CN103182073A - 一种重组人干扰素α-CTP融合蛋白的药物注射剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种重组人干扰素融合蛋白的药物注射剂，由水、重组人干扰素融合蛋白、缓冲剂、保护剂、表面活性剂组成。它不含人血白蛋白，其配方安全，合理，生产工艺简单，制备成具有长期储存稳定性的注射剂，无病毒污染及白蛋白过敏的潜在危险。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术制药领域的重组人干扰素α-CTP融合蛋白药物注射剂制备方法和用途。
背景技术
重组人干扰素α(rHuIFNα)已被广泛用于临床治疗多种人类病毒性疾病和肿瘤。但IFNα在体内半衰期较短从而导致IFNα在用药后数小时即从血浆中被清除。重组人干扰素α-CTP融合蛋白是通过基因工程技术构建高糖基化的干扰素，与市售的长效干扰素所采用的原理不同，并非采用聚乙二醇修饰，而是将干扰素α-2b增加了一段带有人绒膜促性腺激素β亚基的肽链，该肽链增加了糖化位点，从而大大提高干扰素α-2b的半衰期，且不改变干扰素α-2b固有的蛋白结构，并采用哺乳动物细胞表达系统进行表达，并通过CHO表达系统进行表达，使其分子量高于普通干扰素，并增加了O糖基化位点，使其在体内的清除速率降低，从而达到延长体内半衰期及改善体内生物活性的目的。
已知的基因工程重组蛋白质类药品制剂中，人血白蛋白是一种常见和有效的稳定剂（见专利US 4，703，008）。但由于人血白蛋白是血液制品，不可避免的存在着潜在的血源性污染问题（如传染爱滋病病毒、肝炎病毒等）。而且临床上药物说明书已经规定对人血白蛋白过敏者禁用。
为了解决这个问题，人们致力于开发一种不采用血液衍生成分就能稳定重组蛋白质的方法。干扰素-CTP融合蛋白是一种糖蛋白，分子量约为42KD。与普通干扰素相比具有延长半衰期，减少临床给药次数的效果，临床主要应用于病毒性疾病的治疗如乙型肝炎和丙型肝炎。
本发明中的重组人干扰素α-CTP融合蛋白是一种采用基因工程技术构建的哺乳动物细胞（CHO细胞）表达的重组蛋白，具有糖基化特点，重组人干扰素α-CTP融合蛋白易于脱糖降解和蛋白氨基酸序列易于断裂，本发明解决了重组人干扰素α-CTP融合蛋白贮存的稳定性问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的重组人干扰素α-CTP融合蛋白药物注射剂，其配方合理、安全、生产工艺简单，具有长期储存稳定性，而无潜在的血源性污染问题和人血白蛋白过敏的问题。
本发明提供一种主要用于治疗病毒性疾病[11] 的药物制剂，该制剂是注射剂，可以含有以下组分：（a）pH缓冲剂；（b）稳定量的表面活性剂；（c）稳定量的保护剂；（d）药用量的重组人干扰素α-CTP融合蛋白。
本发明pH缓冲剂选自磷酸盐和柠檬酸盐缓冲液，维持药物活性适宜的PH值，其浓度范围是5mM至80mM，pH范围是5至8。
本发明表面活性剂选自聚山梨酯80或聚山梨酯20，其浓度范围是0.001～0.01%（g/ml）。
本发明保护剂，选自蔗糖、海藻糖、精氨酸或它们的盐，其浓度范围是1mM至100mM。
本发明药用量的干扰素-CTP融合蛋白含量为10ug/ml～500ug/ml。
本发明重组人干扰素α-CTP融合蛋白药物冻干注射剂，在制备重组人干扰素α-CTP融合蛋白药物中的应用。
本发明的特点是提供了可生产一种不含人血白蛋白的可相溶的、具有长期贮存稳定性的重组人干扰素α-CTP融合蛋白药物注射剂，非离子型表面活性剂，聚山梨脂80作为稳定剂，广泛应用于蛋白质类药物处方中，本发明还具有制备方法简单、生产成本低、应用效果好等特点。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明进行更详细地说明，但本发明并不仅限于此。
实施例1
配制1000支100ug/ml的重组人干扰素α-CTP融合蛋白
配方组成：
| 重组人干扰素-CTP融合蛋白原液 | 100mg |
| 一水磷酸二氢钠 | 1．076g |
| 磷酸氢二钠 | 1．732g |
| 蔗糖 | 30g |
| 聚山梨酯80 | 0.05g |
| 注射用水 | 至1000ml |
准确称取磷酸二氢钠1.076g，磷酸氢二钠1.732g，聚山梨脂80为0.05g，蔗糖30g，用800ml注射用水溶解后测定PH为6.0-7.0，保持溶液温度为25℃以下，在混合液中加入重组人干扰素α-CTP融合蛋白原液，用注射用水定容至1000ml。搅拌均匀。精过滤到灭菌的容器中。无菌分装于药用玻璃容器中，每瓶加入1ml，经过冷冻干燥，最后加塞轧盖制成。
实施例2
配制1000支400ug/ml的注射用重组人干扰素α-CTP融合蛋白
配方组成：
| 重组人干扰素α-CTP融合蛋白原液 | 400mg |
| 二水柠檬酸钠 | 5.8g |
| 柠檬酸 | 0.06g |
| 海藻糖 | 80g |
| 聚山梨酯80 | 0.05g |
| 注射用水 | 至1000ml |
准确称取二水柠檬酸钠5.8g，柠檬酸0.06g，聚山梨脂80g为0.05g，海藻糖80g，用800ml注射用水溶解后测定PH为6.0-7.0，保持溶液温度为25℃以下，在混合液中加入重组人干扰素α-CTP融合蛋白原液，用注射用水定容至1000ml。搅拌均匀。精过滤到灭菌的容器中。无菌分装于药用玻璃容器中，每瓶加入1ml，冻干后加塞压盖。
实施例3
配制1000支800ug/ml的注射用重组人干扰素α-CTP融合蛋白
配方组成：
| 重组人干扰素α-CTP融合蛋白原液 | 800mg |
| 二水柠檬酸钠 | 5.8g |
| 柠檬酸 | 0.06g |
| 海藻糖 | 80g |
| 聚山梨酯80 | 0.05g |
| 注射用水 | 至1000ml |
准确称取二水柠檬酸钠5.8g，柠檬酸0.06g，聚山梨脂80g为0.05g，海藻糖80g，用800ml注射用水溶解后测定PH为6.0-7.0，保持溶液温度为25℃以下，在混合液中加入重组人干扰素α-CTP融合蛋白原液，用注射用水定容至1000ml。搅拌均匀。精过滤到灭菌的容器中。无菌分装支药用玻璃容器中，每瓶加入1ml，冻干后加塞压盖。
实施例4 人血白蛋白制剂制备含有0.25mg/ml的人血白蛋白
| 重组人干扰素α-CTP融合蛋白原液 | 60mg |
| 二水柠檬酸钠 | 5.8g |
| 柠檬酸 | 0.06g |
| 甘露醇 | 40g |
| 白蛋白 | 2.6g |
| 注射用水 | 至1000ml |
准确称取二水柠檬酸钠5.8g，柠檬酸0.06g，白蛋白2.6g，甘露醇40g，用800ml注射用水溶解后测定PH为6.0-7.0，保持溶液温度为25℃以下，在混合液中加入重组人干扰素α-CTP融合蛋白原液，用注射用水定容至1000ml。搅拌均匀。精过滤到灭菌的容器中。无菌分装支药用玻璃容器中，每瓶加入1ml，冷冻干燥，最后加塞轧盖制成。
以上实施例的所有冷冻干燥曲线如下：
冷冻干燥后充氮气，真空压塞，锁盖即可。
实施例6药物稳定性考察
为了测定贮存的稳定性，进行制剂贮存对照试验，以实施例4制剂为对照组与实施例1、2、3制剂比较。分别放置于25℃和4℃，考察期为6个月和24个月，定期检测PH、体内活性、体外活性、纯度。结果显示25℃考察6个月和4℃考察24个月各项指标均合格，与对照组无明显差异。
25℃加速稳定性考察活性结果比较
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | |
| 0月 | 100% | 101% | 102% | 99% |
| 1月 | 102% | 104% | 99% | 103% |
| 2月 | 100% | 99% | 103% | 101% |
| 3月 | 101% | 105% | 103% | 104% |
| 6月 | 100% | 101% | 99% | 102% |
4℃加速稳定性考察活性结果比较
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | |
| 0月 | 100% | 101% | 102% | 99% |
| 3月 | 98% | 98% | 99% | 98% |
| 6月 | 99% | 101% | 96% | 99% |
| 9月 | 102% | 100% | 97% | 101% |
| 12月 | 101% | 99% | 100% | 98% |
| 18月 | 98% | 98% | 97% | 99% |
| 24月 | 101% | 99% | 98% | 101% |
结果显示：应用本发明提供的方法，生产的不含人血白蛋白的重组人干扰素-CTP融合蛋白注射剂在4℃保存2年活性可保持稳定。
Claims (6)
1. 一种重组人干扰素α-CTP融合蛋白药物注射剂，其特征在于其组成成分包括：
（a）pH缓冲剂，选自磷酸盐和柠檬酸盐缓冲液，其浓度范围是5mM至80mM，pH范围是5至8，优选磷酸盐缓冲液，pH范围优选6.5-7.5；（b）稳定量的表面活性剂，选自聚山梨酯80或聚山梨酯20，其浓度范围是0.001～0.01%（g/ml）；（c）保护剂，选自海藻糖、蔗糖、精氨酸或它们的盐，其浓度范围是1mM至100mM，优选精氨酸盐酸盐；（d）药用量的重组人干扰素α-CTP融合蛋白。
2.权利要求1的制剂，其特征在于含有重组人干扰素α-CTP融合蛋白，其含量为10ug/ml～1000ug/ml。
3.权利要求1的制剂的制备方法，其特征在于：将水、重组人干扰素α-CTP融合蛋白、缓冲剂、保护剂、表面活性剂和作为等渗调节剂的氯化钠混合。
4. 权利要求1的制剂的制备方法，其中所述冷冻干燥包括以下步骤的冷冻循环
其中关键是步骤2的温度及其保温时间。
5.根据权利要求1所述的制剂是注射剂。
6.根据权利要求1所述的药物注射剂在制备重组人干扰素α-CTP融合蛋白药物中用途。
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|---|---|---|---|---|
| CN105879018A (zh) * | 2015-01-26 | 2016-08-24 | 辽宁诺康生物制药有限责任公司 | 一种丝氨酸蛋白酶抑制剂的注射剂 |
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| CN1422870A (zh) * | 2001-12-03 | 2003-06-11 | 第一制糖株式会社 | 具有增强的体内红细胞生成素活性的融合蛋白 |
| CN101002735A (zh) * | 2007-01-24 | 2007-07-25 | 上海华新生物高技术有限公司 | 一种室温保存重组白介素－2冻干制剂及其制备方法 |
| US8048849B2 (en) * | 2006-02-03 | 2011-11-01 | Modigene, Inc. | Long-acting polypeptides and methods of producing same |
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2011
- 2011-12-29 CN CN2011104487906A patent/CN103182073A/zh active Pending
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