CN103304544B - 4-(取代苯胺基)喹唑啉衍生物二甲苯磺酸盐的多晶型物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及作为酪氨酸激酶抑制剂N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸盐(化合物I)的多晶型物。具体而言，本发明涉及化合物I的晶型A、B、C和D。本发明还涉及化合物I的多晶型物的制备方法，包括它的药物组合物以及它们的制药用途。本发明化合物I的多晶型物是有效的酪氨酸激酶抑制剂。

Description

4-(取代苯胺基)喹唑啉衍生物二甲苯磺酸盐的多晶型物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于医药化工领域，具体涉及一种新的具有抗肿瘤活性的N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸盐(化合物I)多晶型物及其制备方法，以及化合物I的多晶型物在作为用于治疗或辅助治疗哺乳动物(包括人)由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的药物方面的应用。

背景技术

肿瘤是严重威胁人类生命和生活质量的主要疾病之一，据WHO统计，全世界每年死于肿瘤的患者约690万。由于生存环境和生活习性的改变，在不良环境和一些不利因素的作用下，肿瘤的发病率和死亡率近年呈逐步上升趋势。

近年来，人们致力于抑制细胞信号转导途径以开发新型靶点抗肿瘤药物。信号转导抑制剂下调肿瘤的生存和增殖信号，促进细胞凋亡，而不是通过细胞毒作用，因此选择性较高、毒副作用较小。目前已有十几种信号转导抑制剂应用于临床治疗肿瘤，主要为酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物，其中4-(取代苯胺基)喹唑啉结构类型的化合物开发的比较成熟，如针对EGFR酪氨酸激酶靶点的小分子抑制剂吉非替尼(Gefitinib)、埃罗替尼(Erlotinib)和拉帕替尼(Lapatinib)等。

吉非替尼(Gefitinib)，商品名Iressa(易瑞沙)，AstraZeneca开发的EGFR酪氨酸激酶抑制剂，是最早进入临床研究的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂，于2002年在日本上市，次年在美国上市，用于治疗既往接受过化疗的晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)。埃罗替尼(Erlotinib)，商品名Tarceva(特罗凯)，OSI公司开发的EGFR酪氨酸激酶抑制剂，受让于Genentech和罗氏公司。2004年在美国上市，用于治疗NSCLC和胰腺癌。属于第一代治疗NSCLC的苯胺喹唑啉类小分子抑制剂，也是目前唯一被证实的对晚期非小细胞肺癌具有生存优势的EGFR酪氨酸激酶抑制剂，对各类非小细胞肺癌患者均有效，且耐受性好，无骨髓抑制和神经毒性，能显著延长生存期，改善患者生活质量。拉帕替尼(Lapatinib)，商品名Tycerb，是GlaxoSmithKline公司开发的EGFR和HER2的双重抑制剂，其对肿瘤增殖和生存的信号传导的抑制作用强于单一受体抑制剂。2007年美国FDA批准该品上市，适应症为与卡培他滨联合治疗过度表达HER2和先前曾接收过化疗如蒽环类、紫杉烷类和曲妥珠单抗的晚期或转移性乳腺癌患者。

此外，专利申请公开号WO96/33977、WO97/30035、WO98/13354、WO00/55141、WO02/41882、WO03/82290和EP837063等公开了在4-位上携带苯胺基取代基和在6-和/或7-位上携带取代基的某些喹唑啉衍生物，具有受体酪氨酸激酶活性。

小分子酪氨酸激酶抑制剂作为新的靶向抗肿瘤药物，为肿瘤的治疗和预防打开了一扇新窗口，而且其副作用轻微，有良好的耐受性。虽然目前已有10多个小分子酪氨酸激酶抑制剂为临床肿瘤治疗作出了很大贡献，但仍然需要发现一些较之现有的酪氨酸激酶抑制剂具有更好的体内活性和/或改良的药理学特性的另外的化合物。因此开发新的改进的或更高效的酪氨酸激酶抑制剂，更深入地了解该类药物与已知靶蛋白之间的关系以及其发挥抗肿瘤作用的机理对肿瘤临床治疗具有重要的意义。

CN102030742A研究了4-(取代苯胺基)喹唑啉衍生物作为用于治疗或辅助治疗哺乳动物(包括人)由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的药物方面的应用。

发明内容

本发明确定了N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸盐(化合物I)的多晶型物，其可用作EGFR家族的酪氨酸激酶抑制剂。

本发明人经过研究发现，化合物I具有很高的酪氨酸激酶抑制作用。我们已发现化合物I的某些形式，是具有有利性质的晶体物质。

为此，本发明第一方面提供了N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸盐(化合物I)的多晶型物。

本发明的发明人令人惊奇地发现化合物I可以以一种以上的多晶型物存在。发明人将这些多晶型物简称为晶型A、B、C和D。化合物I的多晶型物在水中有一定的溶解性，有利于体内吸收；并且具有更好的稳定性，有利于包装和贮存。

在一个实施方案中，所述的化合物I晶型A，使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在4.6°±0.2°，9.2°±0.2°，11.5°±0.2°，12.6°±0.2°，15.1°±0.2°，19.7°±0.2°，24.9°±0.2°，27.2°±0.2°处有特征峰。

在进一步的实施方案中，所述的化合物I晶型A，使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在4.6°±0.2°，9.2°±0.2°，11.5°±0.2°，12.6°±0.2°，14.5°±0.2°，15.1°±0.2°，15.7°±0.2°，16.0°±0.2°，19.1°±0.2°，19.7°±0.2°，20.0°±0.2°，21.9°±0.2°，22.9°±0.2°，24.0°±0.2°，24.3°±0.2°，24.9°±0.2°，27.2°±0.2°处有特征峰。

在更进一步的实施方案中，所述的化合物I晶型A具有基本如同图2所示出的X-射线粉末衍射图谱。

在一个实施方案中，所述的化合物I晶型A的差示扫描量热分析显示，该晶型在240.82～255.59℃熔融分解。

在另一个实施方案中，所述的化合物I晶型B，使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在4.6°±0.2°，8.3°±0.2°，12.0°±0.2°，15.8°±0.2°，19.7°±0.2°，20.8°±0.2°，22.8°±0.2°处有特征峰。

在进一步的实施方案中，所述的化合物I晶型B，使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在4.6°±0.2°，8.3°±0.2°，9.1°±0.2°，12.0°±0.2°，13.9°±0.2°，15.0°±0.2°，15.8°±0.2°，17.6°±0.2°，18.7°±0.2°，19.7°±0.2°，20.8°±0.2°，22.2°±0.2°，22.8°±0.2°，26.0°±0.2°处有特征峰。

在更进一步的实施方案中，所述的化合物I晶型B具有基本如同图4所示出的X-射线粉末衍射图谱。

在一个实施方案中，所述的化合物I晶型B的差示扫描量热分析显示，该晶型在239.11～254.49℃熔融分解。

在又一个实施方案中，所述的化合物I晶型C，使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在4.4°±0.2°，9.5°±0.2°，12.7°±0.2°，14.9°±0.2°，19.8°±0.2°，23.7°±0.2°，26.8°±0.2°处有特征峰。

在进一步的实施方案中，所述的化合物I晶型C，使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在4.4°±0.2°，9.5°±0.2°，12.7°±0.2°，14.9°±0.2°，16.1°±0.2°，17.1°±0.2°，19.4°±0.2°，19.8°±0.2°，20.9°±0.2°，21.4°±0.2°，23.7°±0.2°，26.8°±0.2°处有特征峰。

在更进一步的实施方案中，所述的化合物I晶型C具有基本如同图6所示出的X-射线粉末衍射图谱。

在又一个实施方案中，所述的化合物I晶型D，使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在4.4°±0.2°，8.3°±0.2°，14.8°±0.2°，19.4°±0.2°，21.0°±0.2°，21.7°±0.2°，25.1°±0.2°处有特征峰。

在进一步的实施方案中，所述的化合物I晶型D，使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在4.4°±0.2°，8.3°±0.2°，14.8°±0.2°，18.7°±0.2°，19.4°±0.2°，21.0°±0.2°，21.7°±0.2°，22.2°±0.2°，23.0°±0.2°，25.1°±0.2°，25.6°±0.2°处有特征峰。

在更进一步的实施方案中，所述的化合物I晶型D具有基本如同图7所示出的X-射线粉末衍射图谱。

本发明第二方面提供了本发明第一方面所述化合物I多晶型物的制备方法，所述方法包括：

使N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺(化合物II)与对甲苯磺酸在溶剂中反应，得到化合物I；

将化合物I在加热条件下溶于适当的溶剂体系，降温析晶，过滤，晾干，得化合物I的晶型C或D；和

将化合物I晶型C在一定温度下烘干，得到化合物I的晶型A；或者

将化合物I晶型D在一定温度下烘干，得到化合物I的晶型B。

化合物I多晶型物的制备方法具体描述如下。

(1)化合物I的制备方法，包括以下步骤：

将N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺(化合物II)溶于乙醇中，向体系中加入对甲苯磺酸，析出固体，过滤，得化合物I。

(2)化合物I晶型C的制备方法，包括以下步骤：

将化合物I在加热回流条件下溶于四氢呋喃和水体系中，降温析晶，过滤，晾干，得化合物I晶型C。

其中，所述的四氢呋喃和水的配比(体积)为20:1～1:10，优选20:1～4:1。

(3)化合物I晶型D的制备方法，包括以下步骤：

将化合物I在加热回流条件下溶于乙醇和水体系中，降温析晶，过滤，晾干，得化合物I晶型D。

其中，所述的乙醇和水的配比(体积)为20:1～1:1，优选20:1～4:1。

(4)化合物I晶型A的制备方法，包括以下步骤：

将化合物I晶型C在60～150℃下烘干，得化合物I晶型A。

(5)化合物I晶型B的制备方法，包括以下步骤：

将化合物I晶型D在60～150℃下烘干，得化合物I晶型B。

上述该四种多晶型物之间的关系如图8中所示。

其中，化合物I晶型C、D在常温条件下晶型是稳定的，在高温条件下晶型是不稳定的；化合物I晶型A、B形成后在常温、高温条件下晶型均是稳定的。

在本发明第二方面的制备方法中，其中所述的化合物II是本领域技术人员根据已有技术可以制备的，在一个示例性的方法中，化合物II可以参照文献CN102030742A制备。

本发明第三方面涉及一种药物组合物，其包含本发明第一方面任一项所述的化合物I的多晶型物，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。

本发明第四方面涉及本发明第一方面任一项所述的化合物I的多晶型物在制备用于治疗和/或预防哺乳动物(包括人)与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症的药物中的用途。

本发明第四方面还涉及本发明第一方面任一项所述的化合物I的多晶型物在制备用于治疗或辅助治疗和/或预防哺乳动物(包括人)由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的药物中的用途。

根据本发明，完全可以预期本发明化合物I的多晶型物可用于治疗erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症，如EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤等。为此，本发明上述“与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症”以及“由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤”或“由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移”所涉及的肿瘤或癌症可以包括上述erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症，如EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤等。

本发明第五方面涉及一种在有需要的哺乳动物中治疗和/或预防与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的化合物I的多晶型物。

本发明第五方面还涉及一种在有需要的哺乳动物中治疗或辅助治疗和/或预防哺乳动物(包括人)由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的化合物I的多晶型物。

本发明第五方面进一步涉及一种在有需要的哺乳动物中治疗和/或预防哺乳动物(包括人)的肿瘤或癌症的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的化合物I的多晶型物，所述的肿瘤或癌症包括erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症，如EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤等。

本发明第六方面涉及本发明第一方面任一项所述的化合物I的多晶型物，所述多晶型物用作治疗和/或预防哺乳动物(包括人)与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症的药物。

本发明第六方面还涉及本发明第一方面任一项所述的化合物I的多晶型物，所述多晶型物用作治疗或辅助治疗和/或预防哺乳动物(包括人)由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的药物。

根据本发明，完全可以预期本发明化合物I的多晶型物可以用作药物，所述药物可以治疗erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症，如EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤等。为此，本发明上述“与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症”以及“由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤”或“由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移”所涉及的肿瘤或癌症可以包括上述erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症，如EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤等。

下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

本发明的化合物I的多晶型物以2θ角度表示的X-射线粉末衍射特征峰，其中“±0.2°”为允许的测量误差范围。

本发明的化合物I的多晶型物可以与其它活性成分组合使用，只要它不产生其他不利作用，例如过敏反应。

本发明化合物I的多晶型物所示的活性化合物可作为唯一的抗癌药物使用，或者可以与一种或多种其他抗肿瘤药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。

本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。

可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。

当用于上述治疗和/或预防或其他治疗和/或预防时，治疗和/或预防有效量的一种本发明化合物I的多晶型物可以以纯形式应用，或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。词语“治疗和/或预防有效量”的本发明化合物I的多晶型物指以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明化合物I的多晶型物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明化合物I的多晶型物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001～1000mg/kg体重/天，例如介于0.01～100mg/kg体重/天，例如介于0.01～10mg/kg体重/天。

运用本领域技术人员熟悉的药物载体可以制备成含有效剂量的本发明化合物I的多晶型物的药物组合物。因此本发明还提供包含与一种或多种无毒药物可接受载体配制在一起的本发明化合物I的多晶型物的药物组合物。所述药物组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药、供胃肠外注射或供直肠给药。

所述的药物组合物可配制成许多剂型，便于给药，例如，口服制剂(如片剂、胶囊剂、溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射水可立即使用)。所述的药物组合物中载体包括：口服制剂使用的粘合剂(如淀粉，通常是玉米、小麦或米淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮)，稀释剂(如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素，和/或甘油)，润滑剂(如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐，通常是硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇)，以及如果需要，还含有崩解剂，如淀粉、琼脂、海藻酸或其盐，通常是海藻酸钠，和/或泡腾混合物，助溶剂、稳定剂、悬浮剂、色素、矫味剂等，可注射的制剂使用的防腐剂、溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可以将其配制成肠衣片剂。

更具体地说，本发明的药物组合物可通过口服、直肠、胃肠外、池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏剂或滴剂)、口颊给予人类和其他哺乳动物，或者作为口腔喷雾剂或鼻腔喷雾剂给予。本文所用术语“胃肠外”指包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸骨内、皮下和关节内注射和输液的给药方式。

适合于胃肠外注射的组合物可包括生理上可接受的无菌含水或非水溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂，及供重构成无菌可注射溶液剂或分散剂的无菌散剂。合适的含水或非水载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、植物油(如橄榄油)、可注射有机酯如油酸乙酯及它们的合适混合物。

这些组合物也可含有辅料，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止微生物的作用。还期望包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸铝和明胶，可达到可注射药物形式的延长吸收。

混悬剂中除活性化合物外还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或者这些物质的混合物等。

在一些情况下，为延长药物的作用，期望减慢皮下或肌内注射药物的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂来实现。这样，药物的吸收速度取决于其溶解速度，而溶解速度又可取决于晶体大小和晶型。或者，胃肠外给药的药物形式的延迟吸收通过将该药物溶解于或悬浮于油媒介物中来实现。

可注射贮库制剂形式可通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯(polylactide-polyglycolide)中形成药物的微胶囊基质来制备。可根据药物与聚合物之比和所采用的具体聚合物的性质，对药物释放速度加以控制。其他生物可降解聚合物的实例包括聚原酸酯类(poly(orthoesters))和聚酐类(poly(anhydrides))。可注射贮库制剂也可通过将药物包埋于能与身体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

可注射制剂可例如通过用滤菌器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述固体组合物可在临用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质。

本发明化合物I的多晶型物或其组合物可用口服方法或非胃肠道给药方式。口服给药可以是片剂、胶囊剂、包衣剂，肠道外用药制剂有注射剂和栓剂等。这些制剂是按照本领域的技术人员所熟悉的方法制备的。为了制造片剂、胶囊剂、包衣剂所用的辅料是常规用的辅料，例如淀粉、明胶、阿拉伯胶，硅石，聚乙二醇，液体剂型所用的溶剂如水、乙醇、丙二醇、植物油(如玉米油、花生油、橄榄油等)。含有本发明化合物I的多晶型物的制剂中还有其它辅料，例如表面活性剂，润滑剂，崩解剂，防腐剂，矫味剂和色素等。在片剂、胶囊剂、包衣剂、注射剂和栓剂中含有本发明化合物I的多晶型物的剂量是以单元剂型中存在的化合物量计算的。在单元剂型中本发明化合物I的多晶型物的一般含量为1～5000mg，优选的单元剂型含有10～500mg，更优选的单元剂型含有20～300mg。具体地说，本发明可以提供的供口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性的药物可接受赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c)保湿剂如甘油；d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂如石蜡；f)吸收加速剂如季铵化合物；g)湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂如高岭土和膨润土以及i)润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型中也可包含缓冲剂。

相似类型的固体组合物使用赋形剂例如乳糖及高分子量聚乙二醇等，也可用作软胶囊和硬胶囊中的填充物。

片剂、糖衣丸剂(dragees)、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可与包衣和壳料如肠溶衣材和医药制剂领域公知的其他衣材一起制备。这些固体剂型可任选含有遮光剂，且其组成还可使其只是或优先地在肠道的某个部位任选以延迟方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括高分子物质和蜡类。如果适合，活性化合物也可与一种或多种上述赋形剂配成微囊形式。

供口服给药的液体剂型包括药学可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。液体剂型除含有活性化合物外还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇(tetrahydrofurfurylalcohol)、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及它们的混合物。口服组合物除包含惰性稀释剂外还可包含辅料，例如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香味剂。

供直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂。栓剂可通过将本发明化合物I的多晶型物与合适的非刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，它们在室温下为固体，但在体温下则为液体，因此可在直肠腔或阴道腔内熔化而释放出活性化合物。

本发明的化合物I的多晶型物及其组合物还考虑用于局部给药。供局部给予本发明化合物I的多晶型物的剂量形式包括散剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。在无菌条件下将活性化合物与药学可接受的载体和任何所需的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼用制剂、眼软膏剂、散剂和溶液剂也被考虑在本发明范围内。

本发明化合物I的多晶型物也可以脂质体形式给药。如本领域所公知，脂质体通常用磷脂或其他脂类物质制得。脂质体由分散于含水介质中的单层或多层水化液晶所形成。任何能够形成脂质体的无毒、生理上可接受和可代谢的脂质均可使用。脂质体形式的本发明组合物除含有本发明化合物外，还可含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂类是天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，它们可单独或者一起使用。形成脂质体的方法是本领域公知的。参见例如Prescott,Ed.,MethodsinCellBiology,VolumeXIV,AcademicPress,NewYork,N.Y.(1976),p33。

本发明人惊奇地发现，化合物I的多晶型物对EGFR和Her2酪氨酸激酶都显示了抑制活性，同时，对EGFR和Her2酪氨酸激酶高表达的细胞株有抑制作用，因此，本发明化合物I的多晶型物可用于EGFR和Her2受体酪氨酸激酶单独或部分介导的疾病，主要通过抑制一种或多种EGFR家族酪氨酸激酶，并通过抑制激酶的活性产生抗增殖、抗迁移、促凋亡作用。具体地说，本发明化合物I的多晶型物可通过对EGFR和Her2酪氨酸激酶的抑制作用，用于预防和治疗一种或多种erbB受体酪氨酸激酶敏感的肿瘤，尤其是EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤。包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴的癌症，非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤。

附图说明：

图1化合物I无定形物的X-射线粉末衍射图谱。

图2化合物I晶型A的X-射线粉末衍射图谱。

图3化合物I晶型A的差示扫描量热图谱。

图4化合物I晶型B的X-射线粉末衍射图谱。

图5化合物I晶型B的差示扫描量热图谱。

图6化合物I晶型C的X-射线粉末衍射图谱。

图7化合物I晶型D的X-射线粉末衍射图谱。

图8化合物I晶型A、B、C、D之间的关系。

具体实施方式：

下面通过具体的制备实施例和生物学试验例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例和试验例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

本发明所用的检测仪器：

(1)核磁共振谱

仪器型号：VarianINOVA-400核磁共振仪。

测试条件：溶剂DMSO-d₆。

(2)高分辨质谱

仪器型号：Q-Tofmicro质谱仪。

测试条件：ESI。

(3)X-射线粉末衍射仪

辐射源：Cu靶Kα辐射。

样品处理：样品研细后，置于标准样品架中测定。

(4)差示扫描量热分析

仪器型号：NETZSCH热分析仪。

测试条件：50℃10℃/min。

按照CN102030742A中描述的方法可以制备化合物II，如实施例1所示。

实施例1：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基 氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺(化合物II)的制备：

a.Boc保护的2-巯基乙胺的制备：

在反应瓶中加入二碳酸二叔丁酯35.3g、2-巯基乙胺盐酸盐20.4g和200ml二氯甲烷，并在冰浴条件下分批加入三乙胺25ml，室温搅拌反应过夜，加入过量0.5M的盐酸溶液洗涤，有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂得Boc保护的2-巯基乙胺8g(油状液体)，产率87%。

b.Boc保护的2-甲硫基乙胺的制备：

冰浴、氮气保护条件下，将NaH4.8g分批加入Boc保护的2-巯基乙胺28g的无水四氢呋喃(250ml)溶液中，升至室温反应1h，冰浴条件下滴加12ml碘甲烷的四氢呋喃溶液，滴毕后室温反应约1h，加入饱和碳酸钠溶液淬灭反应，将反应液倾入水中，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂得油状液体。柱层析得到Boc保护的2-甲硫基乙胺14.2g，产率47%。

c.Boc保护的2-甲亚砜基乙胺的制备：

冰浴条件下，将Boc保护的2-甲硫基乙胺14.0g溶于甲醇中，滴加高碘酸钠的水溶液，加毕后室温搅拌反应过夜，过滤，二氯甲烷洗涤滤饼，减压蒸除滤液中的有机溶剂，加入饱和氯化钠溶液，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤减压蒸除溶剂得Boc保护的2-甲亚砜基乙胺13.2g(油状物)，产率87%。

d.Boc保护的2-甲亚砜基乙胺盐酸盐的制备：

将Boc保护的2-甲亚砜基乙胺12g溶于无水乙醚中，通入盐酸气体，TLC检测原料反应完毕，减压蒸除溶剂得Boc保护的2-甲亚砜基乙胺盐酸盐6.8g(油状物)，产率82%。

e.N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲 基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺的制备：

将化合物5-(4-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯胺基)-6-喹唑啉基)呋喃-2-甲醛对甲苯磺酸盐12g溶于二氯甲烷/甲醇(3:1)的混合溶液中，加入12ml三乙胺搅拌反应10min，加入2-甲亚砜乙胺盐酸盐6.0g，室温搅拌反应，TLC检测原料反应完毕，冰浴下分批加入硼氢化钠2.0g，TLC检测反应完毕，加入适量二氯甲烷，饱和氯化铵溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得黄色固体7.3g，即为N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺(化合物II)，产率69%。

¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆,δppm)：9.92(s,1H),9.044(s,1H),8.92(s,1H),8.41(t,1H,J=6.6Hz),7.93(d,1H,J=7.8Hz),7.64(dd,1H,J=2.4Hz,J=9Hz),7.50(d,1H,J=7.8Hz),7.48(d,1H,J=9.6Hz),7.36(d,1H,J=9Hz),7.25(d,1H,J=3.0Hz),7.22(dd,1H,J=2.4Hz,J=9Hz),7.11(d,1H,J=7.2Hz),7.25(d,1H,J=3.0Hz),5.32(s,2H),4.47(s,2H),3.51(t,2H,J=7.2Hz),2.67(t,2H,J=7.2Hz),2.29(s,3H)。

MS(m/z):[M-H]563.1389。

实施例2：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基 氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸盐(化合物I)的制备

参照CN102030742A的制备方法，将化合物II2g(3.54mmol)加入10ml四氢呋喃中，搅拌溶解，加入对甲苯磺酸1.83g(10.6mmol)的乙醇溶液，迅速析出黄色固体，抽滤，晾干，得3.01gN-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸盐(黄色固体)，收率93.5%。

X-射线粉末衍射表明该产物为无定形物，XRPD图谱见图1所示。

MS(m/z):[M-H]907.1713。

核磁共振谱：¹H、COSY谱(600MHz,DMSO-d₆)

测试结果：

表1核磁共振 ¹ H、COSY谱数据列表

实施例3：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基 氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸盐(化合物I)晶型C的制 备

将化合物I2g加入40ml四氢呋喃和5ml水的混合体系中，回流溶解，降温析晶，抽滤，晾干，得1.6g黄色结晶性粉末，收率80%。将得到的产物进行X-射线粉末衍射，结果表明该产物为化合物I晶型C，XRPD图谱见图6所示。

实施例4：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基 氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸盐(化合物I)晶型A的制 备

将化合物I晶型C2g在80℃条件下烘干1小时，得黄色结晶性粉末，将得到的产物进行X-射线粉末衍射，结果表明该产物为化合物I晶型A，XRPD图谱见图2所示；DSC检测数据显示晶型A在240.82～255.59℃熔融分解，差示扫描量热(DSC)图谱见图3所示。

实施例5：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基 氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸盐(化合物I)晶型D的制 备

将化合物I2g加入40ml乙醇和6ml水的混合体系中，回流溶解，降温析晶，抽滤，晾干，得1.7g黄色结晶性粉末，收率85%，将得到的产物进行X-射线粉末衍射，结果表明该产物为化合物I晶型D，XRPD图谱见图7所示。

实施例6：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基 氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸盐(化合物I)晶型B的制 备

将化合物I晶型D2g在80℃条件下烘干1小时，得黄色结晶性粉末，将得到的产物进行X-射线粉末衍射，结果表明该产物为化合物I晶型B，XRPD图谱见图4所示；DSC检测数据显示晶型B在239.11～254.49℃熔融分解；DSC图谱见图5所示。

(注：由于化合物I晶型C、D高温(60℃以上)会转化为化合物I晶型A、B，因此未进行DSC检测。)

本发明对化合物I无定形物、晶型A、B、C、D的稳定性进行了研究，于温度25±2℃，湿度60%±10%；温度40±2℃，湿度75%±5%条件下对稳定性考察6个月。试验结果显示，化合物I无定形物有明显的降解，说明化合物I无定形物稳定性较差；晶型A、B、C、D最大单质和总杂质均未见明显增加，并将上述考察后的样品经X-射线粉末衍射等分析测试方法验证化合物I晶型A、B、C、D均稳定。试验结果见表2。

表2化合物I无定形物、晶型A、B、C、D的稳定性试验结果

本发明对化合物II、化合物I无定形物、晶型A、B、C、D的溶解度进行了研究。取拟检测化合物，置250ml的碘量瓶中，加水，于25℃±2℃，每间隔5分钟强力振摇30秒钟，观察30分钟内的溶解情况。试验结果见表3。

表3化合物II、化合物I无定形物、晶型A、B、C、D的在水中溶解度试验结果

化合物	溶质/溶剂	现象	溶解度
				实施例I得到的化合物II	10mg/99ml	未全溶	不溶
实施例2所得的化合物I无定形物	0.1g/100ml	溶解	微溶
				实施例4得到的化合物I晶型A	0.1g/100ml	溶解	微溶
实施例6得到的化合物I晶型B	0.1g/100ml	溶解	微溶
				实施例3得到的化合物I晶型C	0.1g/100ml	溶解	微溶
实施例5得到的化合物I晶型D	0.1g/100ml	溶解	微溶

结果表明：化合物II在水中不溶，化合物I无定形物、晶型A、B、C、D在水中微溶,说明晶型A、B、C、D比化合物II更有利于药物在体内的溶出。

生物学实验

可以使用以下实验来测定本发明所述化合物对erbB酪氨酸激酶的活性作用以及在体外作为N87细胞和BT474细胞抑制剂的作用。

A)蛋白酪氨酸激酶磷酸化测定

体外激酶分析用CellSignalingTechnology公司的HTScanEGFReceptorKinaseAssayKit(#7909)和HTScanHER2/ErbB2KinaseAssayKit(#7058)检测。操作步骤参照试剂盒说明书，该方法在体外检测待测化合物对EGFR或Her2受体酪氨酸激酶对底物肽磷酸化的抑制作用。室温下激酶反应缓冲液中温育ATP和底物肽以及待测化合物，孵育一段时间后，加入终止液终止反应并将样品转移到链霉亲和素包被的96孔板中，洗板并用HRP标记的抗底物磷酸化抗体检测底物肽上的磷酸化水平，用TMB显色，2M硫酸中止反应。检测450nm吸收波长，计算IC₅₀值(μM)。结果见表2所示。

B)细胞增值抑制

参考Rusnak等，CellProlif，2007，40，580-594中描述的方法进行试验。细胞增殖抑制试验采用人乳腺癌细胞BT474和人胃癌细胞系NCI-N87，BT474高表达Her2受体，N87高表达EGFR和Her2受体。

在含10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)中，在37℃、5%CO₂细胞培养箱中培养细胞，应用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)从细胞培养瓶中收获细胞。细胞以4000/孔(0.1ml培养基)加入96孔细胞培养板贴壁过夜，加入0.1ml待测化合物的稀释液，DMSO的最终浓度为0.25%，将细胞培养板在37℃，5%的CO₂条件下温育72h。然后在显微镜下观察细胞形态的变化，然后每孔加入50%(质量/体积)的三氯乙酸(TCA)50μl固定细胞。TCA的终浓度为10%，静置5min后在4℃冰箱中放置1h，培养板各孔用去离子水冲洗5遍，以去除TCA，甩干，空气干燥至无湿迹。每孔加0.4%(质量/体积)的SRB100μl，室温放置10min，弃去各孔内液体后用1%乙酸冲洗5遍，空气干燥后用pH为10.5，10mMTrisbase(三羟甲基氨基甲烷)150μl萃取，检测540nm的吸收波长。结果IC₅₀值(μM)见表4所示。

表4本发明化合物I的晶型A、B、C、D对EGFR和Her2的抑制活性分析

注：“++++”指IC₅₀值＜0.025μM；“+++”指IC₅₀值为0.025-0.10μM。

在作为评价化合物生物学活性的一个重要的“细胞增殖抑制试验”中可以看到，本发明化合物I的晶型A、B、C、D均具有较好的生物学活性。

结果表明，本发明的化合物I的晶型A、B、C、D都是有效的酪氨酸激酶抑制剂。

Claims (13)

1.化合物I的多晶型物，其特征在于，具有如图2所示的X-射线粉末衍射图谱

2.根据权利要求1所述的化合物I的多晶型物，其差示扫描量热分析显示，该多晶型物在240.82～255.59℃熔融分解。

3.根据权利要求1至2任一项所述的化合物I的多晶型物的制备方法，包括如下步骤：

将化合物I在加热回流条件下溶于四氢呋喃/水体系中，降温析晶，过滤，晾干，然后在60～150℃下烘干，得化合物I的多晶型物，

其中所述的四氢呋喃和水的体积比为20:1～1:10。

4.一种药物组合物，其包含权利要求1至2任一项所述的化合物I的多晶型物，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。

5.权利要求1所述的化合物I的多晶型物在制备用于治疗和/或预防哺乳动物与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症的药物中的用途。

6.权利要求1所述的化合物I的多晶型物在制备用于治疗或辅助治疗和/或预防哺乳动物由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的药物中的用途；其中所述的由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤为erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症。

7.根据权利要求5或6所述的用途，其特征在于，所述哺乳动物为人。

8.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症为EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤为实体肿瘤。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述实体肿瘤选自胆管、骨、膀胱、中枢神经系统、乳房、结直肠、胃、头、颈、肝、肺、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫、外阴的癌症。

11.根据权要求10所述的用途，其特征在于，所述中枢神经系统是指脑。

12.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤为非实体肿瘤。

13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述非实体肿瘤选自白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤。