CN103172627A

CN103172627A - 杂环嘧啶苯或吡啶苯类化合物及其应用

Info

Publication number: CN103172627A
Application number: CN2011104406519A
Authority: CN
Inventors: 蒋晟; 张峰; 姚志艺; 高建兴
Original assignee: NANJING YOKO BIO-MEDICAL RESEARCH Co Ltd; NANJING YOKO PHARMACEUTICAL CO Ltd; NANJING YOKO BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: Nanjing Uniclever Biological Pharmaceutical Ltd By Share Ltd; Nanjing Yoko Biological Pharmaceutical Group Co ltd; Nanjing Yoko Biomedical R & D Ltd; NANJING YOKO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2011-12-26
Filing date: 2011-12-26
Publication date: 2013-06-26
Anticipated expiration: 2031-12-26
Also published as: CN103172627B

Abstract

本发明公开了一种杂环嘧啶苯或吡啶苯类化合物及其应用。本发明公开了一类具有通式I所示的化合物的合成方法及其药学上可接受的酸或盐或立体异构体，该化合物及其药学上可接受的盐或立体异构体在治疗或预防肿瘤的药物中的应用，式中各基团定义详见说明书。该化合物不但优于Gleevec，并且可以有效克服Gleevec的耐药问题。

Description

杂环嘧啶苯或吡啶苯类化合物及其应用

技术领域

本发明属于化学医药领域，具体地涉及一类杂环嘧啶苯或吡啶苯类化合物以及这些化合物在制备预防或治疗与酪氨酸激酶调节异常有关的哺乳动物疾病药物中的应用。

背景技术

癌症是威胁人类健康的重大疾病，发病率及死亡率居高不下；总死亡人数更是呈逐年上升的趋势，成为人类健康的最大杀手。在我国部分恶性肿瘤(如肺癌、肝癌、直肠癌和白血病)因其难早发现、早诊断和早治疗已经成为严重危害人们生活幸福和影响居民健康指数的最重要因素之一。就目前癌症的治疗现状来说，总体治疗效果差，开发有针对性的靶向治疗药物是我们面临的迫切需要解决的科研难题。近年来，虽有一些新型的酪氨酸蛋白抑制剂等靶向新药的开发上市，但远不能满足日益增长的需求。

人体内的520多种蛋白激酶中大约有一半是蛋白酪氨酸激酶(PTKs)。蛋白酪氨酸激酶在细胞内的信号传导通路中占据了十分重要的地位，调节着细胞体内生长，分化，死亡等一系列生理化过程。蛋白酪氨酸激酶功能失调会引发生物体内的一系列疾病。研究表明，半数以上的原癌基因和癌基因的激活都与蛋白酪氨酸激酶相关。蛋白酪氨酸激酶的异常表达可导致细胞增殖调节发生紊乱，进而导致肿瘤发生。此外，蛋白酪氨酸激酶的异常表达还与肿瘤的转移，肿瘤新血管的生成，肿瘤的化疗抗药性密切相关。以蛋白酪氨酸激酶为靶点进行抗肿瘤药物研发成为国际上的一个热点。

蛋白酪氨酸激酶小分子抑制剂在临床肿瘤的治疗中获得的巨大成功进一步证实了蛋白酪氨酸激酶是关键性的治疗靶点，同时也说明其在肿瘤发生中的重要性。到目前为止，已有数十种蛋白酪氨酸激酶小分子抑制剂和抗体进入临床试验。有的已经上市并取得较好的疗效。如Bcr-ABL的抑制剂Gleevec用于治疗慢性粒细胞性白血病(CML)及胃肠间质瘤；EGFR的抑制剂Iressa和Tarceva等。其中Gleevec的成功是治疗癌症的里程碑。

2001年美国FDA批准的用以治疗慢性粒细胞性白血病(CML)的第一个靶向治疗药物Gleevec。它是蛋白酪氨酸激酶小分子抑制剂主要作用于Bcr-Abl，cKit，PDGFR等。临床上Gleevec单药治疗可使98％的CML病人获得临床血液学的缓解，53％获得细胞遗传学缓解。

