CN103819462B

CN103819462B - 一种药用盐及其制备方法和用途

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Publication number: CN103819462B
Application number: CN201210469740.0A
Authority: CN
Inventors: 范传文; 冷传新; 张进; 林栋�; 王丙忠; 王会成
Original assignee: Qilu Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: QILU PHARMACEUTICAL (HAINAN) Co.,Ltd.; Qilu Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2012-11-19
Filing date: 2012-11-19
Publication date: 2017-07-25
Anticipated expiration: 2032-11-19
Also published as: CN103819462A

Abstract

本发明涉及一种药用盐及其制备方法和用途。具体地，涉及式II所示的N‑(4‑(3‑氟苄氧基)‑3‑氯苯基)‑6‑(5‑((2‑(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)‑2‑呋喃基)‑喹唑啉‑4‑胺的酸加成盐，包括无机酸盐和有机酸盐。本发明还涉该药用盐的制备方法、包括它的药物组合物及制药用途。本发明式II所示的药用盐是有效的酪氨酸激酶抑制剂。

Description

一种药用盐及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于医药化工领域，具体涉及一种新的具有抗肿瘤活性的化合物N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺的药用盐及其制备方法和用途。

背景技术

中国专利CN102030742A公开了化合物N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺（式I），式I化合物是有效的酪氨酸激酶抑制剂，其可以用于治疗与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症，例如作为抗癌剂使用。

式I化合物为黄色粘稠状的固体，本发明人以开发具有良好理化性质，更适于制备成药用组合物形式的化合物为目的，对式I化合物的药用盐进行了研究，结果发现式I化合物的酸加成盐是有效的酪氨酸激酶抑制剂，对细胞增殖有抑制作用，作为预防或治疗癌症的药物是有用的，同时式I化合物的酸加成盐具有更好的稳定性、溶解性，从而完成了本发明。

发明内容

本发明第一方面提供式II所示的N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺的酸加成盐，

其中：n为1或2；X为酸根，所述的酸根为选自盐酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、苯磺酸、草酸、甲酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、二苯甲酰酒石酸、柠檬酸的酸根。

由于式I化合物的结构上有两个碱基（-NH-），可与一个多元酸形成盐，也可与两个相同的一元酸形成二盐。所述的一元酸包括盐酸、硝酸、苯磺酸、甲磺酸、苯甲酸、甲酸；所述的多元酸包括二元酸和三元酸，其中二元酸包括硫酸、草酸、马来酸、酒石酸、二苯甲酰酒石酸、富马酸、苹果酸；三元酸包括：柠檬酸。

因此，n=1时，所述的酸根X为选自硫酸、草酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、二苯甲酰酒石酸、富马酸、苹果酸的酸根；n=2时，所述的酸根X为选自盐酸、硝酸、苯磺酸、甲磺酸、苯甲酸、甲酸的酸根。

在本发明的一个具体实施方案中，式II所示的酸加成盐选自以下加成盐：

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二盐酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二苯磺酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲磺酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二硝酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺硫酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺草酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺马来酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺柠檬酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺酒石酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二苯甲酰酒石酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺苹果酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺富马酸盐；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二苯甲酸盐。

本发明第二方面提供了本发明第一方面提供的式II所示的酸加成盐的制备方法，其包括以下步骤：

a）将式I化合物溶于有机溶剂中；

b）向溶液中加入用于成盐的酸，搅拌至析晶，过滤，得到式II所示的的酸加成盐；

其中用于成盐的酸如本发明第一方面所述定义。

上述制备方法中，其中所述的有机溶剂为选自醇类、酯类、酰胺类、环醚类、酮类、醚类、卤代烷类、芳香烃类、腈类、亚砜等的单一或混合溶剂；优选地，所述有机溶剂为选自C1-C5醇（例如乙醇、丙醇、异丙醇、甲醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇、叔丁醇、戊醇及其异构体）、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醚、二氯甲烷、甲苯、乙腈、二甲基亚砜、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺；进一步的，优选为选自乙醇、丙酮、异丙醇、甲醇、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醚、N,N-二甲基甲酰胺中的一种或两种以上的混和溶剂。

上述制备方法中，酸的用量根据所述酸可以提供质子的个数而定，如果是一元酸，比如盐酸盐、硝酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐，酸与式I化合物摩尔投料比为2~6:1，优选为2~3:1或2~4:1，进一步优选为2:1或2.5:1或3:1；

如果是多元酸，比如马来酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、草酸盐、二苯甲酰酒石酸盐、柠檬酸盐，酸与式I化合物摩尔投料比为1~6:1，优选1~4:1、1.5~3:1，进一步优选1:1或1.5:1。

上述制备方法中，其中所述的式I化合物溶于有机溶剂中，溶解温度没有特别限制，只要溶解即可。

上述制备方法中，其中，向溶液中加入用于成盐的酸后，搅拌至析出固体，对反应温度不需要特别控制，通常采用室温；对于反应终点，采用现象控制，析出固体后反应完成。

上述制备方法中，其中所述的式I化合物是本领域技术人员根据已有技术可以制备的，在一个示例性的方法中，式I化合物可以参照文献CN102030742A中描述的方法制备。

本发明第三方面涉及一种药物组合物，其包含本发明第一方面任一项所述的式II所示的酸加成盐，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。

本发明第四方面涉及本发明第一方面任一项所述的式II所示的酸加成盐在制备用于治疗和/或预防哺乳动物(包括人)与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症的药物中的用途。

本发明第四方面还涉及本发明第一方面任一项所述的式II所示的酸加成盐在制备用于治疗或辅助治疗和/或预防哺乳动物(包括人)由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的药物中的用途。

根据本发明完全可以预期本发明化合物可用于治疗erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症，如EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤等。为此，本发明上述“与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症”以及“由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤”或“由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移”所涉及的肿瘤或癌症可以包括上述erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症，如EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤等。

本发明第五方面涉及一种在有需要的哺乳动物中治疗和/或预防与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的式II所示的酸加成盐。

本发明第五方面还涉及一种在有需要的哺乳动物中治疗或辅助治疗和/或预防哺乳动物(包括人)由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的式II所示的酸加成盐。

本发明第五方面进一步涉及一种在有需要的哺乳动物中治疗和/或预防哺乳动物(包括人)的肿瘤或癌症的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的式II所示的酸加成盐，所述的肿瘤或癌症包括erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症，如EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤等。

下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

本发明式II所示的酸加成盐可以与其它活性成分组合使用，只要它不产生其他不利作用，例如过敏反应。

本发明式II所示的酸加成盐可作为唯一的抗癌药物使用，或者可以与一种或多种其他抗肿瘤药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。

本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。

可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平需根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。

当用于上述治疗和/或预防或其他治疗和/或预防时，治疗和/或预防有效量的一种本发明式II所示的酸加成盐可以以纯形式应用，或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。词语“治疗和/或预防有效量”的本发明式II所示的酸加成盐指以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明式II所示的酸加成盐和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明式II所示的酸加成盐用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001～1000mg/kg体重/天，例如介于0.01～100mg/kg体重/天，例如介于0.01～10mg/kg体重/天。

运用本领域技术人员熟悉的药物载体可以制备成含有效剂量的本发明式II所示的酸加成盐的药物组合物。因此本发明还提供包含与一种或多种无毒药物可接受载体配制在一起的本发明式II所示的酸加成盐的药物组合物。所述药物组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药、供胃肠外注射或供直肠给药。

所述的药物组合物可配制成许多剂型，便于给药，例如，口服制剂(如片剂、胶囊剂、溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射水可立即使用)。所述的药物组合物中载体包括：口服制剂使用的粘合剂(如淀粉，通常是玉米、小麦或米淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮)，稀释剂(如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素，和/或甘油)，润滑剂(如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐，通常是硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇)，以及如果需要，还含有崩解剂，如淀粉、琼脂、海藻酸或其盐，通常是藻酸钠，和/或泡腾混合物，助溶剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂等，可注射的制剂使用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可以将其配制成肠衣片剂。

更具体地说，本发明的药物组合物可通过口服、直肠、胃肠外、池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏剂或滴剂)、口颊给予人类和其他哺乳动物，或者作为口腔喷雾剂或鼻腔喷雾剂给予。本文所用术语“胃肠外”指包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸骨内、皮下和关节内注射和输液的给药方式。

适合于胃肠外注射的组合物可包括生理上可接受的无菌含水或非水溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂，及供重构成无菌可注射溶液剂或分散剂的无菌散剂。合适的含水或非水载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、植物油(如橄榄油)、可注射有机酯如油酸乙酯及它们的合适混合物。

这些组合物也可含有辅料，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止微生物的作用。还期望包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸铝和明胶，可达到可注射药物形式的延长吸收。

混悬剂中除活性化合物外还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或者这些物质的混合物等。

在一些情况下，为延长药物的作用，期望减慢皮下或肌内注射药物的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂来实现。这样，药物的吸收速度取决于其溶解速度，而溶解速度又可取决于晶体大小和晶型。或者，胃肠外给药的药物形式的延迟吸收通过将该药物溶解于或悬浮于油媒介物中来实现。

可注射贮库制剂形式可通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯(polylactide-polyglycolide)中形成药物的微胶囊基质来制备。可根据药物与聚合物之比和所采用的具体聚合物的性质，对药物释放速度加以控制。其他生物可降解聚合物的实例包括聚原酸酯类(poly(orthoesters))和聚酐类(poly(anhydrides))。可注射贮库制剂也可通过将药物包埋于能与身体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

可注射制剂可例如通过用滤菌器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述固体组合物可在临用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质。

本发明式II所示的酸加成盐或其组合物可用口服方法或非胃肠道给药方式。口服给药可以是片剂、胶囊剂、包衣剂，肠道外用药制剂有注射剂和栓剂等。这些制剂是按照本领域的技术人员所熟悉的方法制备的。为了制造片剂、胶囊剂、包衣剂所用的辅料是常规用的辅料，例如淀粉、明胶、阿拉伯胶，硅石，聚乙二醇，液体剂型所用的溶剂如水、乙醇、丙二醇、植物油(如玉米油、花生油、橄榄油等)。含有本发明化合物的制剂中还有其它辅料，例如表面活性剂，润滑剂，崩解剂，防腐剂，矫味剂和色素等。在片剂、胶囊剂、包衣剂、注射剂和栓剂中含有本发明式I化合物的剂量是以单元剂型中存在的化合物量计算的。在单元剂型中本发明式I化合物一般含量为1-5000mg，优选的单元剂型含有10-500mg，更优选的单元剂型含有20-300mg。具体地说，本发明可以提供的供口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性的药物可接受赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c)保湿剂如甘油；d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂如石蜡；f)吸收加速剂如季铵化合物；g)湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂如高岭土和膨润土以及i)润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型中也可包含缓冲剂。

相似类型的固体组合物使用赋形剂例如乳糖及高分子量聚乙二醇等，也可用作软胶囊和硬胶囊中的填充物。

片剂、糖衣丸剂(dragees)、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可与包衣和壳料如肠溶衣材和医药制剂领域公知的其他衣材一起制备。这些固体剂型可任选含有遮光剂，且其组成还可使其只是或优先地在肠道的某个部位任选以延迟方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括高分子物质和蜡类。如果适合，活性化合物也可与一种或多种上述赋形剂配成微囊形式。

供口服给药的液体剂型包括药学可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。液体剂型除含有活性化合物外还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇(tetrahydrofurfuryl alcohol)、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及它们的混合物。口服组合物除包含惰性稀释剂外还可包含辅料，例如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香味剂。

供直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂。栓剂可通过将本发明化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，它们在室温下为固体，但在体温下则为液体，因此可在直肠腔或阴道腔内熔化而释放出活性化合物。

本发明式II所示的酸加成盐及其组合物还考虑用于局部给药。供局部给予本发明化合物的剂量形式包括散剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。在无菌条件下将活性化合物与药学可接受的载体和任何所需的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼用制剂、眼软膏剂、散剂和溶液剂也被考虑在本发明范围内。

本发明式II所示的酸加成盐也可以脂质体形式给药。如本领域所公知，脂质体通常用磷脂或其他脂类物质制得。脂质体由分散于含水介质中的单层或多层水化液晶所形成。任何能够形成脂质体的无毒、生理上可接受和可代谢的脂质均可使用。脂质体形式的本发明组合物除含有本发明化合物外，还可含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂类是天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，它们可单独或者一起使用。形成脂质体的方法是本领域公知的。参见例如Prescott,Ed.,Methods in Cell Biology,Volume XIV,AcademicPress,New York， N.Y.(1976),p.33。

发明的有益效果

本发明人惊奇地发现，式II所示的酸加成盐对EGFR和Her2酪氨酸激酶都显示了抑制活性，同时，对EGFR和Her2酪氨酸激酶高表达的细胞株有抑制作用，因此，本发明的化合物可用于EGFR和Her2受体酪氨酸激酶单独或部分介导的疾病，主要通过抑制一种或多种EGFR家族酪氨酸激酶，并通过抑制激酶的活性产生抗增殖、抗迁移、促凋亡作用。具体地说，式II所示的酸加成盐可通过对EGFR和Her2酪氨酸激酶的抑制作用，用于预防和治疗一种或多种erbB受体酪氨酸激酶敏感的肿瘤，尤其是EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤。包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴的癌症，非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤。同时，式II所示的酸加成盐具有更好的稳定性和水溶解性，更有利于药物在体内的溶出，更有利于药物吸收。

具体实施方式

下面通过具体的制备实施例和生物学试验例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例和试验例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

下面实施例中用到的单位M的含义为mol/L，μM的含义为μmol/L，mM的含义为mmol/L。

单位“％（质量/体积）”的单位为g/100ml，1g/100ml其含义是指在每100ml溶液中溶解1g的溶质。

实验例3中用到的“0.4%的SRB溶液”，其中溶质为SRB（磺基罗丹明B），溶剂为1%(v/v)的乙酸水溶液，其含义是指以1%（v/v）乙酸水溶液作为溶剂，每100ml的溶液中溶解0.4g的SRB。

本发明所用的检查仪器：

核磁共振谱

仪器型号：Varian INOVA-400核磁共振仪

测试条件：溶剂DMSO-d6

高分辨质谱

仪器型号：Q-Tofmicro质谱仪

测试条件：ESI（电喷雾）

按照CN102030742A中描述的方法可以制备化合物I，如实施例1所示。

实施例1：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺（式I化合物）的合成：

a.Boc保护的2-巯基乙胺的合成：

在反应瓶中加入二碳酸二叔丁酯35.3g、2-巯基乙胺盐酸盐20.4g和200ml二氯甲烷冰浴条件下分批加入三乙胺25ml，室温搅拌反应过夜，加入过量0.5M的盐酸溶液洗涤，有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂得油状液体8g，产率87%。

b.Boc保护的2-甲硫基乙胺的合成：

冰浴、氮气保护条件下，将NaH 4.8g分批加入Boc保护的2-巯基乙胺28g的无水四氢呋喃(250ml)溶液中，升至室温反应1h，冰浴条件下滴加12ml碘甲烷的四氢呋喃溶液，滴毕后室温反应约1h，加入饱和碳酸钠溶液淬灭反应，将反应液倾入水中，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂得油状液体。柱层析得到目标产物14.2g，产率47%。

c.Boc保护的2-甲亚砜基乙胺的合成：

冰浴条件下，将Boc保护的2-甲硫基乙胺14.0g溶于甲醇中，滴加高碘酸钠的水溶液，加毕后室温搅拌反应过夜，过滤，二氯甲烷洗涤滤饼，减压蒸除滤液中的有机试剂，加入饱和氯化钠溶液，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤减压蒸除溶剂得油状物13.2g，产率87%。

d.Boc保护的2-甲亚砜基乙胺盐酸盐的合成：

将Boc保护的2-甲亚砜基乙胺12g溶于无水乙醚中，通入盐酸气体，TLC检测原料反应完毕，减压蒸除溶剂得油状物6.8g，产率82%。

e.N-(4-(3-氟苄氧基)3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺的合成：

将化合物5-(4-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯胺基)-6-喹唑啉基)呋喃-2-甲醛对甲苯磺酸盐12g溶于二氯甲烷/甲醇(3：1)的混合溶液中，加入12ml三乙胺搅拌反应10min，加入2-甲亚砜乙胺盐酸盐6.0g，室温搅拌反应，TLC检测原料反应完毕，冰浴下分批加入硼氢化钠2.0g，TLC检测反应完毕，加入适量二氯甲烷，饱和氯化铵溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得黄色固体7.3g，即为N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺（式I化合物），产率69%。

¹H-NM(600MHz,DMSO-d₆,δppm)：9.92(s,1H),9.044(s,1H),8.92(s,1H),8.41(t,1H,J=6.6Hz),7.93(d,1H,J=7.8Hz),7.64(dd,1H,J=2.4Hz,J=9Hz),7.50(d,1H,J=7.8Hz),7.48(d,1H,J=9.6Hz),7.36(d,1H,J=9Hz),7.25(d,1H,J=3.0Hz),7.22(dd,1H,J=2.4Hz,J=9Hz),7.11(d,1H,J=7.2Hz),7.25(d,1H,J=3.0Hz),5.32(s,2H),4.47(s,2H),3.51(t,2H,J=7.2Hz),2.67(t,2H,J=7.2Hz),2.29(s,3H).

MS(m/z):[M-H]563.1389。

实施例2：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二盐酸盐（化合物2）的制备

将实施例1制备的式I化合物2g（3.54mmol）加入10ml乙醇中，搅拌溶解，加入含有0.39g（10.6mmol）HCl的乙醚溶液5ml，析出黄色固体，抽滤，晾干，得2.10g N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二盐酸盐，收率93.0%

MS(m/z):[M-H]635.0871

实施例3：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二苯磺酸盐（化合物3）的制备

将实施例1制备的式I化合物2g（3.54mmol）加入10ml乙醇中，搅拌溶解，加入苯磺酸1.83g（10.6mmol），析出黄色固体，抽滤，晾干，得2.92g N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二苯磺酸盐，收率93.6%

MS(m/z):[M-H]879.1443

实施例4：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲磺酸盐（化合物4）的制备

将实施例1制备的式I化合物2g（3.54mmol）加入10ml乙醇中，搅拌溶解，加入甲磺酸1.02g（10.6mmol），析出黄色固体，抽滤，晾干，得2.48g N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲磺酸盐，收率92.5%

MS(m/z):[M-H]755.1201

实施例5：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二硝酸盐（化合物5）的制备

将实施例1制备的式I化合物2g（3.54mmol）加入10ml丙酮及3ml甲醇中，搅拌溶解，加入含硝酸0.67g（10.6mmol）的甲醇溶液5ml，析出黄色固体，抽滤，晾干，得2.25g N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二硝酸盐，收率92.0%

MS(m/z):[M-H]689.1279

实施例6：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺硫酸盐（化合物6）的制备

将实施例1制备的式I化合物2g（3.54mmol）加入10ml丙酮及3ml甲醇中，搅拌溶解，加入含硫酸0.35g（3.54mmol）的甲醇溶液5ml，析出黄色固体，抽滤，晾干，得2.13g N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺硫酸盐，收率90.8%

MS(m/z):[M-H]661.1013

实施例7：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺草酸盐（化合物7）的制备

将实施例1制备的式I化合物2g（3.54mmol）加入10ml乙腈中，搅拌溶解，加入草酸0.32g（3.54mmol），析出黄色固体，抽滤，晾干，得2.10g N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺草酸盐，收率90.6%

MS(m/z):[M-H]653.1332

实施例8：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺马来酸盐（化合物8）的制备

将实施例1制备的式I化合物2g（3.54mmol）加入10ml乙醇中，搅拌溶解，加入马来酸0.41g（3.54mmol），析出黄色固体，抽滤，晾干，得2.16g N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺马来酸盐，收率89.6%

