CN103146618B - 一种类产碱假单胞菌及其应用 - Google Patents

一种类产碱假单胞菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103146618B
CN103146618B CN201310093192.0A CN201310093192A CN103146618B CN 103146618 B CN103146618 B CN 103146618B CN 201310093192 A CN201310093192 A CN 201310093192A CN 103146618 B CN103146618 B CN 103146618B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pseudomonas pseudoalcaligenes
application
nitrite
nitrogen
denitrification
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201310093192.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103146618A (zh
Inventor
武玉强
王鹏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
QINGDAO MASTER BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
QINGDAO MASTER BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by QINGDAO MASTER BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical QINGDAO MASTER BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201310093192.0A priority Critical patent/CN103146618B/zh
Publication of CN103146618A publication Critical patent/CN103146618A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103146618B publication Critical patent/CN103146618B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)

Abstract

本发明公开了一株类产碱假单胞菌及其应用。本发明从南美白对虾养殖塘底泥中筛选到一株类产碱假单胞菌（Pseudomonas pseudoalcaligenes）FX13，其保藏编号为CCTCC NO:M2013069。该菌株具有好氧、反硝化性能，对水体环境中的硝酸盐及亚硝酸盐具有高效的降解作用。

Description

一种类产碱假单胞菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及一株类产碱假单胞菌及其应用。
背景技术
近几十年来，我国水产养殖业迅猛发展，集约化、高密度养殖规模日益扩大。但由于养殖水体中积累大量的残饵、粪便及动植物尸体，导致水体氮元素含量严重超标，富营养化加剧，使得养殖生态环境遭到破坏，鱼虾病害频发，最终造成巨大的经济损失。研究表明，水产动物致病的主要根源是养殖水体中亚硝态氮含量的严重超标，亚硝酸盐可以氧化鱼虾体内的亚铁血红蛋白，使其成为高铁血红蛋白，导致其失去运输氧的能力，最后造成鱼虾死亡。所以，控制水体中的亚硝态氮成为规模化养殖的关键之一。
与物理脱氮法相比，生物脱氮有其独特的优点：无二次污染,脱氮彻底,经济安全等。由于生物脱氮技术具有成本低、易操作、达标排放可靠性强且无二次污染等优点，逐渐成为食品工业废水处理的主要方式。好氧反硝化作用是近年来提出的与传统的缺氧反硝化脱氮相比具有独特优势的生物脱氮技术：一方面，在有氧条件下进行反硝化，硝化作用和反硝化作用可同时在一个反应器中进行，设备与操作成本大幅下降；另一方面，硝化作用的产物可直接作为反硝化作用的底物，避免抑制硝化作用，硝化和反硝化进程加剧。因此，好氧反硝化作用越来越受到人们的关注，国内外对于好氧反硝化菌的筛选研究也比较多，但其成果仍旧远远不能满足工业生产的实际需求。通过筛选分离好氧反硝化细菌，并对好氧反硝化菌的各种生长特性和反硝化特性进行深入研究，对养殖废水、生活废水及工业污水的脱氮处理有着重要的理论价值和实际意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种类产碱假单胞菌及其在水产养殖及污水处理中的应用。所述类产碱假单胞菌筛选自南美白对虾养殖塘的底泥，具有好氧反硝化的性能，能显著降低水体中的硝酸盐及亚硝酸盐。
本发明一方面提供了一株类产碱假单胞菌FX13（Pseudomonaspseudoalcaligenes FX13），已于2013年3月6日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M2013069。
上述的类产碱假单胞菌在水体净化中的应用，用于处理养殖水或生活污水。
上述类产碱假单胞菌FX13可以菌粉的形式制成微生物添加剂
本发明的类产碱假单胞菌FX13株营养需求简单，具有降低水体中硝酸盐及亚硝酸盐的能力，可开发为水产微生态制剂及污水处理剂，应用前景广阔。
具体实施方式
