CN103127524A - 一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法 - Google Patents
一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103127524A CN103127524A CN2013100576666A CN201310057666A CN103127524A CN 103127524 A CN103127524 A CN 103127524A CN 2013100576666 A CN2013100576666 A CN 2013100576666A CN 201310057666 A CN201310057666 A CN 201310057666A CN 103127524 A CN103127524 A CN 103127524A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tos
- solution
- nhac
- add
- polyamide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 title claims abstract description 71
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 title claims abstract description 71
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 claims abstract description 84
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 63
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 19
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 61
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 47
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 33
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims description 24
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 24
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 12
- IELOKBJPULMYRW-NJQVLOCASA-N D-alpha-Tocopheryl Acid Succinate Chemical compound OC(=O)CCC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C IELOKBJPULMYRW-NJQVLOCASA-N 0.000 claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 229940099418 d- alpha-tocopherol succinate Drugs 0.000 claims description 7
- 229920000962 poly(amidoamine) Polymers 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 4
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 abstract description 36
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 abstract description 36
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 35
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 22
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 19
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 106
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 20
- 239000000463 material Substances 0.000 description 20
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 9
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 5
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 230000000235 effect on cancer Effects 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 3
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 3
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 3
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 3
- HVXBOLULGPECHP-WAYWQWQTSA-N Combretastatin A4 Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1\C=C/C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 HVXBOLULGPECHP-WAYWQWQTSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 2
- 229960005537 combretastatin A-4 Drugs 0.000 description 2
- HVXBOLULGPECHP-UHFFFAOYSA-N combretastatin A4 Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C=CC1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 HVXBOLULGPECHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M lipoate Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 2
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILUSBJDVXKZYEP-UHFFFAOYSA-N 4-(aminomethyl)oxan-4-ol;hydrochloride Chemical compound Cl.NCC1(O)CCOCC1 ILUSBJDVXKZYEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 210000000712 G cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical class C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 125000003929 folic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000008204 material by function Substances 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 150000003712 vitamin E derivatives Chemical class 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明涉及一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，包括：将EDC溶液，加入α-Tos溶液，反应，得溶液；将第五代聚酰胺-胺树状大分子溶液，加入上述溶液，反应，即得G5.NH2-α-Tos；将G5.NH2-α-Tos溶液，加入三乙胺、乙酸酐溶液，反应，即得G5.NHAc85-α-Tos；将G5.NHAc85-α-Tos溶液，加入FI溶液，反应即得G5.NHAc85-α-Tos-FI；将FA溶液，加入EDC，搅拌，加入到G5.NHAc85-α-Tos-FI的DMSO溶液中，搅拌反应，即得。该发明制备方法简单，适合于规模化生产，对高叶酸受体表达的癌细胞具有靶向的治疗效果。
Description
技术领域
本发明属于树状大分子负载材料的制备领域，特别涉及一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法。
背景技术
传统的化疗药物有其局限性，例如，它们不能对肿瘤进行靶向治疗，导致不仅对肿瘤组织有杀伤作用，而且对人体的正常组织和器官都有毒副作用。另外，多数抗癌药物缺乏水溶性和生物利用度，极大地限制了它们在癌症治疗方面的应用。包括脂质体、聚合物胶束、纳米颗粒和树状大分子在内的载体系统正逐渐成为发展前景良好的新型药物载体，能够克服传统化疗药物的缺陷。树状大分子由于其单分散性良好，高密度的外围官能团，良好的球形结构而引起了广泛的关注。这些特点使得树状大分子在基因治疗、药物载体、催化、生物传感器、光子学以及电子学各方面都有重要的应用。
作为最早合成以及应用最广泛的树状大分子，聚酰胺-胺树状大分子在药物载体方面的应用引起了非常广泛的关注。其内部的空腔结构可以包裹水溶性差的药物，以增强其控释效果以及水溶性。例如，Zhang等人用叶酸修饰的聚酰胺-胺树状大分子作为药物载体，物理包裹了药物分子combretastatin A4（CA4）。一方面使CA4的水溶性大大提高，另一方面，被多功能的树状大分子包裹的CA4仍然具有生物活性，并且对高叶酸受体表达的癌细胞具有靶向的杀伤作用（Zhang,M.,R.Guo,et al.,International journal ofnanomedicine,2011,6,2337-2349）。除了物理包裹外，抗癌药物分子也可以共价键修饰在树状大分子外围，如Baker等人将氨甲喋呤药物共价修饰在树状大分子表面，也可以完成对癌细胞的靶向化疗（I.J.Majoros,T.P.Thomas,C.B.Mehta and J.R.Baker,Jr,J.Med.Chem.,2005,48,5892--5899）。这表明聚酰胺-胺树状大分子作为药物载体既可以以物理包裹形式，也可以以共价修饰形式完成对药物的负载。
alpha-维生素E琥珀酸酯，简称α-Tos，是维生素E的衍生物。研究表明，α-Tos可以通过诱导凋亡、G cell循环阻断、诱发细胞变异、DNA合成阻滞、诱导TGF-bs分泌和激活以及TGF-2受体的表达增强，从而对人体的多种癌细胞都有一定的治疗效果（Yu,W.,B.G.Sanders,et al.,Cancer research,2003,63(10):2483-2491）。更重要的是，α-Tos的抗肿瘤效果已被证明对普通的细胞无害。但由于其较差的水溶性，传统的将α-Tos溶解在乙醇溶液中的方法极大地限制了它的生物学应用。因此，用一种合适的药物载体来负载α-Tos以提高其水溶性以及生物利用度非常重要。例如，Young-Wook Won等将重组人体明胶（rHG）和硫辛酸（LA）化学键合，得到一种既有亲水端又有疏水端的复合物rHG-LA，并以此复合物形成胶束来物理包裹α-Tos，实现了对α-Tos的成功负载（Won,Y.W.,S.M.Yoon,et al.,Advanced FunctionalMaterials,2012,41,1-10）。然而很少有关于化学键合药物分子α-Tos的研究。树状大分子-药物共轭体可以通过将药物分子化学键合到树状大分子的表面功能基团来制得。由于树状大分子表面大量的功能基团，一个树状大分子可以化学键合多个药物分子，而且药物分子的数量可随不同的反应条件而改变。
检索国内外有关多功能树状大分子负载α-Tos药物方面的文献和专利结果表明：目前没有将抗癌药物α-Tos通过共价键直接连接到聚酰胺-胺树状大分子上实现对抗癌药物α-Tos靶向传递的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，本发明的制备方法简单，适合于规模化生产；所采用的第五代聚酰胺-胺树状大分子（PAMAM）的尺寸大小约为5.4nm，其在血液循环中可以直接从肾脏中排出，无需生物降解；本发明的多功能的树状大分子负载疏水性药物α-Tos后，α-Tos的水溶性大大提高，被多功能的树状大分子负载的α-Tos仍然具有生物活性，并且对高叶酸受体表达的癌细胞具有靶向的治疗效果。
本发明的一种聚酰胺-胺树状大分子负载alpha-维生素E琥珀酸酯的方法
（1）将19.1-20.2mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC溶解于5-10mL溶剂中，加入5-10mL含10.6-11.2mg维生素E琥珀酸酯α-Tos的溶液，反应3-4h，得溶液；将52-55mg的第五代聚酰胺-胺树状大分子溶解于5-10mL的溶剂中，加入上述溶液，反应24-48h，透析，冻干，即得G5.NH2-α-Tos；
（2）将50.0-51.7mg G5.NH2-α-Tos溶解在5-10mL溶剂中，加入三乙胺溶液，然后加入乙酸酐溶液，搅拌反应24-48h，透析，冻干，即得G5.NHAc85-α-Tos；
（3）将40-45mg的G5.NHAc85-α-Tos溶解于5-10mL的溶剂中，加入5-10mL含2.6-2.9mg异硫氰酸荧光素FI的溶液，反应48-72h，透析，冻干，即得G5.NHAc85-α-Tos-FI；
（4）将2.4-2.8mg的叶酸FA溶解在5-10mL的溶剂当中，然后加入10.4-12.2mg EDC，搅拌反应3-4h后，将混合溶液加入到5-10mL含35-40mg G5.NHAc85-α-Tos-FI的溶液当中，搅拌反应3-4天，透析，冻干，即得G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA。
所述步骤（1）中EDC和维生素E琥珀酸酯α-Tos的摩尔比为5:1。
所述步骤（1）中加入含维生素E琥珀酸酯的溶液后，反应3h，加入第五代聚酰胺-胺树状大分子后，反应时间为2d。
所述步骤（2）中三乙胺（N(C2H5)3）、乙酸酐（Ac2O）和G5.NH2-α-Tos的摩尔比为102:85:1。所述步骤（3）中FI和G5.NHAc85-α-Tos的摩尔比为5:1。
所述步骤（3）中反应时间为1d。
所述步骤（4）中EDC与FA的摩尔比为5：1；FA与G5.NH2-α-Tos-FI的摩尔比为5：1。
所述步骤（4）中在FA的溶液中加入EDC溶液，搅拌反应3h；将G5.NH2-α-Tos-FI溶液加入到经EDC活化的FA溶液中，搅拌反应1d。
所述步骤（1）、（2）、（3）和（4）中的溶剂为二甲基亚砜DMSO。
所述步骤（1）、（2）、（3）和（4）中透析为用纤维素透析膜MWCO=14000，在磷酸盐缓冲溶液和蒸馏水中或在蒸馏水中透析，透析时间为2-4天。
所述步骤（1）中的透析为水中(4Lx6)透析3天。
所述步骤（2）中在PBS缓冲液（4Lx3）和水（4Lx3）中透析3天。
所述步骤（3）中在水（4Lx6）中透析3天。
所述步骤（4）中水（4Lx6）中透析3天。
本发明中，我们将抗肿瘤药物α-Tos通过共价键直接连接到聚酰胺-胺树状大分子表面，并且在树状大分子表面也同时修饰了异硫氰酸荧光素和叶酸，分别用作荧光标记和靶向试剂。据我们所知，这是首次将抗癌药物α-Tos通过共价键直接连接到聚酰胺-胺树状大分子上，构建基于树状大分子的纳米抗癌药物输送体系。
对负载抗癌药物的多功能聚酰胺-胺树状大分子的制备、表征、生物活性及体外肿瘤靶向治疗评价，我们做了详细表征和测试，结果如下：
（1）NMR测试结果
NMR测试结果表明：以第五代树状大分子为模板，我们成功合成了多功能树状大分子载药复合物G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA。通过峰面积积分计算可知，每个树状大分子表面键合了5个α-Tos药物分子，每个树状大分子表面键合的FI和FA的个数分别是4.5和5.3。参见附图说明2。
（2）UV-Vis测试结果
UV-Vis图谱显示，修饰了α-Tos的树状大分子显示了与自由的α-Tos相类似的特征峰，修饰了FI的树状大分子在500nm处有FI的特征吸收峰，修饰了FA的树状大分子在280nm处有FA的特征吸收峰，证明我们已成功合成了G5.NH2-α-Tos，G5.NHAc85-α-Tos，G5.NHAc85-α-Tos-FI以及G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA。参见附图说明3。
（3）MTT细胞活力测定结果
用自由α-Tos和G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA(12.5，25，50，100和200μM)分别作用于KB细胞，发现α-Tos的药物治疗效果并没有因为其与树状大分子健合而丧失。在α-Tos的浓度为50μM的时候,G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA较自由α-Tos药物有更加明显的癌细胞杀伤作用，并有显著性差异。说明G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA复合物对KB细胞有显著的治疗效果。参见附图说明4。
