CN103130815A - 一种单硝酸异山梨酯衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种如式（II）所示的单硝酸异山梨酯衍生物及其制备方法以及其在肿瘤联合治疗中的应用。本发明将单硝酸异山梨酯与脂肪酸经酯化反应成酯，以提高其脂溶性，再制备成脂质纳米粒被动靶向给药系统。再将单硝酸异山梨酯脂肪酸衍生物的脂质纳米粒与纳米靶向抗癌药联合用药，提高了化疗药的治疗疗效。

Description

一种单硝酸异山梨酯衍生物及其制备方法和应用

一、技术领域

本发明涉及一种单硝酸异山梨酯衍生物及其制备方法以及在肿瘤治疗中的应用。

二、背景技术

在实体瘤的生长过程，当肿瘤直径达0.2mm时，为了获取快速增长所需的营养和氧气，已自发诱导形成新生血管供血系统。与正常组织不同的是，肿瘤组织微血管管壁缺失，内皮细胞排列疏松、细胞间隙大，没有淋巴回流系统，使得大分子或胶粒载体如脂质体、纳米粒、胶束等被动及主动靶向载体，可穿过肿瘤血管内皮细胞间隙到达肿瘤组织，且停留时间较小分子药物长，即所谓的通透性增强与滞留效应（enhanced permeability and retention effect，EPR），已成为实体瘤靶向治疗的基础。传统的实体瘤靶向治疗主要以栓塞或新生血管生成抑制剂等阻断癌细胞营养的供应而“饿死”癌细胞，或以化疗药直接“杀死”癌细胞理念为主。但实体瘤除了有利于靶向治疗的EPR效应外，还具有血管形态不规则，瘤内静压高、外侧低，中心供血不足和缺氧等复杂的微环境，使得化疗药靶向给药系统难以到达瘤体中心部位，且在瘤内的分布和停留不均一，最终出现肿瘤细胞的耐药和转移（1.

Fang J,Nakamura H,Maeda H.The EPR effect:Unique features oftumor blood vessels for drug delivery,factors involved,and limitationsand augmentation ofthe effect.Adv Drug Deliv Rev,2011,63(3):136-151.2.Halle C,Andersen E,Lando M,Aarnes EK,Hasvold G,Holden M,RG,K,Kristensen GB,Holm R,Malinen E,Lyng H.Hypoxia-induced gene expression in chemoradioresistant cervical cancerrevealed by dynamic contrast-enhanced MRI.Cancer

Res,2012,72(20):5285-5295.）。这说明“堵”可能是导致化疗药靶向治疗疗效仍不够理想的主要原因。

单硝酸异山梨酯，即1，4：3，6-二脱水—D-山梨醇—5-单硝酸酯，为有机硝酸酯类一氧化氮供体（NO供体）药物，水中溶解度大，蛋白结合率低。其在体内通过释放一氧化氮，刺激鸟苷酸环化酶，使环一磷酸鸟苷(cGMP)增加，血管扩张，心脏的负荷减轻，使得缺血区心肌的血流供应增加。目前市售的制剂主要有口服的普通片剂、缓释片、缓释胶囊和滴丸，注射液，注射用粉针及喷雾剂等。主要用于心绞痛、心肌梗死和充血性心衰的治疗。

一氧化氮（NO）是人体重要的信使分子，除了调节着机体的心血管、免疫和神经等重要系统，还参与了肿瘤的发生、发展、转移和死亡等重要环节。文献报道NO供体与化疗药合用对实体瘤具有协同作用（3.Sonveaux P,Jordan BF,Gallez B,Feron O.Nitric oxide deliveryto cancer:why and how Eur J Cancer,2009,45(8):1352-1369.；4.DuanS,Cai S,Yang Q,Forrest ML.Multi-arm polymeric nanocarrier as anitric oxide delivery platform for chemotherapy of head and necksquamous cell carcinoma.Biomaterials.2012,33(11):3243-3253；5.Yasuda H.Solid tumor physiology and hypoxia-induced

chemo/radio-resistance:novel strategy fr cancer therapy:nitric oxidedonor as a therapeutic enhancer.Nitric Oxide.2008,19(2):205-216.）。

Maeda等研究发现，荷瘤小鼠瘤体局部涂敷硝酸甘油（NO供体），可提高大分子复合物伊文思蓝-白蛋白或聚乙二醇原卟啉锌在肿瘤部位的浓集量约2~3倍，并与NO供体的浓度和时间呈依赖性（6.

Maeda H.Tumor-selective delivery of macromolecular drugs via theEPR effect:background and future prospects.Bioconjug

Chem,2010,21(5):797-802.；7.Seki T,Fang J,Maeda H.Enhanceddelivery of macromolecular antitumor drugs to tumors by nitroglycerinapplication.Cancer Sci,2009,100(12):2426-2430.8.Maeda H.

Nitroglycerin enhances vascular blood flow and drug delivery in hypoxictumor tissues:analogy between angina pectoris and solid tumors andenhancement of the EPR effect.J Control Release,2010,142(3):

296-298.）。这说明NO供体可以改善肿瘤微环境，增强肿瘤的EPR效应，以利于化疗药的靶向治疗。此外，硝酸甘油透皮贴剂与氨柔比星或顺铂的联合用药用于治疗非小细胞肺癌已进入了II期临床研究（9.Yasuda H,Yanagihara K,Nakayama K,Mio T,Sasaki T,Asada M,Yamaya M,Fukushima M.Therapeutic applications of nitric oxide formalignant tumor in animal models and human studies.In:Nitric Oxideand Cancer:Prognosis,Prevention and Therapy.Bonavida B(ed).Springer Inc.,New York,NY,pp419-441,2010）。

但目前报道用于化疗联合用药的有机硝酸类NO供体仅硝酸甘油。硝酸甘油因易爆炸，常以10%的乙醇溶液供应，且给药方式以透皮贴剂或涂敷为主，药物透皮吸收差，难以准确控制剂量，且仅限于皮下瘤（9.Yasuda H,Yanagihara K,Nakayama K,Mio T,Sasaki T,Asada M,Yamaya M,Fukushima M.Therapeutic applications of nitricoxide for malignant tumor in animal models and human studies.In:NitricOxide and Cancer:Prognosis,Prevention and Therapy.Bonavida B(ed).Springer Inc.,New York,N丫pp419-441,2010.）。瘤内注射虽可控制剂量，但小分子药物在瘤内高压的作用下，清除快，局限性也大（8.Maeda H.Nitroglycerin enhances vascular blood flow and drug deliveryin hypoxic tumor tissues:analogy between angina pectoris and solidtumors and enhancement ofthe EPR effect.J ControlRelease,2010,142(3):296-298）。仅有的NO靶向给药研究是以纳米SiO₂为载体，属非生物降解型，尚未见动物试验结果报道（10.StevensEV, Carpenter AW，Shin JH,Liu J,Der CJ,Schoenfisch MH.Nitricoxide-releasing silica nanoparticle inhibition of ovarian cancer cellgrowth.Mol Pharm,2010,7(3):775-785.）。

单硝酸异山梨酯与硝酸甘油，同为有机硝酸酯类一氧化氮供体，且单硝酸异山梨酯的半衰期较硝酸甘油长，约为6h。但单硝酸异山梨酯水溶性大，难以载入纳米载体中，制备成载药纳米给药系统；且皮肤渗透性差，尚未见其与抗癌药联合用于实体瘤治疗的报道。

三、发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种单硝酸异山梨酯脂肪酸衍生物的制备及在肿瘤联合用药中的应用，以增强靶向化疗药的抗癌疗效。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种如式（II）所示的单硝酸异山梨酯衍生物

式（II）中，R为C1~C29的烷基，优选为C5-C25的烷基，更优选为C11-C21的烷基，最优选为C11~C17的烷基。

本发明还提供所述的单硝酸异山梨酯衍生物的制备方法，所述方法为：如式（I）所示的单硝酸异山梨酯和脂肪酸RCOOH经Steglich酯化反应，制得如式（II）所示的单硝酸异山梨酯衍生物；所示脂肪酸RCOOH中，R为C1~C29的烷基

较为具体的，所述方法为：如式（I）所示的单硝酸异山梨酯和脂肪酸RCOOH在有机溶剂中，在催化剂和脱水剂的作用下，室温下搅拌反应8~24小时，反应结束后，反应液后处理制得所述如式（II）所示的单硝酸异山梨酯衍生物；所述如式（I）所示的单硝酸异山梨酯和脂肪酸RCOOH的物质的量之比为1:0.5~2，优选为1:0.8~1.2；所述有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、二甲亚砜或四氢呋喃，优选二氯甲烷；

所述催化剂为4-N,N-二甲氨基吡（简称DMAP）；所述脱水剂为1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐（简称EDCI）。

所述催化剂的物质的量用量为单硝酸异山梨酯和脂肪酸总的物质的量的0.01%～15%，优选2-5%。

所述脱水剂与单硝酸异山梨酯的物质的量之比为0.02～1.5：1，优选0.5~1.1:1。

所述有机溶剂的体积用量通常以单硝酸异山梨酯的物质的量计为5~20mL/mmol。

另外，式（II）中的R为甲基时，所述如式（II）所示的单硝酸异山梨酯衍生物的制备方法也可以如下进行：如式（I）所示的单硝酸异山梨酯和乙酸酐在有机溶剂中，在催化剂4-N,N-二甲氨基吡的作用下，室温下搅拌反应8~24小时，反应结束后，反应液后处理制得所述如式（II）所示的单硝酸异山梨酯衍生物；所述如式（I）所示的单硝酸异山梨酯和乙酸酐的物质的量之比为1:0.5~2，优选为1:0.8~1.2；所述有机溶剂为二氯甲烷。

本发明所述反应液后处理方法为：反应结束后，反应液用饱和NaHCO₃溶液、去离子水洗涤，收集有机层，干燥后过滤，滤液减压蒸馏除去溶剂，制得如式（II）所示的单硝酸异山梨酯衍生物。

进一步，本发明提供的单硝酸异山梨酯衍生物可制备得到单硝酸异山梨酯衍生物脂质纳米粒，所述到单硝酸异山梨酯衍生物脂质纳米粒包括单硝酸异山梨酯衍生物的纳米脂质体、固体脂质纳米粒、结构脂质纳米粒、纳米乳等。采用常规的脂质纳米粒配方和薄膜分散-探头超声法、薄膜分散-氮气挤出法或高压均质法等即可成功制备，这是本领域技术人员的公知技术。

再进一步，本发明所述的单硝酸异山梨酯衍生物的脂质纳米粒可应用于制备治疗实体瘤药物，具体的，所述应用的方法中，可以将单硝酸异山梨酯衍生物的脂质纳米粒与纳米靶向抗癌药进行联合用药，用于实体瘤的治疗。所述纳米靶向抗癌药包括载紫杉醇、阿霉素、顺铂、卡铂等抗癌药的脂质体、纳米粒、胶束等纳米载药系统。

本发明首先将单硝酸异山梨酯与脂肪酸经化学反应形成酯化衍生物，再与脂质材料制备成脂质纳米粒，用于增强化疗药抗癌疗效的应用。通过荷瘤小鼠动物试验显示，化学修饰后的单硝酸异山梨酯衍生物不仅易于载入脂质纳米粒中，保留了NO供体的活性，且增强了化疗药的抗癌疗效。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明通过单硝酸异山梨酯与脂肪酸的酯化反应获得了单硝酸异山梨酯的脂肪酸衍生物。与现有单硝酸异山梨酯相比，单硝酸异山梨酯脂肪酸衍生物的脂溶性提高；便于与脂质材料结合，可制备成脂质纳米粒注射液；并保留了单硝酸异山梨酯NO供体的特性，发挥增强化疗药抗癌疗效的作用。

四、附图说明

图1为单硝酸异山梨酯及衍生物的红外图谱。

图2为单硝酸异山梨酯及衍生物的核磁共振图谱。

图3为单硝酸异山梨酯及衍生物对伊文斯兰瘤内聚集量的影响。

图4为单硝酸异山梨酯硬脂酸衍生物与阿霉素长循环脂质体联合用药的S180肿瘤生长曲线。

五、具体实施方式

下面以具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此：

实施例1单硝酸异山梨酯乙酸衍生物（ISMN-2）的制备

称取955mg（5mmol）的单硝酸异山梨酯（简称ISMN），置于100mL圆底烧瓶，加50ml的无水二氯甲烷使溶解；再加入612mg(6mmol)的乙酸酐和67mg的4-N,N-二甲氨基吡啶（DMAP），磁力搅拌，室温反应15小时。反应液用250mL饱和NaHCO3溶液洗涤3次，250mL去离子水洗涤3次，收集有机层，再用无水Na2CO3除去有机层中的水分，过滤除去Na2CO3，滤液减压旋转蒸发除去有机溶剂，得产物779mg，收率49.7%，记为ISMN-2。

实施例2单硝酸异山梨酯月桂酸衍生物（ISMN-12）的制备

称取955mg（5mmol）的单硝酸异山梨酯（ISMN），置于100mL圆底烧瓶，加50ml的无水二氯甲烷使溶解；再加入1.2g（6mmol）的月桂酸，67mg的4-N,N-二甲氨基吡啶（DMAP）和1.1g的脱水剂1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐（EDCI），磁力搅拌，室温反应10小时。反应液用250mL饱和NaHCO₃溶液洗涤3次，250mL去离子水洗涤3次，收集有机层，再用无水Na₂CO₃除去有机层中的水分，过滤除去Na₂CO₃，滤液减压旋转蒸发除去有机溶剂，得产物1.6g，收率76.5%，记为ISMN-12。

实施例3单硝酸异山梨酯硬脂酸酸衍生物（ISMN-18）的制备

称取955mg（5mmol）的5-单硝酸异山梨酯（ISMN），置于100mL圆底烧瓶，加50ml的无水二氯甲烷使溶解；再加入1.7g(6mmol)的硬脂酸，67mg的4-N,N-二甲氨基吡啶（DMAP）和1.1g的脱水剂1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐（EDCI），磁力搅拌，室温反应12小时。反应液用250mL饱和NaHCO₃溶液洗涤3次，250mL去离子水洗涤3次，收集有机层，再用无水Na₂CO₃除去有机层中的水分，过滤除去Na₂CO₃，滤液减压旋转蒸发除去有机溶剂，得产物1.7g，收率64.6%，记为ISMN-18。

实施例4产物的表征

分别对实施例1、例2和例3的产物及ISMN进行薄层色谱、红外色谱和核磁共振法的表征，红外色谱图见图1，核磁共振图谱见图2。

当展开剂为乙酸乙酯：石油醚=1：3时，单硝酸异山梨酯(ISMN)的比移值为0.12，单硝酸异山梨酯乙酸衍生物(ISMN-2)为0.36，单硝酸异山梨酯月桂酸衍生物(ISMN-12)为0.69，单硝酸异山梨酯硬脂酸衍生物(ISMN-18)为0.72。

ISMN-2红外光谱解析：1644.8cm^-1：ν_NO2（不对称，ONO₂）；1286.1cm^-1：ν_NO2（对称，ONO2）；1736.1cm^-1：ν_C=O。

ISMN-12红外光谱解析：1627.0cm^-1：ν_NO2（不对称，ONO₂）；1298.6cm^-1：ν_NO2（对称，ONO₂）；1744.2cm^-1：ν_C=O；2850.7、2921.6cm^-1：ν_C-H。

ISMN-18红外光谱解析：1626.7cm^-1：ν_NO2（不对称，ONO₂）；1299.5cm^-1：ν_NO2（对称，ONO₂）；1743.9cm^-1：ν_C=O；2849.2、2921.3cm^-1：ν_C-H。

分别将适量ISMN或其衍生物溶于CDCl₃，用Bruker AMX-400型核磁共振仪测定（TMS为内标），¹H NMR图谱如图2所示。

ISMN在1.92ppm处有明显的羟基氢特征峰，而ISMN各酯化衍生物中均无此特征峰，说明各ISMN反应后羟基消失，2位羟基为反应基团；ISMN各衍生物保留原料ISMN3.5～6ppm的特征氢峰，增加0.8～2ppm的饱和氢吸收峰；这些结果都表明ISMN通过酯化反应与不同碳链长度的羧酸链接成单分子化合物。

ISMN-2核磁共振氢谱解析：¹H NMR（400MHz，CDCl₃）δ:2.08（3H，s，–CH₃），3.87～4.04（4H，m，1–H，6–H），4.47（1H，d，3–H），4.97（1H，t，4–H），5.20（1H，d，2–H），5.35（1H，dt，5–H）。

ISMN-12核磁共振氢谱解析：¹H NMR（400MHz，CDCl₃）δ:0.88（3H，t，–CH₃），1.25（16H，br.s，–（CH₂）₈-），1.60（2H，bd，–CH₂–），2.30（2H，t，-CH₂-COOR），3.87～4.04（4H，m，1-H，6–H），4.46（1H，d，3H），4.96（1H，t，4H），5.21（1H，d，2-H），5.34（1H，dt，5–H）。

ISMN-18核磁共振氢谱解析：¹H NMR（400MHz，CDCl₃）δ:0.88（3H，t，–CH₃），1.25（28H，b r.s，–（CH₂）₁₄–），1.60（2H，bd，-CH2-），2.30（2H，t，CH2COOR），3.87～4.01（4H，m，1H，6H），4.46（1H，d，3H），4.97（1H，t，4H），5.21（1H，d，2-H），5.34（1H，dt，5–H）。

实施例5：单硝酸异山梨酯硬脂酸衍生物脂质体的制备

取单硝酸异山梨酯硬脂酸衍生物(ISMN-18)50mg、蛋黄磷脂500mg、胆固醇150mg和TPGS180mg置于1000mL的圆底烧瓶中，加氯仿50ml使其溶解，减压蒸发除尽有机溶剂，在烧瓶内壁形成薄膜，再加入生理盐水水化，探头超声减小粒径形成纳米脂质体注射液液，记为ISMN-18Lip。测得平均粒径为105nm，包封率为95%。

按上述同样方法制备单硝酸异山梨酯月桂酸衍生物ISMN-12的纳米脂质体注射液，记为ISMN-12Lip，测得平均粒径为100nm，包封率为93%。

实施例6：单硝酸异山梨酯脂肪酸衍生物增强了伊文思蓝在瘤内的滞留量

将S180细胞悬液1.0×10⁷个/ml，经皮下注射0.1mL，接种于雌性ICR小鼠右背侧。25±2℃条件下饲养，自由饮水、饮食。当肿瘤体积达到200～400mm³时，按肿瘤体积将荷瘤小鼠随机分为6组，每组9只。分别瘤内注射给予生理盐水、空白纳米脂质组(组成成分：10.0mg/ml蛋黄磷脂、3.0mg/ml胆固醇、3.6mg/ml聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯（简称TPGS），生理盐水为溶剂)及浓度均为10mmol/L的ISMN注射液（以生理盐水为溶剂）、ISMN-2注射液（以生理盐水为溶剂）、ISMN-12脂质体注射液（按实施例5方法制得）和ISMN-18脂质体注射液（按实施例5方法制得）各0.2mL。10min后，再尾静脉注射给予伊文思蓝10mg/kg，于伊文思蓝给予后6h处死荷瘤小鼠，剥取肿瘤组织，生理盐水漂洗，滤纸吸干表面水分，称重，并测定瘤内的伊文斯兰的含量。将结果与空白纳米脂质组与生理盐水对照组比较，所得结果见图3，图3中，*表示p<0.05；**表示p<0.005，可以看出ISMN组和衍生物组瘤内伊文斯兰的含量均有显著性差异（p<0.05），但ISMN组与衍生物组之间无显著性差异（p>0.05）。

实施例7：单硝酸异山梨酯硬脂酸衍生物脂质体增强了阿霉素长循环脂质体的抗癌疗效

将S180细胞悬液1.0×10⁷个/ml，经皮下注射0.1mL，接种于雌性ICR小鼠右背侧，接种当天为第0天，记作d0。25±2℃条件下饲养，自由饮水、饮食。当肿瘤体积达到100mm³时（d4），按肿瘤体积将荷瘤小鼠随机分为7组，每组10只。依次为：

第一组：blank-lip1（用于载单硝酸异山梨酯及衍生物的空白脂质体1，组成成分是10.0mg/ml蛋黄磷脂、3.0mg/ml胆固醇、3.6mg/mlTPGS，生理盐水为溶剂）+blank-lip2（用于载化疗药的空白脂质体2，组成成分为：9.58mg/ml氢化大豆磷脂、3.19mg/ml胆固醇、3.19mg/ml PEG2000-DSPE、100mg/ml蔗糖溶液，pH6.5）。

第二组：blank-lip1+dox-lip-5(盐酸阿霉素长循环脂质体注射液，Doxil市售品，5mg/kg)

第三组：blank-lip1+dox-lip-10(盐酸阿霉素长循环脂质体注射液，Doxil市售品，10mg/kg)

第四组：ISMN(单硝酸异山梨酯注射液，10mg/kg，以生理盐水为溶剂配制)+dox-lip-5(盐酸阿霉素长循环脂质体注射液，Doxil市售品，5mg/kg)

第五组：ISMN(单硝酸异山梨酯注射液，10mg/kg，以生理盐水为溶剂配制)+dox-lip-10(盐酸阿霉素长循环脂质体注射液，Doxil市售品，10mg/kg)

第六组：ISMN-18(单硝酸异山梨酯硬脂酸衍生物脂质体注射液，23mg/kg，与单硝酸异山梨酯等摩尔量，实施例5方法制得)+dox-lip-5(盐酸阿霉素长循环脂质体注射液，Doxil市售品，5mg/kg)

第七组：ISMN-18(单硝酸异山梨酯硬脂酸衍生物脂质体注射液，23mg/kg，与单硝酸异山梨酯等摩尔量，实施例5方法制得)+dox-lip-10(盐酸阿霉素长循环脂质体注射液，Doxil市售品，10mg/kg)组。

于d4、d7和d10，分别经瘤内注射给予空白纳米脂质10.1mL或单硝酸异山梨酯及衍生物，10min内经尾静脉给予dox-lip或空白脂质体2。

结果当阿霉素长循环脂质体单次给药剂量为5mg/kg，每3天给药1次，ISMN注射液或ISMN-18脂质体注射液与阿霉素脂质体联合用药组（第四组、第六组），S180肿瘤的生长得到了显著的抑制。ISMN-18脂质体优于ISMN组，不仅延缓了肿瘤溃疡的出现时间，且与阿霉素长循环脂质体5mg/kg联合用药组的抑瘤疗效与阿霉素长循环脂质体10mg/kg的疗效相当。但当阿霉素单次给药剂量提高至10mg/kg时，因剂量太高，则未体现NO供体单硝酸异山梨酯及衍生物的贡献。由此可见，将单硝酸异山梨酯进行硬脂酸酯化后，提高了药物的脂溶性，进一步做成脂质体后，在瘤内停留时间长，故疗效更显著。

Claims (10)

1.一种如式（II）所示的单硝酸异山梨酯衍生物

式（II）中，R为C1~C29的烷基。

2.如权利要求1所述的单硝酸异山梨酯衍生物，其特征在于所述R为C11-C21的烷基。

3.如权利要求1所述的单硝酸异山梨酯衍生物的制备方法，其特征在于所述方法为：如式（I）所示的单硝酸异山梨酯和脂肪酸RCOOH经Steglich酯化反应，制得如式（II）所示的单硝酸异山梨酯衍生物；所示脂肪酸RCOOH中，R为C1~C29的烷基

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述方法为：如式（I）所示的单硝酸异山梨酯和脂肪酸RCOOH在有机溶剂中，在催化剂和脱水剂的作用下，室温下搅拌反应8~24小时，反应结束后，反应液后处理制得所述如式（II）所示的单硝酸异山梨酯衍生物；所述如式（I）所示的单硝酸异山梨酯和脂肪酸RCOOH的物质的量之比为1:0.5~2；所述催化剂为4-N,N-二甲氨基吡啶；所述脱水剂为1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐；所述有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、二甲亚砜或四氢呋喃。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述催化剂的物质的量用量为单硝酸异山梨酯和脂肪酸总的物质的量的0.01%～15%。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述脱水剂与单硝酸异山梨酯的物质的量之比为0.02～1.5：1。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述反应液后处理方法为：反应结束后，反应液用饱和NaHCO₃溶液、去离子水洗涤，收集有机层，干燥后过滤，滤液减压蒸馏除去溶剂，制得如式（II）所示的单硝酸异山梨酯衍生物。

8.如权利要求1或2所述的单硝酸异山梨酯衍生物制备得到的单硝酸异山梨酯衍生物脂质纳米粒。

9.如权利要求8所述的单硝酸异山梨酯衍生物脂质纳米粒在制备治疗实体瘤药物中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于所述应用的方法为，将单硝酸异山梨酯衍生物脂质纳米粒与纳米靶向抗癌药进行联合用药。

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