CN103149184A - 一种荧光检测次氯酸根的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种次氯酸根的荧光检测方法，是基于商业可得的分散紫26定量检测次氯酸根的方法。具体是在pH为7.0的HEPES缓冲溶液中，利用次氯酸根能将分散紫26的氨基氧化为硝基，发生荧光淬灭，实现次氯酸根的检测。该检测方法，对次氯酸根显示了高的灵敏性和选择性，检测试剂廉价、检测过程简便、灵敏、快速，检测结果准确。

Description

一种荧光检测次氯酸根的方法
技术领域
本发明涉及次氯酸根检测技术，具体属于一种以分散紫26为荧光试剂，快速、定量荧光检测次氯酸根的方法。
背景技术
NaOCl被广泛用于漂白剂和消毒剂，其浓度范围为10-5～10-2mol/L。但是，浓缩的次氯酸盐溶液对人类和动物的健康有潜在的危害。另一方面，次氯酸根是一个重要的生物活性氧物种（ROS），它在免疫系统中起着关键的作用。生物体内的次氯酸根对生命体是必不可少的，具有重要的抗菌性能。然而，异常的次氯酸盐浓度可以导致组织损伤和疾病，如肝缺血再灌注损伤，动脉粥样硬化，肺损伤，类风湿心血管疾病，神经元变性，关节炎和癌症。因此，灵敏的和高选择性的用于次氯酸盐检测的探针是非常需要的。而检测环境和生物样品中的次氯酸根，如天然水和自来水也是生化研究的兴趣所在。近年来，荧光探针备受关注。然而，大多数荧光探针一般涉及复杂和高成本的有机合成。因此，发展用商业可得、廉价的试剂，操作方便、选择性高、灵敏度高的次氯酸根定量检测方法尤为重要。
发明内容：
本发明的目的是为了克服现有技术次氯酸根检测中存在的问题，提供一种体系廉价、操作方便、选择性高、灵敏度高的荧光检测次氯酸根的方法。
本发明将商业可得的分散紫26作为荧光试剂在检测ClO-中应用。分散紫26的结构式：
Figure BDA00002812739700011
本发明提供的一种荧光检测ClO-的方法，步骤为：
（1）、配制pH=7.0、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，并用乙醇配制2mM的分散紫26乙醇溶液；
（2）、按体积比400:7将HEPES缓冲溶液和分散紫26乙醇溶液加到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，625nm的荧光强度逐渐减弱；
（3）、用蒸馏水配制2mM的ClO-溶液，把2mL的HEPES缓冲溶液和35μL的分散紫26乙醇溶液加到荧光比色皿中，逐渐加入ClO-溶液的体积为25、50、100、200、300、400、500、600uL，同时在荧光光谱仪上测定625nm的对应的荧光强度F为566、530、492、397、323、213、23，以ClO-浓度为横坐标，以相对荧光强度F0-F(F0﹦588)为纵坐标绘制图，得到ClO-浓度的工作曲线；线性回归方程为：F0-F=2.164+0.929c(c的单位为10-6mol/L)；
（4）、将HEPES缓冲溶液2000uL和分散紫26乙醇溶液35uL加到干净的荧光比色皿中，用微量进样器吸取V ul待测样品溶液，加入到此干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，将测得的荧光强度代入步骤（3）的线性回归方程，得到浓度c，待测样品C待测样=2000uL×c×10-6/VuL，即可求得ClO-的浓度。
经实验证明，其它分析物不干扰体系对ClO-的测定。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果：1、检测体系成本低廉，试剂商业可得且廉价；2、本发明的检测方法，对ClO-显示了高的灵敏性和选择性；3、检测过程在水相中进行；4、检测手段简单，只需要借助荧光光谱仪即可实现。
附图说明：
图1实施例1分散紫26与ClO-作用的荧光发射图
图2实施例2分散紫26与各种分析物的荧光柱状图
图3实施例3工作曲线
图4实施例4细胞成像图
具体实施方式：
实施例1
配制pH=7.0、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，并用乙醇配制2mM的分散紫26溶液；把2mL的HEPES缓冲溶液及35μL的分散紫26乙醇溶液加到干净的荧光比色皿中，取ClO-的溶液，逐渐用微量进样器加到此比色皿中，边加样边在荧光分光光度仪上检测，随着ClO-的加入，625nm处荧光强度逐渐减弱。荧光发射图见图1。
实施例2
配制pH=7.0、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，并用乙醇配制2mM的分散紫溶液；在15个荧光比色皿中，各加入2mL的HEPES缓冲溶液和35μL的分散紫26乙醇溶液，再分别加入5摩尔当量的ClO-，以及50摩尔当量的其他各种分析物（ClO2 -,H2O2,ONOO-，F-,ClO3 -,NO2 -,CN–,S2-,SCN-,P2O7 4-,CO3 2-,AcO-,MnO4 -,ClO4 -），在荧光分光光度仪上检测，绘制不同分析物对应的625nm荧光强度的柱状图，得到荧光发射图见图2（ClO-使得分散紫26的荧光强度由583变到25左右，其它的分析物基本没有引起分散紫26荧光强度的变化）。
经实验证明，其它分析物不干扰体系对ClO-的测定。
实施例3
用蒸馏水配制2mM的ClO-溶液，把2mL的HEPES缓冲溶液和35μL的分散紫乙醇溶液加到荧光比色皿中，逐渐加入ClO-溶液的体积为25、50、100、200、300、400、500、600uL，同时在荧光光谱仪上测定625nm的对应的荧光强度F为566、530、492、397、323、213、23，以ClO-浓度为横坐标，以相对荧光强度F0-F(F0﹦588)为纵坐标绘制图，得到ClO-浓度的工作曲线；线性回归方程为：F0-F=2.164+0.929c(c的单位为10-6mol/L)；
实施例4
用乙醇配制2mM的分散紫26乙醇溶液；将分散紫26乙醇溶液加入肝癌细胞培养液中，使得其浓度为20μM，与肝癌细胞HepG2在37°C下，反应30min，体系在荧光共聚焦成像仪下显示了强的红色荧光；将分散紫26乙醇溶液加入肝癌细胞培养液中，使得其浓度为20μM，与肝癌细胞HepG2在37°C下，反应30min，再加入外源的ClO-，使其浓度为100μM，在37°C下，再反应30min，体系在荧光共聚焦成像仪下没有荧光发射；即先进入细胞的分散紫26与随后进入细胞的ClO-作用，使其荧光淬灭。图4为荧光共聚焦成像仪下与分散紫26作用后的细胞a（显示红色荧光）以及先与分散紫26作用再与外源的ClO-作用的细胞b（不显示荧光）成像图。