实施例1：类产碱假单胞菌FX13分离筛选及鉴定
1、培养基：
BTB培养基(/L)：琼脂20g、KNO31g、KH2PO41g、FeCl2·6H2O0.5g、CaCl2·7H2O0.2g、MgSO4·7H2O1g、琥珀酸钠8.5g、溴百里酚蓝(1%乙醇溶液)1mL，用1mol/L的NaOH调节pH至7.0～7.3，121℃灭菌20min，备用。
LB液体培养基(/L)：KNO31g、KH2PO41g、FeCl2·6H2O0.05g、CaCl2·7H2O0.02g、MgSO4·7H2O1g、琥珀酸钠8.5g，121℃灭菌20min，备用。
DM反硝化培养基(/L)：KNO30.72g、KH2PO41g、MgSO4·7H2O1g、琥珀酸钠2.8g，121℃灭菌20min，备用。
2、筛选方法
采用梯度稀释法将污泥样品稀释至适当浓度，取0.1mL均匀涂布于BTB培养基表面，置入恒温培养箱，30℃下培养2～3d后，用接种环挑取使周围培养基出现蓝色晕圈的单菌落，进行分离纯化即为初筛菌株，本次试验挑取了20株单菌落，并依此命名为FX1、FX2、FX3……、FX20。接种初筛菌株至LB培养基，在30℃、160r/min条件下进行液体培养24h后，以10%的接种量接种到反硝化培养基(DM培养基)中，30℃、160r/min条件下进行摇瓶处理，48h后取样测定实验体系中硝基氮浓度和亚硝基氮浓度，本次试验筛选出了降解硝基氮和亚硝基氮能力较强的菌株FX13（表1）。NO3 --N：用紫外分光光度法测定；NO2 --N：用N-(1-萘基)-乙二胺分光光度法测定。菌体量：光密度法，用721型分光光度计在600nm处测定吸光度值。
表1各菌株培养48h发酵液中NO3 --N、NO2 --N浓度及TIN去除率
Figure BDA00002949253400021
Figure BDA00002949253400031
3、鉴定
1）菌落形态特征：将FX13菌株在营养琼脂培养基上培养18-24小时，呈现为灰黄色、不透明、表面湿润、无皱褶、直径约2-3mm菌落，镜检其细胞为短杆状。
2）利用试剂盒提取FX13菌株基因组DNA，利用PCR技术扩增16S rRNA序列，测序后获得长度为1771bp的片段。通过BLAST比对分析，其与公布的多株类产碱假单胞菌的16S rRNA序列相似度最高，鉴定证实FX13菌株为类产碱假单胞菌，与生化鉴定结果一致。
将FX13菌株命名为类产碱假单胞菌FX13（Pseudomonas pseudoalcaligenesFX13），已于2013年3月6日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M2013069。
实施例2：类产碱假单胞菌FX13降解水产养殖废水实验
将本发明筛选的类产碱假单胞菌FX13活化、扩大培养，经液态发酵，离心收集菌泥，加入淀粉载体，烘干制成100亿/g的菌粉。养殖废水取自青岛田横海参保苗池，经测定其硝态氮含量为54.42±1.15mg/L，亚硝态氮为0.18±0.03mg/L，实验容器为塑料桶，实验水体为10L，实验组按照质量比10ppm和50ppm添加类产碱假单胞菌FX13菌粉，对照组不加菌粉，实验组和对照组均设置3个平行，实验期间不间断曝气，各容器曝气量调至一致，实验温度为28℃恒温。在第3d时测定各实验组及对照组水体中的硝态氮及亚硝态氮的含量（表2）。
表2养殖废水处理第3d各组中TIN去除率
组别 NO3 –N（mg/L） NO2 –N（mg/L） TIN去除率(%)
对照组 51.37±2.72 0.21±0.07 4.80
FX13（10ppm） 43.24±2.15 0.17±0.04 19.88
FX13（50ppm） 32.78±3.31 0.09±0.04 39.33
实验结果表明，类产碱假单胞菌FX13对水产养殖废水中的硝态氮及亚硝态氮均有较强的降解作用（p＜0.05），且随着菌粉使用剂量的加大，其降解硝态氮及亚硝态氮的能力显著加强（p＜0.05）。亚硝酸盐可以氧化鱼虾体内的亚铁血红蛋白，使其成为高铁血红蛋白，导致其失去运输氧的能力，最后造成鱼虾死亡，亚硝酸盐的降解问题是目前水产养殖上的难点。类产碱假单胞菌FX13能够在3天内将亚硝酸盐含量降低一半，因此该菌种可广泛用于解决水产养殖中亚硝酸盐过高的问题。
实施例3：类产碱假单胞菌FX13降解生活污水废水实验
将类产碱假单胞菌FX13活化、扩大培养，经液态发酵，离心收集菌泥，加入淀粉载体，烘干制成100亿/g的菌粉。生活废水取自青岛市李沧区李村菜市场排水沟，静置沉淀后取其上清液，测定其硝态氮含量为168.34±3.67mg/L，亚硝态氮为1.31±0.11mg/L，实验容器为塑料桶，实验水体为10L，实验组按照质量比10ppm和50ppm添加类产碱假单胞菌FX13菌粉，对照组不加菌粉，实验组和对照组均设置3个平行，实验期间不间断曝气，各容器曝气量调至一致，实验温度为28℃恒温。在第3d时测定各实验组及对照组水体中的硝态氮及亚硝态氮的含量（表3）。
表3生活废水处理第3d各组中TIN去除率
组别 NO3 –N（mg/L） NO2 –N（mg/L） TIN去除率(%)
对照组 171.67±7.73 1.24±0.27 -2.13
FX13（10ppm） 116.54±11.02 0.87±0.11 30.65
FX13（50ppm） 74.16±6.33 0.69±0.07 55.79
实验结果表明，类产碱假单胞菌FX13对生活污水中的硝态氮及亚硝态氮均有降解作用（p＜0.05），且随着菌粉使用剂量的加大，其降解硝态氮及亚硝态氮的能力显著加强（p＜0.05）。类产碱假单胞菌FX13能在3天内将硝酸盐及亚硝酸盐降低至一半以下，而且其为好氧型菌株，对生存环境要求不高，因此可广泛用于生活污水处理。

Claims (5)

1.一株类产碱假单胞菌，其保藏编号为CCTCC NO:M2013069。
2.权利要求1所述的类产碱假单胞菌在水体净化中的应用。
3.权利要求1所述的类产碱假单胞菌在制备微生物制剂中的应用。
4.一种微生物制剂，所述的微生物制剂包含有权利要求1所述的类产碱假单胞菌。
5.权利要求4所述的微生物制剂在水产养殖及污水处理中的应用。
CN201310093192.0A 2013-03-21 2013-03-21 一种类产碱假单胞菌及其应用 Active CN103146618B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310093192.0A CN103146618B (zh) 2013-03-21 2013-03-21 一种类产碱假单胞菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310093192.0A CN103146618B (zh) 2013-03-21 2013-03-21 一种类产碱假单胞菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103146618A CN103146618A (zh) 2013-06-12
CN103146618B true CN103146618B (zh) 2014-06-18

Family

ID=48544941

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310093192.0A Active CN103146618B (zh) 2013-03-21 2013-03-21 一种类产碱假单胞菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103146618B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105802873A (zh) * 2015-10-27 2016-07-27 重庆医科大学 高效降解地塞米松的产碱假单胞菌及其应用
CN106040199A (zh) * 2016-08-03 2016-10-26 王维娜 一种河流污水中砷污染复合树脂吸附剂及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101463336A (zh) * 2009-01-05 2009-06-24 中国农业大学 类产碱单胞mob13及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101463336A (zh) * 2009-01-05 2009-06-24 中国农业大学 类产碱单胞mob13及其应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
两株高效好氧反硝化细菌的分离鉴定及其脱氮效率;朱晓宇 等;《环境科学学报》;20090131;第29卷(第1期);第112也左栏第3段，第115页右栏第1－2段以及第111页摘要 *
固定化脱氮菌群处理含氮污水的研究;肖晶晶;《中国博士学位论文全文数据库工程科技Ⅰ辑》;20111015(第10期);全文 *
朱晓宇 等.两株高效好氧反硝化细菌的分离鉴定及其脱氮效率.《环境科学学报》.2009,第29卷(第1期),111－117.
氮循环茵群的构建鉴定及其脱氮性能研究;肖晶晶 等;《农业环境科学学报》;20091231;第28卷(第12期);第2680页摘要、第2681页左栏1.1.1和第2684页左栏第3段等 *
肖晶晶 等.氮循环茵群的构建鉴定及其脱氮性能研究.《农业环境科学学报》.2009,第28卷(第12期),2680－2687.
肖晶晶.固定化脱氮菌群处理含氮污水的研究.《中国博士学位论文全文数据库工程科技Ⅰ辑》.2011,(第10期),全文.

Also Published As

Publication number Publication date
CN103146618A (zh) 2013-06-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103484413A (zh) 一种恶臭假单胞菌株及其应用
CN104164392B (zh) 一株地衣芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用
CN104164391B (zh) 一株枯草芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用
CN103484412B (zh) 一株少动鞘氨醇单胞菌
CN109943497A (zh) 一株具有好氧反硝化功能的施氏假单胞菌及其用途
CN106754578B (zh) 一株氯霉素降解菌株lms-cy及其生产的菌剂和应用
CN105274029B (zh) 一种维氏硝化杆菌及硝化细菌-反硝化细菌复合菌剂及生产方法和应用
CN104164388B (zh) 一株巨大芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用
CN104845920A (zh) 一株海洋卓贝尔氏菌及其应用
CN104145863A (zh) 牡蛎养殖的生态净化方法
CN102899277B (zh) 一种蜡状芽孢杆菌及其应用
CN113317248A (zh) 一种生物絮团养殖微藻强化方法及其在对虾养殖中的应用
Amjad et al. Probiotic additions affect the biofloc nursery culture of white shrimp (Litopenaeus vannamei)
CN104560821B (zh) 一种维氏硝化杆菌xy‑01及其培养方法与应用
CN105441348A (zh) 一株枯草芽孢杆菌新菌株，微生态制剂及应用
Shan et al. Ammonia and nitrite nitrogen removal in shrimp culture by Vibrio alginolyticus VZ5 immobilized in SA beads
CN103525730B (zh) 一种耳炎假单胞菌株及其应用
CN108423838B (zh) 一种用于生态安全水系的微生物制剂及其制备方法
CN103146618B (zh) 一种类产碱假单胞菌及其应用
CN104164390B (zh) 一株烟草节杆菌及其在水产养殖中的应用
CN102876617B (zh) 假单胞菌及其用途
CN109609384B (zh) 一株小球藻Chlorella sorokinianaTX及其高密度快速培养方法
CN104118945B (zh) 一种降解养殖水体中亚硝酸盐的复合微生态制剂及应用
CN103146619B (zh) 一株嗜盐假单胞菌及其应用
CN105060499A (zh) 一种提高养殖水体透明度的复合微生态制剂及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant