CN103189051A

CN103189051A - 包含小热激蛋白的微粒

Info

Publication number: CN103189051A
Application number: CN2011800446869A
Authority: CN
Inventors: J·M·范诺尔特
Original assignee: Delta Crystallon BV
Current assignee: Delta Crystallon BV
Priority date: 2010-07-16
Filing date: 2011-07-14
Publication date: 2013-07-03
Also published as: CA2805728A1; BR112013001171A2; RU2013102122A; EP2593088B1; EP2593088A1; WO2012008834A1; US20130236509A1

Abstract

本发明涉及一种生物可降解微粒，所述生物可降解微粒直径为0.2-3.5微米且含药学有效量的诱导巨噬细胞中IL-10生成的至少一种小热激蛋白，所述小热激蛋白包含与SEQ ID NO:1和12-26中所列任何序列有至少50%相同性的氨基酸序列。

Description

包含小热激蛋白的微粒

发明领域

本发明属于医药领域。具体而言，其属于用于治疗炎性疾病的药物领域。

发明背景

小热激蛋白家族以一个共同特点为特征，即存在含90-100个残基的高保守的所谓α晶体蛋白结构域。脊椎动物眼晶状体蛋白–αA-和αB-晶体蛋白以及包括HSPB1、HSPB2、HSPB3、HSPB6、HSPB7、HSPB8、HSPB9和HSPB10在内的15-30-kDa热激蛋白普遍存在的群均属于该小热激蛋白组。眼晶状体α晶体蛋白的2个亚基是αA-晶体蛋白(CRYAA)和αB-晶体蛋白(CRYAB)。虽然CRYAA优选在眼晶状体中表达，CRYAB在许多组织和器官中广泛表达。认为小热激蛋白的主要作用是抵消胁迫条件对细胞完整性的去稳定化影响。有证据显示其参与变性疾病等。

α晶体蛋白被描述为许多疾病和病症中的潜在药物。WO2008073466中，描述了抑制患者炎性疾病的方法，所述方法包含给予患者治疗有效剂量的游离可溶CRYAB蛋白，其中组织内受自身免疫病影响的免疫细胞在该试剂存在下减少活化。WO9533997中，描述了游离可溶CRYAB蛋白在多发性硬化中的医学应用。

α晶体蛋白家族的蛋白的缺点是这些作为游离可溶蛋白的产品不如预期有效，特别是给予人时。本发明的目标是解决此问题。

发明内容

本发明基于以下发现：小热激蛋白以生物可降解微粒形式给予时相较以其游离可溶形式给予时，能有效得多地激活巨噬细胞。因此，此发明方面的小热激蛋白不作为游离可溶蛋白给予。

因此，本发明提供一种生物可降解微粒，所述生物可降解微粒的直径为0.2-3.5微米，且含药学有效量的诱导巨噬细胞中IL-10产生的至少一种小热激蛋白，所述小热激蛋白包含与SEQ ID NO:1和12-26所列任何序列具有至少50%相同性的氨基酸序列或其组合。与SEQ ID NO:1和12-26所列任何序列有至少50%的氨基酸序列相同性表明所述小热激蛋白包含α晶体蛋白结构域。这种α晶体蛋白结构域是确定其是否激活巨噬细胞的蛋白活性区，巨噬细胞活化通过诱导该巨噬细胞中IL-10产生而趋于明显。α晶体蛋白结构域可与SEQ ID NO:1和12-26具有至少50%，优选至少55%，更优选至少60%、70%、80%、90%或95%的氨基酸序列相同性。所述小热激蛋白优选是具有选自SEQ ID NO:2-11的氨基酸序列的蛋白质。所述小热激蛋白更优选是具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的蛋白质。

在优选实施方式中，所述生物可降解微粒是生物可相容的。在其它优选实施方式中，所述微粒包含己内酯、聚乳酸(PLA)、乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)或乳酸-羟甲基乙醇酸共聚物(PLHMGA)。所述生物可降解微粒优选具有0.2-5μm的平均直径，更优选0.2-3.5μm。

本发明还提供根据本发明用于对象医学治疗的生物可降解微粒。所述对象优选是人对象。所述医学治疗优选针对炎性疾病。所述炎性疾病优选是皮肤、粘膜、肺、神经系统、血管系统、胰腺或关节的急性或慢性炎症性病症，优选皮炎、牛皮癣、湿疹、克罗恩病、溃疡性结肠炎、牙周炎、扁平苔癣、硬化性苔癣、慢性阻塞性肺疾病、气肿、阿尔茨海默病、帕金森病、痴呆、视神经炎、脑炎、炎性周围神经病、动脉粥样硬化、血管炎、风湿性关节炎或糖尿病。

本发明还提供含治疗有效剂量的本发明所述生物可降解微粒的药物组合物。优选地，药物组合物中存在的至少百分之50、60、70、80或90的微粒是本发明的所述生物可降解微粒。

本发明还提供产生本发明所述生物可降解微粒的方法，所述方法包括以下步骤：混合含CRYAB的水溶液与溶于挥发性有机溶剂(优选二氯甲烷(DCM))的己内酯、PLA、PLGA或PLHMGA溶液，以提供水/挥发性有机溶剂二相系统；乳化所述水/挥发性有机溶剂二相系统以提供油包水乳液；向含聚乙烯醇的水溶液中加入所述油包水乳液，并乳化所得混合物以提供水包油包水乳液；使所述挥发性有机溶剂从所述水包油包水乳液中蒸发，并在所述蒸发过程中形成生物可降解微粒。

本发明还提供治疗患有炎性疾病的对象的方法，包含给予所述对象治疗有效量的本发明的生物可降解微粒或本发明的药物组合物。

附图简要说明

图1显示基于乳酸和乙醇酸合成具有羟基侧基的亲水性聚酯。

图1的反应流程显示亲水性聚酯合成中的关键步骤，所述亲水性聚酯能用于产生比传统聚(乳酸-共-乙醇酸)聚合物更亲水的微球。这种微球的制备由Ghassemi等更详细描述[J.Control.Release138:57-63(2009)]。BMMG单体中R=CH₃。

图2显示基于亲水性PLHMGA聚合物或PLGA聚合物的含CRYAB微球的扫描电子显微照片。

图2的图像显示用传统聚(乳酸-共-乙醇酸)聚合物(PLGA)或含羟甲基化聚酯(PLHMGA)的更亲水形式所得微粒的类似大小分布。如实施例中更详细描述制备的PLGA微球的直径一般为0.2-3.5微米，以类似方式制备的PLHMGA微球直径一般为0.2-2微米。

图3显示用游离可溶CRYAB(左)和微球包封的CRYAB(右)诱导IL-10。

图3的数据显示由微球包封的CRYAB诱导巨噬细胞中IL-10比将巨噬细胞暴露于游离可溶CRYAB有效得多。还显示PLHMGA微粒甚至比PLGA微粒更有效。

图4显示α晶体蛋白/小热激蛋白的10个家族成员的序列比对。加框的序列表示保守α晶体蛋白样结构域[摘自Kappé等.(2003)Cell StressChaperones8:53]。

图4显示所有目前已知的10种α晶体蛋白/小热激蛋白的序列比对，突出显示称为α晶体蛋白结构域的具显著同源性的蛋白区段。

图5显示CRYAB的α晶体蛋白结构域(残基68-148)与其它小热激蛋白的α晶体蛋白结构域之间的同源性。

序列相同性由双点指示，结构同源性通过位于残基间的单点指示。此图更详细显示10种不同人小热激蛋白间序列相同性和结构同源性的程度。

图6显示空PLGA微球不仅不能诱导人巨噬细胞的IL-10产生，而且不影响由含CRYAB微球诱导的IL-10产生。

当将降低浓度的空微球加入人巨噬细胞培养物以补充增加浓度的含CRYAB微球至恒定总微球水平时，反应概况与仅用增加浓度的含CRYAB微球所得的相同。这证实巨噬细胞对含CRYAB的PLGA-微球的反应确实由包封的蛋白介导，而不是该微球介导。具有相同大小和化学特征的空PLGA微球不仅不能诱导任何产生，其还不影响含CRYAB微球对IL-10的诱导。

图7显示人血单核细胞源性巨噬细胞和人脑源性小胶质细胞对多个含CRYAB微球的迅速和完全吞噬作用

不同于对微球所探求的大部分应用，本发明不旨在于数日到数周内从微球缓慢释放治疗蛋白。相反，本发明旨在由巨噬细胞迅速摄取含CRYAB微球，并随后迅速释放吞噬体内的治疗蛋白。图3显示此策略如何引起人巨噬细胞中在20小时时间范围内显著产生抗炎因子IL-10。图7中，还显示目前描述的含CRYAB微球如何被不同类型人巨噬细胞迅速和基本完全吞噬。右侧图中，显示24小时时间范围内每个细胞摄入多个微球的巨噬细胞和小胶质细胞。显示此时间阶段中无任何添加培养的细胞或提供游离可溶CRYAB的细胞以用于比较。

图8显示由含CRYAB的PLGA微球诱导的人免疫应答的抗炎质量。

不同于其它哺乳动物，成年人免疫系统包含应答CRYAB的记忆T细胞以及针对CRYAB的血清抗体。此免疫响答性通过天然过程启动，且在所有人中发现。此情况导致的缺点是游离可溶CRYAB不仅激活人中的巨噬细胞，还能激活引起炎症而不是有助于缓解炎症的记忆T细胞。图8显示游离可溶CRYAB确实诱导细胞培养物中的抗原特异T细胞应答(左图；上图针对CD4⁺辅助T细胞，下图针对CD45RO⁺记忆T细胞)。因此，游离可溶CRYAB在抑制对另一抗原(在本情况下为破伤风类毒素)的T细胞应答中无效(右图)。事实上，向外周血单个核细胞的细胞培养物中添加游离可溶CRYAB引起T细胞应答增加。相反，含CRYAB微球而不是空微球强烈抑制对破伤风类毒素的T细胞应答，强调其抗炎作用。因此，与游离可溶CRYAB相反，含CRYAB微球激活巨噬细胞的抗炎反应，而不引发(记忆)T细胞的促炎反应。

图9显示加载CRYAB的PLGA微球在慢性阻塞性肺病(COPD)小鼠模型中的治疗性抗炎活性

含CRYAB微球的治疗性抗炎活性通过治疗COPD小鼠模型中用香烟烟气(cigarette smoke)诱导炎症来证明。由于香烟烟气诱导的肺部炎症，大量淋巴细胞、巨噬细胞和中性粒细胞在6天内浸润肺部。在首次暴露于烟后开始用含CRYAB微球进行一天2次治疗，引起明显和统计上显著抑制淋巴细胞和中性粒细胞募集，分别使这些浸润细胞数目减少75%和44%(图9A)。巨噬细胞数目减少明显更温和，且未达到统计显著的水平。相反，相当或甚至更高剂量的游离可溶CRYAB不能产生这种治疗性抗炎效果(图9B)。除了对细胞浸润的治疗性抑制效果，通过微球包封CRYAB几乎完全防止了通常在COPD期间发现的动物体重减轻(图9C)。

图10显示将含CRYAB的PLGA微球气管内给予暴露于烟的小鼠后从支气管肺泡灌洗液收集的细胞的苏木精-伊红染色。

所述图显示气管内给予小鼠含CRYAB的微球后，其仅被肺泡巨噬细胞选择性摄取。用微球治疗性处理小鼠5天以抑制烟诱导的炎症后，通过支气管肺泡灌洗从肺收集所有细胞。在由此获得的细胞群中，巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞能轻易根据其形态鉴定。微球还通过其暗外观和大小轻易鉴定。此图还显示，仅大的活化巨噬细胞包含被吞噬的微球，而中性粒细胞和淋巴细胞则不包含。这确认了含CRYAB的PLGA微球的治疗效果仅由巨噬细胞应答这些微粒而介导。

图11显示本文所定义小热激蛋白家族的不同成员在人单核细胞源性巨噬细胞中对白介素-10的诱导。从所有值中减去IL-10背景水平。

所述图显示除了CRYAB，小热激蛋白家族的其它成员也具有诱导人巨噬细胞产生有力免疫调节因子IL-10的能力。所示重组、纯化的热激蛋白以5μg/mL浓度加入经分化人巨噬细胞培养物中，培养基中出现的IL-10水平如前所述定量。测量重复两次进行。此图所示结果确认CRYAB的热激蛋白家族成员不仅共有保守α晶体蛋白结构域，还由于此而共有激活巨噬细胞的能力。

发明详述

定义

本文所用的术语“微粒”涵盖“纳米粒子”、“微胶囊”、“微珠”和“微球”。关键在于本文所用的微粒是小于3.5μm且大于0.2μm的生物可降解颗粒，优选小于2μm且大于1μm。本文所指定微粒大小指平均粒径。微粒大小重要，这是因为所述微粒必须由吞噬细胞吞噬以通过释放本文所示小热激蛋白来激活吞噬细胞。巨噬细胞的激活通过巨噬细胞诱导IL-10产生而变得明显。

所述微粒可具有任何形式，包括基本球状和不规则形式。如果微粒不是球形，术语直径指所述微粒可匹配(fit)的最小球面结构内径。微粒可为均匀微粒。本文所用的术语“均匀微粒”指其活性剂(即α晶体蛋白)在整个微粒中分散或溶解的微粒。均匀微粒在结构上优选由赋形剂基质形成，通常是聚合物赋形剂。均匀微粒中，优选所述聚合物赋形剂是生物可降解聚合物。优选所述生物可降解聚合物遍布各均匀微粒存在，活性剂捕获于所述生物可降解聚合物分子内。所述聚合物赋形剂可具有同一聚合物或包含不同类型聚合物的混合物。

可用于本发明方面的其它微粒是包封微粒。

本文所用的术语“包封微粒”指包含生物可降解包衣的微粒，所述包衣包封含所述试剂的组合物或基本纯形式的试剂。所述试剂可在整个所述组合物中分散或溶解。具有延迟所述试剂释放功能的包封微粒外膜优选包含生物可降解聚合物或由其组成。

本文所用的术语“生物可降解微粒”指微粒在生理条件下随着时间分解成较小片段或释放活性剂的能力。降解可通过例如酶、化学或物理过程发生。生物可降解微粒通常经药物扩散和聚合物侵蚀的组合来释放其试剂。所述较小片段优选小于生物可降解微粒在生理条件下暴露于流体前所具有的90、80、70、60、50、40、30、20、10、5、4、3、2、1%微粒直径。在生物可降解微粒的优选实施方式中，较小片段指小于50、40、30、20、10nm的片段。

术语“生理条件”指生物系统中存在的条件。其优选指微粒所暴露于的流体的可能参数值，如果所述参数具有活温血脊椎动物组织或体液中出现的某一值，则所述参数值被视作是生理性的。所述参数优选包含温度、钠浓度、液体静压力、渗透压、和/或pH。“生理条件下”优选指至少所述流体的温度、液体静压力、渗透压和pH在活温血脊椎动物组织或体液中正常出现的值范围内。所述生理条件优选包括35-41度的温度，pH2-9，更优选7-8，且甚至更优选7.35-7.45。在替代的优选实施方式中，所述生理条件指巨噬细胞内涵体和/或吞噬体小室内出现的参数值，涉及降低的pH，优选5-7。更优选地，其指血液、白血球，最优选巨噬细胞中出现的可能参数值。在优选实施方式中，术语生物可降解指微粒为巨噬细胞摄取时被降解。更优选地，所述微粒在巨噬细胞内的降解速率高于体液，优选血液。

本文所用的术语“随着时间”指一年内，但更优选一个月内、一周内或一小时内。

本文所用的术语“生物可降解聚合物”指如上所述在生理条件下随着时间降解的聚合物。生物可降解聚合物的示例包括具有至少一些重复单位的那些聚合物，所述重复单元的代表为如下所述中的至少一种：α-羟基羧酸、α-羟基羧酸的交酯、二氧噁烷酮、内酯、环状碳酸酯、环草酸盐、环氧化物、乙二醇和酸酐。优选的生物可降解聚合物包含至少一些重复单元，所述重复单元的代表为如下所述中的至少一种：乳酸、乙醇酸、丙交酯、乙交酯、环氧乙烷和乙二醇。

优选的生物可降解聚合物包括聚丙交酯、聚乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚酐、聚原酸酯、聚醚酯、聚已酸内酯、聚酯酰胺、聚碳酸酯、聚氰基丙烯酸酯、聚氨酯、聚丙烯酸酯、其混合物和共聚物。

待用于本过程的聚合物的考虑分子量范围能由本领域技术人员基于一些因素容易地确定，如所需的聚合物降解速率，或优选在(模拟)体内条件下(优选人中)的巨噬细胞活化水平。通常，分子量范围为2000-2,000,000道尔顿。

优选的聚合物选自

-己内酯、聚乳酸(PLA)、乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)和乳酸-羟甲基乙醇酸共聚物(PLHMGA)。优选由这些聚合物形成本发明所述微粒的基质材料。

本文所用的术语“乳酸和/或乙醇酸(共)聚合物”意在指单独乳酸的聚合物、单独乙醇酸的聚合物、所述聚合物的混合物、乙醇酸和乳酸的共聚物、所述共聚物的混合物、或所述聚合物和共聚物的混合物。

术语“生物相容性聚合物”指降解成无毒产物的生物相容性聚合物。降解成无需从生物系统移除的无毒产物的生物相容性聚合物的特定示例包括聚氢酸(poly(hydro acids))、聚(L-乳酸)、聚(D,L-乳酸)、聚乙醇酸和其共聚物。

本文所用的术语“生物相容性微粒”指对生物系统没有毒性或有害作用的微粒。在生物可降解微粒的一个优选实施方式中，其指如下的微粒：能在医疗治疗方面行使其所需功能，且不引起该治疗受体或受益者中任何不需要的局部或全身效果，但在该特定情况中产生合适的有益细胞或组织反应，优选优化所述治疗的临床相关性能。

本文所用的术语“药物递送装置”指没有活性剂的微粒。现有技术中已描述了许多微粒类型，或产生此类微粒的方法，有时指定纳入特定活性剂。如果本文提及特定现有技术文献的某一微粒，若该现有技术文献指定纳入特定活性剂，则意味着提及无现有技术活性剂的微粒(除非另有说明)。如果提及产生现有技术特定微粒(其中特定活性化合物被纳入该特定微粒)的方法，则意味着提及用本文所述小热激蛋白替代现有技术的活性剂的方法。

术语“小热激蛋白”在本文中用于指与图4所示任一小热激蛋白HSPB1、HSPB2、HSPB3、HSPB4、HSPB5、HSPB6、HSPB7、HSPB8、HSPB9或HSPB10的α晶体蛋白结构域(SEQ ID NO:2-11)的氨基酸序列相同性为至少约为50%的蛋白质化合物，优选至少56%，更优选至少60%，更优选至少70%，更优选至少80%，更优选至少85%，更加优选至少90%，甚至更优选至少95%，特别优选至少97%、98%，最优选至少99%的蛋白质化合物。优选氨基酸序列相同性涉及至少40个连续氨基酸的区域，更优选至少50个，更优选至少60个，更优选至少70个，更优选至少73个，更优选至少74个，更优选至少75个，更优选至少77个，最优选至少80个连续氨基酸的区域。所述小热激蛋白优选具有选自SEQ ID NO:2-11组的序列的氨基酸序列。

本文所用的“氨基酸序列相似性”指2种多肽或蛋白质间存在相似性。如果2种序列中的氨基酸序列在对齐用于最大对应时相同，多肽具有“相似”序列。2种或多种多肽间的序列比较一般通过在比较窗口中比较2种序列部分来进行，以鉴定和对比具有序列相似性的局部区域。比较窗口一般从约10到80个连续氨基酸。多肽的“序列相似性百分数”如百分之50、60、70、80、90、95、98、99或100序列相同性可通过在比较窗口中比较2种最优比对序列来确定，其中比较窗口中的多肽序列部分可包括就最优比对2种序列而言相较参照序列(不包含添加或缺失)的氨基酸缺失、修饰或单氨基酸或氨基酸组添加。所述百分数通过以下计算：(a)确定2种序列中出现相同氨基酸的位置数以产生匹配位置数；(b)将匹配位置数除以比较窗口中的总位置数；和(c)将结果乘以100产生序列相似性百分数。用于比较的最优序列比对可通过计算机执行已知算法或通过目测来进行。序列比较和多序列比对算法可轻易获自因特网，例如William Pearson的“LALIGN”程序。LALIGN程序执行Huang和Miller的算法，发表于Adv.Appl.Math.(1991)12:337-357。其能见于

http://www.ch.embnet.org/software/LALIGN_form.html。

术语“巨噬细胞”包括由单核细胞扩增和分化产生的组织内白血球。通常，巨噬细胞的直径约为21微米。巨噬细胞驻留在可能发生微生物入侵或灰尘聚集的战略点。本发明方面的巨噬细胞包括不同类型的巨噬细胞，由其体内定位确定。这些巨噬细胞有特定名称。优选的巨噬细胞包括位于肺部肺泡中的尘细胞或肺泡巨噬细胞，位于结缔组织中的组织细胞，位于肝中的枯氏细胞，位于神经组织中的小胶质细胞，位于肉芽肿中的上皮样细胞，位于骨中的破骨细胞，位于脾中的窦内皮细胞(sinusoidal lining cell)和位于肾中的系膜细胞。体外鉴定巨噬细胞的方法为本领域技术人员熟知，且包括使用针对巨噬细胞上所存在的膜结合标记物的优选单克隆抗体以用于鉴定。优选的膜标记物包含CD13、CD14和CD68。

术语“活化的巨噬细胞”指巨噬细胞的功能性状态，以特异细胞因子和/或趋化因子的表达水平等为特征。本文所用的术语“活化的巨噬细胞”指特征为IL-10、TNF-α、CCL1、IL-13、CCL-5和/或TGF-β产生相对非活化巨噬细胞增加的巨噬细胞。活化的巨噬细胞优选不表达水平显著高于正常巨噬细胞的CCL18或IL-12。

术语“显著更高”指统计上不同的表达水平，优选比未刺激巨噬细胞高至少5倍，优选来自同一对象。所述活化优选还以出现胞内一氧化氮为特征。所述活化优选还以所述巨噬细胞上出现MHC II类和CD86表面标记物为特征。所述活化的巨噬细胞优选不表达CD80、CD163、FcγR或甘露糖受体。

确定与巨噬细胞活化相关的特异细胞因子和/或趋化因子水平的优选方法涉及使用市售可得酶联免疫吸附试验(ELISA)或PCR扩增特异细胞因子和/或趋化因子转录物。优选这些特异细胞因子和/或趋化因子中的至少一种在活化巨噬细胞中的分泌相较未刺激巨噬细胞分泌水平显著更高。优选地，所述至少一种细胞因子的分泌水平与未刺激或非活化巨噬细胞相比高至少5、10、15、25、50或100，所述未刺激或非活化巨噬细胞是来自同一来源且在相同条件但没有刺激下培养的巨噬细胞。

术语“巨噬细胞的活化”用于指巨噬细胞经历生理变化产生活化形式的调控过程。

术语“炎性疾病”指免疫系统活性被病理性刺激或抑制的机体病理状态。在一个优选的实施方式中，所述活性是炎性疾病的主因。所述炎性疾病优选是皮肤、粘膜、肺、神经系统、血管系统、胰腺或关节的急性或慢性炎症性病症，优选皮炎、牛皮癣、湿疹、克罗恩病、溃疡性结肠炎、牙周炎、扁平苔癣、硬化性苔癣、慢性阻塞性肺疾病、气肿、阿尔茨海默病、帕金森病、痴呆、视神经炎、脑炎、炎性周围神经病、动脉粥样硬化、血管炎、风湿性关节炎或糖尿病。

本文所用的术语“药学上可接受的载体”指给予所述微粒的载体。所述药学上可接受的载体能包含适于递送所述微粒至治疗靶标的任何物质或载剂。所述术语指任何药物载体，所述载体本身不诱导对接受组合物个体有害的抗体产生，其可被给予而没有过度毒性。合适的载体可为一种或多种可选的稳定剂、稀释剂或赋形剂。

本文所用的术语“药学上有效量”指有效引起巨噬细胞分泌可检测IL-10水平的本文所述小热激蛋白量。优选用刺激浓度1μg/mL的包封蛋白在含有100.000-150.000个人巨噬细胞且总培养基体积为200μL的培养孔中能于24小时期间使IL-10聚集到至少1ng/mL的浓度。

本文所用的术语“治疗有效量”指对预防、治愈或至少部分抑制紊乱症状和其并发症所需的本发明所述生物可降解微粒量。当然，有效实现此目标的量将取决于疾病的严重性和患者的体重及整体状况。通常，体外使用的剂量可对用于原位给予药物组合物的量提供有用指南，动物模型可用于确定治疗特定紊乱的有效剂量。

实施方式

本发明是基于以下意外发现：含CRYAB的微粒激活巨噬细胞的有效性远高于游离可溶CRYAB。

因此，本发明提供含CRYAA或CRYAB蛋白的微粒，优选含药学上有效量。引起强抗炎物质IL-10产生的巨噬细胞活化预示了前面记载的不同炎症小鼠模型中CRYAB蛋白的抗炎效果。

微粒

根据本发明的微粒可由各种组合物和结构构成。可使用直径为0.2-3.5的任何生物可降解微粒。描述了适于制备本发明所述微粒的许多制备药物递送装置方法，所述方法在微粒中纳入药学上有效量的小热激蛋白。原则上，可使用任何微粒如果其可由巨噬细胞摄取并释放该巨噬细胞内药学上有效量的小热激蛋白。根据本发明的微粒的有效性与其大小等相关。微粒必须由吞噬细胞吞噬。因此，优选的微粒大小等于或小于3μm。这种微粒适于口服或注射递送、吸入或肺部递送。

在一个优选实施方式中，所述微粒的平均直径为1-2.5μm。在一个优选实施方式中，如实施例更详细描述所制备的PLGA微粒的直径为0.5-2微米。此范围内的PLGA微粒非常有效。涉及能以类似方式制备的PLHMGA微粒直径时，所述直径优选为0.2-2微米以实现好结果。

微粒优选不是脂质体。在某些实施方式中，明确否认脂质体。

合适的微粒是由聚(环氧乙烷)-聚(L-乳酸)/聚(L-天冬氨酸-e苄酯)构成的纳米粒子。其合成描述于Majeti N.V.Ravi Kumar的J Pharm PharmaceutSci3(2):234-258,2000中的图1。同样，在同一文献中如下记载的纳米例子被考虑作为纳入药学上有效量小热激蛋白的药物递送装置：聚乙二醇包衣的纳米球、叠氮胸苷(AZT)/双脱氧胞苷(ddc)纳米粒子、聚(氰基丙烯酸异丁酯)纳米胶囊、获自聚(L-谷氨酸-y-芐酯)/聚(环氧乙烷)的纳米粒子、壳聚糖-聚(环氧乙烷)纳米粒子和固体脂质纳米粒。

另外，如Majeti N.V.Ravi Kumar的J Pharm Pharmaceut Sci3(2):234-258,2000中所述的如下材料被考虑作为本文所述小热激蛋白的药物递送装置：壳聚糖多孔珠、包衣的海藻酸盐微球、N-(氨烷基)壳聚糖微球、壳聚糖/海藻酸钙珠、聚(己二酸酐)微球、结冷胶珠、聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)微球、聚L-赖氨酸海藻酸酯微胶囊、交联壳聚糖微球、壳聚糖/明胶微球、有间隔基团的交联壳聚糖网络珠、l,5-二氧氮杂-2-酮(1,5-diozepan-2-one，DXO)和D,L-二丙交酯(D,L-LA)微球、甘油三酯脂肪球、海藻酸钠壳聚糖的聚电解质复合物、多肽微胶囊和白蛋白微球。

作为药物递送装置的优选包封微粒描述于US2004247670。

制备本发明微粒的方法

文献中描述了很多种制备微粒的方法。本发明的微粒能用任何现有方法制备。合适技术包括喷雾干燥、研磨或乳化技术。经研磨产生微粒的合适方法是用丙酮、乙醇和/或水超声清洗混合有本文所述小热激蛋白的烧结磷酸钙，然后可选地对微粒进行干燥和灭菌。制备所述生物可降解微粒的一个优选方法由Ghassemi等[J.Control.Release138:57-63(2009)]更详细描述。

合适方法使用乳剂制备生物可降解微粒，特别是准备直径小于100μm的微粒。为给出所述工艺的一般示例，可将聚合物溶于合适有机溶剂(聚合物溶剂)，在此聚合物溶液中溶解或分散试剂，将所得聚合物/试剂混合物分散于水相(加工介质)获得含有分散于加工介质中的油微滴的水包油乳剂，并从微滴中移除溶剂以形成微粒。这些工艺能用油包水乳剂和复乳剂即水包油包水乳剂进行。

根据此基本方法使用基于乳剂的工艺描述于数个美国专利中。例如，美国专利号4,384,975描述通过形成乳剂并随后经真空蒸馏从乳剂的微滴中移除聚合物溶剂来产生微粒。另一示例美国专利号3,891,570公开了通过供热或降低制造容器压力从乳剂的微滴中移除聚合物溶剂的方法。另一示例美国专利号4,389,330中，聚合物溶剂通过真空蒸馏从乳剂的微滴中部分移除(优选40-60%聚合物溶剂)，并随后提取剩余聚合物溶剂以凝固微粒。制备生物可降解微粒的最广泛使用方法是相分离、喷雾干燥和溶剂蒸发。

也称为凝聚的相分离通过添加非溶剂来利用降低的聚合物溶解度。在一个典型过程中，生物可降解聚合物溶于有机溶剂(如二氯甲烷)中。亲脂性药物溶于聚合物溶液中。亲水性药物溶于水中，然后分散于聚合物溶液(油包水(w/o)乳剂)或作为固体粉末分散。逐步加入非溶剂(通常为硅油)。形成2相：富集聚合物的硅油相和聚合物耗尽的液体有机溶剂相。当有机溶剂被提取或蒸发，含有包入药物的聚合物微粒在硅油相中凝固。凝聚物(硅油)吸附于聚合物微粒。

喷雾干燥中，生物可降解聚合物溶于挥发性有机溶剂，如二氯甲烷。药物溶解或分散于聚合物溶液。在加热的空气中喷射溶液或分散液。溶剂蒸发，引起固体微粒形成。

溶剂蒸发是最常用的微粒制备方法。此方法中，含药物的有机聚合物溶液在分散介质中乳化，所述介质通常为水性但可以是油。所述方法能进一步分成水包油(o/w)、水包油包水(w/o/w)，和油包油(o/o)乳化方法。

在o/w方法中，药物和聚合物溶于有机溶剂，如二氯甲烷或甲醇/二氯甲烷混合物。药物-聚合物-有机溶剂溶液分散于水相中。水相中包含乳化剂(通常是聚乙烯醇)以帮助在水相中形成小的有机溶剂滴。有机溶剂在搅拌中蒸发，随着蒸发，液滴凝固成含有包入药物的聚合物微粒。

在w/o/w复乳化中，制备水性药物溶液，并分散于聚合物的有机溶剂溶液中，以形成含所述药物和聚合物的油包水乳剂。w/o聚合物-药物乳剂随后在水相中乳化形成w/o/w乳剂。有机溶剂在搅拌下蒸发，使乳剂中的聚合物-药物液滴能固化成微粒。

在o/o乳化方法中，药物和聚合物溶于水混溶性溶剂(如，乙腈)。该溶液在乳化剂(如SPAN80)存在下于油相中乳化形成油包油乳剂。所述有机溶剂通过油提取，且微粒能由过滤收集。

通常，活性剂的水溶液、悬液或固体形式能与含聚合物的有机溶剂混合。使用活性成分的水溶液时，会形成聚合物:活性剂乳剂，并用于制备微粒。使用活性剂的悬液或固体形式时，形成聚合物:活性剂悬液，并用于制备微粒。

产生本发明微粒的优选方法包含以下步骤：将含本文所述小热激蛋白的溶液加入PLGA或PLHMGA的二氯甲烷(DCM)溶液中，产生水/DCM二相系统，乳化所述水/DCM二相系统产生油包水乳剂，加入含聚乙烯醇的溶液产生混合物，乳化所述混合物产生水包油包水乳剂，使DCM从所述水包油包水乳剂中蒸发，并收集生物可降解微粒。

治疗炎性疾病

本发明的生物可降解微粒极有效活化巨噬细胞。因此，其提供比简单供应游离可溶蛋白有效许多的策略以选择性递送本文所述小热激蛋白到巨噬细胞。不希望受理论约束，认为这是因为微粒由其靶细胞直接吞噬。因此，本发明的生物可降解微粒适用于人对象的医学治疗。本发明还提供治疗患有炎性疾病的人对象的方法，所述方法包括将本发明所述微粒给予所述人对象。直接递送微粒一般通过皮下、腹腔内、静脉内或肌肉内注射完成，或通过注射递送至组织间隙完成。微粒还能给予神经系统内。其它给予模式包括局部、口服、栓剂、透皮施用、针、颗粒枪或无针注射器。剂量治疗可以是单剂量方案或多剂量方案。本发明的生物可降解微粒可在每日、每周或每月基础上给予。

所述生物可降解微粒优选用于针对炎性疾病的医学治疗。所述炎性疾病优选是皮肤、粘膜、肺、神经系统、血管系统、胰腺或关节的急性或慢性炎症性病症，优选皮炎、牛皮癣、湿疹、克罗恩病、溃疡性结肠炎、牙周炎、扁平苔癣、硬化性苔癣、慢性阻塞性肺疾病、气肿、阿尔茨海默病、帕金森病、痴呆、视神经炎、脑炎、炎性周围神经病、动脉粥样硬化、血管炎、风湿性关节炎或糖尿病。

药物组合物

本发明还提供含有效量微粒的药物组合物。为了本发明目的，有效剂量为给予个体中约100ng/kg-50mg/kg组合物。或者，就局部应用预期有效剂量在10ng/mL-10mg/mL范围内。

所述药物组合物还能包含药学上可接受载体。药学上可接受载体为本领域已知，包括例如用于无菌注射组合物的等渗水溶液以及水性和非水性无菌悬液，所述等渗水溶液能包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与目标受体血液等渗的溶质，所述水性和非水性无菌悬液能包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、防腐剂或微球等其它试剂以辅助生物可降解微粒分布和/或递送到靶位点和/或靶细胞。这种载体为本领域普通技术人员熟知。

所述药物组合物优选不含大量的非本发明所述微粒。例如，若药物组合物包含过多的过大微粒，其不是很有效。因此，药物组合物中存在的至少百分之50、60、70、80、90的微粒是本发明所述生物可降解微粒。

在一个优选实施方式中，将本发明所述生物可降解微粒配制成能制成剂型的药物组合物，特别是口服固体剂型如胶囊和压缩片剂，其如本领域所熟知。

压缩片剂从含生物可降解微粒的药物组合物中配制，或使用承载所述微粒的药物载体颗粒、药物学惰性(药学上可接受)添加剂或赋形剂配制。

为制备片剂，通常需要在药物组合物中包括一种或多种温和药物赋形剂。本发明的药物组合物可包含一种或多种稀释剂，其加入使片剂更大并因而使患者和护理者更易处理。普通稀释剂是微晶纤维素(如

、微粉纤维素、乳糖、淀粉、预胶化淀粉、碳酸钙、硫酸钙、糖、葡萄糖结合剂、糊精、右旋糖、二水合磷酸氢钙、磷酸三钙、高岭土、碳酸镁、氧化镁、麦芽糖糊精、甘露醇、聚甲基丙烯酸酯(如

)、氯化钾、粉状纤维素、氯化钠、山梨醇和滑石。

粘合剂也可纳入片剂制剂以帮助压缩后保持片剂结合在一起。一些典型的粘合剂是阿拉伯胶、藻酸、卡波姆(如卡波普)、羧甲基纤维素钠、糊精、乙基纤维素、明胶、瓜尔豆胶、氢化植物油、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素(如

)、羟丙基甲基纤维素(如

)、液状葡萄糖、镁铝硅酸盐、麦芽糖糊精、甲基纤维素、聚甲基丙烯酸酯、聚维酮(如

)、预胶化淀粉、海藻酸钠和淀粉。

所述片剂还可包括崩解剂以加速片剂在患者胃中的崩解。崩解剂包括藻酸、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、胶态二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠(如

)、交聚维酮(如

)、瓜尔豆胶、镁铝硅酸盐、甲基纤维素、微晶纤维素、波拉克林钾(polacrilin)、粉状纤维素、预胶化淀粉、海藻酸钠、羧乙酸淀粉钠(如

)和淀粉。

制备压缩片剂的药物组合物还可包括助流剂、润滑剂、调味剂、着色剂和其它常用赋形剂。

本发明的液体口服药物组合物包含本发明的生物可降解微粒和液体载体如水、植物油、醇、聚乙二醇、丙二醇或甘油，最优选水。

液体口服药物组合物可包含乳化剂以在整个组合物中均匀分散活性成分、药物递送载剂、或在液体载体中溶解度低的赋形剂。可用于本发明液体组合物的乳化剂包括例如明胶、蛋黄、酪蛋白、胆固醇、阿拉伯胶、黄芪胶、角叉菜、果胶、甲基纤维素、卡波姆、十八醇十六醇混合物和十六醇。

本发明的液体口服药物组合物还可包含粘性增强剂以改善产物的口感和/或包被胃肠道壁。这种试剂包括阿拉伯胶、藻酸皂土、卡波姆、羧甲基纤维素钙或钠、十八醇十六醇混合物、甲基纤维素、乙基纤维素、明胶瓜尔豆胶、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糖糊精、聚乙烯醇、聚维酮、碳酸丙烯酯、藻酸丙二醇酯、海藻酸钠、羧乙酸淀粉钠、淀粉西黄蓍胶胶和黄原胶。

所述液体口服药物组合物还可包含：甜味剂，如山梨醇、糖精、糖精钠、蔗糖、阿司帕坦、果糖、甘露醇和转化糖；防腐剂和螯合剂，如醇、苯甲酸钠、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基茴香醚和乙二胺四乙酸；以及缓冲液，如葡糖酸、乳酸、柠檬酸或乙酸、葡萄糖酸钠、乳酸钠、柠檬酸钠或乙酸钠。

在其它优选实施方式中，本发明的药物组合物是适于局部应用的组合物。局部应用活性蛋白质化合物的合适药物组合物为本领域熟知。合适的局部药物组合物可包括一种或多种干燥剂(优选氧化锌)、溶剂(优选一羟基链烷醇)、湿润剂(优选甘油)和/或粘度产生剂(优选膨润土)，与水混合形成洗液或乳膏。

本发明现在通过下列非限制性实施例来说明。

实施例

实施例1.人血清存在下微球包封CRYAB对免疫调节巨噬细胞反应的激活方法

合成亲水性聚酯：有L-丙交酯的3S-(苄氧基甲基)-6S-甲基-1,4-二氧六环-2,5-二酮(BHMG)与和D,L-丙交酯的共聚物

3S-(苄氧基甲基)-6S-甲基-1,4-二氧六环-2,5-二酮(BHMG)根据Leemhuis等.[Macromolecules39:3500-3508(2006)]合成。BMMG与D,L-丙交酯的共聚物(单体比例35/65和50/50%mol/mol)通过Ghassemi等.[J.Control.Release138:57–63(2009)]所述的熔融共聚来合成。共聚后，移除保护苄基，乳酸-羟甲基乙醇酸共聚物(PLHMGA)的组成由¹H-NMR确立。所述共聚物的合适玻璃化转变温度由差示扫描量热法确认，其期望分子量由大小排阻色谱确认。所述共聚物(苄基保护和去保护)的¹H-NMR分析证实所述共聚物组成与单体进料比率匹配，且完全去保护。所述共聚物的产率通常为90-100%。

加载CRYAB的PLHMGA & PLGA微粒的制备和鉴定

PLHMGA聚合物的CRYAB加载微球(图1)或更广泛使用的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)通过复乳化溶剂蒸发技术制备，如Wang等.[Journal ofControlled Release82:289–3073(2002)]所述。简言之，将300μl溶于磷酸盐缓冲盐水的12.5mg/ml CRYAB溶液逐滴加入3ml的10%(w/v)PLHMGA溶液或PLGA溶液(溶于二氯甲烷(DCM))。水/DCM二相系统用IKA均质器(德国施陶芬的IKA Werke实验室仪器公司(IKA WerkeLabortechnik，Staufen))以35,000rpm乳化1分钟。然后，将所得油包水(w/o)乳剂加入30ml含150mM NaCl的5%(w/v)聚乙烯醇(PVA)(pH7.4)，所述混合物用IKA均质器以35,000rpm乳化2分钟。将所得水包油包水(w/o/w)乳剂转移至圆底烧瓶，在真空下室温蒸发DCM。然后，通过在25,000g离心20分钟收集微球，用50ml水洗涤3次，过夜冻干并4°C干燥保存直到用于实验。通过动态光散射和粒度分析仪(accusizer)分析鉴定颗粒大小，并通过扫描电子显微术检测形态。

结果表明PLGA微球在球形颗粒形成中的大小分布为0.5-3.5μm，而PLHMGA颗粒具有0.2-2μm范围的较窄粒度分布。由此获得的微粒扫描电子显微照片示于图2。

实施例2.用游离CRYAB或微球包封CRYAB激活人巨噬细胞。

人外周血单个核细胞从获自健康供体的全血中分离。CD14⁺单核细胞用包被有抗CD14抗体的磁珠通过阳性选择而分离。在巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的存在下，将如此纯化的单核细胞在含10%人血清的标准培养基中培养7天，以诱导其分化成巨噬细胞。7天后，在细胞充分分化时，移出一半的培养基，用等体积新鲜培养基替代，所述新鲜培养基含有10%人血清且包含不同浓度的多种刺激物。刺激物包括游离可溶人重组CRYAB、加载CRYAB的PLHMGA或PLGA微球制品(在相同培养基中制备)。将不含蛋白质的空微球用作对照。培养18-20小时后，当巨噬细胞明显吞噬大部分微粒时，将培养板在4°C以1,250g离心20分钟。最后，单独收集所有培养基上清以用市售ELISA试剂盒定量IL-10。

实施例3.含CRYAB的微球而不是空微球诱导人巨噬细胞产生IL-10(参见图6)。

人外周血单个核细胞从获自健康供体的全血中分离。CD14⁺单核细胞用包被有抗CD14抗体的磁珠通过阳性选择而分离。将如此纯化的单核细胞在巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)存在下培养7天以诱导其分化成巨噬细胞。7天后，在细胞充分分化时，移出一半的培养基，用等体积新鲜培养基取代，所述新鲜培养基包含不同浓度的多个刺激物。刺激物包括不同浓度的CRYAB加载PLGA微球，或具有相同尺寸的CRYAB加载与空PLGA微球的混合物，浓度示于图6。培养18-20小时后，如上所述单独检测培养基上清的IL-10。

实施例4.微球包封CRYAB而不是游离可溶CRYAB抑制人外周血T细胞的抗原特异增殖应答(参见图8)。

人外周血单个核细胞(PBMC)从获自健康供体的全血沉棕黄层分离。如此纯化的PBMC首先用荧光染料羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记。此染料稳定标记胞内蛋白，常用于T细胞增殖实验，因为所述增殖能通过增殖期间细胞分裂引起的胞内荧光标记逐步稀释来显现和定量。经CFSE标记的PBMC在200μg/mL人重组CRYAB或0.2μg/mL破伤风类毒素存在下培养9天，CRYAB和破伤风类毒素是大部分人已建立对其的记忆T细胞应答的2种测试抗原。在培养当日，向有或没有测试抗原的PBMC额外提供增加浓度的游离CRYAB(多至30μg/mL)或PLGA-微球包封CRYAB(多至30μg/mL总微球质量)(其1%是CRYAB蛋白)。培养9天后，收集PBMC并用荧光标记抗体染色表面标记物CD4(辅助T细胞标记物)和CD45RO(记忆T细胞标记物)，并进行流式细胞术分析。经荧光标记的标记物CD4或CD45RO的强度能使流式细胞术分析集中于PBMC群内的记忆T细胞或辅助T细胞，而荧光CFSE标记物强度能鉴定和定量培养中增殖的所述T细胞部分，因为这些细胞的特征为稀释并因而变暗的CFSE信号。图8显示平均值±标准偏差。统计学显著性用ANOVA检验计算。

实施例5.含CRYAB的微球而不是即使剂量高许多的游离可溶CRYAB抑制香烟烟气诱发的肺部炎症(参见图9)。

在5天时间段内，将小鼠(组n=6或n=7)1天2次暴露于香烟烟气中30分钟。作为处理，在异氟烷浅麻醉下1天2次气管内给予：溶于PBS的游离可溶CRYAB、重悬于PBS的含CRYAB的PLGA微球、或单独PBS。在第6天，处死动物并从所有动物收集支气管肺泡灌洗液，单独检测巨噬细胞、嗜曙红细胞、中性粒细胞和淋巴细胞的数目。所有实验由合格人员进行，有动物实验伦理委员会的事先书面批准，依照所有当地规定和法律规制。图9A和B显示平均值±均值标准误差。统计学显著性用未配对斯氏t检验计算。

序列表

<110>德尔塔克利斯塔隆有限公司(Delta Crystallon B.V.)

<120>包含小热激蛋白的微粒

<130>P91820PC00

<151>EP10169869.4

<160>26

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>81

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(81)

<223>HSPB5的α晶体蛋白结构域

<400>1

Met Arg Leu Glu Lys Asp Arg Phe Ser Val Asn Leu Asp Val Lys His

1 5 10 15

Phe Ser Pro Glu Glu Leu Lys Val Lys Val Leu Gly Asp Val Ile Glu

20 25 30

Val His Gly Lys His Glu Glu Arg Gln Asp Glu His Gly Phe Ile Ser

35 40 45

Arg Glu Phe His Arg Lys Tyr Arg Ile Pro Ala Asp Val Asp Pro Leu

50 55 60

Thr Ile Thr Ser Ser Leu Ser Ser Asp Gly Val Leu Thr Val Asn Gly

65 70 75 80

Pro

<210>2

<211>175

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(175)

<223>HSPB5

<220>

<221>结构域

<222>(68)..(148)

<223>α晶体蛋白结构域

<400>2

Met Asp Ile Ala Ile His His Pro Trp Ile Arg Arg Pro Phe Phe Pro

1 5 10 15

Phe His Ser Pro Ser Arg Leu Phe Asp Gln Phe Phe Gly Glu His Leu

20 25 30

Leu Glu Ser Asp Leu Phe Pro Thr Ser Thr Ser Leu Ser Pro Phe Tyr

35 40 45

Leu Arg Pro Pro Ser Phe Leu Arg Ala Pro Ser Trp Phe Asp Thr Gly

50 55 60

Leu Ser Glu Met Arg Leu Glu Lys Asp Arg Phe Ser Val Asn Leu Asp

65 70 75 80

Val Lys His Phe Ser Pro Glu Glu Leu Lys Val Lys Val Leu Gly Asp

85 90 95

Val Ile Glu Val His Gly Lys His Glu Glu Arg Gln Asp Glu His Gly

100 105 110

Phe Ile Ser Arg Glu Phe His Arg Lys Tyr Arg Ile Pro Ala Asp Val

115 120 125

Asp Pro Leu Thr Ile Thr Ser Ser Leu Ser Ser Asp Gly Val Leu Thr

130 135 140

Val Asn Gly Pro Arg Lys Gln Val Ser Gly Pro Glu Arg Thr Ile Pro

145 150 155 160

Ile Thr Arg Glu Glu Lys Pro Ala Val Thr Ala Ala Pro Lys Lys

165 170 175

<210>3

<211>173

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(173)

<223>HSPB4

<220>

<221>结构域

<222>(64)..(144)

<223>α晶体蛋白结构域

<400>3

Met Asp Val Thr Ile Gln His Pro Trp Phe Lys Arg Thr Leu Gly Pro

1 5 10 15

Phe Tyr Pro Ser Arg Leu Phe Asp Gln Phe Phe Gly Glu Gly Leu Phe

20 25 30

Glu Tyr Asp Leu Leu Pro Phe Leu Ser Ser Thr Ile Ser Pro Tyr Tyr

35 40 45

Arg Gln Ser Leu Phe Arg Thr Val Leu Asp Ser Gly Ile Ser Glu Val

50 55 60

Arg Ser Asp Arg Asp Lys Phe Val Ile Phe Leu Asp Val Lys His Phe

65 70 75 80

Ser Pro Glu Asp Leu Thr Val Lys Val Gln Asp Asp Phe Val Glu Ile

85 90 95

His Gly Lys His Asn Glu Arg Gln Asp Asp His Gly Tyr Ile Ser Arg

100 105 110

Glu Phe His Arg Arg Tyr Arg Leu Pro Ser Asn Val Asp Gln Ser Ala

115 120 125

Leu Ser Cys Ser Leu Ser Ala Asp Gly Met Leu Thr Phe Cys Gly Pro

130 135 140

Lys Ile Gln Thr Gly Leu Asp Ala Thr His Ala Glu Arg Ala Ile Pro

145 150 155 160

Val Ser Arg Glu Glu Lys Pro Thr Ser Ala Pro Ser Ser

165 170

<210>4

<211>205

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(205)

<223>HSPB1

<220>

<221>结构域

<222>(88)..(168)

<223>α晶体蛋白结构域

<400>4

Met Thr Glu Arg Arg Val Pro Phe Ser Leu Leu Arg Gly Pro Ser Trp

1 5 10 15

Asp Pro Phe Arg Asp Trp Tyr Pro His Ser Arg Leu Phe Asp Gln Ala

20 25 30

Phe Gly Leu Pro Arg Leu Pro Glu Glu Trp Ser Gln Trp Leu Gly Gly

35 40 45

Ser Ser Trp Pro Gly Tyr Val Arg Pro Leu Pro Pro Ala Ala Ile Glu

50 55 60

Ser Pro Ala Val Ala Ala Pro Ala Tyr Ser Arg Ala Leu Ser Arg Gln

65 70 75 80

Leu Ser Ser Gly Val Ser Glu Ile Arg His Thr Ala Asp Arg Trp Arg

85 90 95

Val Ser Leu Asp Val Asn His Phe Ala Pro Asp Glu Leu Thr Val Lys

100 105 110

Thr Lys Asp Gly Val Val Glu Ile Thr Gly Lys His Glu Glu Arg Gln

115 120 125

Asp Glu His Gly Tyr Ile Ser Arg Cys Phe Thr Arg Lys Tyr Thr Leu

130 135 140

Pro Pro Gly Val Asp Pro Thr Gln Val Ser Ser Ser Leu Ser Pro Glu

145 150 155 160

Gly Thr Leu Thr Val Glu Ala Pro Met Pro Lys Leu Ala Thr Gln Ser

165 170 175

Asn Glu Ile Thr Ile Pro Val Thr Phe Glu Ser Arg Ala Gln Leu Gly

180 185 190

Gly Pro Glu Ala Ala Lys Ser Asp Glu Thr Ala Ala Lys

195 200 205

<210>5

<211>182

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(182)

<223>HSPB2

<220>

<221>结构域

<222>(67)..(147)

<223>α晶体蛋白结构域

<400>5

Met Ser Gly Arg Ser Val Pro His Ala His Pro Ala Thr Ala Glu Tyr

1 5 10 15

Glu Phe Ala Asn Pro Ser Arg Leu Gly Glu Gln Arg Phe Gly Glu Gly

20 25 30

Leu Leu Pro Glu Glu Ile Leu Thr Pro Thr Leu Tyr His Gly Tyr Tyr

35 40 45

Val Arg Pro Arg Ala Ala Pro Ala Gly Glu Gly Ser Arg Ala Gly Ala

50 55 60

Ser Glu Leu Arg Leu Ser Glu Gly Lys Phe Gln Ala Phe Leu Asp Val

65 70 75 80

Ser His Phe Thr Pro Asp Glu Val Thr Val Arg Thr Val Asp Asn Leu

85 90 95

Leu Glu Val Ser Ala Arg His Pro Gln Arg Leu Asp Arg His Gly Phe

100 105 110

Val Ser Arg Glu Phe Cys Arg Thr Tyr Val Leu Pro Ala Asp Val Asp

115 120 125

Pro Trp Arg Val Arg Ala Ala Leu Ser His Asp Gly Ile Leu Asn Leu

130 135 140

Glu Ala Pro Arg Gly Gly Arg His Leu Asp Thr Glu Val Asn Glu Val

145 150 155 160

Tyr Ile Ser Leu Leu Pro Ala Pro Pro Asp Pro Glu Glu Glu Glu Glu

165 170 175

Ala Ala Ile Val Glu Pro

180

<210>6

<211>150

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(150)

<223>HSPB3

<220>

<221>结构域

<222>(64)..(144)

<223>α晶体蛋白结构域

<400>6

Met Ala Lys Ile Ile Leu Arg His Leu Ile Glu Ile Pro Val Arg Tyr

1 5 10 15

Gln Glu Glu Phe Glu Ala Arg Gly Leu Glu Asp Cys Arg Leu Asp His

20 25 30

Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Gly Pro Thr Ile Val Asp Leu Arg Lys Thr

35 40 45

Arg Ala Ala Gln Ser Pro Pro Val Asp Ser Ala Ala Glu Thr Pro Pro

50 55 60

Arg Glu Gly Lys Ser His Phe Gln Ile Leu Leu Asp Val Val Gln Phe

65 70 75 80

Leu Pro Glu Asp Ile Ile Ile Gln Thr Phe Glu Gly Trp Leu Leu Ile

85 90 95

Lys Ala Gln His Gly Thr Arg Met Asp Glu His Gly Phe Ile Ser Arg

100 105 110

Ser Phe Thr Arg Gln Tyr Lys Leu Pro Asp Gly Val Glu Ile Lys Asp

115 120 125

Leu Ser Ala Val Leu Cys His Asp Gly Ile Leu Val Val Glu Val Lys

130 135 140

Asp Pro Val Gly Thr Lys

145 150

<210>7

<211>160

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(160)

<223>HSPB6

<220>

<221>结构域

<222>(67)..(144)

<223>α晶体蛋白结构域

<400>7

Met Glu Ile Pro Val Pro Val Gln Pro Ser Trp Leu Arg Arg Ala Ser

1 5 10 15

Ala Pro Leu Pro Gly Leu Ser Ala Pro Gly Arg Leu Phe Asp Gln Arg

20 25 30

Phe Gly Glu Gly Leu Leu Glu Ala Glu Leu Ala Ala Leu Cys Pro Thr

35 40 45

Thr Leu Ala Pro Tyr Tyr Leu Arg Ala Pro Ser Val Ala Leu Pro Val

50 55 60

Ala Gln Val Pro Thr Asp Pro Gly His Phe Ser Val Leu Leu Asp Val

65 70 75 80

Lys His Phe Ser Pro Glu Glu Ile Ala Val Lys Val Val Gly Glu His

85 90 95

Val Glu Val His Ala Arg His Glu Glu Arg Pro Asp Glu His Gly Phe

100 105 110

Val Ala Arg Glu Phe His Arg Arg Tyr Arg Leu Pro Pro Gly Val Asp

115 120 125

Pro Ala Ala Val Thr Ser Ala Leu Ser Pro Glu Gly Val Leu Ser Ile

130 135 140

Gln Ala Ala Pro Ala Ser Ala Gln Ala Pro Pro Pro Ala Ala Ala Lys

145 150 155 160

<210>8

<211>170

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(170)

<223>HSPB7

<220>

<221>结构域

<222>(75)..(152)

<223>α晶体蛋白结构域

<400>8

Met Ser His Arg Thr Ser Ser Thr Phe Arg Ala Glu Arg Ser Phe His

1 5 10 15

Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ser Ser Ser Ala Ser Arg

20 25 30

Ala Leu Pro Ala Gln Asp Pro Pro Met Glu Lys Ala Leu Ser Met Phe

35 40 45

Ser Asp Asp Phe Gly Ser Phe Met Arg Pro His Ser Glu Pro Leu Ala

50 55 60

Phe Pro Ala Arg Pro Gly Gly Ala Gly Asn Ile Lys Thr Leu Gly Asp

65 70 75 80

Ala Tyr Glu Phe Ala Val Asp Val Arg Asp Phe Ser Pro Glu Asp Ile

85 90 95

Ile Val Thr Thr Ser Asn Asn His Ile Glu Val Arg Ala Glu Lys Leu

100 105 110

Ala Ala Asp Gly Thr Val Met Asn Thr Phe Ala His Lys Cys Gln Leu

115 120 125

Pro Glu Asp Val Asp Pro Thr Ser Val Thr Ser Ala Leu Arg Glu Asp

130 135 140

Gly Ser Leu Thr Ile Arg Ala Arg Arg His Pro His Thr Glu His Val

145 150 155 160

Gln Gln Thr Phe Arg Thr Glu Ile Lys Ile

165 170

<210>9

<211>196

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(196)

<223>HSPB8

<220>

<221>结构域

<222>(89)..(169)

<223>α晶体蛋白结构域

<400>9

Met Ala Asp Gly Gln Met Pro Phe Ser Cys His Tyr Pro Ser Arg Leu

1 5 10 15

Arg Arg Asp Pro Phe Arg Asp Ser Pro Leu Ser Ser Arg Leu Leu Asp

20 25 30

Asp Gly Phe Gly Met Asp Pro Phe Pro Asp Asp Leu Thr Ala Ser Trp

35 40 45

Pro Asp Trp Ala Leu Pro Arg Leu Ser Ser Ala Trp Pro Gly Thr Leu

50 55 60

Arg Ser Gly Met Val Pro Arg Gly Pro Thr Ala Thr Ala Arg Phe Gly

65 70 75 80

Val Pro Ala Glu Gly Arg Thr Pro Pro Pro Phe Pro Gly Glu Pro Trp

85 90 95

Lys Val Cys Val Asn Val His Ser Phe Lys Pro Glu Glu Leu Met Val

100 105 110

Lys Thr Lys Asp Gly Tyr Val Glu Val Ser Gly Lys His Glu Glu Lys

115 120 125

Gln Gln Glu Gly Gly Ile Val Ser Lys Asn Phe Thr Lys Lys Ile Gln

130 135 140

Leu Pro Ala Glu Val Asp Pro Val Thr Val Phe Ala Ser Leu Ser Pro

145 150 155 160

Glu Gly Leu Leu Ile Ile Glu Ala Pro Gln Val Pro Pro Tyr Ser Thr

165 170 175

Phe Gly Glu Ser Ser Phe Asn Asn Glu Leu Pro Gln Asp Ser Gln Glu

180 185 190

Val Thr Cys Thr

195

<210>10

<211>159

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(159)

<223>HSPB9

<220>

<221>结构域

<222>(47)..(130)

<223>α晶体蛋白结构域

<400>10

Met Gln Arg Val Gly Asn Thr Phe Ser Asn Glu Ser Arg Val Ala Ser

1 5 10 15

Arg Cys Pro Ser Val Gly Leu Ala Glu Arg Asn Arg Val Ala Thr Met

20 25 30

Pro Val Arg Leu Leu Arg Asp Ser Pro Ala Ala Gln Glu Asp Asn Asp

35 40 45

His Ala Arg Asp Gly Phe Gln Met Lys Leu Asp Ala His Gly Phe Ala

50 55 60

Pro Glu Glu Leu Val Val Gln Val Asp Gly Gln Trp Leu Met Val Thr

65 70 75 80

Gly Gln Gln Gln Leu Asp Val Arg Asp Pro Glu Arg Val Ser Tyr Arg

85 90 95

Met Ser Gln Lys Val His Arg Lys Met Leu Pro Ser Asn Leu Ser Pro

100 105 110

Thr Ala Met Thr Cys Cys Leu Thr Pro Ser Gly Gln Leu Trp Val Arg

115 120 125

Gly Gln Cys Val Ala Leu Ala Leu Pro Glu Ala Gln Thr Gly Pro Ser

130 135 140

Pro Arg Leu Gly Ser Leu Gly Ser Lys Ala Ser Asn Leu Thr Arg

145 150 155

<210>11

<211>250

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(250)

<223>HSPB10

<220>

<221>结构域

<222>(108)..(201)

<223>α晶体蛋白结构域

<400>11

Met Ala Ala Leu Ser Cys Leu Leu Asp Ser Val Arg Arg Asp Ile Lys

1 5 10 15

Lys Val Asp Arg Glu Leu Arg Gln Leu Arg Cys Ile Asp Glu Phe Ser

20 25 30

Thr Arg Cys Leu Cys Asp Leu Tyr Met His Pro Tyr Cys Cys Cys Asp

35 40 45

Leu His Pro Tyr Pro Tyr Cys Leu Cys Tyr Ser Lys Arg Ser Arg Ser

50 55 60

Cys Gly Leu Cys Asp Leu Tyr Pro Cys Cys Leu Cys Asp Tyr Lys Leu

65 70 75 80

Tyr Cys Leu Arg Pro Ser Leu Arg Ser Leu Glu Arg Lys Ala Ile Arg

85 90 95

Ala Ile Glu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ala Lys Leu Arg Arg Thr Thr

100 105 110

Asn Arg Ile Leu Ala Ser Ser Cys Cys Ser Ser Asn Ile Leu Gly Ser

115 120 125

Val Asn Val Cys Gly Phe Glu Pro Asp Gln Val Lys Val Arg Val Lys

130 135 140

Asp Gly Lys Val Cys Val Ser Ala Glu Arg Glu Asn Arg Tyr Asp Cys

145 150 155 160

Leu Gly Ser Lys Lys Tyr Ser Tyr Met Asn Ile Cys Lys Glu Phe Ser

165 170 175

Leu Pro Pro Cys Val Asp Glu Lys Asp Val Thr Tyr Ser Tyr Gly Leu

180 185 190

Gly Ser Cys Val Lys Ile Glu Ser Pro Cys Tyr Pro Cys Thr Ser Pro

195 200 205

Cys Ser Pro Cys Ser Pro Cys Ser Pro Cys Asn Pro Cys Ser Pro Cys

210 215 220

Asn Pro Cys Ser Pro Tyr Asp Pro Cys Asn Pro Cys Tyr Pro Cys Gly

225 230 235 240

Ser Arg Phe Ser Cys Arg Lys Met Ile Leu

245 250

<210>12

<211>81

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(81)

<223>HSPB1的α晶体蛋白结构域

<400>12

Ile Arg His Thr Ala Asp Arg Trp Arg Val Ser Leu Asp Val Asn His

1 5 10 15

Phe Ala Pro Asp Glu Leu Thr Val Lys Thr Lys Asp Gly Val Val Glu

20 25 30

Ile Thr Gly Lys His Glu Glu Arg Gln Asp Glu His Gly Tyr Ile Ser

35 40 45

Arg Cys Phe Thr Arg Lys Tyr Thr Leu Pro Pro Gly Val Asp Pro Thr

50 55 60

Gln Val Ser Ser Ser Leu Ser Pro Glu Gly Thr Leu Thr Val Glu Ala

65 70 75 80

Pro

<210>13

<211>81

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(81)

<223>HSPB2的α晶体蛋白结构域

<400>13

Leu Arg Leu Ser Glu Gly Lys Phe Gln Ala Phe Leu Asp Val Ser His

1 5 10 15

Phe Thr Pro Asp Glu Val Thr Val Arg Thr Val Asp Asn Leu Leu Glu

20 25 30

Val Ser Ala Arg His Pro Gln Arg Leu Asp Arg His Gly Phe Val Ser

35 40 45

Arg Glu Phe Cys Arg Thr Tyr Val Leu Pro Ala Asp Val Asp Pro Trp

50 55 60

Arg Val Arg Ala Ala Leu Ser His Asp Gly Ile Leu Asn Leu Glu Ala

65 70 75 80

Pro

<210>14

<211>77

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(77)

<223>HSPB5的α晶体蛋白结构域片段

<400>14

Arg Leu Glu Lys Asp Arg Phe Ser Val Asn Leu Asp Val Lys His Phe

1 5 10 15

Ser Pro Glu Glu Leu Lys Val Lys Val Leu Gly Asp Val Ile Glu Val

20 25 30

His Gly Lys His Glu Glu Arg Gln Asp Glu His Gly Phe Ile Ser Arg

35 40 45

Glu Phe His Arg Lys Tyr Arg Ile Pro Ala Asp Val Asp Pro Leu Thr

50 55 60

Ile Thr Ser Ser Leu Ser Ser Asp Gly Val Leu Thr Val

65 70 75

<210>15

<211>77

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(77)

<223>HSPB3的α晶体蛋白结构域片段

<400>15

Arg Glu Gly Lys Ser His Phe Gln Ile Leu Leu Asp Val Val Gln Phe

1 5 10 15

Leu Pro Glu Asp Ile Ile Ile Gln Thr Phe Glu Gly Trp Leu Leu Ile

20 25 30

Lys Ala Gln His Gly Thr Arg Met Asp Glu His Gly Phe Ile Ser Arg

35 40 45

Ser Phe Thr Arg Gln Tyr Lys Leu Pro Asp Gly Val Glu Ile Lys Asp

50 55 60

Leu Ser Ala Val Leu Cys His Asp Gly Ile Leu Val Val

65 70 75

<210>16

<211>81

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(81)

<223>HSPB4的α晶体蛋白结构域片段

<400>16

Val Arg Ser Asp Arg Asp Lys Phe Val Ile Phe Leu Asp Val Lys His

1 5 10 15

Phe Ser Pro Glu Asp Leu Thr Val Lys Val Gln Asp Asp Phe Val Glu

20 25 30

Ile His Gly Lys His Asn Glu Arg Gln Asp Asp His Gly Tyr Ile Ser

35 40 45

Arg Glu Phe His Arg Arg Tyr Arg Leu Pro Ser Asn Val Asp Gln Ser

50 55 60

Ala Leu Ser Cys Ser Leu Ser Ala Asp Gly Met Leu Thr Phe Cys Gly

65 70 75 80

Pro

<210>17

<211>75

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(75)

<223>HSPB5的α晶体蛋白结构域片段

<400>17

Glu Lys Asp Arg Phe Ser Val Asn Leu Asp Val Lys His Phe Ser Pro

1 5 10 15

Glu Glu Leu Lys Val Lys Val Leu Gly Asp Val Ile Glu Val His Gly

20 25 30

Lys His Glu Glu Arg Gln Asp Glu His Gly Phe Ile Ser Arg Glu Phe

35 40 45

His Arg Lys Tyr Arg Ile Pro Ala Asp Val Asp Pro Leu Thr Ile Thr

50 55 60

Ser Ser Leu Ser Ser Asp Gly Val Leu Thr Val

65 70 75

<210>18

<211>75

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(75)

<223>HSPB6的α晶体蛋白结构域片段

<400>18

Asp Pro Gly His Phe Ser Val Leu Leu Asp Val Lys His Phe Ser Pro

1 5 10 15

Glu Glu Ile Ala Val Lys Val Val Gly Glu His Val Glu Val His Ala

20 25 30

Arg His Glu Glu Arg Pro Asp Glu His Gly Phe Val Ala Arg Glu Phe

35 40 45

His Arg Arg Tyr Arg Leu Pro Pro Gly Val Asp Pro Ala Ala Val Thr

50 55 60

Ser Ala Leu Ser Pro Glu Gly Val Leu Ser Ile

65 70 75

<210>19

<211>73

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(73)

<223>HSPB5的α晶体蛋白结构域片段

<400>19

Asp Arg Phe Ser Val Asn Leu Asp Val Lys His Phe Ser Pro Glu Glu

1 5 10 15

Leu Lys Val Lys Val Leu Gly Asp Val Ile Glu Val His Gly Lys His

20 25 30

Glu Glu Arg Gln Asp Glu His Gly Phe Ile Ser Arg Glu Phe His Arg

35 40 45

Lys Tyr Arg Ile Pro Ala Asp Val Asp Pro Leu Thr Ile Thr Ser Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Asp Gly Val Leu Thr Val

65 70

<210>20

<211>70

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(70)

<223>HSPB7的α晶体蛋白结构域片段

<400>20

Asp Ala Tyr Glu Phe Ala Val Asp Val Arg Asp Phe Ser Pro Glu Asp

1 5 10 15

Ile Ile Val Thr Thr Ser Asn Asn His Ile Glu Val Arg Ala Glu Lys

20 25 30

Leu Ala Ala Asp Gly Thr Val Met Asn Thr Phe Ala His Lys Cys Gln

35 40 45

Leu Pro Glu Asp Val Asp Pro Thr Ser Val Thr Ser Ala Leu Arg Glu

50 55 60

Asp Gly Ser Leu Thr Ile

65 70

<210>21

<211>74

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(74)

<223>HSPB5的α晶体蛋白结构域片段

<400>21

Phe Ser Val Asn Leu Asp Val Lys His Phe Ser Pro Glu Glu Leu Lys

1 5 10 15

Val Lys Val Leu Gly Asp Val Ile Glu Val His Gly Lys His Glu Glu

20 25 30

Arg Gln Asp Glu His Gly Phe Ile Ser Arg Glu Phe His Arg Lys Tyr

35 40 45

Arg Ile Pro Ala Asp Val Asp Pro Leu Thr Ile Thr Ser Ser Leu Ser

50 55 60

Ser Asp Gly Val Leu Thr Val Asn Gly Pro

65 70

<210>22

<211>74

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(74)

<223>HSPB8的α晶体蛋白结构域片段

<400>22

Trp Lys Val Cys Val Asn Val His Ser Phe Lys Pro Glu Glu Leu Met

1 5 10 15

Val Lys Thr Lys Asp Gly Tyr Val Glu Val Ser Gly Lys His Glu Glu

20 25 30

Lys Gln Gln Glu Gly Gly Ile Val Ser Lys Asn Phe Thr Lys Lys Ile

35 40 45

Gln Leu Pro Ala Glu Val Asp Pro Val Thr Val Phe Ala Ser Leu Ser

50 55 60

Pro Glu Gly Leu Leu Ile Ile Glu Ala Pro

65 70

<210>23

<211>76

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(76)

<223>HSPB5的α晶体蛋白结构域片段

<400>23

Lys Asp Arg Phe Ser Val Asn Leu Asp Val Lys His Phe Ser Pro Glu

1 5 10 15

Glu Leu Lys Val Lys Val Leu Gly Asp Val Ile Glu Val His Gly Lys

20 25 30

His Glu Glu Arg Gln Asp Glu His Gly Phe Ile Ser Arg Glu Phe His

35 40 45

Arg Lys Tyr Arg Ile Pro Ala Asp Val Asp Pro Leu Thr Ile Thr Ser

50 55 60

Ser Leu Ser Ser Asp Gly Val Leu Thr Val Asn Gly

65 70 75

<210>24

<211>79

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(79)

<223>HSPB9的α晶体蛋白结构域片段

<400>24

Arg Asp Gly Phe Gln Met Lys Leu Asp Ala His Gly Phe Ala Pro Glu

1 5 10 15

Glu Leu Val Val Gln Val Asp Gly Gln Trp Leu Met Val Thr Gly Gln

20 25 30

Gln Gln Leu Asp Val Arg Asp Pro Glu Arg Val Ser Tyr Arg Met Ser

35 40 45

Gln Lys Val His Arg Lys Met Leu Pro Ser Asn Leu Ser Pro Thr Ala

50 55 60

Met Thr Cys Cys Leu Thr Pro Ser Gly Gln Leu Trp Val Arg Gly

65 70 75

<210>25

<211>71

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(73)

<223>HSPB5的α晶体蛋白结构域片段

<400>25

Asn Leu Asp Val Lys His Phe Ser Pro Glu Glu Leu Lys Val Lys Val

1 5 10 15

Leu Gly Asp Val Ile Glu Val His Gly Lys His Glu Glu Arg Gln Asp

20 25 30

Glu His Gly Phe Ile Ser Arg Glu Phe His Arg Lys Tyr Arg Ile Pro

35 40 45

Ala Asp Val Asp Pro Leu Thr Ile Thr Ser Ser Leu Ser Ser Asp Gly

50 55 60

Val Leu Thr Val Asn Gly Pro

65 70

<210>26

<211>74

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC-FEATURE

<222>(1)..(73)

<223>HSPB10的α晶体蛋白结构域片段

<400>26

Ser Val Asn Val Cys Gly Phe Glu Pro Asp Gln Val Lys Val Arg Val

1 5 10 15

Lys Asp Gly Lys Val Cys Val Ser Ala Glu Arg Glu Asn Arg Tyr Asp

20 25 30

Cys Leu Gly Ser Lys Lys Tyr Ser Tyr Met Asn Ile Cys Lys Glu Phe

35 40 45

Ser Leu Pro Pro Cys Val Asp Glu Lys Asp Val Thr Tyr Ser Tyr Gly

50 55 60

Leu Gly Ser Cys Val Lys Ile Glu Ser Pro

65 70

Claims

1.一种生物可降解微粒，所述生物可降解微粒的直径为0.2-3.5微米，且含药学有效量的诱导巨噬细胞中IL-10产生的至少一种小热激蛋白，所述小热激蛋白包含与SEQ ID NO:1和12-26所列任何序列具有至少50%相同性的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的生物可降解微粒，其特征在于，所述至少一种小热激蛋白是具有选自SEQ ID NO:2-11的氨基酸序列的蛋白质，优选SEQ IDNO:2。

3.如权利要求1或2所述的生物可降解微粒，其特征在于，所述生物可降解微粒是生物可相容的。

4.如权利要求1-3中任一项所述的生物可降解微粒，其特征在于，所述微粒包含乳酸和/或乙醇酸的(共)聚合物，优选选自：己内酯、聚乳酸(PLA)、乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)或乳酸-羟甲基乙醇酸共聚物(PLHMGA)。

5.如权利要求1-4中任一项所述的生物可降解微粒，其特征在于，所述生物可降解微粒具有1-2微米的最大直径。

6.如权利要求1-5中任一项所述的生物可降解微粒，其特征在于，所述生物可降解微粒用于对象的医学治疗。

7.如权利要求6所述的生物可降解微粒，其特征在于，所述医学治疗针对炎性疾病。

8.如权利要求7所述的生物可降解微粒，其特征在于，所述炎性疾病是皮肤、粘膜、肺、神经系统、血管系统、胰腺或关节的急性或慢性炎症性病症，优选皮炎、牛皮癣、湿疹、克罗恩病、溃疡性结肠炎、牙周炎、扁平苔癣、硬化性苔癣、慢性阻塞性肺疾病、气肿、阿尔茨海默病、帕金森病、痴呆、视神经炎、脑炎、炎性周围神经病、动脉粥样硬化、血管炎、风湿性关节炎或糖尿病。

9.包含有效剂量的权利要求1-8中任一项所述微粒的药物组合物。

10.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中存在的微粒的至少百分之50、60、70、80或90是权利要求1-8中任一项所述的生物可降解微粒。

11.产生权利要求1-8中任一项所述生物可降解微粒的方法，所述方法包含步骤：

a.混合含权利要求1和2中任一项所定义的小热激蛋白的水溶液与溶于挥发性有机溶剂的己内酯、PLA、PLGA或PLHMGA溶液，以提供水/挥发性有机溶剂二相系统；

b.乳化所述水/挥发性有机溶剂二相系统以提供油包水乳液；

c.向含聚乙烯醇的水溶液中加入获自步骤b的所述油包水乳液，并乳化所得混合物以提供水包油包水乳液；

d.使挥发性有机溶剂从所述水包油包水乳液中蒸发，并在所述蒸发中形成生物可降解微粒。

12.一种治疗患有炎性疾病对象的方法，所述方法包括给予所述对象治疗有效量的权利要求1-8中任一项所述的生物可降解微粒或权利要求9或10所述的药物组合物。