CN103127505B - 他汀类化合物作为治疗糖尿病局部用药物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及他汀类化合物作为治疗糖尿病局部用药物的用途，特别是，公开了骨骼局部施用他汀类促进胰岛素分泌、增强胰岛素敏感性而用于治疗糖尿病。此外，本发明还提供了治疗糖尿病的他汀类化合物局部用组合物。

Description

他汀类化合物作为治疗糖尿病局部用药物的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，更具体地说，涉及HMG-CoA还原酶抑制剂(他汀类化合物)局部用治疗糖尿病的新用途，及其局部用组合物。

背景技术

糖尿病在全世界的发病率有逐年增高的趋势，已经成为世界上继肿瘤、心脑血管病之后第三位严重危害人类健康的慢性疾病。近年来糖尿病的发生率越来越高，患病人数激增。据统计，20岁以上的中国成人中的患病率达到9.7％，患者逼近1亿人。由于糖尿病带来的多系统的并发症具有高死亡率和高致残率，严重危害社会健康，由此带来的高额医疗费用给国家和社会带来沉重的负担。糖尿病主要分为I型(胰岛素依赖型，IDDM)，胰岛素分泌绝对不足，需要外源性胰岛素治疗；和II型(非胰岛素依赖型，NIDDM)，胰岛素相对缺乏所致。NIDDM的特点是空腹高血糖和餐后血浆葡萄糖水平过度增加，在NIDDM中，高血糖与胰岛素抵抗和胰岛素分泌不足导致血糖升高有关。

治疗糖尿病的方法包括胰岛素注射或吸入，以及口服降糖药；其中，口服降糖药包括：

磺酰脲类(例如甲苯磺丁脲、格列本脲、格列吡嗪、格列齐特、格列美脲和格列吡嗪等)；

列奈类(例如瑞格列奈和那格列奈等)；

双胍类(例如二甲双胍和苯乙双胍等)；

胰岛素增效剂(例如罗格列酮和吡格列酮等)；

α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如阿卡波糖和伏格列波糖等)。

以往临床研究中关于口服他汀药物对糖尿病的影响说法不一(SwapnilN.Rajpathak et al.，Statin therapy and risk of developing type 2diabetes：ameta-analysis.Diabetes Care.2009；32(10)：1924-1929.)，甚至有服用他汀类药物可能会增加糖尿病发病率的报道。

覃国珍(临床与实验医学杂志.2010；9(8)：603-604)公开了临床观察口服小剂量阿托伐他汀对2型糖尿病患者血糖的影响。所有患者常规给予降糖药和/或胰岛素治疗，治疗组在原方案基础上给予阿托伐他汀(立普妥，辉瑞公司)10mg/d口服，疗程16周。结果发现，服用阿托伐他汀的患者血糖指标明显地优于对照组。

Michiro，Ishikawa等分别在口服普伐他汀和阿托伐他汀的非糖尿病的高胆固醇血症患者的试验中发现，口服普伐他汀对血糖代谢是有利的，而阿托伐他汀则相反(DOI：10.2169/internalmedicine.45.1476)。Jun Sasaki等在关于他汀类药物对糖尿病和糖代谢影响的综述中描述了口服普伐他汀对糖代谢是有利的，阿托伐他汀(10mg/天)和辛伐他汀(40mg/天)对糖尿病没有影响；而口服普伐他汀和高剂量阿托伐他汀(80mg/天)对糖代谢是不利的(Journal of Atherosclerosis and Thrombosis，第13卷，第3期，第123至129页)。

甚至有临床荟萃分析报道，口服他汀类尽管会减低心血管事件，但会轻度增加糖尿病的风险(Statins and risk of incident diabetes：a collaborativemeta-analysisof randomised statin trials.Lancet.2010；375(9716)：735-742.)，(Risk of incidentdiabetes with intensive-dose compared with moderate-dosestatin therapy：ameta-analysis.JAMA.2011；305(24)：2556-2564.)