然而，随着Gleevec在临床上的广泛应用，耐药问题也日益突出。部分病人对其天然耐受，而另一部分病人在用药治疗过程中逐渐出现获得性耐受。临床上，急变期的CML，Bcr-Abl阳性的ALL病人对Gleevec的耐受较普遍，大约70％的这两类病人在用药3-6个月出现耐受。获得性耐受是肿瘤细胞为选择杀伤的一种防卫，其机制有多种，包括：(1)靶基因(Bcr-Abl，c-Kit，PDGFR)扩增；(2)靶基因突变；(3)靶基因非依赖性肿瘤克隆的形成等。目前公认的耐受机制是靶基因表达产物激酶域的继发性突变。带有这些突变的患者容易复发，预后不好。

如何克服Gleevec的耐药性是当今肿瘤医学的重要课题。寻找新型的酪氨酸激酶小分子抑制剂是克服Gleevec的耐药的重要途径。最近上市的酪氨酸激酶小分子抑制剂尼罗替尼和达沙替尼对部分Gleevec耐药病例有效。达沙替尼可以同时结合和抑制未活化和已活化的Bcr-Abl。达沙替尼对15种点突变细胞有明现的抑制作用。因此需要一种新的低毒高效的酪氨酸激酶小分子抑制剂在肿瘤治疗方面显得十分必要和迫切，本发明因此而来。

发明内容

本发明提供一种新的杂环嘧啶苯或吡啶苯类的酪氨酸激酶抑制剂，用以解决现有药物疗效不高易耐受的缺陷等问题。本发明还提供该类的的酪氨酸激酶的制备方法，以及药物用途。

首先，本发明提供了具有通式I所示的化学结构的杂环嘧啶苯或吡啶苯类化合物，及其药物上可接受的盐、异构体、外消旋体、前体药物或溶剂合物：

其中，X任选为S，O，CH或N；Z任选为CH或N；L₁任选为-CONH或-NHCO-；L₂任选为NH或-N＝；

R₁基团为氢、卤素、C₁-C₅烷基、C₁-C₅烷氧基、C₃-C₆环烷基或C₁-C₅含氟烷基；

R₂基团为氢，卤素，C₁-C₅烷基、C₁-C₅烷氧基、C₃-C₆环烷基或C₁-C₅含氟烷基；

R₃基团为氢，卤素，C₁-C₅烷基、C₁-C₅烷氧基、C₃-C₆环烷基或C₁-C₅含氟烷基；

R₄基团为氢，卤素，C₁-C₄烷基、C₃-C₆环烷基或C₁-C₅含氟烷基；

R₆基团为氢，R₅为氢，(CH₂)nNR₇R₈，(CH₂)n-Het；其中，n为0或1，Het为含有1-3个N的非芳香杂环，所述非芳香杂环任一C原子或N原子能够被取代的位置可以被烷基，环烷基，或NR₇R₈取代；R₇，R₈选自：氢，C₁-C₃烷基、C₃-C₆环烷基；C₁-C₃含氟烷基；或R₇和R₈通过C，O，N或S原子形成五元、六元、七元或八元环状结构。

进一步地，上述结构中，X为S，Z为N，L₁为-NHCO-，L₂任选为NH，

R₁基团为氢，卤素，C₁-C₅烷基、C₁-C₅烷氧基、C₃-C₆环烷基或C₁-C₅含氟烷基；

R₃基团为氢，卤素，C₁-C₅烷基、C₁-C₅烷氧基、C₃-C₆环烷基或C₁-C₅含氟烷基。

进一步地，上述结构中的B环优选为以下结构之一：

进一步地，上述结构中的C环优选为以下结构之一：

进一步地，上述结构中的D环优选为以下结构之一：

其中，R₄基团为氢，卤素，C₁-C₄烷基、C₃-C₆环烷基；C₁-C₅含氟烷基；Het₁为含有1-3个N的非芳香杂环，所述非芳香杂环任一C原子或N原子能够被取代的位置可以被烷基，环烷基，或NR₇R₈取代；

R₇，R₈选自：氢，C₁-C₃烷基、C₃-C₆环烷基；C₁-C₃含氟烷基；或R₇和R₈通过C，O，N，S原子形成五元，六元，七元或八元环状结构。

更进一步地，所述化合物优选为以下之一：

其中，R₁～R₆、L₁、L₂的定义同上。

更进一步优选地，所述的化合物具有下述的结构：

本发明还提供上述的化合物在制备预防或者治疗与酪氨酸激酶调节异常有关的哺乳动物疾病药物中的应用。

进一步地，与酪氨酸激酶调节异常有关的哺乳动物疾病包括癌症、神经变性疾病、疟疾或糖尿病。

更进一步地，与酪氨酸激酶调节异常有关的哺乳动物疾病包括淋巴瘤、肺癌、胃肠间质癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、白血病，肺癌，肝癌或宫颈癌。