Claims (2)

1.分散紫26作为荧光试剂在检测次氯酸根中的应用。
2.一种荧光检测次氯酸根的方法：其特征在于，步骤为：
（1）、配制pH=7.0、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，并用乙醇配制2mM的分散紫26乙醇溶液；
（2）、按体积比400:7将HEPES缓冲溶液和分散紫26乙醇溶液加到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，625nm的荧光强度逐渐减弱；
（3）、用蒸馏水配制2mM的ClO-溶液，把2mL的HEPES缓冲溶液和35μL的分散紫26乙醇溶液加到荧光比色皿中，逐渐加入ClO-溶液的体积为25、50、100、200、300、400、500、600uL，同时在荧光光谱仪上测定625nm的对应的荧光强度F为566、530、492、397、323、213、23，以ClO-浓度为横坐标，以相对荧光强度F0-F为纵坐标绘制图，F0﹦588，得到ClO-浓度的工作曲线；线性回归方程为：F0-F=2.164+0.929c，c的单位为10-6mol/L；
（4）、将HEPES缓冲溶液2000uL和分散紫26乙醇溶液35uL加到干净的荧光比色皿中，用微量进样器吸取V ul待测样品溶液，加入到此干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，将测得的荧光强度代入步骤（3）的线性回归方程，得到浓度c，待测样品C待测样=2000uL×c×10-6/VuL，即可求得ClO-的浓度。
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