（4）相差显微镜观察结果
相差显微镜观察KB细胞形貌的结果表明：G5.NHAc85-FI-FA-α-Tos复合物和相同浓度的自由的α-Tos均导致了相类似的细胞形态变化，KB细胞发生大面积的团聚现象，说明大部分细胞已经凋亡，这些观察结果和MTT细胞毒性实验数据一致。说明α-Tos化学键合到聚酰胺-胺树状大分子后仍然具有与自由药物α-Tos相类似的生物活性。参见附图说明5。
（5）激光共聚焦显微镜观察结果
激光共聚焦显微镜图片表明，用G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA和G5.NHAc85-α-Tos-FI复合物分别作用于高叶酸受体表达的KB细胞（KB-HFAR细胞）和低叶酸受体表达的KB细胞（KB-LFAR细胞）1h后，G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA作用的KB-HFAR细胞呈现明显的荧光，而G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA作用的KB-LFAR细胞没有明显的荧光；同时G5.NHAc85-α-Tos-FI作用的KB-HFAR细胞及KB-LFAR细胞均没有明显的荧光。说明G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA复合物可特异性的结合叶酸受体过表达的KB-HFAR细胞。参见附图说明6。
（6）流式细胞仪荧光检测结果
流式细胞仪荧光检测分析结果表明，用G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA和G5.NHAc85-α-Tos-FI复合物分别作用于高叶酸受体表达的KB细胞（KB-HFAR细胞）和低叶酸受体表达的KB细胞（KB-LFAR细胞）1h后，G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA作用的KB-HFAR细胞的平均荧光强度值更高，而G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA作用的KB-LFAR细胞的平均荧光强度值相对较低；同时G5.NHAc85-α-Tos-FI作用的KB-HFAR细胞及KB-LFAR细胞的平均荧光强度值和G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA作用的KB-LFAR细胞的平均荧光强度值相似，均呈现出相对较低的平均荧光强度值。说明叶酸修饰的G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA被KB细胞摄取的更多，对KB细胞呈现出特异性的靶向结合效果。参见附图说明7。
（7）靶向MTT细胞活力测定结果
靶向MTT细胞活力测定结果表明，用含相同浓度α-Tos（50μM）的G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA和G5.NHAc85-α-Tos-FI分别作用于KB-HFAR细胞和KB-LFAR细胞3h后，清洗细胞，更换新鲜的不含药物的培养液继续培养48h。MTT测试结果表明，G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA作用的KB-HFAR细胞的存活率低于KB-LFAR细胞的存活率，且具有显著性差异；G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA作用的KB-HFAR细胞的存活率低于G5.NHAc85-α-Tos-FI作用的KB-HFAR细胞的存活率且具有显著性差异。说明本发明中制备得到的G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA在浓度为50μM且孵化癌细胞3h后，对高叶酸受体表达的细胞具有靶向作用，因此高叶酸受体表达的细胞活力低于低叶酸受体表达的细胞活性，且具有显著性差异，参见说明书附图8，说明叶酸修饰的材料能够被表面有高叶酸受体表达的癌细胞吞噬，从而实施对癌细胞的特异性治疗。
以第五代聚酰胺-胺树状大分子为平台，合成具有靶向功能和标记功能的多功能药物载体，并用其化学键合α-Tos药物分子，构建出新型纳米药物输送体系，用于癌症的靶向治疗研究。本发明涉及了两个基本原理：
（1）充分利用聚酰胺-胺树状大分子的表面大量的可修饰化氨基，在其表面修饰靶向基团叶酸（FA）、异硫氰酸荧光素（FI）和抗肿瘤药物alpha-维生素E琥珀酸酯（α-Tos），可制备得到新型多功能树状大分子。
（2）由于α-Tos具有疏水性，因此通过将α-Tos和聚酰胺-胺树状大分子化学键和，可提高其水溶性，与此同时也提高了药物的生物利用度和血液循环时间。
有益效果
（1）本发明的制备方法简单，适合于规模化生产；所采用的第五代聚酰胺-胺树状大分子（PAMAM）的尺寸大小约为5.4nm，其在血液循环中可以直接从肾脏中排出，无需生物降解；
（2）本发明的多功能的树状大分子负载疏水性药物α-Tos后，α-Tos的水溶性大大提高，被多功能的树状大分子负载的α-Tos仍然具有生物活性，并且对高叶酸受体表达的癌细胞具有靶向的治疗效果。
附图说明
图1为本发明制备的多功能树状大分子G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA的合成路线图；
图2为本发明制备的多功能树状大分子G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA的1H NMR图谱；
图3分别为G5.NH2（a）、G5.NH2-α-Tos（b）、G5.NHAc85-α-Tos（c）、G5.NHAc85-α-Tos-FI（d）、G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA（e）和自由α-Tos（f）的UV-Vis图谱；
图4分别为未处理的、1μL乙醇、10μL PBS、G5.NHAc85-FI-FA、溶于1μL乙醇的自由α-Tos（12.5，25，50，100和200μM）、G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA（α-Tos浓度为12.5，25，50，100和200μM）处理48小时后的KB细胞的细胞活力；
图5分别为未处理的（A）、1μL乙醇（B）、溶于1μL乙醇的100μM的α-Tos（C）、10μL PBS（D）、G5.NHAc85-FI-FA（E）和α-Tos浓度为100μM的G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA（F）处理48小时后的KB细胞的相差显微镜图片；
图6分别为用PBS处理的KB-HFAR细胞(a)，G5.NHAc85-α-Tos-FI复合物([α-Tos]=0.4μM)处理的KB-HFAR细胞（b）和KB-LFAR细胞（c），G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA复合物([α-Tos]＝0.4μM)处理的KB-HFAR细胞（d）和KB-LFAR细胞（e）的激光共聚焦显微镜图片，处理时间为1h；
图7为流式细胞仪荧光检测结果，其中各项分别为PBS处理的KB-HFAR细胞(a)，G5.NHAc85-α-Tos-FI复合物([α-Tos]=0.4μM)处理的KB-LFAR细胞（b）和KB-HFAR细胞（c），G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA复合物([α-Tos]=0.4μM)处理的KB-LFAR细胞（d）和KB-HFAR细胞（e）的流式细胞仪荧光图片，以及KB细胞的荧光强度分析数据图(f)，培养时间为1h；
图8为KB-HFAR细胞和KB-LFAR细胞分别经G5.NHAc85-α-Tos-FI和G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA复合物处理的细胞活力值，载药复合物与细胞作用3h后，弃掉含复合物的培养基，清洗细胞，并更换不含复合物的新鲜培养液，继续培养48小时后测定细胞活力。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
将19.1mg的EDC溶解于5mL的DMSO溶液中，在搅拌的情况下，逐滴加入5mL含10.6mgα-Tos的DMSO溶液，反应3-4h。将52.0mg的第五代聚酰胺-胺树状大分子溶解于5mL的DMSO溶液中，在搅拌的情况下，逐滴加入上述活化溶液，反应48h，将反应溶液放入透析袋中透析，最后将透析袋中的溶液冻干即得G5.NH2-α-Tos；其中α-Tos:G5.NH2的摩尔比为5：1。
将50mg G5.NH2-α-Tos溶解在5mL DMSO溶液当中，缓慢加入27.9μl三乙胺，然后逐滴地加入15.9μl的乙酸酐溶液，搅拌反应1天，将反应溶液放入透析袋中透析，最后将透析袋中的溶液冻干即得G5.NHAc85-α-Tos；
将40mg的G5.NHAc85-α-Tos溶解于5mL的DMSO溶液中，在搅拌的情况下，逐滴加入5mL含2.6mg FI的DMSO溶液，反应24h，将反应溶液放入透析袋中透析，最后将透析袋中的溶液冻干即得G5.NHAc85-α-Tos-FI；
将2.4mgFA溶解在5mL的DMSO溶液当中，然后加入10.4mg EDC，在室温条件下搅拌反应4h后，将混合溶液逐滴地加入到5mL含35.0mg G5.NHAc85-α-Tos-FI的DMSO溶液当中，搅拌反应3天，将反应溶液放入透析袋中透析，最后将透析袋中的溶液冻干即得G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA复合物。
NMR测试结果表明：以第五代树状大分子为模板，已经成功合成了多功能的树状的分子G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA，每一个树状大分子表面健合了5个α-Tos分子；每一个树状大分子表面分别健合了4.5和5.3个FI和FA。结果如附图说明书2所示。
UV-Vis测试结果表明：以第五代树状大分子为模板，成功合成了树状大分子G5.NH2-α-Tos、G5.NHAc85-α-Tos、G5.NHAc85-α-Tos-FI和G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA。结果如附图说明书3所示。
实施例2
将8.6mg的EDC溶解于5mL的DMSO溶液中，在搅拌的情况下，逐滴加入5mL含4.77mgα-Tos的DMSO溶液，反应4h。将23.4mg的第五代聚酰胺-胺树状大分子溶解于5mL的DMSO溶液中，在搅拌的情况下，逐滴加入上述活化溶液，反应48h，将反应溶液放入透析袋中透析，最后将透析袋中的溶液冻干即得G5.NH2-α-Tos；其中α-Tos:G5.NH2的摩尔比为5：1。
将27.5mg G5.NH2-α-Tos溶解在5mL DMSO溶液当中，缓慢加入15.4μl三乙胺，然后逐滴地加入8.8μl的乙酸酐溶液，搅拌反应1天，将反应溶液放入透析袋中透析，最后将透析袋中的溶液冻干即得G5.NHAc85-α-Tos；
将18mg的G5.NHAc85-α-Tos溶解于5mL的DMSO溶液中，在搅拌的情况下，逐滴加入5mL含1.2mg FI的DMSO溶液，反应24h，将反应溶液放入透析袋中透析，最后将透析袋中的溶液冻干即得G5.NHAc85-α-Tos-FI；
将0.8mg FA溶解在5mL的DMSO溶液当中，然后加入3.4mg EDC，在室温条件下搅拌反应4h后，将混合溶液逐滴地加入到5mL含11.6mg G5.NHAc85-α-Tos-FI的DMSO溶液当中，搅拌反应3天，将反应溶液放入透析袋中透析，最后将透析袋中的溶液冻干即得G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA复合物。
NMR测试结果表明：以第五代树状大分子为模板，已经成功合成了多功能的树状的分子G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA，每一个树状大分子表面健合了5个α-Tos分子；每一个树状大分子表面分别健合了4.5和5.3个FI和FA。结果如附图说明书2所示。
UV-Vis测试结果表明：以第五代树状大分子为模板，已经成功合成了多功能的树状的分子G5.NH2-α-Tos、G5.NHAc85-α-Tos、G5.NHAc85-α-Tos-FI和G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA。结果如附图说明书3所示。
实施例3
以MTT测试来检测制备得到的G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA的药物活性，将不同浓度的材料（其各自的α-Tos终浓度均为12.5，25，50，100和200μM）孵化KB细胞48h后，将材料倒掉，加入180μL培养基和20μLMTT。在37℃孵化4h后，将培养液倒掉，加入200μLDMSO，摇床振摇20min后，用酶标仪测得结果，得到图4所示数据。结果表明在一定浓度范围内实施例1材料促进了癌细胞的凋亡，且较自由药物α-Tos而言，在浓度为12.5，25，50μM时，实施例1中材料对癌细胞的致死效果更为明显，起到药物治疗作用，同时有显著性差异，且载体材料不存在毒性。
实施例4
以共聚焦显微镜测试来证明制备得到的复合物G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA的靶向性。将KB细胞种于放有盖玻片的12孔板，5×104细胞/孔，KB细胞分为高叶酸受体表达和低叶酸受体表达，使用2.5μM叶酸处理的细胞为低叶酸受体表达的KB细胞，未使用叶酸处理的细胞为高叶酸受体表达的KB细胞。各细胞使用等体积的PBS处理，孵化24h后，分别在每孔加100μL实施例1中的材料和900μL培养基。各材料的终浓度为400nM，孵化1h后将材料吸出，用PBS洗2-3次，每孔加入2.5%戊二醛500μL，固定15min，再用PBS洗2-3次，加1μg/mL Hoechst33342 500μL染色20min后，用PBS洗2-3次，将盖玻片上的细胞封片至载玻片上。在共聚焦显微镜下拍摄，结果表明用浓度为400nM的G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA孵化癌细胞1h，对高叶酸受体表达的癌细胞具有靶向作用，不带叶酸的材料G5.NHAc85-α-Tos-FI对高低叶酸受体表达的癌细胞不具靶向作用，通过共聚焦显微镜图片可清晰的看到实施例1材料进入了高叶酸受体表达细胞的细胞质中，说明制得的材料对高叶酸受体表达细胞具有特异靶向性，参见附图6。
实施例5
以流式细胞测试来证明制备得到的复合物G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA的靶向性。将KB细胞种于12孔板，2×105细胞/孔，KB细胞分为高叶酸受体表达和低叶酸受体表达，使用2.5μM叶酸处理的细胞为低叶酸受体表达的KB细胞，未使用叶酸处理的细胞为高叶酸受体表达的KB细胞。各细胞使用等体积的PBS处理，孵化24h后，分别在每孔加100μL实施例1中的材料和900μL培养基，各材料的终浓度为400nM。孵化1h后将材料吸出，用PBS洗2-3次，用胰蛋白酶将细胞悬浮，离心后，溶于1mLPBS中，使用流式细胞仪进行测量。结果表明用浓度为400nM的G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA孵化癌细胞1h，对高叶酸受体表达的癌细胞具有靶向作用，不带叶酸的材料G5.NHAc85-α-Tos-FI对高低叶酸受体表达的癌细胞不具靶向作用，通过荧光强度的显著性差异说明制得的实施例1材料对高叶酸受体表达细胞具有特异性，参见说明书附图7。该结果与共聚焦显微镜测试结果相一致，共同说明实施例1材料对于癌细胞的靶向特异性。
实施例6
以MTT测试实验来检测得到的复合物G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA的靶向治疗效果，将KB细胞种于96孔板，1×104细胞/孔。KB细胞分为高叶酸受体表达和低叶酸受体表达，使用2.5μM叶酸处理的细胞为低叶酸受体表达的KB细胞，未使用叶酸处理的细胞为高叶酸受体表达的KB细胞。各细胞使用等体积的PBS处理，孵化24h后，每孔加10μLα-Tos浓度为125μM的实施例1材料G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA，G5.NHAc85-α-Tos-FI及90μL培养基，各材料的α-Tos终浓度为50μM。孵化3h后，将培养液倒掉，换新培养基孵化48h后，加入180μL培养基和20μLMTT。在37℃孵化4h后，将MTT倒掉，加入200μLDMSO，摇床振摇20min后，用酶标仪测得结果。结果表明α-Tos浓度为50μM的G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA孵化癌细胞3h，高叶酸受体表达的细胞活力远低于低叶酸受体表达的细胞活力，且具有显著性差异，说明对高叶酸受体表达的细胞具有靶向作用，参见附图8，说明叶酸修饰的材料能够被表面有高叶酸受体表达的癌细胞吞噬，从而实施对癌细胞的特异性治疗。
Claims (10)
1.一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，包括：
（1）将19.1-20.2mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC溶解于5-10mL的溶剂中，加入5-10mL含10.6-11.2mg维生素E琥珀酸酯α-Tos的溶液，反应3-4h，得溶液；将52-55mg的第五代聚酰胺-胺树状大分子溶解于5-10mL的溶剂中，加入上述溶液，反应24-48h，透析，冻干，即得G5.NH2-α-Tos；
（2）将50.0-51.7mg G5.NH2-α-Tos溶解在5-10mL溶剂中，加入三乙胺溶液，然后加入乙酸酐溶液，搅拌反应24-48h，透析，冻干，即得G5.NHAc85-α-Tos；
（3）将40-45mg的G5.NHAc85-α-Tos溶解于5-10mL的溶剂中，加入5-10mL含2.6-2.9mg异硫氰酸荧光素FI的溶液，反应48-72h，透析，冻干，即得G5.NHAc85-α-Tos-FI；
（4）将2.4-2.8mg的叶酸FA溶解在5-10mL的溶剂中，然后加入10.4-12.2mg EDC，搅拌反应3-4h后，将混合溶液加入到5-10mL含35-40mg G5.NHAc85-α-Tos-FI的溶液中，搅拌反应3-4天，透析，冻干，即得G5.NHAc85-α-Tos-FI-FA。
2.根据权利要求1所述的一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中EDC和维生素E琥珀酸酯α-Tos的摩尔比为5:1。
3.根据权利要求1所述的一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中加入含维生素E琥珀酸酯的溶液后，反应3h，加入第五代聚酰胺-胺树状大分子后，反应时间为48h。
4.根据权利要求1所述的一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中三乙胺、乙酸酐和G5.NH2-α-Tos的摩尔比为102:85:1。
5.根据权利要求1所述的一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中FI和G5.NHAc85-α-Tos的摩尔比为5:1。
6.根据权利要求1所述的一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中反应时间为1d。
7.根据权利要求1所述的一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中EDC与FA的摩尔比为5：1；FA与G5.NH2-α-Tos-FI的摩尔比为5：1。
8.根据权利要求1所述的一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中在FA的溶液中加入EDC的溶液，搅拌反应3h；将G5.NH2-α-Tos-FI的溶液加入到经EDC活化的FA溶液中，搅拌反应1d。
9.根据权利要求1所述的一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）、（2）、（3）和（4）中的溶剂为二甲基亚砜DMSO。
10.根据权利要求1所述的一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）、（2）、（3）和（4）中透析为用纤维素透析膜MWCO=14000，在磷酸盐缓冲溶液和蒸馏水中或在蒸馏水中透析，透析时间为2-4天。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310057666.6A CN103127524B (zh) | 2013-02-22 | 2013-02-22 | 一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310057666.6A CN103127524B (zh) | 2013-02-22 | 2013-02-22 | 一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103127524A true CN103127524A (zh) | 2013-06-05 |
| CN103127524B CN103127524B (zh) | 2014-10-15 |
Family
ID=48488389
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310057666.6A Expired - Fee Related CN103127524B (zh) | 2013-02-22 | 2013-02-22 | 一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103127524B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103290695A (zh) * | 2013-06-21 | 2013-09-11 | 东华大学 | 一步实现γ-PGA纳米纤维的水稳定性处理和功能化修饰的方法 |
| CN105384942A (zh) * | 2015-12-07 | 2016-03-09 | 江南大学 | 一种可降解的树枝状磷酸酯聚合物 |
| CN110201176A (zh) * | 2019-06-13 | 2019-09-06 | 东华大学 | 一种多级缓释载药纳米短纤维的制备方法 |
| CN114196028A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-03-18 | 浙江工业大学 | Pamam-tpgs及其制备方法与应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101531800A (zh) * | 2009-04-14 | 2009-09-16 | 东华大学 | 癌细胞靶向诊断聚酰胺胺/碳纳米管复合材料的制备方法 |
-
2013
- 2013-02-22 CN CN201310057666.6A patent/CN103127524B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101531800A (zh) * | 2009-04-14 | 2009-09-16 | 东华大学 | 癌细胞靶向诊断聚酰胺胺/碳纳米管复合材料的制备方法 |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103290695A (zh) * | 2013-06-21 | 2013-09-11 | 东华大学 | 一步实现γ-PGA纳米纤维的水稳定性处理和功能化修饰的方法 |
| CN103290695B (zh) * | 2013-06-21 | 2016-02-17 | 东华大学 | 一步实现γ-PGA纳米纤维的水稳定性处理和功能化修饰的方法 |
| CN105384942A (zh) * | 2015-12-07 | 2016-03-09 | 江南大学 | 一种可降解的树枝状磷酸酯聚合物 |
| CN105384942B (zh) * | 2015-12-07 | 2018-01-05 | 江南大学 | 一种可降解的树枝状磷酸酯聚合物 |
| CN110201176A (zh) * | 2019-06-13 | 2019-09-06 | 东华大学 | 一种多级缓释载药纳米短纤维的制备方法 |
| CN114196028A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-03-18 | 浙江工业大学 | Pamam-tpgs及其制备方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103127524B (zh) | 2014-10-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sun et al. | Metal–organic framework nanocarriers for drug delivery in biomedical applications | |
| Feng et al. | Charge-convertible carbon dots for imaging-guided drug delivery with enhanced in vivo cancer therapeutic efficiency | |
| Kommareddy et al. | Preparation and evaluation of thiol-modified gelatin nanoparticles for intracellular DNA delivery in response to glutathione | |
| CN108542885B (zh) | 抗肿瘤药物及其制备方法 | |
| CN105708848B (zh) | 一种环境响应性肿瘤靶向联合给药传递系统 | |
| He et al. | Cationic polymer-derived carbon dots for enhanced gene delivery and cell imaging | |
| CN102302782B (zh) | 一种肝癌细胞靶向的聚酰胺胺树状大分子载体的制备方法 | |
| CN111848975B (zh) | 磷酸化蛋白质、基于磷酸化蛋白质的胞内递送体系及制备方法与应用 | |
| CN104906076B (zh) | 程序化多重靶向的树状大分子组装体药物递送系统及其制备方法和应用 | |
| CN105169400B (zh) | 一种透明质酸靶向的多功能支化聚乙烯亚胺药物载体的制备方法 | |
| CN104474556B (zh) | 碳点作为抗肿瘤药物载体的应用 | |
| CN102234658A (zh) | 靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体、制备方法及应用 | |
| CN110801431A (zh) | 一种核-壳型智能纳米递送系统的构建及应用 | |
| Castanheira et al. | Novel biodegradable laminarin microparticles for biomedical applications | |
| Dong et al. | A Highly Photostable Hyperbranched Polyglycerol‐Based NIR Fluorescence Nanoplatform for Mitochondria‐Specific Cell Imaging | |
| CN103127524B (zh) | 一种聚酰胺-胺树状大分子负载α-Tos的制备方法 | |
| Hao et al. | 5-Boronopicolinic acid-functionalized polymeric nanoparticles for targeting drug delivery and enhanced tumor therapy | |
| CN111544596A (zh) | 一种gsh响应型纳米钻石靶向药物及其制备方法和应用 | |
| CN104146946B (zh) | 一种肝癌靶向的氧化石墨烯载药复合材料及其制备方法 | |
| CN103655587B (zh) | 一种具高度肿瘤识别和环境响应释药能力的树状聚合物递药系统及其构建方法 | |
| CN104814934A (zh) | 一种曲妥株单抗修饰的载紫杉醇的靶向纳米粒传递系统 | |
| CN101148483A (zh) | 叶酸修饰的壳寡糖-硬脂酸嫁接物及制备方法和应用 | |
| CN111870579A (zh) | 一种肿瘤靶向纳米胶束、制备方法及作为药物载体的应用 | |
| CN107929261B (zh) | 一种荷载化疗药物的pH敏感的靶向纳米粒制剂及其制备方法 | |
| CN107007550B (zh) | 一种氧化还原响应性两亲性共聚物及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20141015 Termination date: 20170222 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |