CN103229716A - 金银花“忍冬二号”优良品种选育方法 - Google Patents

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本发明涉及金银花“忍冬二号”新品种的选育方法，适用于金银花新品种的选育。采集山东省平邑县金银花主产地农家种质类型大鸡爪植株枝条，以15～25Gy60Co-γ辐射诱变，然后扦插、移栽，对变异个体进行单株选育，再经扦插、移栽形成株系，经品比和生产试验，获得的“忍冬二号”新品种枝条粗短直立，发枝多，叶长圆形，叶脉及叶缘处被有稀短柔毛，节间长2.5～7cm，花蕾平均长4.16cm，花多而含苞期长，墩桩紧凑，花蕾集中，形如鸡爪，易于采摘，花期较早，适于密植。与原大鸡爪农家类型相比，金银花药材产量提高20.2％，绿原酸含量提高17.95％，木犀草苷含量提高15.20％。

Description

金银花“忍冬二号”优良品种选育方法
技术领域
本发明涉及金银花优良品种的选育方法，专用于选育性状稳定、适合生产需要的金银花“忍冬二号”新品种。 
背景技术
金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾及带初开的花，药用历史悠久，属于著名的传统中药，其味甘，性寒，归肺、心、胃经，具有清热解毒、疏散风热等功效，用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等症，疗效卓著，是中医临床清热解毒的首选药物，年需求量超过2000万公斤。除药用外，金银花在水土保持、绿化观赏、日用化工、食品饮料、牲畜饲料等领域也都有着非常广泛的用途。 
为满足金银花在各个应用领域的市场需求，忍冬在山东、河南、河北、陕西等地均有大面积种植，传统道地产区为山东平邑和河南密州，尤以平邑县种植面积大，约有30万亩。在忍冬种植过程中，种质是影响金银花药材产量与质量最重要的因素之一。忍冬种植历史已经长达800余年，经过长期的自然淘汰与人工优选，忍冬植株形态特征出现了明显分化，形成了不同的种质，当地药农据此将其分为大鸡爪、小毛花、大鸡爪、小鸡爪等不同的类型。也有人利用现代育种方法，育成了“九丰一号”等新品种，但这些品种均属林木新品种，对金银花药材质量没有提出任何要求，因此生产实际中至今尚无金银花优良品种育成，这在一定程度上影响了金银花药材产量与质量的提高。选育优质、高产优良品种，是金银花生产实际中亟需解决的重要问题。 
发明内容
本发明针对金银花主产区栽培种质混乱，缺乏高产优质栽培品种，药材产量与质量低而不稳的局面，确定要解决的技术问题是：以主产区大鸡爪农家类型为基础材料，提供金银花“忍冬二号”优良品种选育方法，在确定栽培类型的基础上，剪取一年生枝条，利用 60Co-γ辐射处理增强变异，通过植株形态特征与生物学特性观察，筛选产花多、利于采摘的植株定向培养，改善大鸡爪农家类型植株上部枝条缠绕、直立性差、花芽分化数量少、金银花药材产量低的不良性状，将选择的优良单株进行扦插繁殖，经品比试验选育出性状基本稳定，药材品质好、产量高，适合大面积推广和规范化种植的“忍冬二号”金银花优良品种。 
本发明所提供的金银花“忍冬二号”优良品种的选育方法，包括： 
步骤一：在山东金银花主产区大田，选择生长年限为5～6年的忍冬Lonicera japonica Thunb.植株，为地方农家类型，于3月初剪取同一农家类型植株上健壮、无病虫害、长10～ 15cm带3～5个饱满休眠芽的一年生枝条5000支，注意保湿，让插枝保持正常生活力。 
步骤二：将选择后的插枝进行60Co-γ辐射处理。 
步骤三：将辐射后插条下部的1/2斜插入事先准备好的土质疏松肥沃、排水良好、灌溉方便的苗床上，株行距15×20cm，以塑料薄膜搭设小型拱棚，保温保湿，气温过高时覆盖遮阳网，并及时通风。拱棚内气温控制在20～25℃、相对湿度90％，及时浇水。插枝出苗、生根后可粗放管理，撤除拱棚。 
步骤四：第二年春季3月下旬将扦插培养一年的植株进行修剪，剪除基部徒长枝，上部枝条长度保持在15cm以内，然后移栽大田，穴栽，株行距100×150cm，常规田间管理。 
步骤五：第三年，观察大田移栽植株的生产性状并进行各项指标测定，选择优良植株，挂牌标记。 
步骤六：第四年8～9月份，剪取挂牌标记植株上的一年生枝条，扦插于大田。 
步骤七：第五年春季植株萌芽前，按照步骤四进行移栽，株系间隔离，常规田间管理。 
步骤八：第六年、第七年、第八年连续在田间生长，加强修剪、施肥等田间管理，促进植株生长发育。同时连续3年进行各株系与当地农家大鸡爪类型间的品比试验，确定优良株系B。 
步骤九：将所选优良株系B确定为“忍冬二号”优良品种的原种，经扩繁形成“忍冬二号”优良品种。 
步骤十：与当地原农家大鸡爪类型相比，“忍冬二号”高产性能明显，绿原酸与木犀草苷含量有显著提高。 
本发明提供的金银花“忍冬二号”优良品种选育方法，与现有技术相比具有如下优点：①金银花在山东平邑、费县一带有大面积种植，栽培历史悠久，经过长期的人工与自然选择形成了诸多变异类型，本发明首先对当地金银花种质进行了广泛收集与整理，在大鸡爪农家类型基础上，经60Co-γ辐射处理使其进一步发生变异，通过变异改良植株上部枝条缠绕、花蕾数量少、活性成分含量低等不良性状，最终选育出农艺性状良好、高产优质的新品种“忍冬二号”，不仅能够适应当地的自然与栽培条件，而且能够快速综合多种优良性状，达到满足生产实际需要的目的；②辐射前选择的类型均为大鸡爪，植株数量不少于500株，剪取插条数量不少于5000支；辐射扦插后，选择性状明显改良的优良单株不少于30株，因此变异后的优良种质基本能够涵括，提高了选育速度；③选育出的优良品种植株实行无性繁殖，利于保持品种的遗传稳定性；④通过本发明选育出的“忍冬二号”新品种，与原大鸡爪农家类型相比，金银花药材产量提高20.2％，绿原酸含量提高17.95％，木犀草苷含量提高15.20％。 
附图说明
附图为金银花“忍冬二号”新品种选育流程图。详细选育路线参见说明书附图。 
具体实施方式
山东省平邑县是我国金银花主要道地产区，本单位于1986年开始在当地进行金银花种质资源调查与优良品种选育工作。 
根据株高，枝长，枝条缠绕性，叶片色泽、形状与大小，花芽分化位置与数量，花蕾形状、大小与重量，开花早晚，毛茸多少与长短等性状，结合当地农民的传统经验，将当地金银花植株种质划分为大毛花、大鸡爪等类型。其中大鸡爪类型生物学性状为：花墩大，枝条粗壮、上部缠绕，花蕾小且分化数量少，花蕾集中于枝条上部形如鸡爪，药材产量低。 
3月初，剪取5～6年生大鸡爪植株上健壮、无病虫害、长10～15cm、带3～5个饱满休眠芽的一年生枝条，注意保湿，让插枝保持正常生活力。将所取枝条等分为10份，分别以不同剂量60Co-γ辐射处理，剂量梯度为0，3，6，9，12，15，25，30，40，60Gy，然后扦插在土质疏松肥沃、排水良好、灌溉方便的苗床上，株行距15×20cm，以塑料薄膜搭设小型拱棚，保温保湿，气温控制在20～25℃，相对湿度90％，及时浇水，观察插枝成活情况，6月底观察结果如表1所示。 
表1不同辐射剂量下大鸡爪植株插枝成活率 
剂量(Gy) 0 3 6 9 12 15 25 30 40 60
成活率(％) 70.3 65.6 51.5 42.0 38.6 25.5 15.3 8.5 6.6 5.0
新梢长(cm) 23.11 21.80 20.92 22.12 23.10 20.10 18.90 9.16 8.75 7.23
新梢节间长(cm) 3.34 3.12 3.24 3.15 3.12 2.84 2.43 2.33 2.14 2.01
根据成活率及植株变异情况，确定辐射剂量在15～25Gy范围内最好，既能保持一定的成活率，又有较大的变异发生，有助于进一步选育优良植株。 
将辐射后插条下部的1/2斜插入事先准备好的土质疏松肥沃、排水良好、灌溉方便的苗床上，株行距15×20cm，以塑料薄膜搭设小型拱棚，保温保湿，气温过高时覆盖遮阳网，并及时通风。拱棚内气温控制在20～25℃、相对湿度90％，及时浇水。插枝出苗、生根后可粗放管理，撤除拱棚。 
第二年春季3月下旬将扦插培养一年的植株进行修剪，剪除基部徒长枝，上部枝条长度保持在15cm以内，然后移栽大田，穴栽，株行距100×150cm，常规田间管理。第三年，观察大田移栽植株的生产性状并进行各项指标测定，选择枝条粗壮、直立性强，叶片肥大，花芽数量多，花蕾肥大，年产花茬次多，花蕾产量高的优良植株，挂牌标记。所选优良单株数量在30个以上。第四年8～9月份，剪取挂牌标记植株上的一年生枝条，扦插于大田。每株建立1个株行圃，形成株系，各株系间距2m以上。第五年春季植株萌芽前，继续修剪后进行移栽，株系间隔离，常规田间管理。 
第六年、第七年、第八年在田间生长，加强修剪、施肥等田间管理，促进植株生长发育。 同时连续3年进行各株系与当地农家大鸡爪类型间的品比试验，确定优良株系B。优良株系B的生物学性状为：枝条粗短直立，发枝多，叶长圆形，叶脉及叶缘处被有稀短柔毛，节间长2.5～7cm，花针略小，平均长4.16cm，花多而含苞期长，墩桩紧凑，有效枝多，花蕾集中，直至花枝顶端，形如鸡爪，易于采摘，花期较早，适于密植。将所选优良株系B确定为“忍冬二号”优良品种的原种，经扩繁形成“忍冬二号”优良品种。 
与当地农家大鸡爪品种类型相比，“忍冬二号”植株枝条直立性增强，花蕾集中于枝条上部，便于采摘，花蕾数量多，药材产量提高20.2％，绿原酸含量提高17.95％，木犀草苷含量提高15.20％。参见表2、表3、表4。 
表2“忍冬二号”与大鸡爪类型植株生物学性状比较 
品种类型 枝条状况 叶片 花蕾数量 花蕾着生部位
忍冬二号 枝条粗壮直立 叶色浓绿，质厚 多 集中于枝条上部
大鸡爪 枝条上部缠绕 叶色黄绿，质较薄 少 着生在枝条中上部
表3“忍冬二号”与大鸡爪类型植株(六年生)花蕾发育与药材产量比较 
品种类型 单株结花枝数 单枝结花数 10个花蕾干重 单株花蕾产量
忍冬二号 546.7 42.1 0.1502g 345.7g
大鸡爪 540.6 35.8 0.1486g 287.6g
表4“忍冬二号”与大鸡爪类型植株(六年生)花蕾活性成分含量比较 
品种类型 绿原酸含量％ 木犀草苷含量％
忍冬二号 1.84 0.139
大鸡爪 1.56 0.121
绿原酸含量检测方法。色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4％磷酸溶液(13∶87)为流动相；检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于1000。对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得(10℃以下保存)。供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率35kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 
木犀草苷含量检测方法。色谱条件与系统适用性试验：用苯基硅烷键合硅胶为填充剂(Agilent ZORBAX SB-phenyl4.6mm×250mm，5μm)，以乙腈为流动相A，以0.5％冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为350nm。理论板数按木犀草苷峰计算应不低于20000。 
Figure BSA00000858396200041
对照品溶液的制备：取木犀草苷对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品细粉(过四号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率35kHz)1小时，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，回收溶剂至干，残渣用70％乙醇溶解，转移至5ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 

Claims (8)

1.金银花“忍冬二号”优良品种选育方法，其特征在于操作步骤如下：
步骤一：在山东金银花主产区大田，选择生长年限为5～6年的忍冬Lonicera japonicaThunb.植株，为地方农家类型，于3月初剪取同一农家类型植株上健壮、无病虫害、长10～15cm带3～5个饱满休眠芽的一年生枝条5000支，注意保湿，让插枝保持正常生活力；
步骤二：将选择后的插枝进行60Co-γ辐射处理；
步骤三：将辐射后插条下部的1/2斜插入事先准备好的土质疏松肥沃、排水良好、灌溉方便的苗床上，株行距15×20cm，以塑料薄膜搭设小型拱棚，保温保湿，气温过高时覆盖遮阳网，并及时通风，拱棚内气温控制在20～25℃、相对湿度90％，及时浇水，插枝出苗、生根后可粗放管理，撤除拱棚；
步骤四：第二年春季3月下旬将扦插培养一年的植株进行修剪，剪除基部徒长枝，上部枝条长度保持在15cm以内，然后移栽大田，穴栽，株行距100×150cm，常规田间管理；
步骤五：第三年，观察大田移栽植株的生物学性状并进行各项指标测定，选择优良植株，挂牌标记；
步骤六：第四年8～9月份，剪取挂牌标记植株上的一年生枝条，扦插于大田；
步骤七：第五年春季植株萌芽前，按照步骤四进行移栽，株系间隔离，常规田间管理；
步骤八：第六年、第七年、第八年连续在田间生长，加强修剪、施肥等田间管理，促进植株生长发育，同时连续3年进行各株系与当地农家大鸡爪类型间的品比试验，确定优良株系B；
步骤九：将所选优良株系B确定为“忍冬二号”优良品种的原种，经扩繁形成“忍冬二号”优良品种；
步骤十：与当地原农家大鸡爪类型相比，“忍冬二号”高产性能明显，绿原酸与木犀草苷含量有显著提高。
2.根据权利要求1所述的金银花“忍冬二号”优良品种选育方法，其特征在于：所述的步骤一中的金银花地方农家类型为大鸡爪。
3.根据权利要求1所述的金银花“忍冬二号”优良品种选育方法，其特征在于：所述的步骤二中的60Co-γ辐射剂量为15～25Gy。
4.根据权利要求1所述的金银花“忍冬二号”优良品种选育方法，其特征在于：所述的步骤五中的挂牌标记优良植株的生产性状为枝条粗壮、直立性强，叶片肥大，花芽数量多，花蕾肥大，年产花茬次多，花蕾集中于枝条上部，易于采摘，药材产量高，所选优良单株数量在30个以上。
5.根据权利要求1所述的金银花“忍冬二号”优良品种选育方法，其特征在于：所述的步骤六中的扦插，须分株进行，每株建立1个株行圃，形成株系，各株系间距2m以上。
6.根据权利要求1所述的金银花“忍冬二号”优良品种选育方法，其特征在于：所述的步骤八中的品比试验，要求各株系与大鸡爪植株的生长年限、栽培管理措施一致，品比项目包括植株形态、抗性、花蕾产量、木犀草苷与绿原含量等，确定的优良株系的基本特征为：枝条粗短直立，发枝多，叶长圆形，叶脉及叶缘处被有稀短柔毛，节间长2.5～7cm，花针略小，平均长4.16cm，花多而含苞期长，墩桩紧凑，有效枝多，花蕾集中，直至花枝顶端，形如鸡爪，易于采摘，花期较早，适于密植。
7.根据权利要求1所述的金银花“忍冬二号”优良品种选育方法，其特征在于：所述的步骤九中的扩繁，系为无性繁殖，可采用扦插方式，也可采用组织培养方式，所述的“忍冬二号”优良品种，系各器官性状一致的植株群体，并能通过扦插繁殖保持群体性状的稳定。
8.根据权利要求1所述的金银花“忍冬二号”优良品种选育方法，其特征在于：所述的步骤十中的高产性能明显是指在主产区环境与栽培条件统一的前提下，与当地大鸡爪类型比较至少30株以上全年花蕾的平均产量，“忍冬二号”植株花蕾产量提高20.2％，绿原酸含量提高17.95％，木犀草苷含量提高15.2％。
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