CN103146619B - 一株嗜盐假单胞菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的是提供一株嗜盐假单胞菌,该菌株命名为嗜盐假单胞菌YZ7(Halomonas sulfidaeris YZ7),已于2013年3月6日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCC NO:M2013070。本发明提供的嗜盐假单胞菌YZ7具有抑制水华藻类的能力,且该菌株营养需要简单,可开发为水产养殖微生物制剂及污水处理剂,应用前景广阔。
Description
技术领域
本发明属于微生物应用技术领域,具体涉及一株嗜盐假单胞菌及其应用。
背景技术
近年来,全球水体有害藻类水华爆发日渐频繁,严重程度也越来越高,发生地点遍布全球各地。因此,防治有害藻类的发生,降低其对水环境、人类生活环境,以及水产养殖业的危害,已成为人们及各国普遍关注的大问题。
正常的水体系统处于一种相互制约的动态平衡中,当水华发生时,少数种类的藻大量繁殖,水面形成很厚的蓝绿色聚集体。因为有害藻铺满水面,水面被覆盖使水体透明度降低,水体变色,水体pH改变,水体溶氧下降,水体粘稠度下降。藻类本身也会因过量繁殖大量死亡,这时藻类和水生植物的尸体被微生物大量分解,造成水体大面积缺氧,甚至无氧,最终造成水生动物的大量死亡。藻类的腐解还会产生大量的有毒气体和毒素,更严重的增加了水质的恶化程度,破坏了整个生态系统结构和功能。
随着水体富营养化的加剧,藻类所引起的水污染问题已越来越引起人们的关注,而淡水藻类污染已成为全球性的环境卫生问题。近年来,在物理化学方法治理水华不够理想的情况下,微生物的方法控制有害藻类是生物控制点的研究热点,而且,溶藻菌在控制水华爆发方面有巨大的潜力和应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一株嗜盐假单胞菌及其应用。所述嗜盐假单胞菌能高效抑制藻类尤其是水华藻类的生长,可广泛应用于水产养殖及污水处理。
本发明一方面提供了一株嗜盐假单胞菌,该菌株命名为嗜盐假单胞菌YZ7(Halomonas sulfidaeris YZ7),已于2013年3月6日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCC NO:M2013070。
本发明另一方面提供了含有上述嗜盐假单胞菌的微生物制剂及其应用。
上述嗜盐假单胞菌YZ7可以菌粉的形式制成微生物添加剂,制备过程为:将嗜盐假单胞菌YZ7活化、扩大培养,经液态发酵,离心收集菌泥,加入淀粉载体,烘干制成菌量为100~1000亿/g的菌粉。
上述嗜盐假单胞菌YZ7菌粉按10-100ppm的比例,活化后均匀泼洒至水体中,可有效抑制水体中藻类的生长,尤其是水华藻类的繁殖。
本发明提供的嗜盐假单胞菌YZ7具有抑制水华藻类的能力,且该菌株营养需要简单,可开发为水产养殖微生物制剂及污水处理剂,应用前景广阔。
具体实施方式
实施例1:嗜盐假单胞菌YZ7分离筛选及鉴定
1、实验材料
选用蓝藻中的铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)FACHB469,藻种经活化后,在25℃,光照强度为2500lx及光暗比为12h:12h条件下培养。
溶藻细菌的富集培养采用牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl5g,蒸馏水100mL。
LB培养基:蛋白胨10g,酵母提取物5g,NaCl5g,蒸馏水100mL。
藻培养用BG11改良培养基:NaNO3150mg,K2HPO44mg,MgSO4·7H2O7.5mg,CaCl2·2H2O3.6mg,Na2Si03·9H2O5.8mg,柠檬酸0.6mg,柠檬酸铁铵0.6mg,EDTA0.1mg,Na2CO32mg,A5溶液0.1mL,蒸馏水99.9mL.A5溶液:H3BO3286mg,MnCl2·4H2O181mg,nSO4·7H2O22mg,CuSO4·5H2O7.9mg,Na2MoO4·2H203.9mg,蒸馏水100mL。
2、微生物筛选
从浙江某富营养化乌鳢养殖塘中采集水样,按10%的比例接入预培养7d的铜绿微囊藻,于25℃混合培养7d。7d后将黄化的藻液作为分离溶藻菌的材料,取黄化藻液按不同浓度梯度稀释,平板涂布,30℃培养48h后,划线分离,获得纯培养的菌株,本实验获得10株纯培养的菌株,并分别依次命名为YZ1、YZ2、YZ3至YZ10。将分离获得的菌株,进行溶藻实验以确定其溶藻效果。
3、溶藻实验
将铜绿微囊藻用牛肉膏蛋白胨培养基培养至对数生长期,再将上述10株菌株于30℃培养36h后(此时细菌数达到108cfu/mL以上),按5%的接种量分别接种至预培养7d的铜绿微囊藻中,实验水体为500mL,设空白对照,将实验组及对照组置于光照培养箱中培养96h,培养期间温度控制在30℃,光暗比12:12,每天早晚各摇动一次,4d后在显微镜下用血球计数板计数各组中的铜绿微囊藻数量。其中YZ7菌株对铜绿微囊藻的抑制率最高,为93.24%(表1)。
表1:不同菌株对铜绿微囊藻的抑制率
4、鉴定
1)菌落形态特征:将YZ7菌株在营养琼脂培养基上培养18-24h,呈现为灰黄色、不透明、表面湿润、无皱褶、直径约2-3mm菌落,镜检其细胞为短杆状。
2)利用试剂盒提取YZ7菌株的基因组DNA,利用PCR技术扩增16S rRNA序列,测序后获得长度为1833bp的片段。通过BLAST比对分析,其与公布的多株嗜盐假单胞菌的16S rRNA序列相似度为99%,鉴定证实该YZ7菌株为嗜盐假单胞菌,与生化鉴定结果一致。
将YZ7菌株命名为嗜盐假单胞菌YZ7(Halomonas sulfidaeris YZ7),已于2013年3月6日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCC NO:M2013070。
实施例2:嗜盐假单胞菌YZ7对养殖塘中藻类的抑制实验
将嗜盐假单胞菌YZ7活化、扩大培养,经液态发酵,离心收集菌泥,加入淀粉载体,烘干制成100亿/g的菌粉。水产养殖塘水取自江苏盐城南美白对虾养殖塘,经镜检计数,总藻密度为3.42×104cells/mL,其中铜绿微囊藻是优势藻种,优势度为43.19%,实验容器为1mL烧杯,实验水体为500mL,实验组按照质量比50ppm添加上述菌粉,对照组不加菌粉,实验组和对照组均设置3个平行,实验在光照培养箱中进行,实验温度为30℃恒温,光暗比12:12。在第96h时测定各实验组及对照组水体中总藻及铜绿微囊藻的密度(表2)。
表2:嗜盐假单胞菌YZ7对养殖水体中藻类的抑制作用
组别 | 总藻量(104cells/mL) | 铜绿微囊藻优势度(%) |
对照组 | 7.52±0.74 | 47.72 |
YZ7组1.14±0.2630.37 |
从实验结果来看,YZ7菌粉对水产养殖水体中的总藻量有显著的抑制作用(p<0.05),对水华藻铜绿微囊藻的抑制尤为显著(p<0.05)。该菌株可开发为水产养殖微生物制剂及污水处理剂。
Claims (6)
1.一种嗜盐假单胞菌,其保藏编号为CCTCC NO:M2013070。
2.权利要求1所述的嗜盐假单胞菌在抑制铜绿微囊藻生长中的应用。
3.权利要求1所述的嗜盐假单胞菌在制备微生物制剂中的应用。
4.一种微生物制剂,所述的微生物制剂包含有权利要求1所述的嗜盐假单胞菌。
5.如权利要求4所述的微生物制剂,其特征在于所述的微生物制剂为权利要求1所述的嗜盐假单胞菌的菌粉。
6.权利要求4或5所述的微生物制剂在抑制水华藻铜绿微囊藻中的应用。
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