞包含的载体为：SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列插入pET21W7或pEGFP_BMP7等表达载体经重组得到的载体。

上述重组细胞的宿主细胞可为BL21(d3)-gold、HepG2、JM109或HB101等。

本发明同时公开了上述重组SLO蛋白的制备方法，其包括：

(1)合成可编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列；

(2)将步骤(1)获得的核苷酸序列构建载体；

(3)将步骤(2)的载体转化宿主细胞获得重组细胞；

(4)培养并收集重组细胞，纯化提取重组SLO蛋白。

本发明还公开了上述重组SLO蛋白、可编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列、上述抗原在链球菌检测等领域的应用。

进一步的，本发明公开了上述重组SLO蛋白、可编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列、上述抗原在抗链球菌溶血素O抗体(ASO)检测等领域的应用。

本发明提供了一种含有上述重组SLO蛋白或上述抗原的ASO检测试剂。

具体的，本发明提供了一种ASO检测试剂，所述试剂中含有上述重组SLO蛋白或上述抗原结合或偶联固相载体或信号分子。

进一步的，本发明提供了一种ASO检测试剂，所述试剂中含有上述重组SLO蛋白与胶乳偶联的胶乳颗粒。

由于采用以上技术方案，本发明的有益效果在于：本发明利用基因工程技术，将重组SLO基因在宿主菌中进行重组表达，经过微生物培养后可获得大量含重组SLO蛋白的培养液，经过多步分离纯化，可获得稳定性好，纯度高，活性高的重组SLO蛋白，以此重组蛋白为原材料，制备的ASO检测试剂稳定性好，成本低，工艺简单，便于大规模生产，为SLO蛋白的制备及应用提供了一种新的选择。

附图说明

图1是本发明实施例1中重组SLO蛋白免疫活力测试结果；

图2是本发明实施例3中实施例2的试剂(待检系统)与对照试剂(对比系统)的方法学测试结果。

具体实施方式

本发明采用现代基因工程技术，设计并合成出突变SLO核苷酸序列，并将其连接到表达载体上再转化宿主菌，表达纯化大量的重组SLO蛋白，该重组蛋白可很好地应用于链球菌相关检测等领域，例如ASO检测，可以获得很好的试剂稳定性。且采用本发明提供的方法得到重组SLO蛋白，还克服了天然提取SLO蛋白的各种缺点，便于SLO蛋白的工厂批量生产，且能效控制批间差，有利于以SLO蛋白为核心原料的各种试剂的制备及SLO蛋白的工业化应用。

ASO检测试剂盒中，SLO蛋白是重要的成分，其稳定性直接影响试剂盒的性能。我们通过研究发现，SLO的自聚集是影响ASO试剂稳定性的重要原因。天然SLO蛋白全长含571个氨基酸(AA)，通过对其序列进行分析，我们发现天然SLO蛋白中仅在530位存在半胱氨酸，没有分子内的二硫键。

另外，天然SLO蛋白对宿主细胞会有毒性作用，不利于工业化的生产。研究发现，天然SLO蛋白N端的77个氨基酸对宿主细胞有较大毒性作用，但是含有较少的抗原决定族，缺失该77个氨基酸能有效降低SLO蛋白的毒性作用，却对SLO蛋白的抗原性影响不大。

本发明对天然SLO蛋白序列进行改造，将天然SLO蛋白的第530位的半胱氨酸残基缺失或突变为Xaa，Xaa选自Ala、Arg、Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，同时将其N端的77个AA缺失获得重组的SLO蛋白。由于半胱氨酸的缺失，能有效的阻止所得蛋白通过分子间二硫键形成寡聚体，且该位点的突变或缺失并不会实质性的影响该蛋白的抗原性。同时N端77个氨基酸缺失有利于重组细胞表达。

在本发明的一个实施方式中，上述重组SLO蛋白含有494个氨基酸，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示，其第453位氨基酸对应于天然蛋白的第530位，由Cys突变为Ala。由于与Cys具有类似化学式结构的氨基酸还有Ser和Thr，本领域技术人员能理解，该位置除了突变为Ala之外，还可以由Cys突变为Ser或Thr。

天然蛋白的530位点的Cys靠近蛋白C端，该位点的改变对蛋白三级结构的影响较小，并不影响蛋白的抗原性。据此本领域技术人员应当理解，除了上述优选的突变方式，将该位置的Cys缺失或者突变为其他氨基酸获得的重组SLO蛋白也在本发明的保护范围内。采取上述方案得到的重组SLO蛋白不仅抗原性不受影响，且其对宿主细胞的毒性作用及形成寡聚体的现象均降低。

本发明公开了可编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列。具体的，在本发明的一个实施例中，公开了SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。本领域技术人员可根据现有分子生物学技术，采用cDNA克隆和定点突变的方法或其他适合的方法获得本发明的重组SLO蛋白的核苷酸序列。这里还需说明的是，编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列并不仅限于SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。本领域技术人员熟知，同一氨基酸可由几种不同的密码子来决定，故同一氨基酸可对应不同的核苷酸序列。因此本发明中的重组SLO蛋白的氨基酸序列，如SEQ IDNO.2所示的氨基酸序列，除可由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列所编码，也可由SEQ ID NO.1所示核苷酸序列进行1个或几个核苷酸取代而得到的密码子同义突变的核苷酸序列所编码。本领域技术人员可以根据本发明中公开的重组SLO蛋白的氨基酸序列，得到可编码该蛋白的核苷酸序列。

一种抗原，该抗原的氨基酸序列中包含：上述重组SLO蛋白的氨基酸序列。具体的，可包含SEQ ID NO.2所示序列。特别说明的是，以上述重组SLO蛋白的氨基酸序列作为一个单元，上述抗原的氨基酸序列中可仅包含单拷贝的上述单元，也可包含多拷贝的上述单元。在不影响抗原的抗原性的基础上，本领域技术人员可通过常规技术手段，将重组SLO蛋白的氨基酸序列与其他序列片段(例如，标签序列或其他具有抗原性的序列片段)融合表达于一个抗原中，也可设计将重组SLO蛋白的氨基酸序列通过串联多拷贝融合表达于一个抗原中，且其得到抗原均具有重组SLO蛋白的抗原性。

本发明提供了一种包含可编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列的载体。可采用将编码重组SLO蛋白的核苷酸序列插入表达载体中，该表达载体含有转录和翻译插入的编码序列所需的元件，适用于本发明的表达载体有pET21W7或pEGFP_BMP7，但并不仅限于这两者，本领域技术人员可根据实际情况选择合适的其他载体，并采用本领域技术人员熟知的方法构建包含编码重组SLO蛋白的核苷酸序列和适合转录和翻译调控元件的表达载体。在本发明的一个实施例中，上述载体由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列插入pET21W7中经重组得到。

本发明还提供了一种重组细胞，本发明的重组细胞可以通过将上述包含本发明重组SLO蛋白的核苷酸序列的重组载体转化宿主细胞而得到。适于构建本发明所述重组细胞的宿主细胞包括但不限于BL21(d3)-gold、HepG2、JM109、HB101等，本领域技术人员可根据实际情况选择合适的宿主细胞。在本发明的一个实施例中，选择了BL21(d3)-gold作为宿主细胞。

本发明同时公开了上述重组SLO蛋白的制备方法。在适当条件下，培养上述宿主细胞，并可采用本领域熟知的方法，从工程改造的宿主细胞中分离本发明的重组SLO蛋白，使其与宿主细胞的其他组分，如蛋白质、糖或脂质分开。这类方法包括但不限于：分子大小排阻层析、硫酸铵分级、离子交换层析、亲和层析和制备型凝胶电泳等。在本发明的一个实施例中，其方法包括以下步骤：(1)合成能表达重组SLO蛋白的核苷酸序列；(2)将步骤(1)获得的核苷酸序列构建表达质粒；(3)将步骤(2)的表达质粒转化宿主细胞获得重组细胞；(4)培养重组细胞；(5)收集培养后的重组细胞，将其经超声破碎，纯化提取上述重组SLO蛋白。构建表达质粒，获得和培养重组细胞，提纯重组细胞表达的重组SLO蛋白，都可以采用本领域常用的方法，或根据商业化表达载体或宿主细胞说明书中的步骤进行。在本发明一个实施例中，构建带His标签的含SEQID NO.1所示核苷酸序列表达质粒，转化合适的宿主细胞，按照常规或宿主细胞说明书中的培养方法培养和表达重组SLO蛋白，后取上清经HisTrap HP柱纯化提取重组SLO蛋白。如果采用其他的表达体系，也可以使用其他的纯化方法，例如，如果是包涵体表达，可以通过盐酸胍变性，透析复性，柱层析等纯化的方法获得有活性的重组SLO蛋白。

本发明并进一步公开了上述重组SLO蛋白、编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列及上述抗原在链球菌相关检测等领域的应用。例如，可将上述重组SLO蛋白、编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列及上述抗原应用于抗链球菌溶血素O抗体检测领域。进一步的，上述重组SLO蛋白和上述抗原应用于ASO检测领域时，其可具体应用于但不限于以下方法：乳胶比浊法、酶联免疫法、化学发光法等。本领域技术人员可根据实际情况将上述重组SLO蛋白或上述抗原直接或经适当修饰后应用于上述检测方法中。例如，上述重组SLO蛋白和上述抗原可结合或偶联固相载体或信号分子。具体的，上述重组SLO蛋白和上述抗原可以游离存在；也可以结合或偶联固相载体，只要能结合或偶联的固相载体均可使用；还可将其与信号分子偶联，只要能结合的信号分子均可使用。本领域技术人员可配合具体的实验方法，选择合适的固相载体或信号分子，例如采用信号分子HRP进行标记等。在本发明的一个实施例中，公开了一种ASO检测试剂，该试剂中含有上述重组SLO蛋白与胶乳偶联的胶乳颗粒，可以使用本领域常规的蛋白与胶乳的交联方法将上述重组SLO蛋白与胶乳进行交联。

下面通过具体实施例并结合附图对本发明作进一步详细说明。以下实施例仅仅对本发明进行进一步的说明，不应理解为对本发明的限制。

实施例1 SLO重组菌株构建、蛋白表达纯化及鉴定

(1)重组菌株的构建

将合成的SEQ ID NO.1序列与T4DNA聚合酶混合后25℃30min，75℃20min激活T4DNA聚合酶，加入T4DNA聚合酶处理的pET21W7载体，25℃30min，转化感受态细胞，通过PCR和测序鉴定阳性克隆，确认构建的表达质粒SLO-pET21W7其碱基序列和插入方向正确。再将表达质粒SLO-pET21W7转化表达宿主菌BL21(d3)-gold即获得重组菌株，加入甘油冻存备用。

(2)重组SLO蛋白的表达

将甘油菌种接种于100mL含100μg/mL Amp的LB培养基，37℃，250rmp过夜培养；第二日，1％接种量接种于含100μg/mL Amp和34μg/mL Chl的LB培养基，37℃，250rmp培养至OD600nm为0.3；继续16℃，250rmp培养至OD600nm为0.6，加入0.1mM IPTG；16℃，250rmp培养过夜，离心收集菌体，-80℃冻存备用。

(3)重组SLO蛋白的提取纯化

菌体细胞用Buffer A(50mM Tris pH 8.0，200mM NaCl，5％glycerol，5mMb-Me)按照10mL/g比例混合，加入1mM PMSF；冰浴中超声15min破碎细胞，离心收集上清。

HisTrap HP柱用Buffer A平衡，将以上上清液直接上柱，依次用20倍体积Buffer A、10倍体积Buffer B(50mM Tris pH 8.0，1M NaCl，5％glycerol，5mMb-Me)、5倍体积Buffer A清洗柱子。用40倍体积的Buffer A和Buffer C(50mMTris pH 8.0，1M NaCl，5％glycerol，5mM b-Me，500mM咪唑)进行梯度洗脱，收集目标蛋白，进行SDS-PAGE分析纯度，目标蛋白加入1mg/50mg的TEV蛋白酶，4℃ Buffer A透析过夜。消化液上用Buffer A平衡好的HisTrap HP柱，收集穿透液和用含20mM咪唑Buffer A的洗脱液。进行SDS-PAGE分析，将含重组蛋白的部分混合并浓缩；将浓缩液上预先用Buffer D(10mM PB 7.6)平衡后的Superdex 75柱，收集洗脱液进行SDS-PAGE分析，合并含重组SLO蛋白的部分并浓缩，分装1mL/管，-80℃冻存备用。

(4)免疫活力测定

重组SLO蛋白用50mM，pH 9.6CB稀释至10ug/mL，酶标板A1-A6B1-B6每孔加入100μL重组SLO蛋白，A7加入100μL Buffer作为对照，密封酶标板4℃静置过夜；PBST洗板1次，每孔加入300μL 1％BSAPBST，37℃温育1h，PBST洗板1次，用1％BSA PBST稀释ASO阳性、阴性血清1∶200，A1-A7每孔加入100μL稀释后的阳性血清，B1-B6每孔加入100μL稀释后的阴性血清，37℃温育1h，PBST洗板3次，每孔加入100μL 1∶250HRP标记的二抗，37℃温育1h，PBST洗板5次，每孔加入TMB显色液50μL，室温2-3min，每孔加入50μL 0.2M盐酸终止反应，450mm读取吸光度，如图1所示，结果显示重组SLO蛋白能够明显区分ASO阳性血清和阴性血清。

实施例2 ASO检测试剂的制备

ASO检测试剂有试剂R1和R2组成。

试剂R1：

Tris    12g/L

PEG     20g/L

吐温20  2g/L

叠氮钠  1g/L

将适量上述物质溶于水，搅拌溶解，用盐酸或者氢氧化钠调节pH 8.2，加水定容到1L。

试剂R2：

用盐酸或者氢氧化钠调节pH 7.4。

本发明所用胶乳由bangs公司提供，偶联SLO的胶乳颗粒的制备过程为：

(1)用10mL激活液(100mM MES pH6.0)清洗1mL(100mg/mL)的微球2次；

(2)第二次清洗后，用10mL激活液重悬胶乳；

(3)混合过程中，加入100.0mg的EDC和120mg的NHS；

(4)反应室温持续15min；

(5)用2倍体积的偶联缓冲液(PBS)洗涤胶乳，用5mL PBS重悬胶乳；

(6)用5mL PBS溶解SLO蛋白，混合蛋白和胶乳溶液；

(7)室温反应2-4h；

(8)用10mL含1％BSA的PBS洗涤一次；

(9)用10mL含1％BSA的PBS重悬胶乳，搅拌30min封闭反应；

(10)离心收集沉淀，沉淀即为偶联SLO的胶乳颗粒。

实施例3 ASO检测试剂方法学和热稳定性测试

(1)方法学测试

测定条件：

波长        570nm

温度        37℃

分析类型    固定时间法

检测        扣除杯空白

测定步骤：

根据以上测定条件和测定步骤，在迈瑞BS400仪器上，将实施例2中的试剂和对照试剂(电化生研公司生产的ASO检测试剂盒)按照以下表1参数设置，测定临床新鲜样本40例，每例样本重复测定2次取均值，生研试剂测定值为x轴，实施例2的试剂测定值为y轴作图，结果如图2所示。从图2可以看出，实施例2的试剂(待检系统)和生研试剂(对比系统)测定值的相关系数R²＝0.9882。

表一：测定参数

续上

(2)热稳定性测试

将实施例2中的试剂R1和R2放置37℃环境下，分别在第1、3、5、7、8天测定高值质控品和低值质控品样本，测定值与第0天冷藏试剂测定值对比计算相对偏差，结果如下表二，可以看出，实施例2的试剂37℃加速8天，质控偏差小于5％。

表二：

实施例4：重组SLO蛋白对于制备ASO试剂的适用性鉴定

将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的重组SLO蛋白和对照蛋白按照实施例2的方法同时制备ASO检测试剂R1和R2，所述对照蛋白与上述重组SLO蛋白除对应天然蛋白的530位氨基酸未经突变外，其重组菌株构建、蛋白表达和纯化方法相同。按照实施例3中的方法测定试剂的稳定性，结果如表三所示，表明：采用突变后的重组SLO蛋白制备的试剂稳定性好，而对照蛋白制备的ASO试剂空白不断上升，说明天然SLO蛋白的530位的氨基酸突变可能防止或者减弱SLO蛋白的自聚集作用，制备的ASO检测试剂盒具有良好的性能。

表三：

不同试剂空白吸光度

冷藏时间(天)	1d	3d	5d	9d
					本发明所述重组蛋白制备的ASO试剂	9012	9016	8998	9010
对照蛋白制备的ASO试剂	9001	9213	9346	9506

以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (13)

1.一种重组链球菌溶血素O蛋白，其特征在于，所述蛋白的序列为将天然链球菌溶血素O蛋白的第530位半胱氨酸缺失，或突变为Xaa，且缺失天然链球菌溶血素O蛋白N端的77个氨基酸，所述Xaa选自Ala、Arg、Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val；

优选的，Xaa为Ser、Thr或Ala；

更优选的，Xaa为Ala。

2.根据权利要求1所述的重组链球菌溶血素O蛋白，其特征在于，所述重组链球菌溶血素O蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

3.编码权利要求1或2所述的重组链球菌溶血素O蛋白的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的核苷酸序列，其特征在于：

所述核苷酸序列为SEQ ID NO.1；或

所述核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示序列进行1个或几个核苷酸取代而得到的密码子同义突变的核苷酸序列。

5.一种抗原，其特征在于：所述抗原的氨基酸序列中包含：

权利要求1所述的重组链球菌溶血素O蛋白的氨基酸序列；或

SEQ ID NO.2所示序列。

6.一种载体，其特征在于，所述载体包含权利要求3或权利要求4所述的核苷酸序列；或

所述载体由权利要求3或权利要求4所述的核苷酸序列与表达载体经重组得到。

7.根据权利要求6的载体，其特征在于，所述表达载体为pET21W7或pEGFP_BMP7。

8.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞包含：

权利要求3或权利要求4所述的核苷酸序列；或

权利要求6或7所述的载体。

9.根据权利要求8所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞的宿主细胞为BL21(d3)-gold、HepG2、JM109或HB101。

10.制备权利要求1或2所述的重组链球菌溶血素O蛋白的方法，所述方法包括：

(1)合成权利要求3所述的核苷酸序列；

(2)将步骤(1)获得的核苷酸序列构建载体；

(3)将步骤(2)的载体转化宿主细胞获得重组细胞；

(4)培养并收集重组细胞，纯化提取重组链球菌溶血素O蛋白。

11.权利要求1或2所述的重组链球菌溶血素O蛋白，或权利要求3或4所述的核苷酸序列，或权利要求5所述的抗原在链球菌检测领域或抗链球菌溶血素O抗体检测领域中的应用。

12.一种抗链球菌溶血素O抗体检测试剂，其特征在于，所述试剂中含有：权利要求1或2所述重组链球菌溶血素O蛋白；或

权利要求5所述的抗原。

13.根据权利要求12的抗链球菌溶血素O抗体检测试剂，其特征在于，所述试剂中含有：权利要求1或2所述的重组链球菌溶血素O蛋白结合或偶联固相载体或信号分子；或

权利要求5所述的抗原结合或偶联固相载体或信号分子。

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