CN103156886A - 脆弱拟杆菌在制备治疗细菌性阴道炎组合物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及脆弱拟杆菌的应用技术领域，具体涉及脆弱拟杆菌在制备治疗细菌性阴道炎组合物中的应用，实验证明脆弱拟杆菌安全无毒，药理作用强，对于细菌性阴道炎有很好治疗效果、成本低，从而预示了脆弱拟杆菌具有很好的食用和药用前景。本发明发掘了脆弱拟杆菌新的用途，开拓了一个新的应用领域，脆弱拟杆菌作为一种益生菌，可用于制备治疗细菌性阴道炎的食品或药物组合物。
Description
技术领域
本发明涉及脆弱拟杆菌的应用技术领域，具体涉及脆弱拟杆菌在制备治疗细菌性阴道炎组合物中的应用。
背景技术
细菌性阴道炎也称细菌性阴道病，细菌性阴道炎是阴道内正常菌群失调所致的一种混合感染，是阴道内有大量的细菌、伴有阴道分泌物性质改变的一组症候群，而临床及病理特征无炎症改变。其大多发生在性活跃期妇女，是广大妇女的常见病、多发病。
在正常生理情况下，人体阴道内存在各种厌氧及需氧菌， 其中90%为乳杆菌。乳杆菌可将糖原分解为乳酸，而其产生的过氧化氢更有一定的分解作用，能抑制阴道内其他致病性杂菌的生长，帮助形成良好的阴道内环境。因此，当各种内外因素导致阴道黏膜损伤，偏碱性的精液、不适当冲洗阴道等破坏了阴道的酸碱平衡，使正常的乳杆菌生长受抑，其他致病菌大量繁殖，引起阴道内菌群失调，继而引发阴道病。所以临床上将补充乳酸杆菌作为治疗方法之一，国外使用乳酸杆菌疗法，主要用于阴道冲洗和制成栓剂置于阴道内。
脆弱拟杆菌（Bacteroides fragilis）作为一种革兰氏染色阴性、杆状、两端钝圆而浓染，有荚膜、无芽胞、无动力的专性厌氧细菌，分产肠毒素型和非产肠毒素型。脆弱拟杆菌作为人及动物肠道正常菌群的一部分，主要存于结肠中，此外，呼吸道、胃肠道及泌尿生殖道粘膜也可定植生长。目前研究较多的是脆弱拟杆菌作为一种条件致病菌，当宿主粘膜受损时，可侵犯粘膜下层，引起感染，也可经血液流动，引起身体其它器官如肠道、腹腔、肝、肺、脑组织化脓性感染并伴发脓肿和引起急慢性腹泻等。此外，其对结肠、直肠癌的发生也有促进作用。
然而，脆弱拟杆菌并非只是一种条件致病菌。1991年张季阶发表了《一种无毒脆弱拟杆菌的分离鉴定》，报导了关于1983年9月从一个发育良好的婴儿粪便中分离出量大而又较纯的细菌，经以系列的鉴定、基础试验和临床应用观察，属于脆弱拟杆菌群中的一株无毒菌，是人体的益生菌，定名为BF839菌株。由此，研究发现了，脆弱拟杆菌也是一种益生菌。但是，脆弱拟杆菌作为一种益生菌，并且在制备治疗细菌性阴道炎组合物的相关应用，目前尚未有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供脆弱拟杆菌在制备治疗细菌性阴道炎组合物中的应用。
为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：
提供脆弱拟杆菌在制备治疗细菌性阴道炎组合物中的应用，所述的脆弱拟杆菌保藏单位名称为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2013年3月12日，保藏编号为CGMCC No.7280，分类命名为Bacteroides fragilis。
其中，所述组合物为至少含有能治疗细菌性阴道炎的脆弱拟杆菌的食品或药物组合物。
其中，所述组合物选自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌、奶基发酵食品、发酵谷类食品中的任意一种。
其中，所述组合物为丸剂、片剂、颗粒制剂、胶囊、口服液或者管饲制剂。
其中，所述组合物为含有所述脆弱拟杆菌的液体细菌悬浮液。
其中，所述脆弱拟杆菌在所述组合物中的含量为108~1010cfu /ml。
本发明的有益效果是：
本发明发掘了脆弱拟杆菌新的用途，开拓了一个新的应用领域。本发明通过实验证明，脆弱拟杆菌安全无毒，药理作用强，对于细菌性阴道炎有很好治疗效果、成本低，从而预示了脆弱拟杆菌具有很好的食用和药用前景。脆弱拟杆菌作为一种益生菌，可用于制备治疗细菌性阴道炎的食品或药物组合物。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例1 脆弱拟杆菌CGMCC No.7280菌液的制备
（1）由婴儿粪便中分离脆弱拟杆菌CGMCC No.7280
按“正常菌群检查法”称取0.5克大便，置于先装有4.5ml生理盐水的试管中，以此连续稀释成10-1~10-6，由高稀积度向低稀积度滴到Bd培养基平板上，置于厌氧产气盒中加厌氧产气袋进行厌氧培养。置37℃，2~7天后开罐检查。选取单一菌落进行纯培养、染色镜检、培养特性、生理生化检测。
（2）脆弱拟杆菌CGMCC No.7280的增菌培养及菌液制备
选取纯化后的单个菌落接种于改良的胰蛋白胨肉汤中进行增菌培养，所得菌液离心沉淀，转速3000r/min，离心15min，去上清，沉淀物用生理盐水洗涤后，沉淀物用生理盐水稀释，用麦氏比浊管做菌数测定，稀释至108 cfu /ml，109 cfu /ml，1010 cfu /ml，保存备用。
实施例2 脆弱拟杆菌CGMCC No.7280毒力实验
采用实施例1制备的脆弱拟杆菌菌液进行以下实验：
（1）小鼠急性毒力实验
取体重22±2克C57BR/C小鼠（雌雄各半）60只，分成高剂量组、低剂量组和对照组，各组20只。高剂量组每只小鼠每天灌胃1012 cfu /ml菌液0.5ml，低剂量组每天灌胃109 cfu /ml菌液0.5ml，对照组每天灌胃0.5ml生理盐水。连续观察14天。
实验结果：小鼠正常生长，未见死亡，LD50测不出。
（2）大鼠毒力实验
取150±20克SD大鼠30只（雌雄各半），分为3组：高低剂量组和对照组。高剂量组每只大鼠每天灌胃1012cfu/ml菌液2ml，低剂量组每天灌胃109cfu/ml菌液2ml，对照组每天灌胃2ml生理盐水。连续观察14天，14天后抽静脉血测血象、肝肾功。取胃肠肝脾组织做病理切片电镜观察。
实验结果：均未见明显异常。
（3）恒河猴毒力实验
取恒河猴10只（雌雄各半），分为2组：高低剂量组和对照组。高剂量组每只恒河猴每天口服1012cfu/ml菌液100ml，低剂量组每天口服109cfu/ml菌液100ml。连续观察60天。14天、30天、45天、60天后分别抽静脉血测血象、肝肾功，测心电图。取胃肠肝脾组织做病理切片电镜观察。
实验结果：均未见明显异常。
实施例3 脆弱拟杆菌CGMCC No.7280对于细菌性阴道炎的治疗作用
动物模型建立：将大肠埃希菌( ATCC25922) 和金黄色葡萄球菌( ATCC25923) 菌株复苏、传代，用无菌生理盐水配制成浓度为1.8*109/ ml 的菌液，按1:1的比例混合成感染菌液。先用无菌的PBS液( pH8.5) 冲洗小鼠阴道3 次（每次间隔5 min），然后用5 号头皮针硅胶管涂无菌石蜡油，缓慢插入小鼠阴道约1 cm~1.5 cm，每种细菌注入量均为0.025ml / 100 g，1次/ 天。接种细菌后逐日观察小鼠阴道病变情况，并取阴道分泌物涂片染色镜检。当小鼠阴道明显充血、 红肿并伴有大量脓性分泌物时，取分泌物涂片，镜下可见大量的感染菌和坏死细胞，表明小鼠细菌性阴道病模型制备成功。除正常对照组外，其余小鼠均采用该法进行造模，，正常对照组小鼠每天用等量无菌生理盐水冲洗阴道1 次。
分组与治疗：60只雌性小鼠随机分为6组：模型组、妇炎康组、正常对照组以及高浓度脆弱拟杆菌组（高浓度组）、中浓度脆弱拟杆菌组（中浓度组）、低浓度脆弱拟杆菌组（低浓度组），每组10 只。阴性对照组和正常对照组分别用生理盐水冲洗阴道，阳性药物组应用妇炎康凝胶治疗，高浓度组应用5 *109cfu/ ml浓度的脆弱拟杆菌冲洗阴道，中浓度组应用5*108cfu / ml浓度的脆弱拟杆菌冲洗阴道，低浓度组应用5*107cfu / ml浓度的脆弱拟杆菌冲洗阴道。各组动物每日阴道给药1 次，连续 14天。
检测指标：
阴道菌群的测定与分析：停药后第1天，取50 μl的生理盐水反复冲洗小鼠阴道8~10次，取30μl的阴道冲洗液10倍系列稀释至10-7，取10μl滴种于相应的选择培养基上，培养48 h后进行菌落计数。模型组于造模成功后第1天按上述方法对小鼠阴道内菌群进行检测。
阴道病变治愈程度：停药后第1天，处死小鼠取阴道组织做病理切片
实验结果：模型组与正常组相比乳杆菌数量显著下降，大肠埃希菌和葡萄球菌的数量显著上升。与阴性对照组相比，妇炎康组和脆弱拟杆菌组高、中、低三个浓度组相比，乳杆菌数量升高，大肠埃希菌和葡萄球菌的数量均有不同程度的下降。与妇炎康组相比，高浓度脆弱拟杆菌组的乳杆菌、大肠埃希菌、葡萄球菌有统计学差异。
实验结果表明，脆弱拟杆菌能够抑制大肠埃希菌及葡萄球菌的生长，促进乳杆菌的生长。这说明脆弱拟杆菌对于细菌性阴道病有很好的治疗效果，尤其是高浓度的脆弱拟杆菌组（10*9 cfu /ml）的治疗效果最明显。
Claims (6)
1. 脆弱拟杆菌在制备治疗细菌性阴道炎组合物中的应用。
2. 根据权利要求1所述的脆弱拟杆菌在制备治疗细菌性阴道炎组合物中的应用，其特征在于：所述组合物为至少含有能治疗细菌性阴道炎的脆弱拟杆菌的食品或药物组合物。
3. 根据权利要求2所述的脆弱拟杆菌在制备治疗细菌性阴道炎组合物中的应用，其特征在于：所述组合物选自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌、奶基发酵食品、发酵谷类食品中的任意一种。
4. 根据权利要求2所述的脆弱拟杆菌在制备治疗细菌性阴道炎组合物中的应用，其特征在于：所述组合物为丸剂、片剂、颗粒制剂、胶囊、口服液或者管饲制剂。
5. 根据权利要求1所述的脆弱拟杆菌在制备治疗细菌性阴道炎组合物中的应用，其特征在于：所述组合物为含有所述脆弱拟杆菌的液体细菌悬浮液。
6. 根据权利要求1所述的脆弱拟杆菌在制备治疗细菌性阴道炎组合物中的应用，其特征在于：所述脆弱拟杆菌在所述组合物中的含量为108~1010cfu /ml。
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张季阶等: "一株无毒脆弱拟杆菌的分离鉴定", 《宁夏医学杂志》 * |
| 张季阶等: "脆弱拟杆菌(BF839)菌液的临床应用研究", <中国生物制品学杂志> * |
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