CN103275973B - 用于辅助鉴定具有滞绿表型的大豆的特异引物对及其应用 - Google Patents
用于辅助鉴定具有滞绿表型的大豆的特异引物对及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103275973B CN103275973B CN201310157105.3A CN201310157105A CN103275973B CN 103275973 B CN103275973 B CN 103275973B CN 201310157105 A CN201310157105 A CN 201310157105A CN 103275973 B CN103275973 B CN 103275973B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- soybean
- sequence
- cytg
- primer pair
- specific primer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 title claims abstract description 128
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 title claims abstract description 128
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 6
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 abstract 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 abstract 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 76
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 21
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 7
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 7
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 2
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- 108010034715 Light-Harvesting Protein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 108010081996 Photosystem I Protein Complex Proteins 0.000 description 1
- 241001464837 Viridiplantae Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000021393 food security Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000002377 thylakoid Anatomy 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于辅助鉴定具有滞绿表型的大豆的特异引物对及其应用。本发明提供的特异引物对，由序列表的序列5所示单链DNA分子和序列表的序列6所示单链DNA分子组成。本发明还所述特异引物对在辅助鉴定具有滞绿表型的大豆中的应用。本发明还保护特异引物对在辅助筛选具有滞绿表型的大豆中的应用。本发明还保护特异引物对在鉴定携带cytG基因的大豆或携带cytG-m基因的大豆中到的应用；所述cytG基因如序列表的序列2所示，所述cytG-m基因如序列表的序列4所示。本发明可用于筛选具有滞绿表型或不具有滞绿表型大豆的筛选和育种，相同传统筛选育种方法，具有时间短、成本低、可以高通量进行的优点，对于大豆育种具有重大价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于辅助鉴定具有滞绿表型的大豆的特异引物对及其应用。
背景技术
正常绿色植物在衰老时细胞结构、代谢、基因表达等会发生一系列的变化，导致叶绿素降解，叶片逐渐变黄，进而光合作用能力下降，光合产物的形成量也随之降低，生物量增加变得缓慢直至完全停止。
滞绿(stay green)是指植物在衰老过程中叶绿素不降解或降解不明显的现象，其最明显的特征是植株生长末期叶片保持绿色的时间较长，甚至完全不黄化。由于滞绿突变体在衰老期叶片仍保持着一定量的光合作用，其生物产量有明显提高。研究表明，玉米滞绿型品种在子粒灌浆期比早衰品种多生产24％的干物质，同时多吸收30％的氮素。利用转基因技术诱发的烟草滞绿突变体的生物量和种子产量分别增加了40％和52％。另外，功能型滞绿减缓或阻止了茎、叶中叶绿素的降解，致使滞绿型品种在成熟后茎、叶中的叶绿素含量始终保持原水平而不减少，同时也保持了光合作用，从而使其茎秆的抗逆能力（如抗干旱、抗病性、抗倒伏等方面）具有很强的优势，如澳大利亚昆士兰利用滞绿特性提高高梁对水的利用效率，培育出很多抗干旱的改良品种供干旱地区种植。因此，滞绿调控基因的研究对于作物高产育种研究具有重要意义，是加速高产新品种培育的重要研究内容。
大豆原产我国，已经有5000年的栽培历史，是重要的经济粮食作物。但我国大豆生产远远不能满足我国大豆消费需求。大豆滞绿调控基因的研究可在一定程度上为大豆高产育种奠定理论基础，促进形成具有国际竞争能力的转基因高产大豆产业，确保国家粮食安全。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于辅助鉴定具有滞绿表型的大豆的特异引物对及其应用。
本发明提供的特异引物对，由序列表的序列5所示单链DNA分子和序列表的序列6所示单链DNA分子组成。
本发明还保护所述特异引物对在辅助鉴定具有滞绿表型的大豆中的应用。所述应用的具体步骤为：以待测大豆的基因组DNA为模板，用所述特异引物对进行PCR扩增，如果PCR扩增产物为110bp、待测大豆材料为候选的具有滞绿表型的大豆材料，如果PCR扩增产物为105bp、待测大豆材料为候选的不具有滞绿表型的大豆材料。所述待测大豆可为大豆材料L74-826、大豆材料L74-824、大豆材料L62-1027、大豆材料L73-54、大豆材料L74-854、大豆材料L72-2824和大豆材料Willams82。
本发明还保护所述特异引物对在辅助筛选具有滞绿表型的大豆中的应用。所述应用的具体步骤为：以待测大豆的基因组DNA为模板，用本发明提供的特异引物对进行PCR扩增，如果PCR扩增产物为110bp、待测大豆材料为候选的具有滞绿表型的大豆材料，如果PCR扩增产物为105bp、待测大豆材料为候选的不具有滞绿表型的大豆材料。所述待测大豆可为大豆材料L74-826、大豆材料L74-824、大豆材料L62-1027、大豆材料L73-54、大豆材料L74-854、大豆材料L72-2824和大豆材料Willams82。
本发明还保护所述特异引物对在鉴定携带cytG基因的大豆或携带cytG-m基因的大豆中到的应用；所述cytG基因如序列表的序列2所示，所述cytG-m基因如序列表的序列4所示。所述应用的具体方法如下：以待测大豆的基因组DNA为模板，用所述特异引物对进行PCR扩增，如果所述PCR扩增得到了105bp的扩增产物待测大豆为携带cytG基因的大豆，如果所述PCR扩增得到了110bp的扩增产物待测大豆为携带cytG-m基因的大豆。所述待测大豆可为大豆材料L74-826、大豆材料L74-824、大豆材料L62-1027、大豆材料L73-54、大豆材料L74-854、大豆材料L72-2824和大豆材料Willams82。
本发明还保护所述特异引物对在大豆育种中的应用。
本发明还保护cytG蛋白（大豆细胞质滞绿调控蛋白），如序列表的序列1所示。
本发明还保护cytG基因，如序列表的序列2所示。
本发明还保护cytG-m蛋白，如序列表的序列3所示。
本发明还保护cytG-m基因，如序列表的序列4所示。
本发明还保护所述cytG蛋白、所述cytG基因、所述cytG-m蛋白或所述cytG-m基因在大豆育种中的应用。
本发明可用于筛选具有滞绿表型或不具有滞绿表型大豆的筛选和育种，相同传统筛选育种方法，具有时间短、成本低、可以高通量进行的优点，对于大豆育种具有重大价值。
附图说明
图1为cytG蛋白和cytG-m蛋白的二级结构比较结果。
图2为大豆材料L62-1027和大豆材料Willams82的琼脂糖凝胶电泳图。
图3为待测大豆种植于北京市昌平区中科院遗传所北七家农场，正常管理，持续观察表型的照片。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
实施例1、cytG蛋白、cytG-m蛋白以及它们的编码序列的发现
cytG突变体大豆是在大豆中发现了一个受细胞质基因控制的滞绿突变体。cytG突变体大豆衰老起始期和野生型没有明显差异，大部分的类囊体蛋白被降解，但是光系统II捕光色素蛋白复合体(light harvesting complex II,LHCII)的降解受到抑制，Chl b的降解被延缓，然而Chl a的含量较少，因此Chl a/b比值较小，植株仍然保持绿色。
分别提取大豆品种Williams82和cytG突变体大豆的基因组DNA，以基因组DNA为模板，采用特异引物对（见表1）进行PCR扩增，并进行序列分析和比较。
表1PCR扩增采用的特异引物
从大豆品种Williams82中发现的cytG蛋白如序列表的序列1所示（由35个氨基酸残基组成），其编码基因如序列表的序列2所示（由105个核苷酸组成）。
从cytG突变体大豆中发现的cytG-m基因如序列表的序列4所示（由110个核苷酸组成），与序列2相比有5个核苷酸的插入。cytG-m基因编码序列表的序列3所示的cytG-m蛋白（由24个氨基酸残基组成）。
cytG蛋白和cytG-m蛋白的二级结构比较结果见图1。cytG蛋白的二级结构由Helix、Extended-Beta和C端的coil组成。cytG-m蛋白相比cytG蛋白缺失了Extended-Beta和C端的coil等结构。结构上的差别可能是导致cytG突变体大豆产生滞绿表型的原因。
实施例2、特异引物对的设计和应用
一、特异引物对的设计
基于cytG蛋白的编码基因和cytG-m蛋白的编码基因的差异性，设计并合成一对引物如下：
F1(序列表的序列5)：5’-atggaagtaaatattcttgc-3’；
R1(序列表的序列6)：5’-ttagtcactttgacttaccgt-3’。
二、特异引物对的应用
用于本步骤的各个大豆材料见表2（来源于美国农业部的种资资源库，该资源库的种资资源面向公众开放，可用于科研相关，可以在http://www.ars-grin.gov/npgs/acc/acc_queries.html中输入PI编号查到）。
将各个待测大豆材料分别进行如下鉴定：
1、提取待测大豆的基因组DNA。
2、以步骤1提取的基因组DNA为模板，用F1和R1组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
PCR扩增体积：基因组DNA100ng/μl1μl，10×PCR Buffer2.0μl，25mM MgCl22.0μl，2mM dNTP2.0μl，10μM F11.0μl，10μM R11μl，15U/μl Taq DNA聚合酶0.2μl，ddH2O10.8μl，总体系20μl。
PCR扩增程序：95℃变性5分钟；94℃变性1分钟，55℃退火1分钟，72℃延伸1分钟，40个循环；72℃补齐10分钟。
3、将步骤2得到的PCR扩增产物进行5.0％琼脂糖凝胶电泳。
大豆材料L62-1027和大豆材料Willams82的琼脂糖凝胶电泳图见图2。大豆材料L74-826、大豆材料L74-824的条带位置均与大豆材料L62-1027的条带位置一致。大豆材料L73-54、大豆材料L74-854和大豆材料L72-2824的条带位置均与大豆材料Willams82的条带位置一致。
4、分别收集各个大豆材料的相应条带并进行测序，结果表明，大豆材料L74-826、大豆材料L74-824和大豆材料L62-1027的PCR扩增产物均为110bp（如序列表的序列4所示）。大豆材料Willams82、大豆材料L73-54、大豆材料L74-854和大豆材料L72-2824扩增产物为105bp（如序列表的序列2所示）。
结果见表2。
表2琼脂糖凝胶电泳和测序的结果
5、2012年5月上旬，将待测大豆种植于北京市昌平区中科院遗传所北七家农场，正常管理，持续观察表型，分别于2012年6月中旬、2012年8月中旬和2012年10月中旬拍照，照片见图3。图3中，A为6月中旬的照片，B为8月中旬的照片,C为10月中旬的照片；A中用于比较的叶片为不同待测样本相同部位的叶片；B中用于比较的叶片为不同待测样本相同部位的叶片；C中用于比较的叶片为不同待测样本相同部位的叶片。6月中旬，各个大豆材料的叶片均为绿色。8月中旬，大豆材料Willams82、大豆材料L73-54、大豆材料L74-854和大豆材料L72-2824开始变黄，即叶绿素开始降解，大豆材料L74-826、大豆材料L74-824和大豆材料L62-1027的叶片仍然保持绿色。10月中旬，大豆材料Willams82、大豆材料L74-854和大豆材料L72-2824叶片中的叶绿素已完全降解，但大豆材料L74-826、大豆材料L74-824和大豆材料L62-1027的叶片中还有未降解的叶绿素。
以上结果表明，本发明提供的特异引物对可以用于辅助鉴定待测大豆材料是否为具有滞绿表型的大豆材料。以待测大豆的基因组DNA为模板，用本发明提供的特异引物对进行PCR扩增，如果PCR扩增产物为110bp、待测大豆材料为候选的具有滞绿表型的大豆材料，如果PCR扩增产物为105bp、待测大豆材料为候选的不具有滞绿表型的大豆材料。
以上结果表明，本发明提供的特异引物对可以用于辅助筛选具有滞绿表型的大豆材料，以待测大豆的基因组DNA为模板，用本发明提供的特异引物对进行PCR扩增，如果PCR扩增产物为110bp、待测大豆材料为候选的具有滞绿表型的大豆材料，如果PCR扩增产物为105bp、待测大豆材料为候选的不具有滞绿表型的大豆材料。
Claims (3)
1.特异引物对在辅助鉴定具有滞绿表型的大豆中的应用；
所述特异引物对由序列表的序列5所示单链DNA分子和序列表的序列6所示单链DNA分子组成。
2.特异引物对在辅助筛选具有滞绿表型的大豆中的应用；
所述特异引物对由序列表的序列5所示单链DNA分子和序列表的序列6所示单链DNA分子组成。
3.特异引物对在鉴定携带cytG基因的大豆或携带cytG-m基因的大豆中的应用；所述cytG基因如序列表的序列2所示，所述cytG-m基因如序列表的序列4所示；
所述特异引物对由序列表的序列5所示单链DNA分子和序列表的序列6所示单链DNA分子组成。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310157105.3A CN103275973B (zh) | 2013-04-28 | 2013-04-28 | 用于辅助鉴定具有滞绿表型的大豆的特异引物对及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310157105.3A CN103275973B (zh) | 2013-04-28 | 2013-04-28 | 用于辅助鉴定具有滞绿表型的大豆的特异引物对及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103275973A CN103275973A (zh) | 2013-09-04 |
| CN103275973B true CN103275973B (zh) | 2014-12-17 |
Family
ID=49058594
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310157105.3A Expired - Fee Related CN103275973B (zh) | 2013-04-28 | 2013-04-28 | 用于辅助鉴定具有滞绿表型的大豆的特异引物对及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103275973B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1831127A (zh) * | 2006-03-14 | 2006-09-13 | 复旦大学 | 一种调控叶绿素代谢的关键基因及其创建植物滞绿性状的方法 |
| CN101831450A (zh) * | 2009-03-12 | 2010-09-15 | 复旦大学 | 一种调控植物衰老进程中叶绿素降解的关键基因及其应用 |
-
2013
- 2013-04-28 CN CN201310157105.3A patent/CN103275973B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1831127A (zh) * | 2006-03-14 | 2006-09-13 | 复旦大学 | 一种调控叶绿素代谢的关键基因及其创建植物滞绿性状的方法 |
| CN101831450A (zh) * | 2009-03-12 | 2010-09-15 | 复旦大学 | 一种调控植物衰老进程中叶绿素降解的关键基因及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| DQ317523.1;Saski C.等;《Genbank》;20051218;全文 * |
| 滞绿突变体的研究现状及应用前景;严波 等;《重庆大学学报(自然科学版)》;20070731;第30卷(第7期);第115-116页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103275973A (zh) | 2013-09-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Prakash et al. | Analysis of molecular diversity in guava using RAPD markers | |
| CN105624320B (zh) | 利用ssr指纹图谱鉴别舒茶早茶树品种的方法 | |
| Cerqueira-Silva et al. | Characterization and selection of passion fruit (yellow and purple) accessions based on molecular markers and disease reactions for use in breeding programs | |
| Liao et al. | Using SSR to evaluate the genetic diversity of potato cultivars from Yunnan province (SW China) | |
| Migliaro et al. | Direct multiplex PCR for grapevine genotyping and varietal identification | |
| CN104357564B (zh) | CmEF1α基因和CmRAN基因在甜瓜果实基因表达分析中作为内参基因的应用 | |
| CN103013966A (zh) | 与黄瓜苦味性状相关的snp标记及其应用 | |
| Hocaoglu-Ozyigit et al. | Genetic diversity and phylogenetic analyses of Turkish cotton (Gossypium hirsutum L.) lines using ISSR markers and chloroplast trnL-F regions | |
| Filippetti et al. | Diversity assessment of seedlings from self-pollinated Sangiovese grapevines by ampelography and microsatellite DNA analysis | |
| CN107177667B (zh) | 小麦穗密度qtl连锁的hrm分子标记及其应用 | |
| CN113774065B (zh) | 美国白蛾不同性别成虫荧光定量内参基因及其引物和应用 | |
| CN108411007B (zh) | Snp标记及其应用 | |
| CN102876777B (zh) | 鮸鱼est微卫星标记的特异引物及筛选方法 | |
| CN114196772A (zh) | 南京椴不同组织及胁迫处理条件下实时定量pcr内参基因及其筛选方法和应用 | |
| CN104830909B (zh) | 一种水稻的育种方法 | |
| CN103866038B (zh) | 用于检测烟草对tmv抗性的n基因特异性引物对、检测方法及试剂盒 | |
| CN105803094A (zh) | 一种鉴定或辅助鉴定马铃薯熟性的scar标记及其应用 | |
| CN103725785B (zh) | 柚木无性系指纹图谱的构建方法及其应用 | |
| CN103275973B (zh) | 用于辅助鉴定具有滞绿表型的大豆的特异引物对及其应用 | |
| CN107849566A (zh) | 用于检测白粉病的方法和试剂盒 | |
| Su et al. | Characterization of the novel hybrid cultivar E25 of Saccharina japonica in the northern farming region of China | |
| CN113151505B (zh) | 一种美国白蛾不同种群密度的荧光定量内参基因及其引物和应用 | |
| CN107858438A (zh) | 异色瓢虫在不同因子下稳定表达的内参基因组合及其应用 | |
| CN105734123B (zh) | 基于海稻作物dna变异标记的海稻作物染色体的pcr鉴定法及相关pcr引物和试剂盒 | |
| Jiang et al. | Analysis of genetic diversity of salt-tolerant alfalfa germplasms |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20141217 Termination date: 20160428 |