本发明涉及的化合物及其药学上可接受的盐，可以有效抑制多种肿瘤细胞的生长，并对Bcr-Abl，cKit，PDGFR等蛋白酶产生抑制作用，可用于制备抗肿瘤药物。并可以克服现有的药物(Gleevec)诱发的耐药。

服用方式与剂量范围：

根据标准药学技术，本发明化合物可单独偶或在药用组合物中与药学可接受的受体，辅料或稀释剂组合给以动物，优选人。可口服或皮下，肌注，腹膜内，静脉，直肠及局部，眼睛，肺部，鼻腔，胃肠外给以予化合物。

在一个实施方案中，利用式(I)化合物治疗或控制癌症等患者时，服用剂量范围为在口服0.1-500毫克/天/公斤体重。适当的给药或每日两次，三餐次，等多次给药或利用缓释技术给药。对于大型哺乳动物动物其优选的剂量范围为0.1-1500毫克/天/公斤体重，优选于0.5-100毫克/天/公斤体重.对于平均体重为70公斤的病人其每日剂量为0.1-500毫克。

本领域的普通技术人员应当知道下列术语或缩写的含义。

术语“药物上可接受的盐”是指在合理医学判断范围内适用于与哺乳动物特别是人的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应等并与合理的效益/风险比相称的盐，比如胺、羧酸和其它类型化合物的医学上可接受的盐在所属领域中是被熟知的。

术语“异构体”是指分子组成相同、但结构和性质不同的两种或多种化合物。

术语“外消旋体”是指一种具有旋光性的手性分子与其对映体的等摩尔混合物，它由旋光方向相反、旋光能力相同的分子等量混合而成，其旋光性因这些分子间的作用而相互抵消，因而是不旋光的。

术语“溶剂合物”是指化合物与溶剂组成的混合物，例如结晶体即是一种溶剂合物。

术语“前体药物”指通过在血液中水解而活体内快速转化产生具有上述化学式的母体化合物的化合物。

具体实施方式

为了更好的说明本发明的技术内容，下面结合具体实例对本发明作进一步阐述。

应当说明的是，下述实施例中，常规后处理方法是：反应完成后，在反应液中加入适量的水，分离有机相和水相，合并有机相；如有需要，依次使用5％HCl溶液和/或饱和NaSO₄干燥，过滤之后减压选干，得到粗产物，再经过柱层析分离纯化之后得到最终产物。

如方案A所示(I)中化合物可以由Boc保护的5-胺基-2-噻唑甲酸为起始原料通过5步反应合成。

实施例1

0℃条件下，向Boc保护的5-胺基-2-噻唑甲酸(9.76g，0.04mmol)的DMF(2mL)溶液中，缓慢滴加草酰氯(5.1mL，0.06mol)的THF(20ml)溶液，滴定完全后，室温下反应6小时。然后，冷却至0℃，滴加2-氯-6-甲基苯胺(6.8g，0.05mmol)和三乙胺(11.1ml，0.08mol)的THF(20ml)溶液。滴完撤去冰浴，室温下反应8小时。减压蒸去溶剂，剩余类白色固体中加入水(100ml)，室温搅拌30min。过滤，滤饼用水洗，干燥后得到白色固体品5.7g，产率80％。Mp 254-256℃.

实施例2

原料(10g，0.027mmol)，三氟乙酸(30ml)和二氯甲烷(30ml)置于室温下搅拌2h，，旋干溶剂，冰浴下滴加氢氧化钠溶液(1mol/L，40ml)调PH值为14，析出白色固体。过滤，滤饼用水洗，干燥后得到白色固体品7.2g，产率100％。Mp 205-207℃.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ2.21(s，3H)，7.22-7.27(m，2H)，7.37(d，J＝7.4Hz，1H)，7.61(s，2H)，7.87(s，1H)，9.64(s，1H)ppm.MS(EI，m/z)：268(M⁺+1).

实施例3

原料(6.3g，2mmol)，氢化钠(2.5g，10mmol)溶于100mL THF中配成溶液。在50℃下搅拌1h，然后，冷却至0℃，滴加4，6-二氯-2-甲基嘧啶(7g，2mmol)。滴完后，回流4h。冰浴下滴加盐酸(2mol/L，40ml)调PH值为6，析出白色固体。过滤，滤饼用水洗，干燥后得到黄色固体品8.92g，产率86％。Mp＞300℃.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ2.23(s，3H)，2.60(s，3H)，6.95(s，1H)，7.23-7.31(m，2H)，7.42(d，J＝7.4Hz，1H)，8.23(s，1H)，10.03(s，1H)，12.25(s，1H)ppm.MS(EI，m/z)：394(M⁺+1).

实施例4

原料(118mg，0.3mmol)，4-(4-甲基哌嗪-1-取代)甲基-3-三氟甲基苯胺，醋酸钯(6.7mg，0.03mmol)1，10-Phen(10.8mg，0.06mmol)和t-BuOK(84.17mg，0.75mmol)溶于1，4二氧六环(2mL)中。120℃下反应48小时。然后加入二氯甲烷20mL。有机相依次用水，饱和食盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，硅胶柱层析得到白色固体100mg，产率40％。¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ10.01(s，1H)，8.32(s，1H)，7.40(dd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，7.30-7.24(m，3H)，6.94(s，1H)，6.84(d，J＝2.4Hz，1H)，6.74(dd，1H，J＝2.0，8.4Hz，1H)，3.38(s，2H)，2.58(S，3H)，2.50(s，3H)，2.47(m，8H)，2.14(s，3H).MS(EI，m/z)：631(M⁺+1).

实施例5

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ10.00(s，1H)，8.30(s，1H)，7.38(dd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，7.28-7.23(m，3H)，6.92(s，1H)，6.82(d，J＝2.6Hz，1H)，6.72(dd，1H，J＝2.2，8.4Hz，1H)，3.36(s，2H)，2.55(s，3H)，2.48(s，3H)，2.45-2.40(m，8H)，2.12(s，3H).MS(EI，m/z)：615(M⁺+1).

实施例6

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ10.08(s，1H)，8.33(s，1H)，7.41(dd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，7.31-7.25(m，3H)，6.95(s，1H)，6.85(d，J＝2.6Hz，1H)，6.75(dd，1H，J＝2.2，8.4Hz，1H)，3.39(s，2H)，2.60(S，3H)，2.55(s，3H)，2.47-2.40(m，8H)，2.15(s，3H).MS(EI，m/z)：675(M⁺+1).

实施例7

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.92(s，1H)，8.23(s，1H)，7.41-6.75(m，6H)，6.90(s，1H)，3.37(s，2H)，2.57(s，6H)，2.52(s，3H)，2.47-2.40(m，8H)，2.15(s，3H).MS(EI，m/z)：611(M⁺+1).

实施例8

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.96(s，1H)，8.26(s，1H)，7.41-6.70(m，7H)，6.92(s，1H)，3.35(s，2H)，2.58(s，3H)，2.50(s，3H)，2.47-2.40(m，8H)，2.15(s，3H).MS(EI，m/z)：596(M⁺+1).

实施例9

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.90(s，1H)，8.25(s，1H)，7.51-6.70(m，7H)，6.90(s，1H)，3.33(s，2H)，2.59(s，3H)，2.53(s，3H)，2.47-2.40(m，8H)，2.14(s，3H).MS(EI，m/z)：596(M⁺+1).

实施例10

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ10.06(s，1H)，8.27(s，1H)，7.46-6.72(m，6H)，6.96(s，1H)，3.36(s，2H)，2.58(s，3H)，2.55(s，3H)，2.47-2.40(m，8H)，2.15(s，3H).MS(EI，m/z)：631(M⁺+1).

实施例11

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ10.02(s，1H)，8.33(s，1H)，7.41(dd，J＝1.2，7.2Hz，1H).7.30-7.24(m，3H)，6.95(s，1H)，6.85(d，J＝2.4Hz，1H)，6.76(dd，1H，J＝2.0，8.4Hz，1H)，3.39(s.2H)，2.60(S，3H)，2.53(m，8H)，2.15(s，3H).MS(EI，m/z)：666(M⁺+1).

实施例12

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ10.00(s，1H)，8.31(s，1H)，7.39(dd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，7.30-7.24(m，3H)，6.95(s，1H)，6.83(d，J＝2.4Hz，1H)，6.76(dd，1H，J＝2.0，8.4Hz，1H)，3.39(s，2H)，2.60(S，3H)，2.55(s，3H)，2.50-2.46(m，5H)，2.30(s，6H).MS(EI，m/z)：645(M⁺+1).

实施例13

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ10.00(s，1H)，8.31(s，1H)，7.60-6.70(m，8H)，6.96(s，1H)，6.90(s，1H)，3.39(s，2H)，2.55(s，3H)，2.50(m，8H)，2.30(s，3H).MS(EI，m/z)：581(M⁺+1).

实施例14

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ10.03(s，1H)，8.31(s，1H)，7.38(dd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，7.30-7.24(m，3H)，6.95(s，1H)，6.93(s，1H)，6.82(d，J＝2.4Hz，1H)，6.73(dd，1H，J＝2.0，8.4Hz，1H)，3.38(s，2H)，2.60(S，3H)，2.55(s，3H)，2.50-2.46(m，8H)，2.30(s，3H).MS(EI，m/z)：630(M⁺+1).

实施例15

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ10.03(s，1H)，8.31(s，1H)，7.40(dd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，7.35-7.28(m，3H)，6.96(s，1H)，6.94(s，1H)，6.83(d，J＝2.4Hz，1H)，6.73(dd，1H，J＝2.0，8.4Hz，1H)，3.39(s，2H)，2.62(S，3H)，2.58(s，3H)，2.52-2.46(m，8H)，2.30(s，3H).MS(EI，m/z)：684(M⁺+1).

实施例16

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ10.02(s，1H)，8.32(s，1H)，7.39(dd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，7.31-7.26(m，3H)，6.96(s，1H)，6.92(s，1H)，6.83(d，J＝2.4Hz，1H)，6.75(dd，1H，J＝2.0，8.4Hz，1H)，3.39(s，2H)，2.61(S，3H)，2.56(s，3H)，2.51-2.47(m，8H)，2.31(s，3H).MS(EI，m/z)：613(M⁺+1).

实施例17

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.56(s，1H)，7.32(s，1H)，7.39-6.75(m，，7H)，6.96(s，1H)，3.36(s，2H)，2.56(s，3H)，2.51-2.47(m，8H)，2.31(s，3H).MS(EI，m/z)：567(M⁺+1).

实施例18

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.62(s，1H)，7.37(s，1H)，7.41-6.87(m，，6H)，6.98(s，1H)，3.39(s，2H)，2.61(S，3H)，2.56(s，3H)，2.51-2.47(m，8H)，2.31(s，3H).MS(EI，m/z)：615(M⁺+1).

实施例19

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.62(s，1H)，7.37(s，1H)，7.43-6.92(m，，6H)，6.98(s，1H)，3.39(s，2H)，2.56(s，3H)，2.51-2.47(m，8H)，2.31(s，3H).MS(EI，m/z)：669(M⁺+1).

实施例20

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.62(s，1H)，7.37(s，1H)，7.43-6.92(m，，6H)，6.98(s，1H)，3.39(s，2H)，2.61(S，3H)，2.56(s，3H)，2.51-2.47(m，8H)，2.31(s，3H).MS(EI，m/z)：599(M⁺+1).

实施例21

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.65(s，1H)，7.40(s，1H)，7.45-6.92(m，，6H)，6.99(s，1H)，3.39(s，2H)，2.63(S，3H)，2.58(s，3H)，2.51-2.47(m，8H)，2.31(s，3H).MS(EI，m/z)：659(M⁺+1).

实施例22

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.60(s，1H)，7.50(s，1H)，7.45-6.92(m，，6H)，6.99(s，1H)，6.93(s，1H)，3.39(s，2H)，2.58(s，3H)，2.51-2.47(m，8H)，2.31(s，3H).MS(EI，m/z)：668(M⁺+1).

实施例23

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.67(s，1H)，7.45(s，1H)，7.45-6.92(m，，6H)，6.97(s，1H)，6.92(s，1H)，3.37(s，2H)，2.56(s，3H)，2.51-2.47(m，8H)，2.30(s，3H).MS(EI，m/z)：658(M⁺+1).

实施例24

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.67(s，1H)，7.45(s，1H)，7.45-6.92(m，，6H)，6.97(s，1H)，6.92(s，1H)，3.37(s，2H)，2.56(s，3H)，2.51-2.47(m，8H)，2.30(s，3H).MS(EI，m/z)：614(M⁺+1).

实施例25

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.80(s，1H)，7.50(s，1H)，7.48-6.95(m，，6H)，6.96(s，1H)，6.93(s，1H)，3.35(s，2H)，2.58(s，3H)，2.52-2.47(m，8H)，2.32(s，3H).MS(EI，m/z)：598(M⁺+1).

实施例26

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.90(s，1H)，7.49(s，1H)，7.48-6.95(m，，6H)，6.99(s，1H)，3.39(s，2H)，2.58(s，3H)，2.53-2.49(m，8H)，2.31(s，3H).MS(EI，m/z)：658(M⁺+1).

实施例27

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.96(s，1H)，7.50(s，1H)，7.49-6.96(m，，6H)，6.98(s，1H)，3.40(s，2H)，2.57(s，3H)，2.53-2.48(m，8H)，2.32(s，3H).MS(EI，m/z)：668(M⁺+1).

实施例28

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.92(s，1H)，7.51(s，1H)，7.49-6.93(m，，6H)，6.96(s，1H)，3.38(s，2H)，2.58(s，3H)，2.53-2.48(m，8H)，2.31(s，3H).MS(EI，m/z)：615(M⁺+1).

实施例29

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.92(s，1H)，7.51(s，1H)，7.49-6.93(m，，6H)，6.99(s，1H)，3.38(s，2H)，2.58(s，3H)，2.53-2.48(m，8H)，2.31(s，3H).MS(EI，m/z)：598(M⁺+1).

实施例30

合成方法如实施例4

¹HNMR：(400MHz，DMSO-d6)：δ9.88(s，1H)，7.50(s，1H)，7.49-6.94(m，，6H)，6.97(s，1H)，6.90(s，1H)，3.38(s，2H)，2.58(s，3H)，2.53-2.48(m，8H)，2.31(s，3H).MS(EI，m/z)：613(M⁺+1).

实施例31 BCR-Abl及其变异株的生化活性的测定

1.具体步骤：BCR-Abl的底物用反应缓冲液稀释至200M(反应浓度为20M)，将BCR-Abl酶稀释至适当浓度，加入不同浓度待测化合物，37℃反应30分钟，然后加入相同体积的2倍浓度底物发展液(developer)，室温孵育15分钟，最后用微孔板读板仪测定读数，激发光为360nm，发射光为460nm，数据用Prime 4软件处理。

2.检测结果与分析：

上表中IC₅₀是指被抑制一半时抑制剂的浓度(50％inhibitory concentration)。

从上表中结果可以看出：上述的化合物与阳性对照(Geelvec)相比，具有显著的抑制BCR-Abl酶及其变异株的活性。

实施例32检测化合物对癌细胞活性实验

1.实验原理：化合物抑制癌细胞生长用MTT方法来检测。MTT法的原理是，黄色的噻唑兰可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的针状Formazan结晶并沉积在细胞中，结晶能被二甲基亚砜(DMSO)溶解，用酶联免疫检测仪在490nm/570nm波长处检测其光吸收值，可间接反映细胞数量。

2.实验材料：所使用的癌细胞系为A549(人肺癌细胞)，A431(人表皮鳞状细胞癌细胞)，DU145(人前列腺癌细胞)，K562(人白血病细胞)，U937(人白血病细胞)，Pac-1(人胰腺癌细胞)，MOLT-4(人急性淋巴母细胞白血病细胞)；分别用DMEM+10％FBS培养基培养或者使用1640+10％FBS培养。

3.实验方法与结果分析：

实验组：190μl细胞悬液+10μl不同浓度的药物(终浓度为10^-5～10^-10M)

空白对照组：200μl PBS

阴性对照组：190μl细胞悬液+10μl 2％DMSO(DMSO终浓度为0.1％)

阳性对照组：190μl细胞悬液+10μl不同浓度的化合物

a).细胞接种于96孔板，接种量为1500个/孔，190μl/孔，37℃5％的CO₂培养箱培养过夜；

b).次日每孔加入10μl不同药物，药物终浓度为10^-5～10^-10M，设三个平行孔；37℃、5％的CO₂培养箱孵育72小时；

c).每孔加入20μl 5mg/ml的MTT，37℃5％的CO₂培养箱孵育4小时；

d).弃上清，每孔加入100μl的DMSO，振荡；

e).570nm读数，计算细胞存活率，根据结果计算GI₅₀，得下表。

上表中GI₅₀表示的是细胞50％生长抑制所需的药物浓度(50％growth inhibition)。

从上表中结果可以看出：上述的药物与阳性对照(Geelvec)相比，具有显著的抑制所列肿瘤细胞生长的活性。

应当说明的是，上述的实施例仅用于说明而不是限制本发明的技术方案，任何等同的替换或更改，均应当视为包含在本发明的范围之内。