但无一例外，上述的这些报道得出的结论都是基于口服他汀类药物。

发明内容

本发明人令人惊奇地发现了局部应用他汀类化合物(HMG-CoA还原酶抑制剂)可维持长时间地促进胰岛素的分泌，增加外周组织的胰岛素敏感性，降低血糖，可用于治疗糖尿病。

本发明的目的提供他汀类化合物(HMG-CoA还原酶抑制剂)作为治疗糖尿病的局部用药物的用途。

本发明的另一目的是提供治疗糖尿病的他汀类化合物的局部用组合物及其制备方法。

具体地说，本发明涉及他汀类化合物(HMG-CoA还原酶抑制剂)在制备用于治疗非胰岛素依赖型糖尿的药物中的用途。药物为非储库形式经局部给药，优选药物为注射剂经骨骼给药，最优选药物为注射剂经骨内给药。单位制剂中他汀类化合物含量为0.1mg至1000mg，优选地为1mg至500mg，更优选地为2mg至200mg。

本申请中他汀类化合物包括辛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀、匹伐他汀、柏伐他汀、西立伐他汀、克伐他汀、达伐他汀、美伐他汀、或替伐他汀，优选辛伐他汀。

他汀类化合物包括药学上可接受盐的形式，选自盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、三氟醋酸盐或乙酸盐、钠盐、钾盐、钙盐或镁盐。

本申请还涉及一种药物组合物用于制备治疗哺乳动物非胰岛素依赖型糖尿病的局部给药制剂的用途，所述的药物组合物含有他汀类化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的辅料。

本申请还涉及一种药物组合物，其特征在于含有他汀类化合物和药学可接受的辅料。

本申请还涉及一种适合骨内注射给药的药物组合物，其特征在于含有他汀类化合物与药学上可接受的辅料。

本申请还涉及一种他汀类药物局部给药制剂，其特征在于含有有效量的他汀类化合物以及药学可接受的辅料，所述有效量是指经局部给药后可有效治疗糖尿病，所述制剂优选为适合骨内给药的注射剂。

本申请还涉及一种制备他汀类化合物制剂的方法，其特征在于将治疗有效量的他汀类化合物与药物可结合受辅料制备为局部给药制剂，优选制备为适合骨内给药的注射剂。

在本发明的实施方案中，所述他汀类局部用药物(或组合物)优选为骨骼内注射给药，本发明所述的他汀类局部用药物可以注射剂的形式存在，所述的注射剂包括但不限于注射溶液、注射用混悬液、注射用乳剂、注射用凝胶、注射用固体形式，或者它们的缓释或控释形式。这里，所述的注射用固体形式是指在使用时与注射用溶媒例如注射用水、注射用生理盐水或注射用葡萄糖溶液等中一种相混合，以便注射应用。

在本发明的实施方案中，所述的他汀类局部用药物(或组合物)是由他汀类化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的辅料组成，这里，所述药学上接受的辅料可选自水溶性溶媒或油性溶媒、分散剂、等渗剂、防腐剂、增溶剂或者稳定剂中的一种或两种以上，其中，水溶性溶媒可选自蒸馏水、生理盐水、格林氏溶液或者磷酸盐缓冲溶液(PBS)等；油溶性溶媒可选自植物油，例如橄榄油、蓖麻油、芝麻油、棉籽油或者玉米油等；分散剂可选自吐温20或吐温80、聚乙二醇、羧甲基纤维素、或者海藻酸钠等；等渗剂可选自氯化钠、甘油、山梨醇、或者葡萄糖等；增溶剂可选自水杨酸钠、帕洛沙姆或者醋酸钠等；防腐剂可选自尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、苯甲醇、氯丁醇、苯甲酸钠、或者苯酚等；稳定剂可选自白蛋白等，如人血清白蛋白、牛血清白蛋白等。此外，所述药学上可接受的辅料还可选自生物可降解的材料，例如聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、聚天冬氨酸等。对于本领域的技术人员而言，可以应用已知的制剂技术来制备本发明的他汀类局部用药物(或组合物)，例如，将他汀类化合物或其药学上可接受的盐与分散剂、和/或等渗剂、和/或防腐剂、和/或增溶剂、和/或稳定剂一起溶解、悬浮或乳化在水溶性溶媒或油性溶媒中(这里，引入Remington：the science andpractice of pharmacy，第21版，LippincottWilliams & Wilkins出版社，2005年，作为参考)。

在本发明中，对哺乳动物给药本发明的他汀类局部用组合物，给药间隔为7天至600天一次，优选地10天至500天一次，更优选地20天至400天一次，特别优选地30天至300天一次。对哺乳动物给药本发明的他汀类局部用组合物，剂量为每次他汀类化合物0.1mg至1000mg，优选地为1mg至500mg，更优选地为2mg至200mg。对于临床医师而言，在本发明的教导下，可根据临床治疗效果的需要，调整或者修改给药的次数和剂量。

在本发明的实施方案中，本发明提供了一种治疗糖尿病的局部用组合物，其中，所述他汀类化合物或其药学上可接受的盐的药理学上有效量是指，剂量为0.1mg至1000mg，优选地为1mg至500mg，更优选地为2mg至200mg。此外，对哺乳动物给药本发明的他汀类局部用组合物，给药间隔为7天至600天一次，优选地10天至500天一次，更优选地20天至400天一次，特别优选地30天至300天一次。对于本领域的技术人员而言，可以根据临床治疗效果的需要，调整或者修改给药的次数和剂量。

在本发明的实施方案中，所述局部用药物(或组合物)优选地为骨骼内给药，这里，所述的骨骼内可任选地选自，但不限于，髂骨、桡骨远端、指骨、胫骨、或椎体等任何方便局部给药的骨骼内，更优选地为含骨髓腔的骨骼内给药。

在本发明的实施方案中，所述的哺乳动物优选地为人类。

经实验证明，本发明的他汀类局部单次用组合物经骨髓腔内给药可显著增高血清胰岛素水平，增强胰岛素敏感性，明显地降低糖尿病哺乳动物的血糖，且单次注射即可持续长时间疗效，避免了目前糖尿病口服降糖药或皮下注射胰岛素等治疗需要每日给药的问题，增强了用药的依附性和方便性，且因为促进自身内源性胰岛素的分泌，作用效果更佳。

附图说明

图1表示的是去卵巢大鼠股骨髓腔内单次局部注射辛伐他汀1月后，血清胰岛素水平变化。

去卵巢大鼠3个月后，在大鼠右侧股骨髓腔内分别注射辛伐他汀(配方见本发明实施例1)，(0，5，10mg)1次，注射1个月后大鼠过量麻醉处死，取血清，测定血清胰岛素。结果显示股骨髓腔内单次注射辛伐他汀后胰岛素分泌显著增高(与对照组比较，*＜0.05，**p＜0.01)。

图2表示的是去卵巢大鼠股骨髓腔内单次局部注射辛伐他汀5个月后，血清胰岛素水平变化。

去卵巢大鼠3个月后，在大鼠右侧股骨髓腔内分别注射辛伐他汀(配方见本发明实施例1)，(0，5，10mg)1次，注射5个月后大鼠过量麻醉处死，取血清，测定血清胰岛素。结果显示股骨髓腔内单次注射辛伐他汀后胰岛素分泌显著增高(与对照组比较，**p＜0.01)。

图3表示的是糖尿病模型大鼠股骨髓腔内局部单次注射辛伐他汀后，8-14周的空腹血糖。

自糖尿病大鼠股骨髓腔内注射辛伐他汀(配方见本发明实施例1)8周至14周，分别在每周的同一时间点，大鼠禁食12h后，针刺实验大鼠尾部，取血，血糖仪测定血糖变化，结果显示糖尿病大鼠股骨髓腔内单次注射辛伐他汀显著降低空腹血糖，且持续最少14周。

图4表示的是糖尿病模型大鼠股骨髓腔内局部单次注射辛伐他汀(配方见本发明实施例1)后，第15周空腹血糖水平，在单次注射15周后仍维持显著疗效。

糖尿病大鼠股骨髓腔内注射辛伐他汀(配方见本发明实施例1)后第15周处死。处死前大鼠禁食8h，大鼠麻醉(10％水合氯醛腹腔内注射麻醉，3ml/kg)下腹主动脉取血致死，分离血清后测定血糖。

图5表示的是糖尿病模型大鼠股骨髓腔内局部单次注射辛伐他汀(配方见本发明实施例1)后，第11周葡萄糖耐量(GTT)实验结果。

按照标准方案，大鼠禁食12h后，腹腔内注射腹葡萄糖(2g/kg)后，血糖仪进行GTT测试。

图6表示的是糖尿病模型大鼠股骨髓腔内局部单次注射辛伐他汀(配方见本发明实施例1)后，第11周胰岛素刺激葡萄糖分泌(ITT)实验结果。

按照标准方案，大鼠禁食12h后，中性胰岛素注射液1U/kg腹腔内注射，血糖仪进行ITT测试。

图7表示的是表示的是糖尿病模型大鼠股骨髓腔内局部单次注射辛伐他汀(配方见本发明实施例1)后，第14周葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验(GSIS)结果。

按照标准方案，大鼠禁食12h，大鼠腹腔内注射葡萄糖(3g/kg，中国大冢制药有限公司)，采集大鼠尾静脉血，微量胰岛素测定试剂盒测定胰岛素水平。

图8表示的是糖尿病模型大鼠股骨髓腔内局部单次注射氟伐他汀(配方见本发明实施例3)1周后，分别在每周的同一时间点，大鼠禁食12h后，针刺实验大鼠尾部，取血，血糖仪测定血糖变化，结果显示糖尿病大鼠股骨髓腔内单次注射氟伐他汀14周后仍维持显著疗效。

图9表示的是糖尿病模型大鼠股骨髓腔内局部单次注射阿托伐他汀(配方见本发明实施例4)1周后，分别在每周的同一时间点，大鼠禁食12h后，针刺实验大鼠尾部，取血，血糖仪测定血糖变化，结果显示糖尿病大鼠股骨髓腔内单次注射阿托伐他汀14周后仍维持显著疗效。

图10表示的是糖尿病模型大鼠股骨髓腔内局部单次注射阿托伐他汀(配方见本发明实施例4)后，第11周葡萄糖耐量(GTT)实验结果。

按照标准方案，大鼠禁食12h后，腹腔内注射腹葡萄糖(2g/kg)后，血糖仪进行GTT测试。

图11表示的是糖尿病模型大鼠股骨髓腔内局部单次注射瑞舒伐他汀(配方见本发明实施例5)1周后，分别在每周的同一时间点，大鼠禁食12h后，针刺实验大鼠尾部，取血，血糖仪测定血糖变化，结果显示糖尿病大鼠股骨髓腔内单次注射瑞舒伐他汀14周后仍维持显著疗效。

图12表示的是糖尿病模型大鼠股骨髓腔内局部单次注射瑞舒伐他汀(配方见本发明实施例5)后，第11周葡萄糖耐量(GTT)实验结果。

按照标准方案，大鼠禁食12h后，腹腔内注射腹葡萄糖(2g/kg)后，血糖仪进行GTT测试。

具体实施方式

下面通过实施例来进一步说明本发明的可实施性，对于本领域的技术人员而言，根据现有技术的教导，在本发明实施方案的指导下，对其中的技术特征进行等同性修改或替换是显而易见的，仍然属于本发明请求保护的范围内。

药物组合物的制备

实施例1

辛伐他汀局部用注射剂制备

将辛伐他汀1000mg溶解于PBS磷酸盐缓冲液10ml(购自北京中杉金桥生物技术有限公司)，PBS溶液中含2％的二甲基亚砜(DimethylSulfoxide，DMSO，购自Sigma公司)和0.1％牛血清白蛋白(Bovine SerumAlbumin，BSA，购自Sigma公司)，将所得到溶液均质，即得。

实施例2

普伐他汀局部用注射剂制备

将普伐他汀钠1000mg混悬于脂肪乳(英脱利匹特)10ml，将得到的溶液均质即得。

实施例3

氟伐他汀局部用注射剂制备

将氟伐他汀钠1000mg溶解于含3％帕洛沙姆188(德国BSF公司)的生理盐水10ml，将得到的溶液均质即得。

实施例4

阿托伐他汀局部用注射剂制备

将阿托伐他汀钙1000mg溶解于PBS磷酸盐缓冲液10ml(购自北京中杉金桥生物技术有限公司)，内含2％的DMSO(二甲基亚砜)，0.1％BSA(牛血清白蛋白，同上PBS)以利于辛伐他汀溶解使得溶液均质便于局部注射给药。

实施例5

瑞舒伐他汀局部用注射剂制备

将瑞舒伐他汀钙1000mg溶解于含3％帕洛沙姆188(德国BSF公司)的生理盐水10ml，将得到的溶液均质即得。

实施例6

辛伐他汀局部用注射剂制备

将辛伐他汀钠1mg混悬于脂肪乳(英脱利匹特)10ml，将得到的溶液均质即得。

实施例7

替伐他汀局部用注射剂制备

将替伐他汀8000mg溶解于PBS磷酸盐缓冲液10ml(购自北京中杉金桥生物技术有限公司)，内含2％的DMSO(二甲基亚砜)，0.1％BSA(牛血清白蛋白，同上PBS)以利于辛伐他汀溶解使得溶液均质便于局部注射给药。

实施例8

匹伐他汀局部用注射剂制备

将匹伐他汀200mg溶解于含3％帕洛沙姆188(德国BSF公司)的生理盐水10ml，将得到的溶液均质即得。

药物制剂的糖尿病药理活性实验

实验例1

去卵巢大鼠股骨髓腔内局部单次注射辛伐他汀后促进胰岛素分泌

按照标准操作程序，切除大鼠双侧卵巢。简言之，3月龄雌性SD大鼠(体重200～250g)麻醉(10％水合氯醛腹腔内注射麻醉，3ml/kg)下，在动物背部左右两侧拉一小切口，在脂肪组织下仔细找到卵巢，经止血钳钳夹止血，切除双侧卵巢。逐层缝合伤口，待手术康复，去双侧卵巢3月后，大鼠被随机分为3组(对照组，辛伐他汀5mg组，辛伐他汀10mg组)，每组12只，麻醉(10％水合氯醛腹腔内注射麻醉，3ml/kg)及无菌条件下右侧股骨大转子下0.5cm切口暴露股骨，在股骨外侧骨穿针(直径1mm)穿透骨皮质，根据实施例1的辛伐他汀注射液制备方法，微量注射器注射辛伐他汀5mg，10mg，对照组单纯注射载体(PBS缓冲液，0.1％BSA，2％DMSO)。骨蜡封闭穿刺针孔。

分别在大鼠股骨髓腔内注射辛伐他汀注射1个月、5个月后，每周随机选取6只，麻醉(10％水合氯醛腹腔内注射麻醉，3ml/kg)下取血致死，分离血清，取血清100ul，I¹²⁵标记放免法(I¹²⁵标记放免试剂盒购自北京北方生物技术研究所)BH6020型组合式计数器(北京核仪器厂)测定胰岛素水平。令人惊奇的是，血清中胰岛素水平显著增高，并呈剂量依赖关系，单次注射辛伐他汀后促进胰岛素水平增高并可持续至少5个月。(图1-辛伐他汀局部注射1月后胰岛素水平)(图2-辛伐他汀注射5月后胰岛素水平)。

实验例2

糖尿病大鼠模型股骨髓腔内注射辛伐他汀注射剂

3月龄成年雄性SD大鼠(体重250～300g)36只，适应性喂养1周，按照糖尿病大鼠模型制作标准程序，腹腔内注射链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ，Sigma公司)40mg/kg，给药后第二天高脂饲料(购自中科院动物所，配方：基础料68.5％，猪油20％，蔗糖10％，胆固醇1％，猪胆盐0.5％)

2个月后测定大鼠血糖均异常升高(高于19.5mmol/L)，模型建立成功。(周光兴.人类疾病动物模型复制方法学.上海科学技术文献出版社，2008：167-168.施新猷.人类疾病动物模型.人民卫生出版社，2008：301-305)。待糖尿病大鼠模型建立后，实验动物被随机分为3组(对照组，辛伐他汀5mg组，辛伐他汀10mg组)，每组12只。大鼠股骨髁注射：大鼠10％水合氯醛腹腔内注射麻醉(3ml/kg)，右侧股骨大转子下0.5cm切口暴露股骨，在股骨外侧骨穿针(直径1mm)穿透骨皮质，根据实施例1所述辛伐他汀注射剂制备方法，微量注射器注射辛伐他汀5mg，10mg，对照组单纯注射载体(PBS缓冲液，0.1％BSA，2％DMSO)。骨蜡封闭穿刺针孔，逐层缝合伤口。

实验例3

空腹血糖测定：

自股骨髓腔内局部注射辛伐他汀8周以后，每周测定实验动物的空腹血糖，大鼠禁食6h后，大鼠尾部针刺尾尖部，取血1滴(约50ul)，置于血糖试纸(罗氏公司)，2秒钟后方法，罗氏(Roche)罗康全卓越型血糖仪(ACCU-CHEK Performa)测定血糖。糖尿病大鼠股骨髓腔内单次辛伐他汀局部注射后，血糖显著降低，并一直持续到14周。(结果参见图3.)。

处死取血后，血生化仪测定血糖水平，结果显示血糖显著降低。(结果参见图4.)。

实验例4

糖耐量实验(Glucose Tolerance Test，GTT)

为进一步验证大鼠股骨髓腔内单次注射辛伐他汀后治疗糖尿病的效果，我们进行了腹腔内注射葡萄糖耐量实验。辛伐他汀治疗后第11周，大鼠隔夜禁食12h，腹腔内注射葡萄糖(2g/kg，中国大冢制药有限公司)，并分别在0，15，30，60，120分钟后，采集大鼠尾静脉血，罗氏(Roche)罗康全卓越型血糖仪(ACCU-CHEK Performa)测定血糖。(Mauvais-JarvisF，Ueki K，Fruman DA，et al.Reduced expression of the murinep85alphasubunit of phosphoinositide 3-kinase improves insulin signalingandameliorates diabetes.J Clin Invest.2002；109(1)：141-149.)(结果参见图5.)。

实验例5

胰岛素耐量实验(Insulin Tolerance Test，ITT)

为进一步验证大鼠股骨髓腔内单次注射辛伐他汀后治疗糖尿病的效果，我们进行了胰岛素耐量实验。辛伐他汀治疗后第11周，大鼠禁食6h，中性胰岛素注射液(1U/kg，万邦医药)腹腔内注射，并分别在0，15，30，60，90，120分钟采集大鼠尾静脉血，参照文献报道的方法(Mauvais-JarvisF，Ueki K，Fruman DA，et al.Reduced expression of the murinep85alphasubunit of phosphoinositide 3-kinase improves insulin signalingandameliorates diabetes.J Clin Invest.2002；109：141-149.)，罗氏(Roche)罗康全卓越型血糖仪(ACCU-CHEK Performa)，记录血糖，并计算与初始血糖的比值。糖尿病大鼠股骨髓腔内单次注射辛伐他汀后可显著改善胰岛素的敏感性(参见图6.)

实验例6

葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验(Glucose-Stimulated Insulin SecretionTest，GSIS)

为进一步验证大鼠股骨髓腔内单次注射辛伐他汀后治疗糖尿病的效果，我们进行了胰岛素耐量实验。辛伐他汀治疗后第14周，大鼠禁食12h，大鼠腹腔内注射葡萄糖(3g/kg，中国大冢制药有限公司)，并分别在0，30，60，120分钟采集大鼠尾静脉血，大鼠尾尖部针刺取血200ul，室温静置5分钟，离心4000×10分钟，取血清大约20ul，大鼠微量胰岛素测定试剂盒(Millipore Corp.Billerica，MA公司)，全波长扫描多功能读数仪(赛默飞世尔科技有限公司，Thermo Fisher Scientific)微量胰岛素测定。结果参见图7。

实验例7

糖尿病大鼠模型股骨髓腔内注射氟伐他汀后降低血糖

3月龄成年雄性SD大鼠(体重250～300g)36只，适应性喂养1周，按照糖尿病大鼠模型制作标准程序，腹腔内注射链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ，Sigma公司)40mg/kg，给药后第二天高脂饲料(购自中科院动物所，配方：基础料68.5％，猪油20％，蔗糖10％，胆固醇1％，猪胆盐0.5％)

2个月后测定大鼠血糖均异常升高(高于19.5mmol/L)，模型建立成功。(周光兴.人类疾病动物模型复制方法学.上海科学技术文献出版社，2008：167-168.施新猷.人类疾病动物模型.人民卫生出版社，2008：301-305)。待糖尿病大鼠模型建立后，实验动物被随机分为3组(对照组，氟伐他汀8mg组)，每组12只。大鼠股骨髁注射：大鼠10％水合氯醛腹腔内注射麻醉(3ml/kg)，右侧股骨大转子下0.5cm切口暴露股骨，在股骨外侧骨穿针(直径1mm)穿透骨皮质，根据实施例3所述氟伐他汀注射剂制备方法，微量注射器注射氟伐他汀8mg，对照组单纯注射载体(3％帕洛沙姆188的生理盐水)。骨蜡封闭穿刺针孔，逐层缝合伤口。

空腹血糖测定：

自股骨髓腔内局部注射氟伐他汀1周以后，每周测定实验动物的空腹血糖，大鼠禁食6h后，大鼠尾部针刺尾尖部，取血1滴(约50ul)，置于血糖试纸(罗氏公司)，2秒钟后方法，罗氏(Roche)罗康全卓越型血糖仪(ACCU-CHEK Performa)测定血糖。糖尿病大鼠股骨髓腔内单次氟伐他汀局部注射后，血糖显著降低，并一直持续到14周。结果参见图8。

实验例8

糖尿病大鼠模型股骨髓腔内注射阿托伐他汀后降低血糖

3月龄成年雄性SD大鼠(体重250～300g)36只，适应性喂养1周，按照糖尿病大鼠模型制作标准程序，腹腔内注射链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ，Sigma公司)40mg/kg，给药后第二天高脂饲料(购自中科院动物所，配方：基础料68.5％，猪油20％，蔗糖10％，胆固醇1％，猪胆盐0.5％)

2个月后测定大鼠血糖均异常升高(高于19.5mmol/L)，模型建立成功。(周光兴.人类疾病动物模型复制方法学.上海科学技术文献出版社，2008：167-168.施新猷.人类疾病动物模型.人民卫生出版社，2008：301-305)。待糖尿病大鼠模型建立后，实验动物被随机分为3组(对照组，阿托伐他汀4mg组)，每组12只。大鼠股骨髁注射：大鼠10％水合氯醛腹腔内注射麻醉(3ml/kg)，右侧股骨大转子下0.5cm切口暴露股骨，在股骨外侧骨穿针(直径1mm)穿透骨皮质，根据实施例4所述阿托伐他汀注射剂制备方法，微量注射器注射阿托伐他汀4mg，对照组单纯注射载体(PBS缓冲液，0.1％BSA，2％DMSO)。骨蜡封闭穿刺针孔，逐层缝合伤口。

空腹血糖测定：

自股骨髓腔内局部注射阿托伐他汀1周以后，每周测定实验动物的空腹血糖，大鼠禁食6h后，大鼠尾部针刺尾尖部，取血1滴(约50ul)，置于血糖试纸(罗氏公司)，2秒钟后方法，罗氏(Roche)罗康全卓越型血糖仪(ACCU-CHEK Performa)测定血糖。糖尿病大鼠股骨髓腔内单次阿托伐他汀局部注射后，血糖显著降低，并一直持续到14周。结果参见图9。

实验例9

糖耐量实验(Glucose Tolerance Test，GTT)

为进一步验证大鼠股骨髓腔内单次注射阿托伐他汀后治疗糖尿病的效果，我们进行了腹腔内注射葡萄糖耐量实验。阿托伐他汀治疗后第11周，大鼠隔夜禁食12h，腹腔内注射葡萄糖(2g/kg，中国大冢制药有限公司)，并分别在0，15，30，60，120分钟后，采集大鼠尾静脉血，罗氏(Roche)罗康全卓越型血糖仪(ACCU-CHEK Performa)测定血糖。(Mauvais-JarvisF，Ueki K，Fruman DA，et al.Reduced expression of the murinep85alphasubunit of phosphoinositide 3-kinase improves insulin signalingandameliorates diabetes.J Clin Invest.2002；109(1)：141-149.)，结果参见图10。

实验例10

糖尿病大鼠模型股骨髓腔内注射瑞舒伐他汀后降低血糖

3月龄成年雄性SD大鼠(体重250～300g)36只，适应性喂养1周，按照糖尿病大鼠模型制作标准程序，腹腔内注射链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ，Sigma公司)40mg/kg，给药后第二天高脂饲料(购自中科院动物所，配方：基础料68.5％，猪油20％，蔗糖10％，胆固醇1％，猪胆盐0.5％)

2个月后测定大鼠血糖均异常升高(高于19.5mmol/L)，模型建立成功。(周光兴.人类疾病动物模型复制方法学.上海科学技术文献出版社，2008：167-168.施新猷.人类疾病动物模型.人民卫生出版社，2008：301-305)。待糖尿病大鼠模型建立后，实验动物被随机分为3组(对照组，瑞舒伐他汀2mg组)，每组12只。大鼠股骨髁注射：大鼠10％水合氯醛腹腔内注射麻醉(3ml/kg)，右侧股骨大转子下0.5cm切口暴露股骨，在股骨外侧骨穿针(直径1mm)穿透骨皮质，根据实施例5所述瑞舒伐他汀注射剂制备方法，微量注射器注射瑞舒伐他汀2mg，对照组单纯注射载体(3％帕洛沙姆188的生理盐水)。骨蜡封闭穿刺针孔，逐层缝合伤口。

空腹血糖测定：

自股骨髓腔内局部注射瑞舒伐他汀1周以后，每周测定实验动物的空腹血糖，大鼠禁食6h后，大鼠尾部针刺尾尖部，取血1滴(约50ul)，置于血糖试纸(罗氏公司)，2秒钟后方法，罗氏(Roche)罗康全卓越型血糖仪(ACCU-CHEK Performa)测定血糖。糖尿病大鼠股骨髓腔内瑞舒伐他汀单次局部注射后，血糖显著降低，并一直持续到14周。结果参见图11。

实验例11

糖耐量实验(Glucose Tolerance Test，GTT)

为进一步验证大鼠股骨髓腔内单次注射瑞舒伐他汀后治疗糖尿病的效果，我们进行了腹腔内注射葡萄糖耐量实验。瑞舒伐他汀治疗后第11周，大鼠隔夜禁食12h，腹腔内注射葡萄糖(2g/kg，中国大冢制药有限公司)，并分别在0，15，30，60，120分钟后，采集大鼠尾静脉血，罗氏(Roche)罗康全卓越型血糖仪(ACCU-CHEK Performa)测定血糖。(Mauvais-JarvisF，Ueki K，Fruman DA，et al.Reduced expression of the murinep85alphasubunit of phosphoinositide 3-kinase improves insulin signalingandameliorates diabetes.J Clin Invest.2002；109(1)：141-149.)，结果参见图12。

Claims (14)

1.他汀类化合物或其药学上可接受的盐在制备用于经骨髓腔内注射给药治疗非胰岛素依赖型糖尿病的药物中的用途，给药间隔为 7 天至600 天一次，其中所述他汀类化合物为辛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀或瑞舒伐他汀。

2.权利要求 1所述用途，其中所述给药间隔为10 天至 500 天一次。

3.权利要求 2 所述用途，其中所述给药间隔为20 天至 400 天一次。

4.权利要求 3 所述用途，其中所述给药间隔为30 天至 300 天一次。

5.一种药物组合物用于制备经骨髓腔内注射给药治疗哺乳动物非胰岛素依赖型糖尿病的制剂的用途，所述的药物组合物含有他汀类化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的辅料，给药间隔为 7 天至600 天一次，其中所述他汀类化合物为辛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀或瑞舒伐他汀。

6.权利要求 5所述用途，其中所述给药间隔为10 天至 500 天一次。

7.权利要求 6 所述用途，其中所述给药间隔为20 天至 400 天一次。

8.权利要求 7 所述用途，其中所述给药间隔为30 天至 300 天一次。

9.权利要求 1-8任一项所述的用途，其特征在于单位药物或制剂中他汀类化合物或其药学上可接受的盐含量为 0.1mg 至 1000mg。

10.权利要求 9所述用途，其中所述单位药物或制剂中他汀类化合物或其药学上可接受的盐含量为 1mg 至 500mg。

11.权利要求 10 所述用途，其中所述单位药物或制剂中他汀类化合物或其药学上可接受的盐含量为2mg 至 200mg。

12.权利要求 1或5所述的用途，其中他汀类化合物的药学上可接受盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、三氟醋酸盐或乙酸盐、钠盐、钾盐、钙盐或镁盐。

13.权利要求 9所述的用途，其中他汀类化合物为辛伐他汀；他汀类化合物的药学上可接受盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、三氟醋酸盐或乙酸盐、钠盐、钾盐、钙盐或镁盐。

14.权利要求 5所述的用途，其中所述药学上接受的辅料选自水溶性溶媒或油性溶媒、分散剂、等渗剂、防腐剂、增溶剂或者稳定剂中的一种或两种以上，其中，水溶性溶媒选自蒸馏水、生理盐水、格林氏溶液或者磷酸盐缓冲溶液；油溶性溶媒选自植物油；分散剂选自吐温 20 或 吐温 80、聚乙二醇、羧甲基纤维素或者海藻酸钠；等渗剂选自氯化钠、甘油、山梨醇或者葡萄糖；增溶剂选自帕洛沙姆；防腐剂选自尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、苯甲醇、氯丁醇、苯甲酸钠或者苯酚；稳定剂选自白蛋白。