MS(m/z):[M-H]679.1493

实施例9：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺柠檬酸盐（化合物9）的制备

将实施例1制备的式I化合物2g（3.54mmol）加入10ml乙醇中，搅拌溶解，加入柠檬酸0.68g（3.54mmol），析出黄色固体，抽滤，晾干，得2.39g N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺柠檬酸盐，收率89.2%

MS(m/z):[M-H]755.1654

实施例10-15：化合物10-15的制备：采用将式I化合物溶到乙醇中，加入相应的酸，析晶，得到相应的化合物，高分辨质谱信息见表1。

表1化合物10-15高分辨质谱信息

实验例1：对本发明对化合物2、化合物4、化合物6、化合物7、化合物8的稳定性进行了研究，于温度40±2℃，湿度75%±5%条件下对稳定性考察6个月。试验结果显示，4个化合物均稳定。试验结果见表2。

表2化合物2、4、6、7、8的稳定性试验结果

其他化合物I的酸加成盐的稳定性考察后的纯度也在99.5%以上，可以看出，本发明化合物I的酸加成盐有良好的稳定性。

实验例2：对本发明对化合物I、化合物2-15的溶解度进行了研究。取拟检测化合物（化合物I以及实施例2-15制备的化合物2-15），置于250ml的碘量瓶中，加水，于25℃±2℃，每间隔5分钟强力振摇30秒钟，观察30分钟内的溶解情况。

表3式I化合物及化合物2-15在水中溶解度试验结果

实施例1制备得到的化合物I的溶解度为10mg/100ml，且不能全部溶解。本发明化合物2-15的溶解度在0.1g/100ml以上，均全部溶解。说明式II所示的酸加成盐更有利于药物在体内的溶出。

实验例3：可以使用以下实验来测定本发明所述化合物对ErbB酪氨酸激酶的活性作用以及在体外作为N87细胞和BT474细胞抑制剂的作用。

A)蛋白酪氨酸激酶磷酸化测定

体外激酶分析用Cell Signaling Technology公司的HTScan EGFReceptorKinase Assay Kit(#7909)和HTScan HER2/ErbB2 KinaseAssay Kit(#7058)检测。操作步骤参照试剂盒说明书，采用该方法在体外检测待测化合物（实施例2-15制备的化合物2-15）对EGFR或Her2受体酪氨酸激酶对底物肽磷酸化的抑制作用。室温下激酶反应缓冲液（60mMN-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸（HEPES），5mM MgCl₂，5mMMnCl₂，3μM Na₃VO₄）中温育ATP（腺嘌呤核苷三磷酸）和底物肽（Gastrin Precursor(Tyr87)Biotinylated Peptide）以及待测化合物（实施例2-15制备的化合物2-15），孵育一段时间后，加入终止液（5mMEDTA pH8）终止反应并将样品转移到链霉亲和素包被的96孔板中，洗板并用HRP（辣根过氧化物酶）标记的抗底物磷酸化抗体检测底物肽上的磷酸化水平，用TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）显色，加入2M硫酸（100μl/孔，）中止反应。检测450nm波长处的吸光度值，以化合物浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐标，然后采用GRAPHPAD PRISM5软件做剂量-效应曲线拟合，计算得IC₅₀(μM)值。具体IC₅₀(μM)值参见表4。

结果表明本发明化合物2-15对EGFR激酶活性抑制作用的IC₅₀(μM)值在0.01μM至0.2μM之间；本发明化合物2-15对Her2激酶活性抑制作用的IC₅₀(μM)值在0.04μM至0.05μM之间。

表4：本发明化合物对EGFR及her2激酶活性的抑制作用

B)细胞增殖抑制试验

参考Rusnak等，Cell Prolif，2007，40，580-594中描述的方法进行试验。细胞增殖抑制试验采用人乳腺癌细胞BT474（购自ATCC）和人胃癌细胞系NCI-N87（购自上海细胞所）。

在含10%（质量/体积）胎牛血清、2mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的Dulbecco改良Eagle培养基(即DMEM液体培养基，购自Gibco)中，在37℃、5%（v/v）CO₂细胞培养箱中培养细胞（人乳腺癌细胞BT474或人胃癌细胞系NCI-N87），应用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)从细胞培养瓶中收获细胞。细胞以4000个/孔(0.1ml培养基/孔)加入96孔细胞培养板贴壁过夜后，加入0.1ml待测化合物（实施例2-15制备的化合物2-15）的稀释液（待测化合物用DMSO溶解为10mM的母液，然后用DMEM培养基稀释为浓度1,0.5,0.25,0.125,0.0625μM的待测化合物溶液），阴性对照孔加入DMSO（Dimethyl sulfoxide，DMSO，二甲基亚砜）。使得每个孔的最终DMSO的浓度为0.25%（v/v）且保持各孔溶液总体积一致。将细胞培养板在37℃，5%的CO₂条件下温育72h后在显微镜下观察细胞形态的变化，然后每孔加入50%(质量/体积)的三氯乙酸(TCA)水溶液50μl固定细胞。TCA的终浓度为10%(质量/体积)，静置5min后在4℃冰箱中放置1h，培养板各孔用去离子水冲洗5遍，以去除TCA，甩干，空气干燥至无湿迹。每孔加0.4%(质量/体积)的SRB（磺基罗丹明B）溶液100μl，室温放置10min，弃去各孔内液体后用1%(v/v)乙酸水溶液冲洗5遍，空气干燥后用pH为10.5，10mM Trisbase(三羟甲基氨基甲烷)150μl萃取，检测540nm的吸收波长处的吸光度，以化合物浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐标，然后采用GRAPHPAD PRISM 5软件做剂量-效应曲线拟合，计算得IC₅₀(μM)值。具体IC₅₀(μM)值参见表5。

结果表明，本发明化合物2-15对人胃癌细胞系NCI-N87增殖抑制作用的IC₅₀(μM)值在0.02μM至0.03μM之间；本发明化合物2-15对人乳腺癌细胞BT474增殖抑制作用的IC₅₀(μM)值在0.03μM至0.04μM之间。

表5：本发明化合物对肿瘤细胞的增殖抑制作用

从以上试验结果可以看出，本发明所述的式I化合物的酸加成盐具有较好的生物学活性，是有效的酪氨酸激酶抑制剂。

Claims

1.式II所示的N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺的酸加成盐，

其中：n为2；X为酸根，所述的酸根为选自盐酸、甲磺酸的酸根，

所述的酸加成盐为以下化合物：

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亚砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲磺酸盐。

2.权利要求1所述的酸加成盐的制备方法，其包括以下步骤：

a)将式I所示化合物溶于有机溶剂中；

b)向步骤a)中得到的溶液中加入用于成盐的酸，搅拌至析出固体，过滤，得到式II所示的酸加成盐；其中成盐的酸如权利要求1所述定义，

3.根据权利要求2所述的制备方法，其中所述有机溶剂为选自乙醇、丙酮、异丙醇、甲醇、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醚、N,N-二甲基甲酰胺中的一种或两种以上的混合溶剂。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其中所述酸与式I化合物摩尔投料比为2:1或2.5:1或3:1。

5.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的酸加成盐，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。

6.权利要求1所述的酸加成盐在制备用于治疗和/或预防哺乳动物与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症的药物中的用途。

7.权利要求1所述的酸加成盐在制备用于治疗或辅助治疗和/或预防哺乳动物由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的药物中的用途。

8.权利要求6所述的用途，其中所述的与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症为erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症。

9.权利要求7所述的用途，其中所述的由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移为erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症。

10.权利要求8或9所述的用途，其中所述的erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症为EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，选自实体肿瘤和非实体肿瘤。

11.权利要求6或7所述的用途，其中所述的哺乳动物为人。

12.权利要求10所述的用途，其中所述的实体肿瘤为胆管、骨、膀胱、中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫或外阴的癌症。

13.权利要求12所述的用途，其中所述的肺的癌症为非小细胞肺癌。

14.权利要求12所述的用途，其中所述的中枢神经系统的癌症为脑或神经元的癌症。

15.权利要求10所述的用途，其中所述的非实体肿瘤为白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤。