CN103098634A

CN103098634A - 一种提高杭白菊药效成分含量的处理方法

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Publication number: CN103098634A
Application number: CN2013100501848A
Authority: CN
Inventors: 徐茂军; 陈倩; 于沁; 陈尊委; 李梦雅; 阮家钊; 李盛超; 徐竑珂; 符孟娜; 杨凤霞
Original assignee: Hangzhou Normal University
Current assignee: Hangzhou Normal University
Priority date: 2013-02-08
Filing date: 2013-02-08
Publication date: 2013-05-15

Abstract

本发明提供了一种提高杭白菊药效成分含量的处理方法，所述方法包括：按常规条件进行杭白菊种植，在杭白菊现蕾期前10天左右，取酵母提取物配制成浓度为0.1~0.5g/L的溶液，将所得溶液按200~400ml/m²用量均匀喷洒于杭白菊叶片上，待花蕊散开50~70%时采收，杀青、烘干，获得杭白菊成品。本发明的有益效果主要体现在：采用本发明方法，可显著提高杭白菊成品中的药效成分含量。

Description

一种提高杭白菊药效成分含量的处理方法

（一）技术领域

本发明涉及一种提高杭白菊药效成分含量的处理方法。

（二）背景技术

以药用植物为主的中药材产业是我国少数具有自主知识产权的优势产业之一，也是国家十二五重点支持产业和浙江省十二五农业十大主导产业之一。药用植物不仅可作为化学药品的原料，而且本身就作为药物应用于传统医学保健和治疗中。在药用植物中，药用成分含量是决定药用植物的物质基础。

目前，从植物中提取分离仍是获得次生代谢物最主要的途径，然而，大多数次生代谢物在植物中含量低，且只在特殊组织部位、特定生长阶段或生长环境下积累，过度依赖野生资源会危及濒危物种、破坏环境。药用植物栽培在一定程度上可以缓解这些问题，但由于生长环境要求高、耗时长、劳动量大等原因，使得药用植物栽培成本较高、难度较大。大部分次生代谢物结构复杂，常含有特异的立体化学结构，使得化学全合成往往不可能或者经济上不可行。

药用植物的次生代谢物往往含量较低，且天然药用植物资源有限，影响了药用植物作为药材的品质控制及其活性成分的开发利用；次生代谢产物是植物在长期进化过程中与环境相互作用的结果，其产生和变化与环境有较强的相关性和对应性，并且大部分具有生物活性的次生代谢产物在植物体内的主要功能与提高植物的抗逆性有关。植物的生存环境并不总是适宜的，植物生长发育的过程中经常受到各种环境胁迫(也称逆境)。近年来，不少学者就环境胁迫对中药次生代谢产物积累的影响进行了研究。

（三）发明内容

本发明目的是提供一种提高杭白菊药效成分（具体为总黄酮、绿原酸、木犀草素等）含量的处理方法。

本发明采用的技术方案是：

一种提高杭白菊药效成分含量的处理方法，所述方法包括：按常规条件进行杭白菊种植，在杭白菊现蕾期前10天左右，取酵母提取物配制成浓度为0.1~0.5g/L的溶液，将所得溶液按200~400ml/m²用量均匀喷洒于杭白菊叶片上，待花蕊散开50~70%时采收，杀青、烘干，获得杭白菊成品。所述现蕾期是指菊花长出花蕾到开花的这一段时期，一般在9月中旬进入现蕾期，因此喷洒酵母提取物的时间一般在9月10日前后，一株杭白菊喷一次即可。

杭白菊亦名小汤黄、小白菊，为桐乡地区的特产。杭白菊定植时间一般在4月上中旬，最迟不超过5月上旬。定植密度根据耕作制度和栽种时期而定，一般每亩苗数在3500~5000株之间。栽植方式：可采用穴栽或开定植沟栽种，密度为1.2米×20~30厘米，每穴2株，种植深度10~15cm，栽在每畦中间，穴施磷肥50公斤/亩；定植推迟，植株偏大，定植时可适当斜栽，植后须浇足定根水，遇干旱则须浇水抗旱，以确保成活率。压条：菊花压条分1~2次进行，第一次在移栽后一个月左右，当苗高30~50厘米时可进行，此时菊苗木质化程度低，茎杆软易分播均匀。压条前，须除草松土，松土深度，在菊苗行两边施一次生物有机肥或羊栏肥1000公斤，压条时把枝条向两边分揿倒在地，每隔10厘米左右压上泥块，保证枝条充分与松土接触，有利菊苗节节生根和节部侧枝生长。待新侧枝长到20厘米左右，进行第二次压条，这时压条的方向由密处压向稀处，使菊苗生长趋于平衡，最迟在7月底前结束。

杭白菊是旱地作物，对水反应敏感，怕涝怕旱，特别是春雨及梅雨天气影响，如沟渠不畅造成田块积水，容易出现沤根现象，基部叶早衰甚至全株死亡。因此，需做好开沟作畦（特别是低洼田块），做到排灌畅通，以改善通气条件，减少病源菌感染；夏、秋季如遇长期干旱，出现菊苗失水萎缩，要及时沟灌抗旱，促使正常生长。

杭白菊种植前期以有机肥、农家肥为主，后期则以速效肥料为主。主要有以下几次肥：

（1）基肥：栽种前结合整地翻耕时施入或开沟条施每亩用有机肥1000~1500公斤，有机肥种类主要有：人粪尿、羊栏肥、鸭粪等，并配施磷肥50公斤。

（2）活苗肥：栽种活棵后用人粪尿50~100公斤，兑水浇施，促使发棵。

（3）压条肥：压条前在菊苗行两边铺施羊肥每亩1000公斤、尿素10~15公斤，并用松土覆盖后压条。

（4）分枝肥：8月份在每次摘心后施入，每次用人粪尿100—150公斤兑水浇施或施复合肥10公斤。

（5）蕾肥：9月上、中旬是菊花现蕾期，这时进入生长盛期及生殖生长期，需肥量大，施用尿素或进口复合肥15~20公斤，促使花蕾增多、增大，开花整齐，可视生长状况施1~2次。

病害防治：杭白菊病害主要为叶枯病为主，发病时期为6~9月。防治方法：注意做好轮作、合理密度和排水降湿，药剂防治可用50%多菌灵500倍或70%甲基托布津800倍或5%井岗霉素100倍防治。

虫害防治：

菊苗虫害主要有蚜虫、夜蛾类及蝗虫，可用高效低毒类农药进行防治，并在收获前15天停用农药。严禁使用氧乐果、甲胺磷等高毒高残留农药，同时根据预测预报掌握防治适期。

蚜虫：多在9月上旬至10月发生，2%以上叶、花蕾有蚜虫为防治适期，视蚜虫发生情况，每7天防治1次，连续防治2—3次，一般用10%吡虫啉1000~1500倍。

夜蛾类：主要有斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、小菜蛾等，8月底开始为害，一般每7天防治1次，连续2~3次，可用5%抑太保1500倍或10%安打3000倍防治（该类药物对蚕桑特别敏感，须进行隔离防治，并要求专用药水桶，过后用洗涤剂清洗干净）；在桑菊混栽区建议使用50%辛硫磷800~1000倍或20%灭多威1500倍防治。

所述酵母提取物（YE）可采用市售酵母提取物，也可由如下方法获得：

（1）将酵母细胞清洗干燥后，粉碎，用2%～6%（w/w）HCl溶液于搅拌下浸泡4~6h，过滤，取沉淀；

（2）将步骤（1）沉淀洗至中性，加入8%~10%（w/w）NaOH溶液，加热至40~50℃，搅拌保温2~3h，过滤，取沉淀；

（3）将步骤（2）沉淀水洗至中性，先后加入l~2%（w/w）的KMnO₄溶液和l~2%的NaHSO₄溶液，分别漂洗后，洗净干燥，得固体提取物；

（4）将步骤（3）固体提取物按照料液质量比1：20~30加入0.5~1.0%（w/w）醋酸溶液，搅拌至完全溶解，离心、取上清液；

（5）步骤（4）上清液以2~10%（w/w）NaOH溶液中和至pH8.0~8.5，静置8~10h，离心、取沉淀，脱水、烘干，粉碎，过100目筛，取筛下物，即得所述酵母提取物。

优选的，所述酵母提取物溶液浓度为0.4g/L，用量为300ml/m²。

外界逆境因子诱发药用植物次生代谢产物合成积累是一种十分普遍的自然现象。一般认为逆境因子可以通过以下方式影响细胞中次生产物的合成：外界逆境因子刺激植物细胞膜上的信号受体，激活胞内第二信使，并通过特定的信号传递途径将胞外的逆境刺激信号传递至细胞核并调控相关次生代谢途径酶基因的表达，促进细胞内次生代谢产物的生成。近年来的研究结果表明，多胺、钙、茉莉酸盐、NO、乙烯等是参与上述信号转导过程的重要信号分子。最近，杭州师范大学浙江省药用植物重点实验室课题组的研究结果表明，NO是药用植物细胞中次生代谢信号转导途径的关键节点（key-point）。这一研究结果提示：通过调控药用植物细胞内NO的水平，可以激活细胞中次生代谢信号转导途径，并促进次生代谢产物的合成积累。

NO合成积累（nitric oxide burst）是植物在逆境胁迫下的一种普遍现象。发明人的最近研究结果表明，酵母细胞壁多糖提取物可以诱导桃果实中NO迸发。既然NO在促进药用植物次生代谢产物合成中具有关键作用，而酵母提取物可以诱发植物细胞NO迸发，因此本发明提出了以下设想：以酵母提取物处理并诱发药用植物中NO迸发，通过激活细胞内的次生代谢信号转导途径促进次生产物合成积累，提高其含量。

经实验证明，在不同时期施用YE，与不施用YE的各有效成分含量相对比，苗期、分枝期、现蕾期前、现蕾期施用YE，各有效成分含量都有所增加，但在现蕾前期施用YE，杭白菊有效成分含量明显高于其它各时期。而酵母提取物浓度，则以0.4g/L为最佳。

本发明的有益效果主要体现在：采用本发明方法，可显著提高杭白菊成品中的药效成分含量。

（四）附图说明

图1为酵母提取物施用时期对杭白菊药效成分的影响；

图2为酵母提取物浓度对对杭白菊药效成分的影响。

（五）具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：

（1）将酵母细胞（面包酵母，湖州礼来生物技术有限公司，产品编号：LM801H）清洗干燥后，粉碎，用5%HCl溶液于搅拌下浸泡5h，过滤，取沉淀；

（2）将步骤（1）沉淀洗至中性，加入8%NaOH溶液，加热至40℃，搅拌保温2h，过滤，取沉淀；

（3）将步骤（2）沉淀水洗至中性，先后加入l%的KMnO₄溶液和l%的NaHSO₄溶液，分别漂洗后，洗净干燥，得固体提取物；

（4）将步骤（3）固体提取物按照料液质量比1：25加入0.5%醋酸溶液，搅拌至完全溶解，离心（4000转/分，15分钟）、取上清液；

（5）步骤（4）上清液以5%NaOH溶液中和至pH8.5，静置8h，离心（3000转/分，15分钟）、取沉淀，脱水（65℃干燥8小时）、烘干，粉碎，过100目筛，取筛下物，即得所述酵母提取物。

所得酵母提取物以蒸馏水配制成以下浓度：（1）0.1g/LYE；（2）0.2g/LYE；（3）0.3g/L YE；（4）0.4g/L YE；（5）0.5g/L YE；备用。

实施例2：

在浙江省桐乡市屠甸镇对杭白菊主栽品种小洋菊进行试验，试验采用大田栽培，畦宽1.5m，每穴2株，5000株/亩，穴距15-15cm。4月15日定植，5月16日第一次压条，7月15日第二次压条，6月10日和7月11日两次打顶。按照杭白菊栽培管理要求进行常规的施肥、除草和病虫害防治。

试验处理一：酵母提取物最适施用时期。设为4个不同的时期：（1）苗期（5月5日）；（2）分枝期（7月20日）；（3）现蕾期前（9月10日）；（4）现蕾期（9月20日）。

处理方法：每个处理的小区面积为15m²，每个处理重复3次。配制0.4g/L酵母提取物（YS）溶液，按照300ml/m²用量均匀喷洒于苗叶片。当杭白菊头状花序中心小花60%开放时（花瓣舒展平直、管状花即花心散开60%），采取杭白菊样品，120杀青10min，55℃烘干至恒重，粉碎并过40目（0.42mm）筛，分别测定总黄酮、绿原酸、木犀草素含量及样品的总还原力、OH清除率和DPPH清除率，结果见图1。

由试验一可知，在不同时期施用YE，杭白菊有效成分的含量都有所差异。与不施用YE的各有效成分含量相对比，苗期、分枝期、现蕾期前、现蕾期施用YE，各有效成分含量都有所增加，但在现蕾前期施用YE，杭白菊有效成分含量明显高于其它各时期。因此，在现蕾期前施用YE时，各有效成分含量最高。

试验处理二：酵母提取物最适施用量。设为5种不同的浓度：（1）0.1g/LYE；（2）0.2g/LYE；（3）0.3g/LYE；（4）0.4g/LYE；（5）0.5g/LYE；（6）空白（对照）。

处理方法：以现蕾期前杭白菊为材料。每个处理的小区面积为15m²，每个处理重复3次。处理方法：配制0.1-0.5g/LYS溶液，按照300ml/m²用量均匀喷洒于苗叶片。当杭白菊头状花序中心小花60%开放时，采取样测定总黄酮、绿原酸、木犀草素含量及样品的总还力、·OH清除率和DPPH清除率，结果见图2。

由试验二可知，YE浓度从0g/L开始，到0.4g/L，杭白菊的有效成分含量不断增高，并在0.4g/L处达到最大值。之后，随着YE浓度的提高，杭白菊有效成分的含量不再增加。可见，0.4g/L是酵母提取物的最佳浓度。

Claims

1.一种提高杭白菊药效成分含量的处理方法，所述方法包括：在杭白菊现蕾期前10天，取酵母提取物配制成浓度为0.1~0.5g/L的溶液，将所得溶液按200~400ml/m²用量均匀喷洒于杭白菊叶片上，待花蕊散开50~70%时采收，杀青、烘干，获得杭白菊成品。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述酵母提取物由如下方法获得：

（1）将酵母细胞清洗干燥后，粉碎，用2%～6%HCl溶液于搅拌下浸泡4~6h，过滤，取沉淀；

（2）将步骤（1）沉淀洗至中性，加入8%~10%NaOH溶液，加热至40~50℃，搅拌保温2~3h，过滤，取沉淀；

（3）将步骤（2）沉淀水洗至中性，先后加入l~2%的KMnO₄溶液和l~2%的NaHSO₄溶液，分别漂洗后，洗净干燥，得固体提取物；

（4）将步骤（3）固体提取物按照料液质量比1：20~30加入0.5~1.0%醋酸溶液，搅拌至完全溶解，离心、取上清液；

（5）步骤（4）上清液以2~10%NaOH溶液中和至pH8.0~8.5，静置8~10h，离心、取沉淀，脱水、烘干，粉碎，过100目筛，取筛下物，即得所述酵母提取物。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述酵母提取物溶液浓度为0.4g/L，用量为300ml/m²。